Avaliação de um protocolo de extração de DNA genômico a partir de sangue total.

2009

Otimização de protocolo para análise de AFLP em Lolium multiflorum Lam.

ESTABELECIMENTO DE METODOLOGIA PARA ANÁLISE MOLECULAR DE AZEVÉM ANUAL COM MARCADORES AFLP. O uso de marcadores moleculares no manejo de bancos de germoplasma tem sido cada vez mais expressivo. Entre os diferentes tipos de marcadores moleculares, o AFLP, Amplified Fragment Length Polymorphism, apresenta algumas vantagens para uso na caracterização de recursos genéticos, como a detecção de grande número de bandas informativas por reação, com ampla cobertura do genoma e considerável reprodutibilidade, além de não necessitar de dados de seqüenciamento prévio da espécie para a construção de primers. Embora a análise de AFLP seja freqüentemente utilizada em estudos de variabilidade genética em diferentes espécies, o uso da técnica em Lolium multiflorum ainda é incipiente. Com a finalidade de estabelecer um protocolo para o emprego da técnica de AFLP em azevém anual foi conduzido este trabalho. Foram avaliadas as concentrações iniciais de DNA genômico de 100 e 250 ng, a digestão do DNA com 1,25 e 1U das enzimas EcoRI e MSe, e os respectivos tempos de reação de digestão: 3, 6 e 12 horas. Também foram avaliadas quatro concentrações da solução resultante da ligação dos adaptadores: solução sem diluição; diluída 1:5; 1:10 e 1:20 e duas diluições após a reação de pré-amplificação, de 1:25 e 1:50. Como resultado, foi estabelecido como melhor protocolo, no qual foi obtido um maior número e qualidade de fragmentos, o que utiliza a concentração inicial de DNA genômico de 100 ng, num volume final de reação de digestão 10 ?l, com 1U de cada enzima EcoRI e MseI e tempo de reação de 12h a 37°C, com reação de ligação de adaptadores realizada com a adição da solução de ligação de adaptadores, do Kit AFLP? Analysis System I (InvitroGen Life Technologies, Carlsbad, Calif., USA), e 0,4 U de T4 DNA ligase em um volume final de 10?l, por 2h a 20°C. Após a ligação de adaptadores a diluição deverá ser de 1:5. A reação de pré-amplificação deverá ocorrer a partir de 1?l desta última solução (diluída 1:5), 1,0 X PCR buffer com Mg Plus [Tris-HCl (pH 7.6) 20 mM, MgCl2 1,5 mM, KCl 50 mM], BSA 0,003% e 1 U de Taq DNA polimerase, completando com mix de pré-amplificação do Kit AFLP? Analysis System I até alcançar o volume final de 11?l. O produto da pré-amplificação deverá ser diluído 1:25 antes de ser procedida à amplificação seletiva, a qual deve ser realizada utilizando 2,5 ?l da solução de DNA pré-amplificado (diluído 1:25), 1 X PCR buffer com Mg Plus [Tris-HCl (pH 8,4) 20 mM, MgCl2 1,5 mM, KCl 50 mM], BSA (0,003%), 1 U de Taq DNA polimerase, 10 ng de primer EcoRI, 1,5 ng de primer MseI, 0,4mM de DNTps e H2O MilliQ? até completar o volume final de 10?l. Com este protocolo uma única combinação de primers permitiu identificar 58 bandas polimórficas na análise de duas populações de azevém anual.

Protocolo de tecnologia: selecao para resistencia a doencas em hortalicas. 1. Etapas para selecao de fontes de resistencia a doencas.

1999

Protocolo de tecnologia: selecao para resistencia a doencas em hortalicas. 2. Tomateiro - Mancha-de-estenfilio (Stemphylium spp.).

1999

Protocolo de tecnologia: selecao para resistencia a doencas em hortalicas. 3. Tomateiro - Murcha-de-fusario (Fusarium oxysporum f.sp. lycopersici).

1999

Protocolo de tecnologia: selecao para resistencia a doencas em hortalicas. 4. Tomateiro - Murcha-de-verticilio (Verticillium dahliae e V. albo-atrum).

1999

Protocolo de tecnologia: selecao para resistencia a doencas em hortalicas. 5. Tomateiro - Pinta-preta (Alternaria solani).

1999

Protocolo de tecnologia: selecao para resistencia a doencas em hortalicas. 6. Tomateiro - Septoriose (Septoria lycopersici).

1999

Protocolo de análise para determinação da atividade antioxidante total em hortaliças no sistema beta-caroteno / ácido linoléico.

2009

Protocolo de coleta e preparação de amostras de macroinvertebrados bentônicos em riachos.

O biomonitoramento de corpos hídricos através do uso de macroinvertebrados bentônicos é cada vez mais usado e aceito como uma importante ferramenta na avaliação da qualidade da água. Embora seja uma ferramenta utilizada desde o início do século XX na Europa e na América do Norte, no Brasil esta técnica tem apenas algumas décadas e não existem publicações de protocolos específicos para a coleta de macroinvertebrados em rios tropicais. Na América do Norte, em particular, a publicação de Rosenberg & Resh (1993) constitui uma das principais obras sobre o tema, sendo uma boa fonte de consulta para os iniciantes no estudo do biomonitoramento da qualidade das águas. Por ser uma metodologia de baixo custo e de aparato técnico simples, é interessante que se estabeleça um protocolo padrão para utilização em riachos nos países em desenvolvimento, a fim de que estudos futuros possam ser comparados, desde que desenvolvidos em áreas de clima e geografia semelhantes. Esta metodologia apresenta várias vantagens quando empregada em associação à tradicional análise de parâmetros físicos, químicos e físico-químicos da água.

Protocolo usado na Embrapa Trigo para produção de peritécios de Gibberella zeae em grãos de trigo.

2007

Protocolo para a propagação in vitro de bananeira cultivar prata zulu.

Este trabalho tem por objetivo relatar, de forma simplificada, a partir de resultados de pesquisas realizadas no Laboratório de Biotecnologia da Embrapa Amazônia Ocidental, Manaus, as melhores condições de produção in vitro de mudas da banana cv. Prata Zulu, cultivar que tem sobressaído às demais pela alta resistência à sigatoka-negra e pelos bons resultados fitotécnicos apresentados.

Protocolo para o transporte de tambaqui (Colossoma macropomum) vivo.

Sistemas de transporte. Sistema fechado. Sistema aberto. Condicionamento pré-transporte (período de depuração). Densidade e tempo de transporte. Qualidade da água durante o transporte. Transporte de juvenis. Transporte de juvenis para o abate.

Protocolo de avaliação isoenzimática para a pimenta longa (Piper hispidinervum).

Considerando o alto valor comercial do safrol, bem como a ocorrência natural de pimenta longa no Acre, esta espécie poderá constituir-se em mais uma alternativa econômica de produção para os pequenos, médios e grandes produtores do Estado. Sendo uma espécie pouco conhecida geneticamente, desenvolveu-se um protocolo de análise isoenzimática com o objetivo de avaliar a estrutura genética e distribuição da variabilidade genética entre as populações nativas da espécie, visando traçar uma estratégia de coleta de material vegetal mais adequada para conservação da variabilidade ex situ e detectar populações superiores com relação aos teores de safrol, rendimento em base livre de umidade, resistência a pragas e/ou doenças e outros parâmetros de interesse.

Protocolo de avaliação da qualidade física e química de cebola.

Neste protocolo, são relatadas as informações necessárias para a avaliação da qualidade química e física em cebola, baseadas em adaptações e modificações realizadas no laboratório de pós-colheita da Embrapa Hortaliaças.