"Staying Alive" while "Living the Life" : conceptualizations of risk among homeless youth

Résumé Le but de cette thèse est de comprendre les représentations du risque chez les jeunes de la rue. Plus précisément, elle s’intéresse à appréhender les constructions du risque que font les jeunes de la rue eux-mêmes, d’autant plus que ces jeunes sont définis comme un groupe à risque. Si le risque est plus souvent défini de manière stricte comme le mal éventuel, dans cette étude, il est défini plus largement intégrant l’idée des opportunités et prises de risque. Ancrée dans une perspective double du constructionnisme social et de l’interactionnisme symbolique, cette recherche a exploré les savoirs des jeunes sur les risques qu’ils vivaient dans les contextes observés et la manière dont ils les appréhendaient. Pour y parvenir, cette recherche s’inscrit dans une approche ethnographique pour mieux comprendre le monde des jeunes de la rue, utilisant des méthodes d'observation participante et dévoilée et des entrevues informelles variées. Cette approche globale permet de saisir comment les jeunes définissent leur capacité à estimer, gérer, éviter ou prendre des risques. L’utilisation d’une perspective longitudinale (de un à deux ans) et les relations de confiance bâties avec ces jeunes, ont permis de suivre comment la construction identitaire des jeunes observés a influencé leurs perception du risque et leurs pratiques de débrouillardise. En outre, les liens établis ont permis de révéler les points de vue singuliers des jeunes mais aussi leurs savoirs expérientiels relatifs aux risques. Il s’agit dans cette étude de montrer à partir des théories générales qui définissent nos sociétés comme des sociétés du risque, comment des individus, identifiés comme appartenant à un groupe à risque, définissent et gèrent leurs risques à partir de leur propre expérience et point de vue afin de révéler la diversité et la complexité des expériences et savoirs des jeunes de la rue à l’endroit du risque. En effet, cette thèse montre qu’un ancrage dans une sociologie du risque permet de sortir de l’image de victime ou de déviance associée généralement aux jeunes de la rue mais qu’elle demeure marquée par la promotion de la sécurité légitimant intervention et régulation de la situation des jeunes de la rue tout en ignorant l’expérience même des jeunes. Les discours sur les risques associés à la rue sont alors inscrits dans une logique d’expertise. Cette étude vise à sortir de ces préconceptions des risques pris par les jeunes de la rue pour au contraire s’attarder à comprendre comment se définit le risque à partir du sens que les jeunes accordent et les expériences qu’ils en ont. Mots clés: jeunes itinérants, jeunes de la rue, le risque, à risque, victimisation, déviance, identité.

Homogeneity and heterogeneity of political traditions in the remaking of world order

Deux décennies après la chute de l'URSS (1991), ce mémoire propose une réévaluation de la thèse de Francis Fukuyama sur la Fin de l'Histoire, élaborée en 1989, qui postule qu'avec la chute de l'URSS aucune idéologie ne peut rivaliser avec la démocratie libérale capitaliste; et de la thèse de Samuel P. Huntington sur le Choc des civilisations, élaborée en 1993, qui pose l'existence d'un nombre fini de civilisations homogènes et antagonistes. Pourtant, lorsque confrontées à une étude approfondie des séquences historiques, ces deux théories apparaissent pour le moins relatives. Deux questions ont été traitées: l'interaction entre Idéologie et Conditions historiques, et la thèse de l'homogénéité intracivilisationnelle et de l'hétérogénéité antagoniste intercivilisationnelle. Sans les invalider complètement, cette recherche conclut toutefois que ces deux théories doivent être nuancées; elles se situent aux deux extrémités du spectre des relations internationales. La recherche effectuée a montré que les idéologies et leur poids relatif sont tributaires d'un contexte, contrairement à Fukuyama qui les pose dans l'absolu. De plus, l'étude de la Chine maoïste et particulièrement de la pensée de Mao Zedong montre que les traditions politiques locales sont plus hétérogènes qu'il n'y paraît au premier abord, ce qui relativise la thèse de Huntington. En conclusion, les rapports entre États sont plus dynamiques que ne le laissent penser les thèses de Fukuyama et de Huntington.

