A Dicer-1 gene from white shrimp Litopenaeus vannamei: Expression pattern in the processes of immune response and larval development

Dicer is a member of the RNAase III family which catalyzes the cleavage of double-stranded RNA to small interfering RNAs and micro RNAs, and then directs sequence-specific gene silencing. In this paper, the full-length cDNA of Dicer-1 was cloned from white shrimp Litopenaeus vannamei (designated as LvDcr1). It was of 7636 bp, including a poly A tail, a 5' UTR of 136 bp, a 3' UTR of 78 bp, and an open reading frame (ORF) of 7422 bp encoding a putative protein of 2473 amino acids. The predicted amino acid sequence comprised all recognized functional domains found in other Dicer-1 homologues and showed the highest (97.7%) similarity to the Dicer-1 from tiger shrimp Penaeus mondon. Quantitative real-time PCR was employed to investigate the tissue distribution of LvDcr1 mRNA, and its expression in shrimps under virus challenge and larvae at different developmental stages. The LvDcr1 mRNA could be detected in all examined tissues with the highest expression level in hemocyte, and was up-regulated in hemocytes and gills after virus injection. These results indicated that LvDcr1 was involved in antiviral defense in adult shrimp. During the developmental stages from fertilized egg to postlarva VII, LvDcr1 was constitutively expressed at all examined development stages, but the expression level varied significantly. The highest expression level was observed in fertilized eggs and followed a decrease from fertilized egg to nauplius I stage. Then, the higher levels of expression were detected at nauplius V and postlarva stages. LvDcr1 expression regularly increased at the upper phase of nauplius, zoea and mysis stages than their prophase. The different expression of LvDcr1 in the larval stages could provide clues for understanding the early innate immunity in the process of shrimp larval development. (C) 2010 Elsevier Ltd. All rights reserved.

Broader pattern of tandem repeats in the mitochondrial control region of Perciformes

Perciformes, the largest order of vertebrates with 20 suborders, is the most diverse fish order that dominates vertebrate ocean life. The complete mitochondrial control region (CR) of Trichiurus japonicus (Trichiuridae, Scombroidei) and Pampus sp. (Stromateidae, Stromateoidei) were amplified and sequenced. Together with data from GenBank, the tandem repeats in the mitochondrial CR from 48 species, which covered nine suborders of Perciformes, are reported in this study. The tandem repeats tend to be long in the suborder Percoidei and Stromateoidei. The identical repeats in 21 species of Cichlidae suggest a common origin and have existed before species divergence. Larimichthys crocea shows tandem repeats instead of the typical structure of the central conserved sequence blocks, which was first reported in Perciformes and vertebrates. This might have resulted from interruption of the polymerase activity during the H-strand synthesis. The four broader patterns presented here for the tandem repeats, including those in both the 5' and 3' ends, only in the either 5' or 3' end, and in the central conserved domain of the control region, will be useful for understanding the evolution of species.

Molecular cloning and characterization of a serine proteinase homolog prophenoloxidase-activating factor in the swimming crab Portunus trituberculatus

Serine proteinase homologues (SPHs), as one of prophenoloxiase-activating factors (PPAFs), play critical roles in innate immunity of crabs. Based on an EST from the eyestalk full length cDNA library, the complete cDNA (designated as PtSPH) and genomic DNA of SPH from the swimming crab Portunus trituberculatus were cloned in this study. The estimated molecular weight of mature PtSPH (354 amino acids) was 38.7 kDa and its isoelectric point was 5.08. Multiple sequence alignment revealed that PtSPH lacked a catalytic residue with a substitution of Ser in the active site triad to Gly. Phylogenetic analysis indicated PtSPH together with PPAFs of Callinectes sapidus (AAS60227), Eriocheir sinensis (ACU65942), Penaeus monodon (ABE03741, ACP19563) and Pacifastacus leniusculus (ACB41380), formed a distinct cluster which only included clip-SPHs. As the first analyzed genomic structure of PPAFs in crustaceans, two introns were found in the open reading frame region of this gene. The mRNA transcripts of PtSPH could be detected in all the examined tissues, and were higher expressed in the eyestalk than that in gill, hepatopancreas, haemocytes and muscle. Accompanied with the change in phenoloxidase (PO) activity and total haemocyte counts, the temporal expression of PtSPH gene in haemocytes after Vibrio alginolyticus challenge demonstrated a clear time-dependent expression pattern with two peaks within the experimental period of 32 h. These findings suggest that PtSPH is involved in the antibacterial defense mechanism of Portunus tritubercualtus crab. (C) 2010 Elsevier Ltd. All rights reserved.

