Cloning and functional analysis of the Sry-related HMG box gene, Sox18

The Sox gene family (Sry like HMG box gene) is characterised by a conserved DNA sequence encoding a domain of approximately 80 amino acids which is responsible for sequence specific DNA binding. We initially published the identification and partial cDNA sequence of murine Sox18, a new member of this gene family, isolated from a cardiac cDNA library. This sequence allowed us to classify Sox18 into the F sub-group of Sox proteins, along with Sox7 and Sox17. Recently, we demonstrated that mutations in the Sox18 activation domain underlie cardiovascular and hair follicle defects in the mouse mutation, ragged (Ra) (Pennisi et al., 2000. Mutations in Sox18 underlie cardiovascular and hair follicle defecs in ragged mice. Nat. Genet. 24, 434-437). Ra homozygotes lack vibrissae and coat hairs, have generalised oedema and an accumulation of chyle in the peritoneum. Here we have investigated the genomic sequences encoding Sox18. Screening of a mouse genomic phage library identified four overlapping clones, we sequenced a 3.25 kb XbaI fragment that defined the entire coding region and approximately 1.5 kb of 5' flanking sequences. This identified (i) an additional 91 amino acids upstream of the previously designated methionine start codon in the original cDNA, and (ii);ln intron encoded within the HMG box/DNA binding domain in exactly the same position as that found in the Sox5, -13 and -17 genes. The Sox18 gene encodes a protein of 468 aa. We present evidence that suggests HAF-2, the human HMG-box activating factor-2 protein, is the orthologue of murine Sox18. HAF-2 has been implicated in the regulation of the Human IgH enhancer in a B cell context. Random mutagenesis coupled with GAL4 hybrid analysis in the activation domain between amino acids 252 and 346, of Sox18, implicated the phosphorylation motif, SARS, and the region between amino acid residues 313 and 346 as critical components of Sox18 mediated transactivation. Finally, we examined the expression of Sox18 in multiple adult mouse tissues using RT-PCR. Low-moderate expression was observed in spleen, stomach, kidney, intestine, skeletal muscle and heart. Very abundant expression was detected in lung tissue. (C) 2001 Elsevier Science B.V. All rights reserved.

The VCAM-1 gene that encodes the vascular cell adhesion molecule is a target of the Sry-related high mobility group box gene, Sox18

VCAM-1 (vascular cell adhesion molecule-1) and Sox18 are involved in vascular development. VCAM-1 is an important adhesion molecule that is expressed on endothelial cells and has a critical role in endothelial activation, inflammation, lymphatic pathophysiology, and atherogenesis. The Sry-related high mobility group box factor Sox18 has previously been implicated in endothelial pathologies. Mutations in human and mouse Sox18 leads to hypotrichosis and lymphedema. Furthermore, both Sox18 and VCAM-1 have very similar spatio-temporal patterns of expression, which is suggestive of crosstalk. We use biochemical techniques, cell culture systems, and the ragged opossum (RaOP) mouse model with a naturally occurring mutation in Sox18 to demonstrate that VCAM-1 is an important target of Sox18. Transfection, site-specific mutagenesis, and gel shift analyses demonstrated that Sox18 directly targeted and trans-activated VCAM-1 expression. Importantly, the naturally occurring Sox18 mutant attenuates the expression and activation of VCAM-1 in vitro. Furthermore, in vivo quantitation of VCAM-1 mRNA levels in wild type and RaOP mice demonstrates that RaOP animals show a dramatic and significant reduction in VCAM-1 mRNA expression in lung, skin, and skeletal muscle. Our observation that the VCAM-1 gene is an important target of SOX18 provides the first molecular insights into the vascular abnormalities in the mouse mutant ragged and the human hypotrichosis-lymphedematelangiectasia disorder.