A study of chymotrypsin immobilization conditions for improved peptide mapping

La cartographie peptidique est une technique de grande importance utilisée lors de l’identification des protéines et la caractérisation des modifications post-traductionnelles des protéines. Deux méthodes sont utilisées afin de couper les protéines en peptides pour la cartographie : les méthodes chimiques et les méthodes enzymatiques. Dans ce projet, l’enzyme chymotrypsine a été utilisée pour l’hydrolyse (la digestion) des liens peptidiques. Cependant, l’autoprotéolyse des enzymes peut augmenter la complexité des échantillons, rendant ainsi ardue l’obtention de pics résolus suite à l’apparition de pics non-désirés dans la carte peptidique. Par conséquent, nous avons utilisé la réticulation des enzymes protéolytiques par réaction avec le glutaraldéhyde (GA) donnant une enzyme insoluble afin de réduire l’autoprotéolyse. L’immobilisation de la chymotrypsine par GA a été effectuée selon une méthode rapportée précédemment par le groupe Waldron. L’électrophorèse capillaire (CE) couplée à l’absorption UV-visible a été utilisée pour la séparation et la détection de peptides et pour obtenir ainsi une cartographie peptidique. Deux tampons différents ont été évalués afin d’obtenir les meilleures conditions pour la digestion de substrats protéiques par la chymotrypsine libre (soluble) ou la GAchymotrypsine et l’analyse par CE. Les cartes des peptides autoprotéolytiques ont été comparées entre les deux formats de chymotrypsine. Afin d’améliorer la cartographie peptidique, nous avons évalué trois méthodes de conditionnement du capillaire CE et deux méthodes pour stopper la digestion. Le bicarbonate d’ammonium s’est avéré être le tampon optimal pour la digestion en solution et l’utilisation d’un bain d’acétone et de glace sèche s’est avérée être la méthode optimale pour stopper la digestion. Une solution de SDS, 25 mM, dans l’étape de rinçage a été utilisée après chaque analyse CE et a permis d’améliorer la résolution des cartes peptidiques. La comparaison entre l’autoprotéolyse de la chymotrypsine libre et de celle immobilisé par GA a été effectuée par des tests utilisant une gamme de six différentes combinaisons de conditions afin d’évaluer le temps (30 et 240 min) et la température de digestion (4, 24 et 37°C). Dans ces conditions, nos résultats ont confirmé que le GA-chymotrypsine réduit l’autoprotéolyse par rapport à l’enzyme libre. La digestion (à 37°C/240 min) de deux substrats modèles par la chymotrypsine libre et immobilisée en fonction de la température de dénaturation du substrat a été étudiée. iii Avant la digestion, les substrats (l’albumine de sérum bovine, BSA, et la myoglobine) ont été dénaturés par chauffage pendant 45 min à trois températures différentes (60, 75 et 90°C). Les résultats ont démontré que la dénaturation par chauffage du BSA et de la myoglobine n’a pas amélioré la cartographie peptidique pour la GA-chymotrypsine, tandis que la digestion de ceux-ci en présence de la chymotrypsine libre a amélioré de façon quantifiable à des températures élevées. Ainsi, le chauffage du substrat à 90°C avec l’enzyme soluble facilite le dépliement partiel du substrat et sa digestion limitée, ce qui a été mieux pour la myoglobine que pour la BSA.

Unfolded singularities of analytic differential equations

La thèse est composée d’un chapitre de préliminaires et de deux articles sur le sujet du déploiement de singularités d’équations différentielles ordinaires analytiques dans le plan complexe. L’article Analytic classification of families of linear differential systems unfolding a resonant irregular singularity traite le problème de l’équivalence analytique de familles paramétriques de systèmes linéaires en dimension 2 qui déploient une singularité résonante générique de rang de Poincaré 1 dont la matrice principale est composée d’un seul bloc de Jordan. La question: quand deux telles familles sontelles équivalentes au moyen d’un changement analytique de coordonnées au voisinage d’une singularité? est complètement résolue et l’espace des modules des classes d’équivalence analytiques est décrit en termes d’un ensemble d’invariants formels et d’un invariant analytique, obtenu à partir de la trace de la monodromie. Des déploiements universels sont donnés pour toutes ces singularités. Dans l’article Confluence of singularities of non-linear differential equations via Borel–Laplace transformations on cherche des solutions bornées de systèmes paramétriques des équations non-linéaires de la variété centre de dimension 1 d’une singularité col-noeud déployée dans une famille de champs vectoriels complexes. En général, un système d’ÉDO analytiques avec une singularité double possède une unique solution formelle divergente au voisinage de la singularité, à laquelle on peut associer des vraies solutions sur certains secteurs dans le plan complexe en utilisant les transformations de Borel–Laplace. L’article montre comment généraliser cette méthode et déployer les solutions sectorielles. On construit des solutions de systèmes paramétriques, avec deux singularités régulières déployant une singularité irrégulière double, qui sont bornées sur des domaines «spirals» attachés aux deux points singuliers, et qui, à la limite, convergent vers une paire de solutions sectorielles couvrant un voisinage de la singularité confluente. La méthode apporte une description unifiée pour toutes les valeurs du paramètre.