Molecular cloning and expression analysis of Crustin-like gene from Chinese shrimp Fenneropenaeus chinensis

A new member of antimicrobial protein genes of the Crustin family was cloned from haemocytes of the Chinese shrimp Fenneropenaeus chinensis by 3' and 5' RACE. The full-length cDNA of Crustin-like gene contains a 390 bp open reading frame, encoding 130 amino acids. The deduced peptide contains a putative signal peptide of 17 amino acids and mature peptide of 113 amino acids. The molecular mass of the deduced mature peptide is 12.3 ku. It is highly cationic with a theoretical isoelectric point of 8.5. The deduced amino acids sequence of this Crustin showed high homology with those of Penaeus (Litopenaeas) setferus. Northern blotting showed that the cloned Crustin gene was mainly expressed in haemocytes, gill, intestine, and RNA in situ hybridization indicated that the Crustin gene was constitutively expressed exclusively in haemocytes of these tissues. Capillary electrophoresis RT-PCR analysis showed that Crustin was up-regulated dramatically from 12 to 48 h after a brief decrease of mRNA during first 6 h in response to microbe infection. The level of Crustin mRNA began to restore at 72 h post-challenge. This indicated that Crustin gene might play an important role when shrimps are infected by bacterial pathogen.

中国对虾对微量元素硒的吸收、代谢及硒对其生长的影响

中国对虾（Penaeus orientalis）对硒的需要量为20ppm或高于此值，饵料中添加的硒可能通过促进谷胱苷肽过氧化物酶（GSH-Px）的活性而间接提高对虾的增重率和抗病能力；GSH-Px活性是对虾重要的生理指标，可用来衡量对虾对硒的营养状态。对虾可以直接吸收海水中的硒，但能力较低，由于海水中的硒含量很低，所以，有必要在饵料中添加适量的硒。肝胰脏是对虾体内各种来源的硒的储存库；肝胰脏中的硒除了少量与小分子的氨基酸、肽等结合外，大部分与大分子的蛋白质（部分是酶）结合。对虾体内的硒可以通过甲壳和鳃排出体外。

刺参急性口围肿胀病和皱纹盘鲍肌肉萎缩症的病理学研究

本论文以大连沿海养殖刺参劾皱纹盘鲍为研究对象，利用组织学、超微病理学、病理生理学的方法，开展了患病病理学研究，并对可能诱发刺参和皱纹盘鲍病害的原因，以及病变过程进行了初步探讨。 中国北方养殖刺参[Apostichopus japonicus (Selenka)]幼参和成参的急性口围肿胀病。急性口围肿胀病是爆发于中国北方辽宁省和山东省沿岸养殖刺参群体中的一种新发现的疾病，并且从2004年开始已经引起刺参的大面积死亡现象，经济损失重大。 本文报道在养殖患病刺参的肠上皮细胞内发现大量的病毒样颗粒。这是首次报道病毒样粒子感染刺参。组织学检查表明该病毒具有包涵体结构，寄生于肠上皮细胞中。电镜检查的结果表明，该病毒粒子呈球形，直径80-100纳米，螺旋状核衣壳，具有囊膜结构且囊膜表面具有纤突结构。 进一步的形态学和病理学分析发现该病毒具有许多报道的关于冠状病毒的特征。细胞质内的 病毒颗粒大部分以团聚方式存在于一个完整的包膜内，形成典型的病毒包涵体结构。最明显的细胞病理学特征是细胞质内大面积的粒状物质的存在，该区域相对缺少相应的细胞器。在病毒包涵体内的管状结构，核衣壳包涵体以及双层膜囊泡也在病变细胞内发现。 在病参体内未发现立克次氏体，衣原体，细菌以及其他寄生生物。 中国北方养殖皱纹盘鲍(Haliotis discus hannai)的肌肉萎缩症病理研究 。 在2004年和2005年的中国北方海区，养殖皱纹盘鲍幼体和成体群体中爆发了严重的肌肉萎缩症。肌电图监测显示病鲍的肌肉萎缩是肌源性的而不是神经源性的。 与正常对照组对比结果显示，病鲍的肌纤维数量和肌纤维直径都显著降低。 肌酶谱测定结果显示，病鲍血清中的肌酸激酶水平，肌酸激酶—肌同工酶水平和乳酸脱氢酶水平，与正常血清对比，呈显著升高状态，说明病鲍体内发生了肌细胞损伤。超薄切片电镜检测结果显示在发生病变的肌细胞内存在双螺旋丝状结构的包涵体（Paired helical filaments, PHFs）, 该结构是人类患包涵体肌炎的主要的病理特征。 本文首次报道在无脊椎动物中发现双螺旋丝包涵体结构。 对损伤的肌纤维的进一步研究发现了异常增生的小圆柱体结构（Small Cylinder Structure, SCS）和致密小体(Dense colored particles, DCP),同时观察到这两种异常结构与肌纤维的损伤直接相关。本文还对该病的感染机制作了探讨。 中国北方皱纹盘鲍(Haliotis discus hannai)肌肉萎缩的病理生理研究。严重的足肌肉萎缩症是鲍的一种慢性致死性疾病。在中国北方的养殖皱纹盘鲍群体中第一次发现是在2000年，随后在各养殖海区，自然海区及实验室养殖过程中都发现了该病的暴发。 超微结构电镜检测显示肌肉纤维损伤严重，其内的大部分肌原纤维断裂或消失。 大量的花瓣状的糖原颗粒聚集在断裂的肌原纤维中，还有一些被包裹在包膜内。 这说明在病鲍体内的糖原代谢处于被抑制状态（或停止状态），随后的血清学检测表明病鲍血清中的葡萄糖含量与正常对照的含量显著降低，也证明了糖代谢途径的终止。病鲍血清中胆固醇和甘油三酯的量显著降低，伴随着高密度脂蛋白的水平显著升高，说明脂肪代谢途径的亢进状态。病鲍血清中的二氧化碳水平的显著降低说明出现了酸碱平衡紊乱，通过病因学分析可知该酸碱平衡紊乱应属于代谢性酸中毒。病鲍血清中的钠离子和钾离子浓度显著升高，无机磷和镁离子浓度显著降低说明出现了患病皱纹盘鲍体内出现了电解质紊乱。病鲍血清中蛋白质含量的检测表明患病皱纹盘鲍已出现低蛋白血症，说明病鲍出现了严重的营养不良。病鲍血清中的尿酸含量，胆碱酯酶水平和γ-转肽酶水平与正常对照组相比显著降低。各项指标检测的结果说明糖代谢途径的终止造成了病鲍一系列的调节体系的不平衡和各种生理功能的紊乱，甚至造成了鲍的最终死亡。

