Vector-mediated delivery of a polyamide ("peptide") nucleic acid analogue through the blood-brain barrier in vivo.

Polyamide ("peptide") nucleic acids (PNAs) are molecules with antigene and antisense effects that may prove to be effective neuropharmaceuticals if these molecules are enabled to undergo transport through the brain capillary endothelial wall, which makes up the blood-brain barrier in vivo. The model PNA used in the present studies is an 18-mer that is antisense to the rev gene of human immunodeficiency virus type 1 and is biotinylated at the amino terminus and iodinated at a tyrosine residue near the carboxyl terminus. The biotinylated PNA was linked to a conjugate of streptavidin (SA) and the OX26 murine monoclonal antibody to the rat transferrin receptor. The blood-brain barrier is endowed with high transferrin receptor concentrations, enabling the OX26-SA conjugate to deliver the biotinylated PNA to the brain. Although the brain uptake of the free PNA was negligible following intravenous administration, the brain uptake of the PNA was increased at least 28-fold when the PNA was bound to the OX26-SA vector. The brain uptake of the PNA bound to the OX26-SA vector was 0.1% of the injected dose per gram of brain at 60 min after an intravenous injection, approximating the brain uptake of intravenously injected morphine. The PNA bound to the OX26-SA vector retained the ability to bind to synthetic rev mRNA as shown by RNase protection assays. In summary, the present studies show that while the transport of PNAs across the blood-brain barrier is negligible, delivery of these potential neuropharmaceutical drugs to the brain may be achieved by coupling them to vector-mediated peptide-drug delivery systems.

Blockade of T- and B-lymphocyte development by antibody to the gamma c subunit of the receptors for interleukins 2, 4, and 7.

Cytokines are important regulators of hematopoesis. Mutations in gamma c, which is a subunit shared by the receptors for interleukin (IL) 2, IL-4, and IL-7, have been causally associated with human X chromosome-linked severe combined immunodeficiency disease. This finding indicates a mandatory role for cytokine receptor signaling at one or more stages of lymphocyte development. To evaluate the cellular level at which gamma c is critical for lymphopoiesis, the effect of monoclonal antibodies to gamma c on the capacity of syngeneic bone marrow cells to reconstitute the hematopoietic compartment of lethally irradiated recipient mice was examined. We show that monoclonal antibody to gamma c blocked lymphocyte development at or before the appearance of pro-B cells and prior to or at the seeding of the thymus by precursor cells while erythromyeloid cell development was normal. These results suggest that one level of lymphocyte development that requires gamma c is a point in hematopoietic cell differentiation near the divergence of lymphopoiesis and erythromyelopoesis.

A peptide interaction in the major groove of RNA resembles protein interactions in the minor groove of DNA.

A 17-amino acid arginine-rich peptide from the bovine immunodeficiency virus Tat protein has been shown to bind with high affinity and specificity to bovine immunodeficiency virus transactivation response element (TAR) RNA, making contacts in the RNA major groove near a bulge. We show that, as in other peptide-RNA complexes, arginine and threonine side chains make important contributions to binding but, unexpectedly, that one isoleucine and three glycine residues also are critical. The isoleucine side chain may intercalate into a hydrophobic pocket in the RNA. Glycine residues may allow the peptide to bind deeply within the RNA major groove and may help determine the conformation of the peptide. Similar features have been observed in protein-DNA and drug-DNA complexes in the DNA minor groove, including hydrophobic interactions and binding deep within the groove, suggesting that the major groove of RNA and minor groove of DNA may share some common recognition features.

Identification of mutations in the Wiskott-Aldrich syndrome gene and characterization of a polymorphic dinucleotide repeat at DXS6940, adjacent to the disease gene.

The Wiskott-Aldrich syndrome (WAS) is an X-chromosome-linked recessive disease characterized by eczema, thrombocytopenia, and immunodeficiency. The disease gene has been localized to the proximal short arm of the X chromosome and recently isolated through positional cloning. The function of the encoded protein remains undetermined. In this study we have characterized mutations in 12 unrelated patients to confirm the identity of the disease gene. We have also revised the coding sequence and genomic structure for the WAS gene. To analyze further the transmittance of the disease gene, we have characterized a polymorphic microsatellite at the DXS6940 locus within 30 kb of the gene and demonstrate the inheritance of the affected alleles in families with a history of WAS.