Effect of combined heat and high-pressure treatments on the texture of chicken breast muscle (Pectoralis fundus)

Commercially supplied chicken breast muscle was subjected to simultaneous heat and pressure treatments. Treatment conditions ranged from ambient temperature to 70 °C and from 0.1 to 800 MPa, respectively, in various combinations. Texture profile analysis (TPA) of the treated samples was performed to determine changes in muscle hardness. At treatment temperatures up to and including 50 °C, heat and pressure acted synergistically to increase muscle hardness. However, at 60 and 70 °C, hardness decreased following treatments in excess of 200 MPa. TPA was performed on extracted myofibrillar protein gels that after treatment under similar conditions revealed similar effects of heat and pressure. Differential scanning calorimetry analysis of whole muscle samples revealed that at ambient pressure the unfolding of myosin was completed at 60 °C, unlike actin, which completely denatured only above 70 °C. With simultaneous pressure treatment at >200 MPa, myosin and actin unfolded at 20 °C. Unfolding of myosin and actin could be induced in extracted myofibrillar protein with simultaneous treatment at 200 MPa and 40 °C. Electrophoretic analysis indicated high pressure/temperature regimens induced disulfide bonding between myosin chains.

Structural and Biochemical Characterization of Peroxiredoxin Q beta from Xylella fastidiosa CATALYTIC MECHANISM AND HIGH REACTIVITY

The phytopathogenic bacterium Xylella fastidiosa is the etiological agent of various plant diseases. To survive under oxidative stress imposed by the host, microorganisms express antioxidant proteins, including cysteine-based peroxidases named peroxiredoxins. This work is a comprehensive analysis of the catalysis performed by PrxQ from X. fastidiosa (XfPrxQ) that belongs to a peroxiredoxin class still poorly characterized and previously considered as moderately reactive toward hydroperoxides. Contrary to these assumptions, our competitive kinetics studies have shown that the second-order rate constants of the peroxidase reactions of XfPrxQ with hydrogen peroxide and peroxynitrite are in the order of 107 and 106 M(-1) s(-1), respectively, which are as fast as the most efficient peroxidases. The XfPrxQ disulfides were only slightly reducible by dithiothreitol; therefore, the identification of a thioredoxin system as the probable biological reductant of XfPrxQ was a relevant finding. We also showed by site-specific mutagenesis and mass spectrometry that an intramolecular disulfide bond between Cys-47 and Cys-83 is generated during the catalytic cycle. Furthermore, we elucidated the crystal structure of XfPrxQ C47S in which Ser-47 and Cys-83 lie similar to 12.3 angstrom apart. Therefore, significant conformational changes are required for disulfide bond formation. In fact, circular dichroism data indicated that there was a significant redox-dependent unfolding of alpha-helices, which is probably triggered by the peroxidatic cysteine oxidation. Finally, we proposed a model that takes data from this work as well data as from the literature into account.

Thermodynamic characterization of the palm tree Roystonea regia peroxidase stability