有机污染对水环境生态效应及中国对虾内环境的影响

以人工配合饵料作为有机污染源，选定试验池、对照池各1个，分别放养5cm左右的中国对虾12尾；除了试验池的投饵量为对照池的2倍以及对照池每天吸底外，其他养殖条件均保持一致。目的在于研究有机污染对水环境生态效应和对中国对虾内环境的影响，进而探讨有机污染对虾病的诱发作用。结果表明，有机污染影响水环境，且改变中国对虾内环境，降低其免疫水平，使虾病易于发生。同时，温度在有机污染对水环境的影响中也具有重要的作用。

中国明对虾免疫系统中抗氧化相关基因的克隆与表达分析

对虾病害在世界范围内的广泛传播，给水产养殖和沿海农村经济造成了重大损失。深入开展对虾免疫机制研究并在此基础上寻找对虾疾病防治的有效方法已成为当务之急。研究表明，当对虾等甲壳动物受到外界病原刺激时，其体内的吞噬细胞在吞噬活动中会激活磷酸己糖支路的代谢，引起呼吸爆发，产生多种活性氧分子。另外，受到病原侵染的对虾还会产生其他多种免疫反应，这些免疫反应将消耗大量的能量（ATP），产能的呼吸链会加速运转，由此也会引发大量活性氧的产生。这些活性氧分子可以杀灭入侵的病原微生物，但同时由于活性氧分子反应的非特异性，它们也会对宿主的细胞、组织和器官造成严重伤害，进而导致对虾生理机能的损伤和免疫系统的破坏。所以，消除对虾体内因过度免疫反应产生的过量氧自由基将能够增强其抵御病原侵染的能力，提高免疫力。本论文从中国明对虾体内克隆了线粒体型超氧化物歧化酶（mMnSOD）、胞质型超氧化物歧化酶（cMnSOD）、过氧化氢酶（Catalase）和过氧化物还原酶（Peroxiredoxin）等四种与免疫系统相关的抗氧化酶基因，分析了它们的分子结构特征，组织分布及应答不同病原刺激的表达变化模式，并对其中的mMnSOD基因和Peroxiredoxin基因进行了体外重组表达、分离纯化和酶活性分析。 采用RACE技术从中国明对虾血细胞中克隆了两个超氧化物歧化酶（SOD）基因，通过序列比对分析发现，其中一个为mMnSOD基因，另一个为cMnSOD基因。mMnSOD基因的cDNA全长为1185个碱基，其中开放阅读框为660个碱基，编码220个氨基酸，其中推测的信号肽为20个氨基酸。多序列比对结果显示中国明对虾mMnSOD基因的推导氨基酸序列与罗氏沼虾、蓝蟹的推导氨基酸序列同源性分别为88%和82%。Northern blot结果表明，该基因在对虾的肝胰脏、血细胞、淋巴器官、肠、卵巢、肌肉和鳃等组织中均有表达。半定量RT-PCR结果显示，对虾感染病毒3 h时，该基因在血细胞和肝胰脏中的转录水平显著升高。此外，通过构建原核表达载体，本研究对该基因进行了体外重组表达，并对纯化的重组蛋白进行了质谱鉴定和酶活分析。cMnSOD基因的cDNA全长为1284个碱基，其中开放阅读框为861个碱基，编码287个氨基酸。多序列比对结果显示中国明对虾cMnSOD基因的推导氨基酸序列与斑节对虾和凡纳滨对虾的同源性高达98%和94%。