Characterization of TRIB2-mediated resistance to anti-cancer drugs

Disserta����o de Mestrado, Oncobiologia: Mecanismos Moleculares do Cancro, Departamento de Ci��ncias Biom��dicas e Medicina, Universidade do Algarve, 2016

Inferencia de par��metros en l��neas celulares de c��ncer

Objetivos y m��todo de estudio: En el presente trabajo se muestra la comparaci��n de m��todos formulados para dar soluci��n a la inferencia de par��metros en redes de regulaci��n gen��tica artificiales. Este proyecto es motivado por un caso pr��ctico en una red gen��tica proveniente de l��neas celulares de c��ncer reales al que desea extenderse. Dentro de este estudio se incluyen evaluaciones emp��ricas donde se compara el desempe��o de cada una de las metodolog��as presentadas tomando diversas muestras de datos mediante los modelos creados. El prop��sito de esta tesis es contrastar distintas metodolog��as desarrolladas para la inferencia de par��metros de redes gen��ticas artificiales. Esto con el fin de proporcionar evidencia sobre cu��al es m��as apropiada emplear, bas��ndose en criterios de eficiencia y errores de muestra. Contribuciones y conclusiones: La contribuci��n fundamental del presente trabajo radica en realizar un an��lisis de las metodolog��as creadas para inferir par��metros teniendo en cuenta la limitaci��n de pocos datos atribuida a las escasas observaciones con las que se cuentan en experimentos en casos reales.

Evaluaci��n de un implante de c��lulas madre mesenquimales modificadas gen��ticamente con proteínas morfogen��ticas de huesos para la osteog��nesis en ovis aries

Prop��sito y M��todo del Estudio: Introducci��n. La generaci��n de implantes para el tratamiento y regeneraci��n de afecciones del tejido ��seo representan una enorme oportunidad de desarrollo e innovaci��n para muchos campos de la salud humana. Metodolog��a: nosotros generamos un implante de tres componentes (I-3C) constituido por c��lulas madre mesenquimales (CMMs), transducidas ex vivo con un vector adenoviral que expresa una combinaci��n de las proteínas morfogen��ticas de hueso 2 y 7 (AdBMP2/7), embebidas en una matriz ��sea desmineralizada (MOD). Este implante fue probado en un modelo ovino (Ovis aries) en una lesi��n sometida a carga. Resultados: los ensayos in vitro demostraron que el tratamiento seleccionado con mayor potencial osteog��nico es el que contiene la combinaci��n AdBMP2/7 comprobado por PCR en tiempo real, Western Blot y tinciones histol��gicas e inmunohistoqu��micas para las proteínas marcadoras de inducci��n a hueso, osteocalcina y col��geno tipo I. El implante fue colocado en la zona de la lesi��n, creada por una distracci��n en la di��fisis media de la tibia. Se probaron tres grupos de experimentaci��n: control 1 sin implante (S-I); control 2 implante con CMMs (I-CMMs); implante de 3 componentes CMMs modificadas gen��ticamente con adenovirus que expresan proteínas morfogen��ticas de hueso 2 y 7 que se encuentran embebidas en una matriz de hueso desmineralizado (I-3C). Resultados: el seguimiento radiogr��fico por 10 semanas despu��s de la distracci��n ��sea demostr�� una reducci��n en el tiempo de consolidaci��n del grupo I-3C. La tomograf��a computarizada demostr�� en ese mismo grupo, una forma y estructura del hueso postmortem muy parecida a la de una tibia sin lesi��n. Estos hallazgos fueron corroborados por los ensayos de compresi��n e histol��gicos, demostrando que la calidad del hueso nuevo formado fue mayor que la de los grupos sin implante y con CMMs sin modificaci��n gen��tica. Contribuciones y Conclusiones: se logr�� desarrollar un implante de tres componentes constituido por c��lulas madre mesenquimales (CMMs), transducidas ex vivo con un vector adenoviral que expresa una combinaci��n de las proteínas morfogen��ticas de hueso 2 y 7 (AdBMP2/7), que nos permitir�� continuar con los estudios cl��nicos necesarios para evaluar principalmente defectos en huesos y enfermedades relacionadas con el sistema ��seo.

