Injeção Intracitoplasmática de Espermatozoide em Equinos

As técnicas de reprodução assistida utilizadas para os equinos estão em grande desenvolvimento, mesmo com a escassa disponibilidade de ovários de abatedouro para serem feitos estudos e a relação animal/indivíduo entrando, neste caso, a política do bem estar animal e outros fatores que serão discutidos ao longo desta revisão. Podemos afirmar que a técnica de ICSI promove resultados favoráveis à evolução da reprodução assistida, juntamente com outras técnicas, as quais muitas vezes são utilizadas para aprimorar o desenvolvimento e a produção de embriões, não mais necessitando do animal em si e sim de novas técnicas em produção in vitro. Oócito equino tolera o estresse de injeção mecânica de espermatozoides no ooplasma, ou seja, há grande viabilidade da técnica em discussão. O sêmen de baixa qualidade ou com baixo número de espermatozóides pode ser utilizado, seguramente na ICSI, o método pode ser uma ferramenta para avaliar a maturação citoplasmática ou mesmo para substituir outras técnicas já descritas em literatura, mas que não alcançaram a eficiência esperada

Avaliação da técnica de coloração AgNOR em testículos de ovinos

Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq)

Comparison of microbial load in immersion chilling water and poultry carcasses after 8, 16 and 24 working hours

As atividades dos estabelecimentos de abate de frangos são conhecidas por utilizarem grandes volumes de água durante seus processos, principalmente no processo de resfriamento das carcaças de frangos. Parte desse volume utilizado se faz necessário, em cumprimento à legislação que determina que cada tanque do sistema de pré-resfriadores contínuos por imersão deve ser completamente esvaziado, limpo e desinfetado no final de cada período de trabalho (oito horas). O objetivo deste estudo foi comparar a carga microbiana das águas do sistema de resfriamento e das carcaças de frango ao final de oito, dezesseis e vinte e quatro horas de trabalho do abatedouro, para possível redução do número de vezes do completo esvaziamento dos tanques do sistema de resfriamento. Foram avaliadas, por meio de métodos convencionais microbiológicos e físico-químicos, amostras da água de abastecimento (n=69), visando a evitar possível interferência nas contagens das águas do sistema de resfriamento, amostras de carcaças de frango antes (n=345) e após (n=345) sua passagem pelo sistema de resfriamento e amostras de águas do último estágio do sistema de resfriamento de carcaças (n=69). Os resultados obtidos demonstraram que não houve diferença significativa na carga microbiana das amostras entre as três jornadas de trabalho do estabelecimento, sugerindo que a redução é segura, diminuindo assim o volume de águas residuais e seu impacto no meio ambiente, bem como melhorando o uso racional do tempo de processamento.

Expressão gênica de TLR-2, TLR-4, HMGB1 E VEGF em úlceras abomasais em bovinos de corte

Pós-graduação em Ciência Animal - FMVA

Pododermatite e qualidade de carcaça de frangos de corte suplementados com minerais orgânicos e vitamina E

Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP)