组织半定量结果显示，cMnSOD基因在对虾被检测的各个组织中均有表达。 另外，半定量RT-PCR结果表明，对虾感染病毒23h时，该基因在肝胰脏中的转录上升到正常水平的3.5倍；而感染后59 h时，该基因在血细胞中的转录上升到正常水平的2.5倍。 利用根据其他生物过氧化氢酶保守氨基酸序列设计的简并引物，结合RACE技术，从中国明对虾肝胰脏中克隆到了过氧化氢酶基因的部分片段，片段长1725个碱基。多序列比对结果发现目前所得中国明对虾Catalase基因部分片段的推导氨基酸序列与罗氏沼虾和皱纹盘鲍Catalase氨基酸序列的同源性分别达到95%和73%。通过实时荧光定量PCR技术对中国明对虾Catalase基因在各个组织中的分布情况及病毒感染后该基因在血细胞和肝胰脏中的转录变化进行了研究。结果发现，该基因在肝胰脏、鳃、肠和血细胞中表达水平较高，在卵巢、淋巴器官和肌肉中的表达水平相对较弱；感染病毒23 h和37 h时，对虾血细胞和肝胰脏中该基因mRNA的表达量分别出现显著性上升。 依据中国明对虾头胸部cDNA文库提供的部分片段信息，结合SMART-RACE技术，从中国明对虾肝胰脏中克隆到了过氧化物还原酶基因（Peroxiredoxin）， 该基因的cDNA全长为942个碱基，其中开放阅读框为594个碱基，编码198个氨基酸。中国明对虾Peroxiredoxin基因的推断氨基酸序列与伊蚊、文昌鱼和果蝇等Peroxiredoxin基因的推断氨基酸序列同源性分别为77%、76%和73%。其蛋白理论分子量为22041.17 Da，pI为5.17。Northern blot结果表明，Peroxiredoxin基因在对虾的肝胰脏、血细胞、淋巴器官、肠、卵巢、肌肉和鳃等组织中均有表达。实时荧光定量PCR结果显示，弧菌感染后，该基因在对虾血细胞和肝胰脏中的转录水平都有明显变化并且表达模式不同。另外，对该基因进行了体外重组表达，并对纯化的重组蛋白进行了质谱鉴定和酶活性分析。酶活性分析表明，复性后的重组蛋白能在DTT存在的条件下还原H2O2。

人工控制对虾卵巢发育的初步研究

南美洲白对虾(Penaeus vannamei Boone）在龄期分别为9和12个周月时实施眼柄摘除手术，均能有效地诱导卵巢发育并成熟。其差别为前者需要三个月后才能产卵，而后者中需20天，相对而言龄期越大卵巢催熟的效果越明显。但上述期内，两栖批对虾所产卵粒幸免存在质量差，数量明显减少的问题，说明该虾种在龄期达12个周月时实施催熟手术仍然为时尚早。中国对虾Penaeus chinensis(0'sbeck)眼柄中所含的性腺抑制激素（GIH）对于雌虾的卵巢发育具有显著的抑制作用。实验结果表明：摘眼迟了8天多。这种抑制效应并不受提供眼柄的对虾性别的限制。注射眼柄提取液对卵巢发育所产生的抑制作用是暂时性的，一旦停止注射，被抑制的卵巢能够重新发育，并成熟产卵。

