Acibenzolar-S-Metil e Ecolife® na indução de respostas de defesa do tomateiro contra a mancha bacteriana (Xanthomonas vesicatoria)

Foi investigada a eficácia comparativa da pulverização foliar em tomateiro de acibenzolar-S-metil (ASM) e Ecolife® na proteção contra Xanthomonas vesicatoria, bem como avaliada a ativação de algumas respostas bioquímicas de defesa de planta. Plantas de tomateiro cv. Santa Cruz Kada foram pulverizadas com acibenzolar S-metil (0,2 g l-1 ASM) e uma formulação natural proveniente de biomassa cítrica denominada Ecolife® (5 ml l-1). Quatro dias após as pulverizações, as plantas foram inoculadas com um isolado patogênico de Xanthomonas vesicatoria. Em experimentos de quantificação de doença, a pulverização foliar de Ecolife® e ASM conferiu 39,2% e 47,7% de proteção, respectivamente. A resistência induzida em plantas pulverizadas com ASM e Ecolife® foi evidenciada pelo aumento da atividade de peroxidases (POX) e oxidases de polifenóis (PPO), iniciado logo às primeiras horas após as pulverizações, continuando até 12 dias de avaliação. A despeito da tendência de queda nas atividades de amônia-liases de fenilalanina (PAL) a partir de 3 dias após as pulverizações, plantas tratadas com ASM e Ecolife® tiveram discreto aumento no acúmulo de lignina, principalmente aquelas pulverizadas com Ecolife® e inoculadas com X. vesicatoria. Teores de fenóis solúveis totais decresceram significativamente, 9 e 12 dias após pulverizações. O aumento nas atividades de POX e PPO poderia resultar em lignificação, a qual estaria associada a uma estratégia de defesa do tomateiro contra a mancha bacteriana.

Snake Venom L-Amino Acid Oxidases: Some Consideration About their Functional Characterization

Snake Venom L-amino acid oxidases (LAAOs E.C. 1.4.3.2) are flavoenzymes broadly found in various snake venom compositions. LAAOs have become an attractive subject for molecular biology, biochemistry, physiology and medicine due to their actions on various cells and biological effects on platelets, apoptosis, hemorrhage and others. In this review we try to summarize some of these reports, with special emphasis on apoptosis, anti-protozoa, bactericidal and anti-viral activities.

Disponibilidade de polifenóis em frutas e hortaliças consumidas no Brasil

OBJETIVO: Estimar a disponibilidade de polifenóis totais em frutas e hortaliças consumidas no Brasil segundo macrorregião e identificar os principais alimentos-fonte que fazem parte do hábito alimentar nacional. MÉTODOS: O conteúdo de polifenóis foi determinado pelo método Folin-Ciocalteu e sua disponibilidade foi estimada com base na Pesquisa de Orçamentos Familiares 2002/2003. Foram escolhidos 12 alimentos de maior consumo, sendo seis "frutas tropicais" e seis "hortaliças folhosas e florais", "hortaliças frutosas" e "hortaliças tuberosas". A determinação de polifenóis foi realizada em três experimentos independentes, cada um em duplicata. A disponibilidade nacional de polifenóis foi estimada por grama de peso fresco de cada vegetal analisado. A ingestão diária per capita no Brasil e regiões foi calculada como sendo o aporte diário de polifenóis fornecido pelo consumo dos 12 alimentos analisados. RESULTADOS: O teor de polifenóis nos alimentos variou de 15,35 a 214,84mg EAG/100g peso fresco. A disponibilidade nacional, com base na quantidade, em kg, adquirida anualmente no Brasil foi de 48,3mg/dia, tendo a região Sudeste e a região Centro-Oeste os maiores e menores valores, respectivamente. A banana foi a principal fonte de polifenóis consumida no Brasil, variando conforme macrorregião. CONCLUSÕES: A estimativa de disponibilidade de polifenóis no Brasil encontrada foi semelhante à de outros países. Diferenças observadas entre as macrorregiões geográficas podem estar diretamente relacionadas às diferenças culturais de cada região. Apesar de não haver uma quantidade recomendada para o consumo de polifenóis, a adoção da recomendação diária de frutas e hortaliças representa um aumento de 16 vezes na disponibilidade nacional de polifenóis, demonstrando a relação entre o consumo destes grupos alimentares com a ingestão de compostos bioativos benéficos à saúde.