Fatores extrínsecos que afetam a absorção de água em carcaças de frango de corte

O Brasil ocupa uma posição de destaque como produtor e exportador de carne de frango. Um parâmetro importante na qualidade da carne de frango é a quantidade de água absorvida pela carcaça durante o processamento. No Brasil, o resfriamento das carcaças é feito por imersão em água refrigerada e, neste processo, a carcaça é reidratada, recuperando a água perdida durante o transporte e as operações iniciais. Este projeto teve como objetivo avaliar os fatores extrínsecos que podem influenciar a absorção de água pela carne de frango. Para isso, foram utilizados 144 frangos da linhagem Cobb, divididos em 24 grupos de seis aves. Aos 42 dias de idade, uma ave de cada grupo, com peso variando até 10% para mais ou para menos, em relação à média do grupo, foram abatidas em abatedouro experimental. A etapa de resfriamento foi realizada seguindo um delineamento inteiramente casualizado com arranjo fatorial 3x2, onde os fatores foram: três temperaturas na primeira seção do sistema de refrigeração (4, 10 e 16 º C) e dois graus de dureza da água (água dura e água mole), com seis tratamentos e quatro repetições. A legislação brasileira estabelece que a temperatura da água na primeira seção do resfriador não deve ser superior a 16ºC. Todas as carcaças permaneceram na primeira seção do resfriador durante 30 minutos e, em seguida, foram transferidas para outro tanque com água a 4ºC, permanecendo até atingir 7ºC. As carcaças foram pesadas antes e após o resfriamento por imersão, para avaliação da percentagem de água absorvida. A absorção de água foi influenciada pela temperatura inicial da água no pré-resfriador e pela dureza da água. Quando imersas inicialmente em água a 4ºC, as carcaças absorveram, em média, 2,70%, uma absorção significativamente menor do que a média de 3,83% observada nas carcaças que foram inicialmente imersas em água a 16ºC (p<0,05). As carcaças imersas em água a 10ºC apresentaram média de absorção de água de 3,66%, não diferindo das médias observadas nos outros tratamentos (p>0,05). Em água dura, a média de absorção de água foi de 2,46% e, em água mole, de 4,33% (p<0,05). Em todos os tratamentos, a absorção de água não excedeu o limite estabelecido pela legislação brasileira, que é de, no máximo, 8%. Esta informação é importante para controlar a absorção de água pelas carcaças em processamento de carne de frango, impedindo que os consumidores sejam prejudicados.

Efeitos da adição do IGF-1 ou IGF-LongR3 sobre aspectos celulares e moleculares de complexos cumulus-oócito durante a maturação oocitária in vitro em bovinos

Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES)

Quantificação de citocinas no conteúdo abomasal de bovinos de corte na presença ou ausência de ulceração gástrica

Pós-graduação em Ciência Animal - FMVA

Correlação da circunferência escrotal, citologia testicular e parâmetros do sêmen do epidídimo de touros

Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP)

Molecular typing of Clostridium perfringens isolated from swine in slaughterhouses from São Paulo State, Brazil

Clostridium perfringens is an anaerobic Gram-positive bacterium known as common pathogen for humans, for domestic and wildlife animals. Although infections caused by C. perfringens type C and A in swine are well studied, just a few reports describe the genetic relationship among strains in the epidemiological chain of swine clostridioses, as well as the presence of the microorganism in the slaughterhouses. The aim of the present study was to isolate C. perfringens from feces and carcasses from swine slaughterhouses, characterize the strains in relation to the presence of enterotoxin, alpha, beta, epsilon, iota and beta-2 toxins genes, using polymerase chain reaction (PCR) and comparing strains by means of Pulsed field gel electrophoresis (PFGE). Clostridium perfringens isolation frequencies in carcasses and finishing pig intestines were of 58.8% in both types of samples. According to the polymerase chain reaction assay, only alfa toxin was detected, being all isolates also negative to enterotoxin and beta2 toxin. Through PFGE technique, the strains were characterized in 35 pulsotypes. In only one pulsotype, the isolate from carcass sample was grouped with fecal isolate of the same animal, suggesting that the risk of cross-contamination was low. Despite the high prevalence of C. perfringens in swine carcasses from the slaughterhouses assessed, the risk of food poisoning to Brazilian pork consumers is low, since all strains were negative to cpe-gene, codifying enterotoxin.