刺参遗传连锁图谱构建及卵母细胞成熟过程研究

第一部分 刺参遗传连锁图谱的构建 利用AFLP和微卫星标记以一个远缘地理杂交家系为作图群体，以拟测交理论为作图策略，构建了刺参Apostichopus japonicus的雌性和雄性遗传连锁图谱。利用62对AFLP引物组合，对亲本和93个个体进行了分离分析，共得到3572个标记，其中具有多态性的标记为点数为1133个，多态性比例为31.5%。平均每个引物对产生18.3个多态片段。1133个多态性位点中，294个标记在父母本中都出现并在后代中分离，839个标记在父本或母本中出现并在子代分离，其中母本443(52.8%)个分离标记，父本396(47.2%)个分离标记。卡方检验显示，556个标记符合孟德尔1:1分离。筛选微卫星标记中30个在家系中具有作图信息，其中19个可用于母本作图，19个可用于父本作图。 利用Mapmaker 3.0/EXP软件对分离标记进行连锁分析。358个分子标记用于雌性遗传连锁分析，其中包括19个微卫星标记，199个AFLP标记和11个微卫星标记定位在雌性框架图谱中。雌性框架图谱共有25个连锁群，总长度为3148.3 cM。标记之间最大间隔为37.5 cM，平均间隔为17.0 cM，连锁群的分子标记数最大为21个最小为4个。用于雄性连锁分析的分子标记共有332个，其中包含19个微卫星标记。207个标记定位于23个连锁群上，其中AFLP标记数为196个，微卫星标记数为11个。23个连锁群总长度为3059.8 cM，标记间最大间隔38.6 cM，平均间隔16.6 cM。每个连锁群的长度范围在40 cM到271.4 cM之间，标记数在18到4个之间，包括二、三连体在内的雄性连锁图谱共覆盖3227 cM。雌雄基因组的预测长度分别为4053.7 cM和3816.3 cM，因此，所构建的雌雄连锁图谱覆盖率分别为84.0%和84.5%。通过共有微卫星标记，有3个连锁群在两个图谱中对应。分子标记在两个图谱中呈均匀分布，没有成簇现象。 分子标记筛选、遗传图谱的构建为刺参分子标记辅助选择育种，经济性状QTL定位和比较基因作图打下基础，并且最终将促进中国刺参遗传改良和新品种的培育工作。 第二部分 卵母细胞成熟过程研究 对刺参卵母细胞的体外诱导成熟方法进行探索，并且通过透射电子显微镜、扫描电子显微镜和激光共聚焦显微镜结合超薄切片技术及间接免疫荧光染色技术研究卵母细胞成熟的生物学过程。 分别利用在海参中有诱导作用的海星神经提取液和二硫苏糖醇(DTT)对从成熟卵巢解剖出的刺参卵母细胞进行诱导成熟试验，结果显示，刺参的卵母细胞在海水中不会发生自发成熟，海星神经提取液以及神经提取液加滤泡悬浮液对卵母细胞没有诱导成熟的作用，而二硫苏糖醇处理可以诱导卵母细胞生发泡破裂，当DTT溶液的浓度处于10-1 mol/L到10-3 mol/L之间时，对刺参卵母细胞的促熟作用较为明显，在10-2 mol/L左右时，卵母细胞的诱导成熟率可以达到90%以上。未成熟的卵母细胞处于第一次减数分裂前期，不具备受精能力。经DTT诱导后，生发泡发生移动并破裂，染色体排列到赤道板上，然后第一、二极体先后排出，诱导成熟的卵母细胞排出极体的时间与自然受精的卵子一致。在卵母细胞成熟过程中有受精膜举起的现象，说明精子入卵不是受精膜举起的必要条件。卵母细胞只有在生发泡破裂之后才具有受精能力，从生发泡破裂到第二极体排出前的整个减数分裂过程中，卵母细胞都可以受精，但是只有在第一极体排出前受精的卵母细胞才能发生卵裂。人工促熟的卵母细胞受精后，形成的胚胎似乎并不能正常发育，试验过程中最多只得到了8细胞期的胚胎，之后细胞便产生畸形并停止分裂，最终裂解消失。 利用DTT诱导刺参卵母细胞成熟，综合运用光镜、电子显微镜及激光共聚焦技术观察卵母细胞成熟过程，分析了卵母细胞表面动物极突起在卵母细胞脱滤泡中的作用，以及卵母细胞动物极突起和微管组织在生发泡移动过程中所起的作用。卵母细胞通过动物极突起连接到滤泡上，在脱滤泡作用开始时，卵母细胞动物极突起刺入并穿过滤泡膜，使得滤泡膜表面形成一个缺口，然后整个卵母细胞开始从缺口处挤出。脱滤泡的作用力来源有两种：胶膜层的水合作用以及滤泡的收缩。通过激光共聚焦显微镜观察，未成熟的卵母细胞中存在5种类型的微管，并且有两个微管组织中心锚定在卵母细胞突起下方。减数分裂重新启动时，生发泡沿微管向动物极移动，至细胞膜下时破裂。微管解聚对照实验证明驱动生发泡移动的细胞结构为微管束。生发泡破裂后，两个微管组织中心组织形成减数分裂纺锤体，然后第一极体以“收缩-排出”的独特方式排出。 本研究填补了刺参繁殖生物学研究中的缺失环节，为刺参人工繁育技术提供理论基础和指导。