Desenvolvimento de bionanoconjugados com nanopartículas de ouro e oxidases para a detecção de poluentes ambientais

Dissertação para a obtenção do grau de Mestre em Biotecnologia

Insight into the multicopper oxidases stability

Dissertation presented to obtain the PhD degree in Biochemistry

Desenvolvimento de um novo método de produção de sumo de maçã visando incrementar o teor em polifenóis e diminuir o escurecimento

Dissertação para obtenção do Grau de Mestre em Tecnologia e Segurança Alimentar

STRUCTURE-FUNCTION ANALYSIS OF MULTI-COPPER OXIDASES

Dissertation presented to obtain the Ph.D degree in Biochemistry, Structural Biochemistry

Conteúdo em Polifenóis totais do vinho em contacto com aparas de madeira e subsequentes características colorimétricas

Neste trabalho fez-se o estudo do conteúdo de polifenóis totais (PT) por reação de Folin-Ciocalteau e das características colorimétricas por espetrofotometria e colorimetria de dois tipos de vinho: branco (Vb) e tinto (Vt) e o estudo evolutivo das mesmas características em soluções hidroalcoólicas (SH), miméticas ao vinho em teor alcoólico e pH. Tanto os vinhos como as soluções estiveram em contacto com vários tipos de espécies botânicas com potencial interesse enológico: Acácia (AC), Cerejeira (CJ), Castanheiro (CT) e Carvalho (CN) em concentrações de 50 g/L, 2 g/L e 6 g/L para as SH, Vb e Vt respetivamente todas elas com quatro graus de queima e duas morfologias: aparas e dominós (apenas SH). As SH-aparas estiveram 11 dias em contacto com as madeiras onde ao final do dia 9 se registou um teor de PT de 1128 (AC), 321 (CJ), 2346 (CT) e 1815 (CN) mg GEA/L para todos com queima ligeira, à exceção de castanheiro, que obteve o máximo na madeira sem queima. Nas SH-dominós o máximo de PT registou-se em carvalho sem queima com 1897 mg GAE/L, quando em contacto com a madeira num período superior a 9 meses. O estudo dos PT nos vinhos mostrou que as madeiras são capazes de os enriquecer com este tipo de compostos registando-se um aumento máximo de 74,44 mg GAE/L e de 979,93 mg GAE/L para os Vb e Vt respetivamente. No estudo colorimétrico por espetrofotometria foram avaliados os parâmetros CIELab de todas as SH e observou-se que L* (luminosidade) tende a diminuir com o grau de queima e com o tempo para todas as madeiras. O parâmetro a* (verde/vermelho) em AC e CJ diminui com os dias e com o grau de queima representando uma diminuição da componente vermelha. O inverso é observado em CT e CN. Por fim, b* (azul/amarelo) tende a aumentar em todas as SH com os dias e a queima tornando a solução mais amarela. Comparando os vinhos com as suas testemunhas, em Vb L* e b* aumentam refletindo-se num aumento da cor amarela e a* é mantido. Nos Vt, L* diminui quando na presença das madeiras e a* e b* aumentam acrescendo a sua componente vermelha. Fez-se a avaliação de alguns voláteis das SH por GC/MS onde foram encontrados compostos com interesses organoléticos como é o caso da lactona do whisky nalgumas graus de queima para as espécies botânicas de cerejeira e carvalho.

Degradação de polifenóis em cinco espécies vegetais em ambientes aquáticos

Estudos de degradação de polifenóis em folhas e galhos de Inga sp., Mabea caudata Pax ex Hoffn., Mezilaurus itauba (Meissn.) Taub. ex Mez., Vatairea sericea Ducke e Protium sp. foram realizados no período de 155 dias em dois lagos experimentais situados próximos a Usina Hidrelétrica de Balbina, no Estado do Amazonas. Um dos lagos ficou com vegetação intacta e o outro foi desmatado. As determinações dos compostos fenólicos ba searam-se no método de Follin-Denis e o trabalho teve por objetivo o estudo de degradação da vegetação superior no meio aquático. Os resultados mostram que, no lago 1, Inga sp. e Mezilaurus itauba apresentaram maior taxa de decomposição, enquanto que, no lago 2, a degradação foi maior para as espécies Mabea caudata e Mezilaurus itauba.

Restrição materna de polifenóis e dinâmica ductal fetal na gestação normal: um ensaio clínico aberto