The structural stability of a peroxidase, a dimeric protein from royal palm tree (Roystonea regia) leaves, has been characterized by high-sensitivity differential scanning calorimetry, circular dichroism, steady-state tryptophan fluorescence and analytical ultracentifugation under different solvent conditions. It is shown that the thermal and chemical (using guanidine hydrochloride (Gdn-HCl)) folding/unfolding of royal palm tree peroxidase (RPTP) at pH 7 is a reversible process involving a highly cooperative transition between the folded dimer and unfolded monomers, with a free stabilization energy of about 23 kcal per mol of monomer at 25 degrees C. The structural stability of RPTP is pH-dependent. At pH 3, where ion pairs have disappeared due to protonation, the thermally induced denaturation of RPTP is irreversible and strongly dependent upon the scan rate, suggesting that this process is under kinetic control. Moreover, thermally induced transitions at this pH value are dependent on the protein concentration, allowing it to be concluded that in solution RPTP behaves as dimer, which undergoes thermal denaturation coupled with dissociation. Analysis of the kinetic parameters of RPTP denaturation at pH 3 was accomplished on the basis of the simple kinetic scheme N ->(k) D, where k is a first-order kinetic constant that changes with temperature, as given by the Arrhenius equation; N is the native state, and D is the denatured state, and thermodynamic information was obtained by extrapolation of the kinetic transition parameters to an infinite heating rate. Obtained in this way, the value of RPTP stability at 25 degrees C is ca. 8 kcal per mole of monomer lower than at pH 7. In all probability, this quantity reflects the contribution of ion pair interactions to the structural stability of RPTP. From a comparison of the stability of RPTP with other plant peroxidases it is proposed that one of the main factors responsible for the unusually high stability of RPTP which enhances its potential use for biotechnological purposes, is its dimerization. (c) 2008 Elsevier Masson SAS. All rights reserved.

Role of cis-cis muconic acid in the catalysis of Pseudomonas putida chlorocatechol 1,2-dioxygenase

Chlorocatechol 1,2-dioxygenase (1,2-CCD) is a non-heme iron protein involved in the intradiol cleavage of aromatic compounds that are recalcitrant to biodegradation. In particular, 1,2-CCD catalyzes the conversion of catechol and its halogenated derivatives to cis-cis muconic acid. In this study we describe a series of experiments concerning the interaction of chlorocatechol 1,2-dioxygenase from Pseudomonas putida (Pp1,2-CCD) with cis-cis muconic acid. We used single-injection ITC to show that the reaction product inhibits enzyme kinetics. DSC and EPR measurements probed whether this was accomplished by a direct binding of the product to the enzyme active site. DSC shows that cis-cis muconic acid affects the thermal unfolding of the protein and allowed us to estimate a binding constant. Furthermore, EPR spectra of the Fe(III) center demonstrate that, upon product binding, a significant decrease in resonance intensity is observed, indicating that cis-cis muconic acid binds directly to the active site. Based on the increasing interest for understanding dioxygenases mechanism of action and, moreover, how to control such process, our data indicate that the product of the reaction does play a relevant role in the catalysis and should therefore be taken into account when one thinks about ways of regulating enzyme activity. (C) 2010 Elsevier B.V. All rights reserved.

Camptosemin, a tetrameric lectin of Camptosema ellipticum: structural and functional analysis

Lectins have been classified into a structurally diverse group of proteins that bind carbohydrates and glycoconjugates with high specificity. They are extremely useful molecules in the characterization of saccharides, as drug delivery mediators, and even as cellular surface makers. In this study, we present camptosemin, a new lectin from Camptosema ellipticum. It was characterized as an N-acetyl-d-galactosamine-binding homo-tetrameric lectin, with a molecular weight around 26 kDa/monomers. The monomers were stable over a wide range of pH values and exhibited pH-dependent oligomerization. Camptosemin promoted adhesion of breast cancer cells and hemagglutination, and both activities were inhibited by its binding of sugar. The stability and unfolding/folding behavior of this lectin was characterized using fluorescence and far-UV circular dichroism spectroscopies. The results indicate that chemical unfolding of camptosemin proceeds as a two-state monomer-tetramer process. In addition, small-angle X-ray scattering shows that camptosemin behaves as a soluble and stable homo-tetramer molecule in solution.