刺参生态增养殖原理与关键技术

针对目前刺参养殖业中面临的问题，系统研究了刺参的基础生物学、组织学，生理生态学和呼吸生理学特征，评估了刺参的养殖容量，优化了养殖模式，以嵊泗列岛为例，系统研究了刺参南移后的存活和生长等特征。研究结果如下： 1．刺参体腔液细胞存在于刺参的体腔中，体腔液细胞行使免疫防御、营养贮存和运输的功能。根据形态和功能上的特征可分为小淋巴细胞、桑葚细胞、吞噬细胞、结晶细胞、纺缍细胞和振动细胞。体腔液细胞的形态和结构与其功能密切相关。不同特征的细胞可能是同一类型体腔液细胞的不同发育阶段。体腔液细胞平均密度为(3.79 ± 0.65)×106 cells /ml-1. 刺参的血淋巴细胞可分为小淋巴细胞、桑葚细胞、吞噬细胞和结晶细胞。刺参体腔液细胞可分为小淋巴细胞、桑葚细胞、吞噬细胞、结晶细胞、纺锤细胞和振动细胞。刺参吞噬细胞的吞噬率与温度呈正相关，并呈现出强烈的凝集现象。 2．刺参的血管、呼吸树、肌细胞和体腔内皮细胞的超微结构复杂，与其功能密切相关。夏眠前后刺参消化道明显萎缩，上皮细胞重吸收现象显著，结果显示组织结构的改变与外界环境相适应。刺参夏眠时体腔液pH和PO2升高，PCO2降低。连续取样对刺参体腔液血气指标没有显著性影响。刺参体腔液的%Extrw和%EwO2与体重呈负相关。 3．刺参的扰动导致底质中有机物含量、TOC、TN、叶绿素和细菌含量降低，刺参粪便中有机物含量高于周围底质，刺参对摄食底质具有选择性。刺参的扰动能增强底质的稳定性，与对照组相比，硫化物含量和氧化还原电位降低。 4．根据水体理化指标变化和自然沉积有机物的供饵力，结合不同温度下大规格刺参对自然生物沉积物的吸收率，计算刺参的养殖容量。浅海典型水域刺参的养殖容量约为109.40 g y-1m-2。 5．前三岛近岛水域底质有机物含量高于离岸深水水域，且粒度较离岸水域细，大多在0.20 mm以下。刺参的放流浓度和参礁的放置深度应选择在5-12m。刺参的放养规格宜为经人工越冬后体长在8-10厘米的参苗，体重超过30克。 6．研究了三种规格的刺参笼养殖存活和生长特征，初步建立了刺参筏式笼养技术。投喂海带，存活率达到83%以上。密度对刺参的生长有着显著的影响，随着实验的进行，放养密度增加，刺参的体重减小。4月后，随着温度的升高和海况的改变，刺参的生长率下降。刺参南移养殖模式的适宜放养密度应控制在3-5头，放养规格应在40g以上，经过5-6个月的生长能达到100g左右。

中国对虾酚氧化酶的研究

该文利用生化、组化、电镜酶细胞化学技术以及分子生物学技术,研究了中国对虾酚氧化酶（PO）的活性、在血淋巴中的定位、Cu结合位点cDNA片段结构分析.以生物化学方法研究了中国对虾和南美白对虾血清酚氧化酶（PO）生理功能和活性影响.超显微结构定位显示,PO阳性产物位于血细胞和血细胞周围.PO大部分均质且电子密度很高.在细胞外层有异物处的PO密度最大.其中大颗粒细胞周围的PO阳性产物最多,小颗粒细胞和透明细胞则很少或没有.中国对虾酚氧化酶原（proPO）cDNA片断含有两个公认的铜结合位点,两个位点周围的组氨酸的高度保守.