Loss of the catalytic subunit of the DNA-dependent protein kinase in DNA double-strand-break-repair mutant mammalian cells.

The DNA-dependent protein kinase (DNA-PK) consists of three polypeptide components: Ku-70, Ku-80, and an approximately 350-kDa catalytic subunit (p350). The gene encoding the Ku-80 subunit is identical to the x-ray-sensitive group 5 complementing gene XRCC5. Expression of the Ku-80 cDNA rescues both DNA double-strand break (DSB) repair and V(D)J recombination in group 5 mutant cells. The involvement of Ku-80 in these processes suggests that the underlying defect in these mutant cells may be disruption of the DNA-PK holoenzyme. In this report we show that the p350 kinase subunit is deleted in cells derived from the severe combined immunodeficiency mouse and in the Chinese hamster ovary cell line V-3, both of which are defective in DSB repair and V(D)J recombination. A centromeric fragment of human chromosome 8 that complements the scid defect also restores p350 protein expression and rescues in vitro DNA-PK activity. These data suggest the scid gene may encode the p350 protein or regulate its expression and are consistent with a model whereby DNA-PK is a critical component of the DSB-repair pathway.

The glucocorticoid receptor type II complex is a target of the HIV-1 vpr gene product.

The vpr gene of human immunodeficiency virus type 1 (HIV-1) encodes a 15-kDa virion-associated protein that functions as a regulator of cellular processes linked to the HIV life cycle. We report the interaction of a 41-kDa cytosolic viral protein R interacting protein 1 (Rip-1) with Vpr in vitro. Rip-1 displays a wide tissue distribution, including relevant targets of HIV infection. Vpr protein induced nuclear translocation of Rip-1, as did glucocorticoid receptor (GR)-II-stimulating steroids. Importantly, Vpr and Rip-1 coimmunoprecipitated with the human GR as part of an activated receptor complex. Vpr complementation of a vpr mutant virus was also mimicked by GR-II-stimulating steroids. Vpr and GR-II actions were inhibited by mifepristone, a GR-II pathway inhibitor. Together these data directly link the activity of the vpr gene product to the glucocorticoid steroid pathway and provide a biochemical mechanism for the cellular and viral activity of Vpr, as well as suggest that a unique class of antivirals, which includes mifepristone (RU486), may influence HIV-1 replication.

Risco cardiovascular e sua associação com variáveis demográficas, clínicas e psicossociais em pessoas vivendo com HIV/aids

Trata-se de um estudo analítico de corte transversal, que visa avaliar o risco cardiovascular de PVHA segundo o Escore de Framingham e identificar a associação entre o risco e as variáveis demográficas, comportamentais, psicossociais e clínicas de PVHA. O estudo foi aprovado na Secretaria Municipal de Saúde e no Comitê de Ética da Escola de Enfermagem de Ribeirão Preto, a coleta de dados foi realizada no período de outubro de 2014 a agosto de 2015 em cinco Serviços de Atendimento Especializado às PVHA utilizando questionário sociodemográfico, clínico e comportamental, avaliação da alimentação saudável, Inventário de Sintomas de Stress para Adultos de Lipp e avaliação do risco cardiovascular por meio do Escore de Framingham. A análise dos dados ocorreu através de estatística descritiva e teste de associação entre as variáveis, onde foi adotado nível de significância com valor de p<0,05. Identificou-se que 58,3% pertenciam ao sexo masculino, 69,1% apresentavam idade acima de 40 anos, com média de 44,4 anos, 40,6% referiram ser brancos e 40,0% pardos, e 70,9% eram heterossexuais. Observou-se que 64,0% eram sedentários, 35,4% tabagistas e 40,0% faziam uso de bebida alcóolica regularmente. Do mesmo modo, 73,7% consideraram sua alimentação saudável, no entanto, ao ser avaliado de acordo com o escore da alimentação saudável, 70,9% obtiveram score intermediário para alimentação. Com relação às variáveis psicossociais, foi identificado que 52,0% tinham menos de oito anos de estudo, e 80,6% referiram receber até três salários mínimos por mês. Quanto aos sintomas de estresse, foi visto que 29,1% e 22,3% estavam nas fases de resistência e exaustão, respectivamente. Além disso, identificou-se que 15,4% da amostra tinha diagnóstico médico para depressão e que 71,4% não realizavam atividades de lazer regularmente. Com relação às variáveis clínicas gerais, 57,7% referiram antecedentes familiares para HAS, 40,6% para DM, 21,7% para IAM e 27,4% para AVE. Quanto aos antecedentes pessoais, foi visto que 15,4% eram hipertensos, 8,0% eram diabéticos e 8,0% tinham dislipidemia. Desta mesma amostra, 45,2% apresentavam IMC maior que 25,0 kg/m² e 41,7% estavam em síndrome metabólica. Com relação às variáveis clínicas relacionadas ao HIV, observou-se que 42,2% e 32,0% possuíam o diagnóstico de soropositividade e fazem uso de TARV há mais de dez anos, respectivamente. A contagem de células TCD4+ e carga viral mostrou que 82,8% dos participantes apresentaram contagem maior que 350 cels/mm³, e 80,6% tinham carga viral indetectável. Foi identificado que 25,8% dos sujeitos apresentam risco cardiovascular de médio a alto, segundo o Escore de Framingham. Apenas as variáveis sociodemográficas sexo (p=0,006), idade (p<0,001) e estado civil (p=0,003) apresentaram associação com o risco cardiovascular calculado pelo Escore de Framingham. Nas variáveis comportamentais, as fases de estresse (p=0,039) tiveram associação com o risco cardiovascular, e com relação às variáveis clínicas, antecedentes familiares para DM (p=0,035), HAS, DM e SM (p<0,001) e DLP (p=0,030) apresentaram significância estatística. Nas variáveis clínicas relacionadas ao HIV, o tempo de diagnóstico (p=0,005) e o tempo de TARV (p=0,038) também apresentaram associação. Conclui-se que 25,8% de PVHA no município de Ribeirão Preto apresentam risco cardiovascular de moderado a alto, medido pelo Escore de Framingham