Produ����o de novos anticorpos Anti-CD20 na forma de FvFc em c��lulas de mam��feros

Disserta����o (mestrado)���Universidade de Bras��lia, Instituto de Ci��ncias Biol��gicas, Departamento de Biologia Celular, P��s-Gradua����o em Biologia Molecular, 2015.

O problema religioso como pre��mbulo do idealismo italiano : das teses de Maurizio Viroli �� religi��o da liberdade em Croce

O objetivo do presente artigo �� analisar o quanto o chamado idealismo italiano de Croce e Gentile ��, em verdade, dependente da concep����o religiosa italiana. Para tanto, nos deteremos, na primeira parte do nosso trabalho, principalmente numa an��lise das teses de Maurizio Viroli. J�� no segundo parte do nosso artigo nos deteremos na an��lise dessa tem��tica dentro do conceito de religi��o da liberdade em Croce. Assim, ap��s tal invent��rio, teceremos nossas conclus��es. _______________________________________________________________________________ ABSTRACT

Checkpoint mit��tico como alvo terap��utico para sensibilizar c��lulas cancer��genas a agentes antimit��ticos

Disserta����o de Mestrado, Oncobiologia ��� Mecanismos Moleculares do Cancro, Departamento de Ci��ncias Biom��dicas e Medicina, Universidade do Algarve, 2015

Multibiomarker assessment of cadmium-based quantum dots effects in the marine mussel Mytilus galloprovincialis

Tese de Doutoramento, Ci��ncias do Mar, da Terra e do Ambiente, Ramo: Ci��ncias e Tecnologias do Ambiente, Especializa����o em Ecotoxicologia, Faculdade de Ci��ncias e Tecnologia, Universidade do Algarve, 2016

Dosificaci��n de proteínas plasm��ticas en personas sanas por electroforesis

Tecn��logo M��dico en Laboratorio Cl��nico

Ultramorphology and histochemistry of fat body cells from last Instar larval of the Pachycondyla (=Neoponera) villosa (Fabricius) (Formicidae: Ponerinae)

As c��lulas do corpo gorduroso de Pachycondyla (=Neoponera) villosa distribuem-se como uma ��nica camada entre a cut��cula e o trato digestivo, formando um conjunto de c��lulas agrupadas e recobertas por uma fina membrana. N��o foram identificados tipos celulares distintos por meio da ultramorfologia, por��m a histologia revelou tr��s tipos celulares distintos: os trof��citos, mais abundantes, as c��lulas de urato, distribu��das por entre os trof��citos, e os en��citos, menos abundantes que os demais. Os en��citos s��o comumente observados pr��ximos da cut��cula. Histoquimicamente, os trof��citos apresentaram rea����o positiva para proteínas b��sicas no n��cleo e no citoplasma e rea����o fortemente positiva nos gr��nulos citoplasm��ticos. O teste para carboidratos foi fortemente positivo em todo o citoplasma, enquanto para os lip��deos observou-se rea����o positiva nas ves��culas citoplasm��ticas. em rela����o ��s c��lulas de urato, estas apresentaram rea����o positiva para proteínas b��sicas no n��cleo e citoplasma, por entre as ves��culas. Essas c��lulas n��o apresentaram rea����o para o teste de PAS e Sudan Black B. Quanto aos en��citos, estes apresentaram citoplasma fracamente positivo ao PAS e fortemente positivo ao Sudan Black B e para o azul de bromofenol.

Prospec����o de proteínas relacionadas com a resist��ncia �� Meloidogyne enterolobii em Psidium spp.

O presente estudo tem por objetivo analisar as rea����es oxidativas que ocorrem em cultivares de goiaba (Psidium spp.) e ara���� (Psidium cattleyanum), visando descobrir o que as tornam uma esp��cie suscept��vel e outra resistente, respectivamente.

Papel del inmunogen isg15 de lubina (Dicentrarchus labrax) en las infecciones por betanodavirus