On the Denaturation Mechanisms of the Ligand Binding Domain of Thyroid Hormone Receptors

The ligand binding domain (LBD) of nuclear hormone receptors adopts a very compact, mostly alpha-helical structure that binds specific ligands with very high affinity. We use circular dichroism spectroscopy and high-temperature molecular dynamics Simulations to investigate unfolding of the LBDs of thyroid hormone receptors (TRs). A molecular description of the denaturation mechanisms is obtained by molecular dynamics Simulations of the TR alpha and TR beta LBDs in the absence and in the presence of the natural ligand Triac. The Simulations Show that the thermal unfolding of the LBD starts with the loss of native contacts and secondary Structure elements, while the Structure remains essentially compact, resembling a molten globule state. This differs From most protein denaturation simulations reported to date and suggests that the folding mechanism may start with the hydrophobic collapse of the TR LBDs. Our results reveal that the stabilities of the LBDs of the TR alpha and TR beta Subtypes are affected to different degrees by the binding of the isoform selective ligand Triac and that ligand binding confers protection against thermal denaturation and unfolding in a subtype specific manner. Our Simulations indicate two mechanisms by which the ligand stabilizes the LBD: (1) by enhancing the interactions between H8 and H 11, and the interaction of the region between H I and the Omega-loop with the core of the LBD, and (2) by shielding the hydrophobic H6 from hydration.

The stability and aggregation properties of the GTPase domain from human SEPT4

The septins are a family of conserved proteins involved in cytokinesis and cortical organization. An increasing amount of data implicates different septins in diverse pathological conditions including neurodegenerative disorders, neoplasia and infections. Human SEPT4 is a member of this family and its tissue-specific ectopic expression profile in colorectal and urologic cancer makes it a useful diagnostic biomarker. Thermal unfolding of the GTPase domain of SEPT4 (SEPT4-G) revealed an unfolding intermediate which rapidly aggregates into amyloid-like fibers under physiological conditions. In this study, we examined the effects of protein concentration, pH and metals ions on the aggregation process of recombinant SEPT4-G using a series of biophysical techniques, which were also employed to study chemical unfolding and stability. Divalent metal ions caused significant acceleration to the rate of SEPT4-G aggregation. Urea induced unfolding was shown to proceed via the formation of a partially unfolded intermediate state which unfolds further at higher urea concentrations. The intermediate is a compact dimer which is unable to bind GTR At 1 M urea concentration, the intermediate state was plagued by irreversible aggregation at temperatures above 30 degrees C. However, higher urea concentration resulted in a marked decay of the aggregation, indicating that the partially folded structures may be necessary for the formation of these aggregates. The results presented here are consistent with the recently determined crystal structure of human septins and shed light on the aggregation properties of SEPT4 pertinent to its involvement in neurodegenerative disease. (C) 2008 Elsevier B.V. All rights reserved.

Implementação da rotina de unfolding para determinação de distribuição de tamanho de grãos esféricos via distribuição de interceptos lineares e de área de seção

Na unfolding method of linear intercept distributions and secction área distribution was implemented for structures with spherical grains. Although the unfolding routine depends on the grain shape, structures with spheroidal grains can also be treated by this routine. Grains of non-spheroidal shape can be treated only as approximation. A software was developed with two parts. The first part calculates the probability matrix. The second part uses this matrix and minimizes the chi-square. The results are presented with any number of size classes as required. The probability matrix was determined by means of the linear intercept and section area distributions created by computer simulation. Using curve fittings the probability matrix for spheres of any sizes could be determined. Two kinds of tests were carried out to prove the efficiency of the Technique. The theoretical tests represent ideal cases. The software was able to exactly find the proposed grain size distribution. In the second test, a structure was simulated in computer and images of its slices were used to produce the corresponding linear intercept the section area distributions. These distributions were then unfolded. This test simulates better reality. The results show deviations from the real size distribution. This deviations are caused by statistic fluctuation. The unfolding of the linear intercept distribution works perfectly, but the unfolding of section area distribution does not work due to a failure in the chi-square minimization. The minimization method uses a matrix inversion routine. The matrix generated by this procedure cannot be inverted. Other minimization method must be used

Structural and Biochemical Characterization of Peroxiredoxin Q beta from Xylella fastidiosa CATALYTIC MECHANISM and HIGH REACTIVITY

Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP)

On 3-Parameter Families of Piecewise Smooth Vector Fields in the Plane

Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP)

On homoclinic chaos and a control chaos strategy applied to a free-joint nonholonomic manipulator

In this work, the occurrence of chaos (homoclinic scene) is verified in a robotic system with two degrees of freedom by using Poincare-Mel'nikov method. The studied problem was based on experimental results of a two-joint planar manipulator-first joint actuated and the second joint free-that resides in a horizontal plane. This is the simplest model of nonholonomic free-joint manipulators. The purpose of the present study is to verify analytically those results and to suggest a control strategy.