FUNDAMENTOS: Recentemente demonstramos reversão da constrição ductal fetal após redução da ingesta materna de alimentos ricos em polifenóis (ARP), por sua ação inibidora da síntese das prostaglandinas. OBJETIVOS: Testar a hipótese de que fetos normais no 3º trimestre também melhoram a dinâmica ductal após restrição materna de polifenóis. MÉTODOS: Ensaio clínico aberto com 46 fetos com idade gestacional (IG) > 28 semanas submetidos a dois estudos Dopplerecocardiográficos com intervalo de duas semanas, sendo os examinadores cegados para os hábitos alimentares maternos. Um questionário de frequência alimentar validado para esse objetivo foi aplicado e uma dieta com alimentos pobres em polifenóis (< 30 mg/100 mg) foi orientada. Um grupo controle de 26 fetos no 3º trimestre foi submetido ao mesmo protocolo. Utilizou-se o teste-t para amostras independentes. RESULTADOS: A IG média foi 33 ± 2 semanas. A média do consumo materno diário de polifenóis (CMDP) foi 1277 mg, caindo para 126 mg após orientação (p = 0,0001). Ocorreu diminuição significativa nas Velocidades Ductais Sistólica (VSD) e Diastólica (VDD) e na relação dos diâmetros ventriculares (VD/VE), assim como aumento do índice de pulsatilidade (IP) [VSD = 1,2 ± 0,4 m/s (0,7-1,6) para 0,9 ± 0,3 m/s (0,6-1,3) (p = 0,018);VDD = 0,21 ± 0,09 m/s (0,15-0,32) para 0,18 ± 0,06 m/s (0,11-0,25) (p = 0,016); relação VD/VE = 1,3 ± 0,2 (0,9-1,4) para 1,1 ± 0,2 (0,8 - 1,3) (p = 0,004); IP do ducto = 2,2 ± 0,03 (2,0-2,7) para 2,4 ± 0,4 (2,2-2,9) (p = 0,04)]. A IG média dos controles foi de 32 ± 4 semanas, não ocorrendo diferenças significativas no CMDP, nas velocidades ductais, no IP do ducto e na relação VD/VE. CONCLUSÃO: A restrição da ingesta de alimentos ricos em polifenóis no 3º trimestre por duas semanas melhora a dinâmica do fluxo no ducto arterioso fetal e as dimensões do VD.

Differential contribution of mitochondria, NADPH oxidases, and glycolysis to region-specific oxidant stress in the anoxic-reoxygenated embryonic heart.

The ability of the developing myocardium to tolerate oxidative stress during early gestation is an important issue with regard to possible detrimental consequences for the fetus. In the embryonic heart, antioxidant defences are low, whereas glycolytic flux is high. The pro- and antioxidant mechanisms and their dependency on glucose metabolism remain to be explored. Isolated hearts of 4-day-old chick embryos were exposed to normoxia (30 min), anoxia (30 min), and hyperoxic reoxygenation (60 min). The time course of ROS production in the whole heart and in the atria, ventricle, and outflow tract was established using lucigenin-enhanced chemiluminescence. Cardiac rhythm, conduction, and arrhythmias were determined. The activity of superoxide dismutase, catalase, gutathione reductase, and glutathione peroxidase as well as the content of reduced and oxidized glutathione were measured. The relative contribution of the ROS-generating systems was assessed by inhibition of mitochondrial complexes I and III (rotenone and myxothiazol), NADPH oxidases (diphenylene iodonium and apocynine), and nitric oxide synthases (N-monomethyl-l-arginine and N-iminoethyl-l-ornithine). The effects of glycolysis inhibition (iodoacetate), glucose deprivation, glycogen depletion, and lactate accumulation were also investigated. In untreated hearts, ROS production peaked at 10.8 ± 3.3, 9 ± 0.8, and 4.8 ± 0.4 min (means ± SD; n = 4) of reoxygenation in the atria, ventricle, and outflow tract, respectively, and was associated with arrhythmias. Functional recovery was complete after 30-40 min. At reoxygenation, 1) the respiratory chain and NADPH oxidases were the main sources of ROS in the atria and outflow tract, respectively; 2) glucose deprivation decreased, whereas glycogen depletion increased, oxidative stress; 3) lactate worsened oxidant stress via NADPH oxidase activation; 4) glycolysis blockade enhanced ROS production; 5) no nitrosative stress was detectable; and 6) the glutathione redox cycle appeared to be a major antioxidant system. Thus, the glycolytic pathway plays a predominant role in reoxygenation-induced oxidative stress during early cardiogenesis. The relative contribution of mitochondria and extramitochondrial systems to ROS generation varies from one region to another and throughout reoxygenation.