A integralidade no cuidado das pessoas vivendo com HIV e AIDS: a experiência do Centro de Referência e Treinamento em DST/AIDS da SES-SP

Ao assumir o compromisso com a prevenção e tratamento, baseada no princípio da integralidade, a estratégia brasileira, fez a diferença na resposta nacional à aids nas décadas de 1980/90 e criou um novo paradigma que mostrou-se avançado do ponto de vista técnico, ético e político, contribuindo para a mudança nas recomendações das agências internacionais (OMS\\Banco Mundial) - do \"não tratar e só prevenir\" do início dos anos 1990, para o \"Tratamento como Prevenção\", base da atual proposta dos 90/90/90. Essa estratégia de controle da epidemia concentra responsabilidade na Rede de Serviços, em um período de discussão sobre mudanças no modelo de atenção a ser priorizado no país. Características relevantes dos contextos político e programáticos permitiram uma maior efetivação do cuidado às PVHA no Estado de São Paulo. O objetivo do presente estudo é recuperar a história do Centro de Referência e Treinamento em DST/Aids (CRT) na gestão e organização programática do cuidado em HIV/Aids no Estado de São Paulo, no período de 1988 a 2015, interpretando-a sob a perspectiva dos aspectos facilitadores e limitadores da incorporação prática do princípio da integralidade às ações de saúde. Realizou-se, nesse sentido, uma revisão narrativa da literatura sobre o tema da integralidade no campo da Saúde Coletiva Brasileira nas últimas cinco décadas. Tomando por base o cotejamento com esse desenvolvimento conceitual, a trajetória do CRT foi analisada por meio de entrevistas com atores-chaves no processo da gestão e organização programática do cuidado das PVHA no Estado de São Paulo, e análise dos documentos produzidos no processo. Esta análise foi organizada em torno de dois grandes eixos temáticos: (1) a criação e estruturação do CRT, e (2) as relações entre o CRT, os Programas Municipais de DST/aids e a rede de serviços assistenciais no Estado de São Paulo. Entre os resultados do estudo, destacam-se o resgate e reflexão crítica sobre o desenvolvimento dos discursos tecnocientíficos sobre integralidade no contexto das propostas de reforma da saúde no Brasil; a incorporação desses construtos às propostas desenvolvidas pelo CRT, especialmente em torno aos conceitos de vulnerabilidade, cuidado, clínica ampliada e direitos humanos em saúde; e a identificação de arranjos institucionais, estratégias técnicas e configurações políticas que permitiram ao CRT o exercício articulado de três níveis de gestão do cuidado (das PVHA, dos serviços e da Rede) numa mesma plataforma. Conclui-se apontando alcances e limites na efetivação da integralidade, que se mostraram desiguais nos três níveis de gestão do cuidado. Aponta-se maiores avanços na dimensão gerencial da rede e as maiores dificuldades na efetivação da integralidade no cuidado das PVHA e na gestão dos serviços de saúde

