Checkpoint mitótico como alvo terapêutico para sensibilizar células cancerígenas a agentes antimitóticos

Dissertação de Mestrado, Oncobiologia – Mecanismos Moleculares do Cancro, Departamento de Ciências Biomédicas e Medicina, Universidade do Algarve, 2015

Muitos cancros são tratados com agentes antimitóticos, como o taxol. Estes agentes param as células em mitose ao danificarem os microtúbulos, ativando o checkpoint mitótico (SAC), mecanismo que controla a correta segregação dos cromossomas durante a mitose. Contudo, células resistentes conseguem contornar esses danos e prosseguir com a mitose, emergindo assim o SAC como potencial alvo terapêutico no tratamento do cancro. Desta forma surgiu o primeiro objetivo deste trabalho: identificar potenciais inibidores da proteína BubR1, envolvida na ativação do SAC e na estabilização das ligações entre microtúbulos e cinetocoros, numa linha celular de cancro cervical. Dos compostos testados houve um que se destacou pela sua interferência na viabilidade celular e revelou ser um potencial inibidor desta proteína. O objetivo principal deste trabalho foi sensibilizar duas linhas celulares de glioblastoma e uma linha celular de cancro do pulmão ao taxol através da depleção das proteínas Cdc20 ou Spindly, envolvidas na saída da mitose e no silenciamento do SAC, respetivamente. Para isso, estas proteínas foram depletadas por RNAi e foi adicionado taxol às mesmas células. Esta depleção provocou uma redução da viabilidade celular e da capacidade clonogénica, tendo este efeito sido mais pronunciado quando se adicionou taxol, sugerindo que a depleção das proteínas Cdc20 ou Spindly sensibiliza estas células à ação do taxol.

Many cancers are treated with antimitotic agents, such as taxol. These agents stop cells in mitosis by damaging microtubules, activating the mitotic checkpoint (SAC), which controls the correct chromosome segregation during mitosis. However, resistant cells can bypass these damages and proceed with mitosis, emerging thus the SAC as a potential therapeutic target in the treatment of cancer. In this way arose the first aim of this work: to identify potential BubR1 inhibitors, a protein involved in SAC activation and in the stabilization of the bindings between microtubules and kinetochores, in a cervical cancer cell line. Of the compounds tested there was one that stood out for its interference on cell viability and revealed to be a potential inhibitor of this protein. The main goal of this work was to sensitize two glioblastoma cell lines and a lung cancer cell line to taxol by depleting Cdc20 or Spindly, involved in the mitotic exit and in SAC silencing, respectively. To achieve this goal, these proteins were depleted by RNAi, and taxol was added to cells lacking these proteins. These depletions caused a reduction in cell viability and in clonogenic ability, which was more evident when taxol was added, suggesting that depletion of Cdc20 or Spindly sensitizes these cells to the action of taxol.

CESPU – Cooperativa de Ensino Politécnico e Universitário (Referência do projeto: CheckTax-CESPU-2014)