长江口及其邻近海域鱼类浮游生物群落结构特征研究

本文根据1999年－2007年间7个航次的长江口及其邻近海域的鱼类浮游生物和环境因子的调查资料，探讨了三峡工程蓄水前后长江口鱼类浮游生物群落特征，主要包括长江口鱼类浮游生物的种类组成、数量变动、群落多样性、空间分布格局等，分析了三峡工程蓄水前后长江口鱼类浮游生物群落结构的动态变化，为评价三峡工程对河口生态环境及鱼类补充资源的影响提供科学依据，研究结果如下： 1．三峡工程蓄水前春季（1999年5月和2001年5月）共捕获11540个鱼类浮游生物隶属11目18科32种，其中凤鲚(Coilia mystus)、鳀(Engraulis japonicus)、六丝矛尾鰕虎鱼(Chaeturichthys hexanema)、白氏银汉鱼(Allanetta bleekeri)、松江鲈(Trachidermis fasciatus)为优势种；鱼类浮游生物群落可划分为三个类群：①以凤鲚为优势种的河口群组，②以松江鲈和白氏银汉鱼为优势种的沿岸群组，③以鳀和六丝矛尾鰕虎鱼为优势种的近海群组；盐度、深度、溶解氧和悬浮体是影响这一海域鱼类浮游生物分布的主要环境因子。 2．三峡工程蓄水后春季长江口的环境因子总体分布格局没有改变，部分环境因子表现出数量上的差异：溶解氧含量偏低，COD平均值下降，pH值显著上升，盐度升高，河道水域和口门附近悬浮体下降，长江口鱼类生物群聚栖息环境发生了变化。三峡工程蓄水后春季（2004年5月和2007年5月）共采获的25种鱼类浮游生物，总丰度(1 070个)仅为蓄水前(11 540)的10%，4种优势种白氏银汉鱼、凤鲚、松江鲈和鳀贡献了总丰度的94.57％；蓄水后影响长江口鱼类浮游生物格局的主要环境因子是盐度和悬浮体，蓄水后长江口鱼类浮游生物群聚类型(河口型、沿岸型和近海型)与蓄水前一致，但沿岸型空间分布区域明显减少，近海型分布区域向河口方向扩展。长江口环境因子中，盐度和悬浮体是蓄水前后鱼类浮游生物群聚变异的主要影响因素。 3．三峡工程蓄水前后春季四次调查共记录鱼类浮游生物39种，生态类型包括淡水、半咸水、沿岸和近海。春季长江口鱼类浮游生物优势种包括鯷、凤鲚、白氏银汉鱼、松江鲈和六丝矛尾鰕虎鱼，2004年和2007年鯷、凤鲚优势地位有所下降。长江口鱼类浮游生物群落结构年度间差异显著，以2004年长江口鱼类浮游生物群落结构与1999和2001年相异性最高，鯷和凤鲚种群数量变动对其群落变异的贡献率最大，群落相似性以2004和2007年最高，达71.17%。与蓄水前相比，三峡水库蓄水后的长江口鱼类浮游生物群落多样性显著下降。1999—2007年间，长江口发生了一系列环境环境条件变化，直接或间接的环境干扰带来了长江口鱼类生物群落结构变异。 4．2007年四个航次（春、夏、秋、冬）共捕获鱼类浮游生物6,463个, 隶属12目28科45种, 以鳀科丰度最高, 占总丰度的76.5%。长江口鱼类浮游生物包括4种生态类型: 淡水型(2种), 半咸水型(14种), 沿岸型(10种)和近海型(16种)。其中, 近海型物种个体数量最多, 占2007年长江口鱼类浮游生物总丰度的74.55%。鳀在4个季节均有出现, 对长江口鱼类浮游生物丰度贡献最大。鱼类浮游生物在物种组成上存在明显的季节变化: 白氏银汉鱼在春季占绝对优势, 鳀是夏季优势度最高的种类, 秋季除鳀外, 前颌间银鱼(Hemisalanx prognathus)成为优势种; 鱼类浮游生物丰度高度集中在优势种上, 各季节优势种对总丰度贡献超过89%。群落物种数量、丰度、丰富度指数、均匀度指数和多样性指数, 在夏季最高, 春季和秋季次之, 冬季最低。2007年长江口鱼类浮游生物的群落格局在空间上分为三个不同的群组：河口、沿岸、外海，并且这种分布随长江冲淡水的季节变化而变化。盐度是影响决定长江口鱼类浮游生物群落空间分布的最重要因子，而温度则是影响其季节性结构变化的主要因子。此外，生殖洄游和索饵洄游也是影响鱼类浮游生物群落结构时间变化的重要因子。

磁场对中国对虾胚胎发育的影响

本文以中国对虾（penaeus orientalis）胚胎为实验材料，先后在恒磁场和变磁场条件下研究了磁场对对虾胚胎发育的影响。结果表明：磁场对虾胚胎发良的效应与所使用的磁场类型、磁场强度及磁场处理时间都有密切关系。弱恒磁场（1000GS※以下）促进胚胎发育，具有正向的生物学效应，而强恒磁场（7000GS以上）则抑制胚胎发育，表现为负向的生物学效应。强度在1000GS以下的磁场对对虾胚胎发育的效应与强恒磁场相似，也表现为负向的生物学效应。同其它生物效应一样，磁场对对虾胚胎发育的效应也与胚胎受磁场处理时间的长短有密切关系。1000GS交变磁场的表明：磁场处理胚胎的时间越长，则其对胚胎发育的效应越明显，反之则不明显或无。实验结果亦表明：对虾胚胎发育的不同时期对磁场的敏感程度不同。原肠期最敏感，囊胚期次之，肢芽期最不敏感。磁场对胚胎发育的影响机制非常复杂。恒磁场有可能通过影响参与胚胎发育的一些酶的活性及改变胚胎内部正常的物质分布及传递，从而对胚胎发育产生影响。变磁场对胚胎发育的影响更为复杂，其中包括生物电效应，即变磁场通过造成胚胎内磁场通量的瞬间变化，引起胚胎内产生感应电场及感应电流。感应电场及感应电流对胚胎发育的正常具有不利影响。