Impacto de la mutilación genital femenina en los objetivos del milenio

Objetivo: Relacionar la Mutilación Genital Femenina como factor negativo para la consecución de los Objetivos de Desarrollo del Milenio 1, 3, 4, 5 y 6. Métodos: Se ha realizado la recogida de datos a través de una revisión integradora de la literatura en los años 2014 y 2015. Se consultaron las bases de datos Medline/PubMed, Web of Science, LILACS, SCIELO, Tesis Doctorales TESEO y en las webs de WOK, UNICEF, UNAF y WHO utilizando los descriptores: circuncisión femenina, objetivos de desarrollo del milenio y mutilación genital femenina. Se incluyeron artículos publicados entre los años de 2010 y 2015, y se seleccionaron finalmente 24 artículos. Resultados: La Mutilación Genital Femenina es una práctica basada en discriminaciones de género que refuerza e incentiva el círculo de la pobreza. Provoca complicaciones físicas que pueden repercutir en la mortalidad y morbilidad infantil, así como en complicaciones en el embarazo y el parto y en la adquisición del virus de la inmunodeficiencia humana. Conclusión: La lucha contra la Mutilación Genital Femenina contribuye a la consecución de cinco de los ocho Objetivos del Milenio.

Microbial translocation and immune activation in HIV infection

Trabalho Final do Curso de Mestrado Integrado em Medicina, Faculdade de Medicina, Universidade de Lisboa, 2014

Lesão hiperemiada do bordo palpebral

Trabalho Final do Curso de Mestrado Integrado em Medicina, Faculdade de Medicina, Universidade de Lisboa, 2014

Um caso de neuropatia óptica sifilítica irreversível

Trabalho Final do Curso de Mestrado Integrado em Medicina, Faculdade de Medicina, Universidade de Lisboa, 2014

Étude de la migration des populations de lymphocytes B du sang de patients infectés par le virus d’immunodéficience humaine (VIH)

La dérégulation du compartiment de cellules B est une conséquence importante de l’infection par le virus de l’immunodéficience humaine (VIH-1). On observe notamment une diminution des nombres de lymphocytes B sanguins ainsi qu’une variation des fréquences relatives des différentes populations de lymphocytes B chez les individus infectés par rapport aux contrôles sains. Notre laboratoire a précédemment démontré l’implication des cellules dendritiques dans la dérégulation des lymphocytes B via la roduction excessive de BLyS/BAFF, un stimulateur des cellules B. De plus, lors l’études menées chez la souris transgénique présentant une maladie semblable au SIDA, et chez la souris BLyS/BAFF transgénique, l’infection au VIH-1 fut associée à une expansion de la zone marginale (MZ) de la rate. De façon intéressante, nous observons chez les contrôleurs élites une diminution de la population B ‘mature’ de la MZ. Il s’agit du seul changement important chez les contrôleurs élites et reflète possiblement un recrutement de ces cellules vers la périphérie ainsi qu’une implication dans des mécanismes de contrôle de l’infection. Pour tenter d’expliquer et de mieux comprendre ces variations dans les fréquences des populations B, nous avons analysé les axes chimiotactiques CXCL13-CXCR5, CXCL12-CXCR4/CXCR7, CCL20-CCR6 et CCL25-CCR9. L’étude longitudinale de cohortes de patients avec différents types de progression clinique ou de contrôle de l’infection démontre une modulation des niveaux plasmatiques de la majorité des chimiokines analysées chez les progresseurs rapides et classiques. Au contraire, les contrôleurs élites conservent des niveaux normaux de chimiokines, démontrant leur capacité à maintenir l’homéostasie. La migration des populations de cellules B semble être modulée selon la progression ou le contrôle de l’infection. Les contrôleurs élites présentent une diminution de la population B ‘mature’ de la MZ et une augmentation de la fréquence d’expression du récepteur CXCR7 associé à la MZ chez la souris, suggérant un rôle important des cellules de la MZ dans le contrôle de l’infection au VIH-1. De façon générale, les résultats dans cette étude viennent enrichir nos connaissances du compartiment de cellules B dans le contexte de l’infection au VIH-1 et pourront contribuer à élaborer des stratégies préventives et thérapeutiques contre ce virus.