En peces, al igual que en vertebrados superiores, la respuesta antiviral innata est�� mediada por el sistema interfer��n tipo I (IFN I), que act��a mediante la activaci��n de genes denominados isg (interferon-stimulated genes), entre los que se incluye el gen isg15. La prote��na codificada por este gen, denominada ISG15, presenta actividad antiviral actuando como citoquina, o mediante un mecanismo denominado ISGilaci��n, que consiste en su uni��n covalente a proteínas v��ricas o celulares. Entre las enfermedades de etiolog��a viral que afectan a la lubina (Dicentrarchus labrax), destaca la necrosis nerviosa viral, causada por el virus de la necrosis nerviosa (NNV, g��nero Betanodavirus), que presenta dos segmentos de ARN monocatenario de polaridad positiva: ARN1 (polimerasa viral) y ARN2 (prote��na de la c��pside). Las diferencias en la secuencia de la regi��n variable T4 del segmento ARN2 permiten su clasificaci��n en 4 genotipos, siendo el genotipo RGNNV el ��nico asociado a episodios de elevada mortalidad en lubina. El presente estudio contribuye a ampliar el conocimiento del papel del sistema IFN I en lubina frente a infecciones por betanodavirus, describi��ndose la estructura del gen isg15, analizando su transcripci��n en respuesta a poli I:C y RGNNV; y evaluando su actividad in vitro. La lubina presenta un gen isg15, compuesto por dos exones y un intr��n localizado en la regi��n 5���-UTR. El ORF, de 474 pb, codifica una prote��na de 157 amino��cidos constituida por dos dominios tipo ubiquitina y un motivo RLRGG en el extremo carboxilo terminal. La clonaci��n del ORF en el pl��smido pcDNA His/Max, y su posterior transfecci��n en la l��nea celular E-11, ha permitido obtener una l��nea celular estable (DLISG15-E11), en la que se ha demostrado, mediante inmunofluorescencia indirecta, la localizaci��n citoplasm��tica de esta prote��na. El an��lisis de transcripci��n muestra una respuesta m��s temprana e intensa tras la inducci��n por poli I:C que por RGNNV. Poli I:C estimula la expresi��n g��nica desde las 4 hasta las 24 h post-inyecci��n (p.i.) en ambos ��rganos, y con una cin��tica similar. Sin embargo, ambos ��rganos difieren en el nivel de transcripci��n del gen tras la infecci��n por RGNNV, produci��ndose una estimulaci��n temprana, desde las 12 h p.i., y de mayor nivel en el cerebro que en el ri����n cef��lico, ��rgano en el que la expresi��n comienza a las 72 h p.i. La actividad antiviral se ha evaluado mediante el an��lisis comparativo de la replicaci��n de RGNNV, determinada mediante PCR cuantitativa, en c��lulas DLISG15-E11 y c��lulas control no transfectadas, no observ��ndose diferencias significativas. Sin embargo, ISG15 podr��a actuar a otro nivel del ciclo de multiplicaci��n viral, por lo que se est��n realizando ensayos de rendimiento v��rico extracelular mediante titulaci��n, y de ISGilaci��n mediante Western-blot. El hecho de que el cerebro sea el principal ��rgano diana para la multiplicaci��n de betanodavirus, y el papel antiviral atribuido a la ISG15, junto con los resultados obtenidos, contribuyen a dilucidar la importancia de este gen frente a las infecciones por RGNNV en lubina, increment��ndose el conocimiento del papel del sistema del IFN I en la defensa frente a las infecciones v��rcas y la relaci��n pat��geno-hospedador.

An��lise prote��mica de c��lulas n��o fagoc��ticas na fase inicial da infec����o por trypanosoma cruzi

Disserta����o (mestrado)���Universidade de Bras��lia, Faculdade de Medicina, Programa de P��s-Gradua����o em Patologia Molecular, 2015.

Caracterizaci��n funcional de las proteínas TasA y TapA en la formaci��n de fibras de tipo amiloide en Bacillus subtilis