An??lise das pr??ticas de gest??o dos empreendimentos de urbaniza????o do Departamento de Urbaniza????o de Assentamentos Prec??rios (DUAP) do governo federal ?? luz de metodologia de gerenciamento de projetos

O presente trabalho teve como objetivo analisar as pr??ticas de gest??o dos empreendimentos de Urbaniza????o do Departamento de Urbaniza????o de Assentamentos Prec??rios (DUAP), unidade organizacional integrante da estrutura da Secretaria Nacional de Habita????o do Minist??rio das Cidades, ?? luz de metodologia de gerenciamento de projetos. O referencial te??rico utilizado baseou-se, essencialmente, no Guia PMBOK 4?? Edi????o, que ?? um guia consagrado em n??vel internacional que re??ne as melhores pr??ticas reconhecidas na ??rea de gerenciamento de projetos, com base em experi??ncias diversas de empresas de distintos ramos, p??blicas ou privadas. No desenvolvimento da pesquisa, apresentou-se uma perspectiva hist??rica das pol??ticas federais para os assentamentos prec??rios no Brasil e informa????es institucionais relacionadas ?? unidade, de forma a auxiliar na compreens??o de suas atribui????es e de seu funcionamento. Para o levantamento das pr??ticas de gest??o realizou-se entrevista direcionada aos monitores dos empreendimentos e aos gerentes do DUAP. O referencial te??rico forneceu base conceitual para realiza????o das an??lises relacionadas ??s informa????es institucionais do Departamento e aos dados obtidos por meio das entrevistas realizadas. A pesquisa possibilitou perceber que as pr??ticas de gest??o dos empreendimentos de Urbaniza????o do Departamento poderiam, em alguns aspectos, passar por um processo de revis??o e aprimoramento tendo como objetivo estabelecer procedimentos gerenciais espec??ficos que auxiliem no desenvolvimento da atividade de monitorar os empreendimentos de Urbaniza????o e, conseq??entemente, na execu????o das interven????es propostas por tais projetos

Metodologia para medir a satisfa????o do usu??rio no Canad??: desfazendo mitos e redesenhando roteiros

Caderno composto de relat??rios de pesquisa, elaborados no ??mbito de uma rede de pesquisa formada por altos administradores p??blicos do Canad??, acad??micos e especialistas na ??rea de presta????o de servi??os p??blicos, sobre a avalia????o do cidad??o/usu??rio a respeito da qualidade dos servi??os p??blicos

Negocia????o tripartite: uma nova metodologia para normaliza????o

O in??cio do processo de forma????o do arcabou??o legal de seguran??a e medicina do trabalho foi marcado por forte influ??ncia do regime ditatorial - fim da d??cada de 70. Com a consolida????o da democracia no Pa??s e visando estabelecer uma legisla????o eficiente e eficaz em contribuir para a melhoria das condi????es e ambientes de trabalho, foi concebida, no in??cio dos anos 90, uma nova metodologia para elabora????o e revis??o de normas na ??rea de seguran??a e sa??de no trabalho. Tal metodologia tem como princ??pio b??sico a ado????o do sistema tripartite e parit??rio, com a participa????o de representa????es do governo, trabalhadores e empregadores, atrav??s de ampla negocia????o em todas as etapas do processo. De acordo com o novo procedimento foram elaboradas 9 (nove) Normas Regulamentadoras e, como resultado dessa inova????o, temos assistido a um cont??nuo decl??nio do n??mero de acidentes de trabalho nos respectivos setores ou atividades, ocasionado pelo comprometimento das partes envolvidas em melhorar as condi????es e ambientes de trabalho

Colet??nea planejamento e or??amento governamental: volume 1: a metodologia de gest??o estrat??gica do NAE

O texto incorpora uma diversidade de ferramentas de planejamento estrat??gico. Sua principal caracter??stica ?? a de ver o planejamento estrat??gico como um processo e n??o apenas como um projeto que se finda com a antevis??o de cen??rios prospectivos e suas poss??veis solu????es estrat??gicas.

Oficina de metodologia do caf?? com debate na ENAP

O Caf?? com Debate, promovido periodicamente pela ENAP, ?? uma metodologia que possibilita o interc??mbio de ideias entre pares. De maneira informal, os dirigentes e as dirigentes, que atuam predominantemente na administra????o p??blica federal, ouvem experi??ncias nacionais e internacionais sobre um tema de relev??ncia e, em seguida, t??m a oportunidade de debater com o(s) convidado(s) e expor suas d??vidas e posicionamentos

Metodologia para obtenção do hidrograma de escoamento superficial em encostas e canais. Parte I: desenvolvimento e avaliação