Mixed-function oxidases and esterases associated with cross-r esistance between DDT and lambda-cyhalothrin in Anopheles darlingi Root 1926 populations from Colombia

In order to establish the insecticide susceptibility status for Anopheles darlingi in Colombia, and as part of the National Network on Insecticide Resistance Surveillance, five populations of insects from three Colombian states were evaluated. Standardised WHO and CDC bottle bioassays, in addition to microplate biochemical assays, were conducted. Populations with mortality rates below 80% in the bioassays were considered resistant. All field populations were susceptible to deltamethrin, permethrin, malathion and fenitrothion. Resistance to lambda-cyhalothrin and DDT was detected in the Amé-Beté population using both bioassay methods with mortality rates of 65-75%. Enzyme levels related to insecticide resistance, including mixed function oxidases (MFO), non-specific esterases (NSE), glutathione S-transferases and modified acetylcholinesterase were evaluated in all populations and compared with a susceptible natural strain. Only mosquitoes from Amé-Beté presented significantly increased levels of both MFO and NSE, consistent with the low mortalities found in this population. The continued use of lambda-cyhalothrin for An. darlingi control in this locality has resulted in a natural resistance to this insecticide. In addition, DDT resistance is still present in this population, although this insecticide has not been used in Colombia since 1992. Increased metabolism through MFO and NSE may be involved in cross-resistance between lambda-cyhalothrin and DDT, although kdr-type nerve insensitivity cannot be discarded as a possible hypothesis. Additional research, including development of a kdr specific assay for An. darlingi should be conducted in future studies. Our data demonstrates the urgent need to develop local insecticide resistance management and surveillance programs throughout Colombia.

Roles of multiple acyl-CoA oxidases in the routing of carbon flow towards β-oxidation and polyhydroxyalkanoate biosynthesis in Yarrowia lipolytica.

The oleaginous yeast Yarrowia lipolytica possesses six acyl-CoA oxidase (Aox) isoenzymes encoded by genes POX1-POX6. The respective roles of these multiple Aox isoenzymes were studied in recombinant Y. lipolytica strains that express heterologous polyhydroxyalkanoate (PHA) synthase (phaC) of Pseudomonas aeruginosa in varying POX genetic backgrounds, thus allowing assessment of the impact of specific Aox enzymes on the routing of carbon flow to β-oxidation or to PHA biosynthesis. Analysis of PHA production yields during growth on fatty acids with different chain lengths has revealed that the POX genotype significantly affects the PHA levels, but not the monomer composition of PHA. Aox3p function was found to be responsible for 90% and 75% of the total PHA produced from either C9:0 or C13:0 fatty acid, respectively, whereas Aox5p encodes the main Aox involved in the biosynthesis of 70% of PHA from C9:0 fatty acid. Other Aoxs, such as Aox1p, Aox2p, Aox4p and Aox6p, were not found to play a significant role in PHA biosynthesis, independent of the chain length of the fatty acid used. Finally, three known models of β-oxidation are discussed and it is shown that a 'leaky-hose pipe model' of the cycle can be applied to Y. lipolytica.

Avaliação do estado nutricional do nitrogênio em batateira por meio de polifenóis e clorofila na folha

O objetivo deste trabalho foi avaliar o efeito de doses de N sobre índices fisiológicos relacionados à nutrição nitrogenada e verificar a possibilidade de estimar indiretamente os teores foliares de N em batata. Foram avaliados os índices de flavonóis (IFLV), de clorofila (ICHL) e de balanço de N (IBN), e as estimativas dos teores foliares de N foram realizadas aos 21 e 42 dias após a emergência, por meio do medidor portátil Dualex. O experimento foi conduzido de novembro de 2010 a fevereiro de 2011, em delineamento de blocos ao acaso, e os tratamentos consistiram de cinco doses de N (0, 50, 100, 200 e 300 kg ha‑1 de N, na forma de ureia) aplicadas em pré‑plantio, com quatro repetições. Houve aumento no ICHL e no IBN e decréscimo no IFLV com o aumento das doses de N. Os índices determinados com o medidor Dualex correlacionaram-se com os teores de N e de clorofila extraível na quarta folha, bem como com o rendimento de tubérculos na safra. O Dualex pode ser utilizado para avaliar o estado nutricional de N em batateira e prognosticar a produtividade de tubérculos.

TEORES DE POLIFENÓIS DE CAULE E FOLHA DE QUATRO CULTIVARES DE ABACAXIZEIRO

Teores de polifenóis foram determinados nos resíduos agrícolas - caule e folha -do abacaxizeiro (Ananas comosus (L.) Merrill) das cultivares Pérola, Perolera, Smooth Cayenne e Primavera, cultivadas em Ijací-MG, com o objetivo de subsidiar a possível utilização destes resíduos para consumo humano e/ou animal. De acordo com os resultados obtidos, nenhuma das cultivares estudadas apresentou teores de polifenóis acima de 1%, nível considerado alto e prejudicial à digestibilidade de proteínas. A folha apresentou teores de polifenóis superiores aos do caule em todas as cultivares analisadas. Não houve diferenças significativas entre as cultivares, mas a Smooth Cayenne e a Perolera apresentaram os maiores e menores teores de polifenóis, respectivamente.