肉食性鱼类补偿生长特性的研究

本文主要以花鲈[Lateolabrax．japonicus (C．& V．)]和褐牙鲆[Paralichthys olivaceus(T. & S.)]作为海洋肉食性鱼类的代表种类，根据鱼类生态生理学理论，通过设定不同饥饿时问下因子水平，研究两种鱼类摄食率、排粪率、转化效率和SGR等生态生理效率的状态变化。其目的在于研究高营养级鱼类在海洋生态系统中的下行控制作用(Top-down Effect)，以及肉食性鱼类的生态对策与鱼类资源补充机制的相互关系，为深入解析鱼类资源生产力及其持续利用海洋生物资源，提供科学依据。其主要研究结果概述如下：1．花鲈： 饥饿0(对照组)、4、8、12、16d后恢复投喂，过量投喂淡水桡足类，温度为19.5±2.0℃，初始体重为0.61-0.93g，平均体重为0．79g实验周期为28d。1.1饥饿时间对花鲈的体重损失率产生显著影响，受过饥饿的个体的湿重失率 (LR_W)与饥饿时间(t)的关系为：LR_W=2.2164t-3.6634(r~2=0.9767，p13d)的个体的排粪率显著大于其它各组，其它各组间排粪率差异不显著；2.2在整个实验周期36d内，对照组与经受3—8d饥饿的实验组的SGR显著大于经受饥饿时间大于lOd的实验组，饥饿3-8d的完全补偿生长，饥饿10-15d 的个体发生部分补偿生长，饥饿18d的个体不能补偿生长；经受饥饿个体的摄食率低于对照组；除了饥饿18d的个体的饵料转化率显著小于对照组外，其它各组的转化率没有显著差异；经受长时间饥饿(>13d)的个体的排粪率显著大于其它各组，其它各组问没有显著的差异。2．3平均体重为2．59g的褐牙鲆，饥饿至不可恢复点(PNR)的时间大于18d。3．花鲈和褐牙鲆在经受饥饿后的体重损失率与饥饿的时间正相关。在实验期间，花鲈体重损失率与饥饿时间成一次线性关系，褐牙鲆体重损失率与饥饿时间成对数函数关系。在饥饿后均会发生补偿生长。3.1比较研究结果，表明在适当时间饥饿后的个体均会发生补偿生长，其超生长速度与饥饿时间密切相关。花鲈在饥饿至不可恢复点的临界状态时发生最强烈的超生长现象，而褐牙鲆则是在饥饿3—5d后恢复投喂时可以观测到最高速度的超生长。3.2经受适当时间饥饿后的个体在短期内，其摄食率大于对照组的摄食强度。曾经饥饿的时间越长，花鲈在饥饿结束后的摄食率越高，褐牙鲆在饥饿结束后的高摄食率持续的时间越长。3.3经受适当时间饥饿后的个体，在短期内的转化率均会大于对照组的转化 效率，且随饥饿时间而加强；高转化效率持续的时间与饥饿时间无关。褐牙鲆的高转化率持续的时间很短，且很快下降至低于对照组的水平，其下降程度与饥饿时问成正相关，经受过度饥饿的花鲈和褐牙鲆转化率显著低于对照组。3．4花鲈的补偿生长是饵料转化率提高的结果；而褐牙鲆的补偿生长的原因则因其经受的饥饿程度而异。从饥饿后恢复投喂较短的时间周期(4d和6d)看，花鲈和褐牙鲆的补偿生长是转化率和摄食率共同提高的结果；但从饥饿后恢复投喂较长的时问周期(12d和1 8d)看，经受短期(4-8d)饥饿的花鲈的补偿生长是转化率显著提高的结果，而经受长期(12d)饥饿的花鲈的补偿生长是转化率显著提高的结果，褐牙鲆则是摄食率显著提高的结果。3．5从整个实验周期来看，对花鲈的饥饿降低了其生长速度和饵料转化率，但对褐牙鲆的短期饥饿(<8d)不会降低其生长速度，也不会影响一定时间(3-13d)饥饿的个体的饵料转化率。