Acidentes com perfurocortantes em profissionais da assistência do SAMU, Maceió

Introdução – Os acidentes de trabalho envolvendo material biológico entre profissionais de saúde são frequentes e constituem um problema de saúde pública, pois representam uma preocupação constante das instituições e dos profissionais de saúde. Os profissionais do pré hospitalar tornam-se mais expostos pela tensão emocional vivida, pela natureza e circunstâncias do seu exercício profissional. Objetivos – Identificar a ocorrência de acidentes ocupacionais com materiais perfurocortantes nos profissionais de saúde do SAMU Maceió; identificar os acidentes mais frequentes, os períodos em que ocorrem e avaliar as condutas tomadas após o acidente. Métodos – Estudo descritivo com orientação analítico-descritiva desenvolvido numa amostra de 40 profissionais de saúde, Enfermeiro socorrista, Técnico Enfermagem e Médicos Socorristas. A recolha de informação foi suportada num questionário elaborado para o efeito. Resultados – A nossa amostra apresentou uma média de idades de 39,2 anos, o sexo feminino foi maioritário com 70,0% e 50,0% trabalha entre 6 a 10 anos na unidade. A maioria dos acidentes perfuro cortantes foram provocados por agulhas (75,0%) e dos quais não resultou incapacidade em 75%. A maioria dos acidentes ocorreram no verão e no turno da noite. Grande número de profissionais (70%) não cumpriu com as normas de procedimentos após o acidente e 80,0% dos profissionais não realizaram a quimioprofilaxia, não cumprindo com o protocolo do Ministérios da Saúde do Brasil. O paciente-fonte foi identificado em 87,5% dos casos mas verificamos uma subnotificação dos acidentes pois 45,0% dos profissionais não o fizeram. Nenhum profissional frequentou formação específica sobre acidentes de trabalho Conclusões – Verificamos uma alta incidência de acidentes perfurocortantes entre os profisionais do SAMU. Existe uma subnotificação do acidente e um déficite nas condutas apropriadas após o acidente. A população estudada necessita de uma maior sensibilização/formação quanto às medidas preventivas de segurança no ambiente de trabalho e motivação para o controle e prevenção dos acidentes ocupacionais no exercício de sua profissão. Palavras-chave: Acidente de trabalho. Materiais biológicos. Materiais perfurocortantes.

Heterogeneity in testing practices for infections during pregnancy: national survey across Switzerland.

QUESTION Detection and treatment of infections during pregnancy are important for both maternal and child health. The objective of this study was to describe testing practices and adherence to current national guidelines in Switzerland. METHODS We invited all registered practicing obstetricians and gynaecologists in Switzerland to complete an anonymous web-based questionnaire about strategies for testing for 14 infections during pregnancy. We conducted a descriptive analysis according to demographic characteristics. RESULTS Of 1138 invited clinicians, 537 (47.2%) responded and 520 (45.6%) were eligible as they are currently caring for pregnant women. Nearly all eligible respondents tested all pregnant women for group B streptococcus (98.0%), hepatitis B virus (HBV) (96.5%) and human immunodeficiency virus (HIV) (94.7%), in accordance with national guidelines. Although testing for toxoplasmosis is not recommended, 24.1% of respondents tested all women and 32.9% tested at the request of the patient. Hospital doctors were more likely not to test for toxoplasmosis than doctors working in private practice (odds ratio [OR] 2.52, 95% confidence interval [CI] 1.04-6.13, p = 0.04). Only 80.4% of respondents tested all women for syphilis. There were regional differences in testing for some infections. The proportion of clinicians testing all women for HIV, HBV and syphilis was lower in Eastern Switzerland and the Zurich region (69.4% and 61.2%, respectively) than in other regions (range 77.1-88.1%, p <0.001). Most respondents (74.5%) said they would appreciate national guidelines about testing for infections during pregnancy. CONCLUSIONS Testing practices for infections in pregnant women vary widely in Switzerland. More extensive national guidelines could improve consistency of testing practices.