O estudo das células Tγδ na manutenção da tolerância materna em vacas gestantes

O sistema imunológico materno desempenha um papel importante no estabelecimento da gestação e desenvolvimento de concepto até início do parto. A hipótese deste projeto é que há um recrutamento de células Tγδ para o endométrio ao longo da gestação que expressam citocinas que favorecem o estabelecimento e manutenção da tolerância materna a antígenos fetais durante a gestação em bovinos. Experimento I Para estudar a dinâmica populacional das células do sistema imune no sangue periférico de não lactantes não prenhes (NLNP), vacas lactantes no 1º trimestre e vacas no 3º trimestre da gestação, as PBMCs foram separadas por gradiente de densidade de Ficoll, seguido por protocolo de imunocitoquímica e analisadas em citômetro de fluxo para os anticorpos CD3+, CD4+, CD8+, CD14+, CD25+ e WC1+. As células analisadas tanto na região de linfócitos quanto na região de monócitos, não apresentaram diferença significativa entre os grupos analisados. Experimento II Para análise do perfil de expressão gênica das células Tγδ, foram coletadas amostras de sangue de vacas no 1º trimestre da gestação, vacas lactantes não prenhes (LNP) e vacas não lactantes não prenhes (NLNP). As células mononucleares foram separadas por gradiente de densidade de Ficoll e células Tγδ foram analisadas quanto ao perfil de citocinas por qRT-PCR para os genes IFNG; IL10; IL15; IL17; IL18; IL1B; IL4; IL-6; ISG15; PFR; TGFB2 e TNFA. A análise de expressão gênica mostrou tendência no aumento na expressão de IL1B, IL6 e TGFB2 em células PBMC em vacas NLNP quando comparado com vacas LNP e no 1º trimestre da gestação, enquanto que os outros genes analisados não apresentaram diferença significativa. Experimento III Fragmentos de endométrio, provenientes de abatedouro, foram coletados de vacas em 1º trimestre (33 a 35 dias de gestação), 2º trimestre (143 a 182 dias de gestação) e 3º trimestre de gestação (228 a 247 dias de gestação). Cortes congelados foram imunolocalizados e quantificados para as células do sistema imune CD3+, CD4+, CD8+, CD14+, CD18+, CD25+, CD62L+ e WC1+ por imunofluorescência. Nossos estudos mostraram aumento das células CD25+ e CD62L+ no endométrio no início da gestação. No meio da gestação, há um aumento das células WC1+ e CD14+. No final da gestação, observamos o aumento de CD14+, CD25+, CD18+ e CD62L+. Em suma, nossos dados sugerem que a modulação do sistema imune materno é específica para cada estágio da gestação, sendo que no início da gestação há um envolvimento de células T ativadas (CD25+) provavelmente para o estabelecimento de uma resposta ativa para tolerância dos antígenos fetais. Já no meio da gestação, há um recrutamento massivo de células Tγδ para o endométrio gravídico provavelmente para manter um microambiente de tolerância para o desenvolvimento fetal e no final da gestação células efetoras como macrófagos são recrutadas para o endométrio para auxiliar no processo do parto e involução uterina.