Desenvolveu-se uma metodologia que permite obter o hidrograma de escoamento superficial e a vazão máxima para qualquer posição ao longo de uma encosta e para seções transversais de canais utilizando o modelo de ondas cinemáticas. A área da encosta é dividida num sistema matricial composto por 100 linhas e 100 colunas. Na encosta, considera-se que o escoamento ocorre na direção da declividade e que a vazão de cada pixel é a soma da vazão produzida nesse com a vazão advinda dos pixels que contribuem com o escoamento superficial para o pixel em análise. No canal, a vazão é calculada pela soma dos hidrogramas advindos das colunas do sistema reticulado. A comparação entre os valores de lâmina e vazão máxima de escoamento superficial obtidas experimentalmente e calculadas em duas condições (encosta e bacia) permitiu evidenciar que a metodologia, comparada aos métodos Racional e do Número da Curva, ofereceu boas estimativas tanto da lâmina quanto da vazão máxima de escoamento superficial.

Metodologia para obtenção do hidrograma de escoamento superficial em encostas e canais. Parte II: modelo computacional e análise de sensibilidade

Estimativas de vazão máxima de escoamento superficial são necessárias para o projeto de obras hidráulicas em bacias urbanas e rurais. A dificuldade em aplicar os procedimentos disponíveis para calcular a variação do escoamento superficial com o tempo e de seu valor máximo deve-se à inexatidão dos métodos usados para esse objetivo e à variabilidade nos resultados que podem ser obtidos por profissionais que usem o mesmo procedimento. Dessa forma, a investigação de um método que produza estimativas confiáveis da vazão máxima e do hidrograma de escoamento superficial é de grande interesse. Neste trabalho, desenvolveu-se e avaliou-se a sensibilidade de um software (HIDROGRAMA 2.1) que permite a obtenção do hidrograma de escoamento superficial, da vazão máxima e seu tempo de ocorrência, da altura e da velocidade máximas do escoamento, do volume e da lâmina de escoamento superficial em encosta e em canais. O modelo apresentou grande sensibilidade ao período de retorno, à taxa de infiltração estável e ao comprimento da encosta e do canal.

Desenvolvimento de metodologia para determinação de Co, Cr, Fe, Mn, Ni, Se e V em amostras de água produzida da indústria do petróleo através da técnica ICP OES utilizando digestão por micro-ondas

O descarte ou reutilização da água produzida da indústria do petróleo é difícil por causa dos impactos ambientais causados devido à presença de alta salinidade e componentes tóxicos, ou pelo risco de obstrução nas colunas de produção devido à formação de incrustações que causam redução na produção de petróleo e enormes perdas no processo de extração. Assim, o conhecimento da composição química da água produzida é muito importante. O método proposto por este trabalho visa a determinação de elementos traço (Co, Cr, Fe, Mn, Ni, Se e V) em amostras de água produzida de petróleo por espectrometria de emissão óptica com plasma indutivamente acoplado (ICP OES) utilizando a digestão ácida assistida por micro-ondas para o preparo das amostras (15 g de amostra e 2 mL de HNO3 concentrado). A curva analítica construída em HNO3 2% v v-1 foi adotada para o método após verificar que não é necessário o uso de salinidade para equiparação de matriz. Para o elemento Ni, não há necessidade do uso de padrão interno, para os elementos Co, Cr, Fe, Mn e V os melhores resultados foram obtidos usando Sc como padrão interno. Para o elemento Se é recomendado o uso de Y como padrão interno. Os limites de detecção obtidos foram Co 0,67, Cr 1,2, Fe 2,3, Mn 0,49, Ni 1,9, Se 3,7 e V 5,5 μg L-1; e os limites de quantificação foram Co 2,2, Cr 4,0, Fe 7,7, Mn 1,6, Ni 6,5, Se 12,4 e V 18,3 μg L-1. A exatidão do procedimento foi verificada através de testes de recuperação em dois níveis de concentração (40 e 80 μg L-1) e análise dos materiais certificados de referência de água estuarina SLEW-2 e de água do mar NASS-5. Bons valores de recuperação foram obtidos e não houve diferença significativa (95% de confiança) entre os resultados obtidos e os valores certificados dos materiais de referência.