Las proteínas amiloides son un grupo heterog��neo de proteínas diferentes en secuencia aminoac��dica, pero similares en su estructura cuaternaria: fibras enriquecidas en l��minas beta, con gran estabilidad, resistencia y capacidad de uni��n de colorantes espec��ficos, como el rojo congo o la thioflavina T. Estas proteínas han estado tradicionalmente asociadas a patolog��as neurodegenerativas en humanos como el Alzheimer o el Parkinson. Sin embargo, los miembros dentro de esta familia est��n ampliamente distribuidas en la naturaleza, desde bacterias hasta humanos, e intervienen en un amplio rango de funciones biol��gicas, motivo por el que se han denominado ���amiloides funcionales���. En bacterias, los amiloides funcionales son responsables de participar en funciones muy diversas como la interacci��n c��lula-c��lula, con superficies abi��ticas, y formaci��n de biofilms. En Bacillus subtilis, la prote��na amiloide TasA es el componente proteico mayoritario de la matriz extracelular del biofilm de este microorganismo y el principal elemento que constituye las fibras amiloides, mientras que la prote��na auxiliar TapA, presente en mucha menor proporci��n, act��a favoreciendo el ensamblaje de las mismas. Estas act��an como un andamiaje proteico donde se disponen el resto de componentes de la matriz extracelular, lo que confiere a esta estructura una mayor estabilidad y, por consiguiente, proporcionan una mayor robustez al biofilm. En este este trabajo se pretende llevar a cabo el an��lisis de regiones o dominios tanto de TasA como de TapA importantes para la amiloidog��nesis, as�� como para la funcionalidad de ambas proteínas. Para ello, el estudio se ha enfocado desde un punto de vista multidisciplinar, combinando pruebas cl��sicas de caracterizaci��n de amiloides con t��cnicas de biolog��a molecular y diversas pruebas biof��sicas. Los resultados obtenidos hasta la fecha han demostrado la existencia de peque��as secuencias, dentro de las proteínas TasA o TapA con capacidad para polimerizar en la forma de fibras, lo que muestra su importancia en el proceso de fibrilaci��n y en la funcionalidad de ambas proteínas. En el caso de la prote��na TapA, las regiones analizadas ponen de manifiesto la importancia de su extremo amino-terminal tanto en la funcionalidad de la prote��na como en su interacci��n con TasA.

Estudio prote��mico de las ves��culas extracelulares y del secretoma de "Candida albicans" y an��lisis funcional de proteínas de superficie celular

Candida albicans es un importante pat��geno oportunista en humanos, que puede causar distintos tipos de infecciones, desde micosis superficiales hasta sist��micas. La candidiasis invasiva es una enfermedad que puede causar mortalidad en pacientes inmunocomprometidos. Para causar da��o en el hospedador, C. albicans cuenta con una serie de factores de virulencia. Entre ellos destaca la capacidad de cambiar su forma de crecimiento de levadura a hifa. La superficie celular es la estructura m��s externa de la c��lula y el punto de contacto entre el hongo y el hospedador. Las proteínas de superficie tienen un papel importante en la integridad estructural de la c��lula y en la adherencia e invasi��n de c��lulas del hospedador. Una de las proteínas localizadas en la superficie celular es Ecm33, una prote��na de pared celular con anclaje glicosilfosfatidilinositol (GPI). La deleci��n de esta prote��na afecta a la morfolog��a tanto de levaduras como de hifas, dando como resultado c��lulas con la pared celular alterada y virulencia reducida tanto en condiciones in vitro como in vivo. El secretoma o las proteínas secretadas por C. albicans son tambi��n relevantes en la interacci��n pat��geno-hospedador. C. albicans secreta muchas proteínas importantes relacionadas con diferentes procesos, entre los que se incluyen la formaci��n de biofilms, la adquisici��n de nutrientes y el mantenimiento de la integridad de la pared celular. Muchas de estas proteínas secretadas, como las pertenecientes a las familias de aspartil proteasas (Sap) y la familia de fosfolipasas B (Plb), tambi��n han sido detectadas en la pared celular, ya que deben pasar a trav��s de ella en su tr��nsito hacia el medio extracelular. Estas proteínas tienen un p��ptido se��al en el extremo N-terminal que es el responsable de dirigirlas a la ruta cl��sica de secreci��n. Sin embargo, cerca de un tercio de las proteínas identificadas en el medio extracelular de C. albicans no poseen dicho p��ptido se��al en su secuencia...

Culturas celulares

As culturas celulares apareceram no s��culo XX e t��m vindo a evoluir como m��todo de estudo e an��lise de patologias e de novos medicamentos para as combater. Com o passar dos anos surgiram diferentes m��todos de cultivo de c��lulas diversificando assim as culturas celulares em mono-camada, suspensas e imobilizadas. Um dos prop��sitos das culturas celulares �� a manipula����o das c��lulas de modo a permitir a visualiza����o das altera����es celulares como o envelhecimento da c��lula (senesc��ncia), a apoptose, a necrose e a autofagia da c��lula. Este m��todo tem provado ser ��til tanto no diagnostico e tratamento de v��rias patologias como em doen��as oncol��gicas, neuro-degenerativas ou do sistema imunit��rio.