Kisspeptina: efeito na maturação in vitro de ovócitos bovinos

This study aimed to evaluate different concentrations of kisspeptin, as well as the interaction of kisspeptin and FSH/LH in vitro maturation and oocyte competence in cattle. In Experiment 1 was determined the minimum concentration of Kisspeptin (Kp) to be used, and in Experiment 2 was evaluated its interection with FSH and LH. The oocytes were collected in a commercial slaughterhouse and only Grade I oocytes were utilized. The oocytes were cultured in TCM-199 medium with bicarbonate plus 10% FBS, sodium pyruvate (22μg/mL), amikacin (83mg/mL), FSH (0.5μg/mL), with different concentrations of Kp, the treatments were: FSH + 0M Kp-10; FSH + 10-7M Kp-10, FSH + 10-6M Kp-10; FSH + 10-5M Kp-10. In Experiment 2, was used better concentration of Kp found in Experiment 1, the following treatments: no hormones; FSH; FSH + Kp-10; FSH + LH; FSH, LH + Kp-10; Kp-10. The oocyte competence was determined by nuclear maturation, mitochondrial distribution, MitoTracker® Orange CMTMRos fluorescence intensity and DCF. The evaluation of nuclear maturation was made after 24 hours incubation and the oocytes were stained with DAPI to determine the nuclear stage (Germinal Vesicle-GV, Metaphase I-MI and Metaphase II-MII).The mitochondrial distribution was classified as peripheral/semiperipheral and diffuse in clusters/granules, evaluated after stained with the MitoTracker® Orange CMTMRos, and was also identified the intensity of it. To determine the intensity of ROS oocytes were stained with DCF. The statistical analysis was performed by SAS GLIMMIX PROC. In Experiment 1 oocytes matured only with the FSH reached a smaller nuclear maturation when compared to those who were matured with Kisspeptin at different concentrations (FSH:13/33; FSH + 10-7M Kp-10: 28/35; FSH + 10-6M Kp-10:30/34; FSH + 10-5M Kp-10:28/32; P=0,0001). There was no statistical difference in mitochondrial distribution between treatments (P>0.05). The fluorescence intensity of MitoTracker did not differ among treatments (P>0.05). The DCF fluorescence intensity was lower when the concentration of Kp was increased in the medium (FSH:12177726,1; FSH + 10-7M Kp-10:10945982,83; FSH + 10-6M Kp-10:9820536,53; FSH + 10-5M Kp-10:9147016,38; P<0,0001). Based in the Experiment 1 results, the concentration of Kp was determined in 10-7M. In Experiment 2 the mitochondrial distribution was different between treatments, because oocytes matured only with Kp or FSH+LH, reached a oocyte competence greater than those maturated with FSH only or without hormone addition (no hormones:66,66%; FSH:66,66%; FSH + Kp-10:75,86%; FSH + LH:91,17%; FSH, LH + Kp-10:82,85%; Kp-10:91,17%; P<0,05). The no hormones resulted in a lower nuclear maturation than the other treatments (no hormones: 5/18; FSH:18/32; FSH + Kp-10:22/29; FSH + LH:26/33; FSH, LH + Kp-10:26/34; Kp-10:25/34; P=0,0094). The fluorescence intensity of probes MitoTracker and DCF was lower when Kp was added to the maturation medium (no hormones:1228363/540069; FSH:2307984/1395751; FSH + Kp-10:1941890/1114948; FSH + LH:2502145/1722376; FSH, LH + Kp-10:2286173/1467782; Kp-10:1859411/979325 P<0,0001). So this is the first study that shows that Kisspeptin stimulates oocyte maturation without the presence of gonadotropins in the maturation medium.

Determinação de curva glicolítica em carcaças de aves PSE (Pale, soft, exsudative) e normal em linha de abate industrial

Some quality defects can cause changes in attributes of the meat, among these we can detach the PSE meat (Pale, Soft and Exudative). The PSE meat is pale, flaccid and exudative and result from sudden pH decrease while the carcass is still under high temperature. The identification of PSE meat has been done by measuring pH and L* (Lightness). However, studies suggest that a more precise evaluation of the kinetics of pH and temperature decrease has to be conducted to better understand the etiology of PSE meat in poultry. The aim of this study was to obtain the glycolytic curve for normal and PSE meat of chicken, through the pH, L* and CRA (water holding capacity) analysis. This experiment was conducted with carcasses obtained from a commercial slaughterhouse (n = 35) of Cobb lineage, 50 days old, from the same batch of creation and with the same pre-slaughter fasting time (10h). Samples of breast fillets were obtained from carcasses randomly collected immediately at the output of pre-cooling chiller, and the analysis of pH, temperature and L * were conducted in the same in times 1h35, 2h35, 3h35, 5h35, 8h35, 11h35, 14h35, 17h35, 20h35, 23h35 and 25h35 post mortem. The CRA analyzes were performed at the time of 25h35 post mortem. The pH measurements indicated that only from the 04 time (8h35 post mortem) was possible to verify an indicative of stabilization, being that PSE meat pH was 5,69±0,07, and normal meat was 5,93±0,09. The final pH (25h35 post mortem) was 5,98±0,06 and L* 57,30± 2,39 for normal meat, while for PSE meat the result was 5,72±0,06 and L* 59,44±1,51. To CRA, the average of the samples (67,19±3.13 and 64,45± 2.66) showed a difference between the normal chicken fillets and PSE respectively. The data found in this study are consistent with those reported by own research group in another slaughterhouse and contradicts similar works, but made at room temperature, indicating that for chickens under commercial conditions the resolution of rigor mortis occurs after 8h35 post mortem.

Bloqueio meiótico como alternativa para aumentar a produção de embriões clone por transferência nuclear

Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Faculdade de Agronomia e Medicina Veterinária, 2016.