Morfogênese in vitro de variedades brasileiras de cana-de-açúcar

O objetivo deste trabalho foi estabelecer sistemas de multiplicação de plantas de cana-de-açúcar in vitro e avaliar sua utilização, como material inicial, para a indução de regeneração a partir de ápices caulinares. Três métodos de cultivo foram avaliados: cultura em meio semi-sólido, cultura líquida estacionária e cultura líquida sob agitação. A taxa de multiplicação mais elevada foi alcançada por meio da cultura líquida sob agitação. Ápices caulinares, excisados dessas plantas, apresentaram taxas de regeneração in vitro compatíveis com sua utilização em protocolos de transformação. Calos resistentes a PPT e GUS-positivos foram obtidos de explantes da variedade Chunnee com inoculação de Agrobacterium tumefaciens C58C1 (pMP90) (pDUBarA9). O protocolo estabelecido a partir de cultivo in vitro pode ser utilizado para a produção de plantas transgênicas de cana-de-açúcar, visando à realização de estudos de regulação da expressão gênica, assim como à introdução de características de interesse agronômico.

Basic calcium phosphate crystals induce IL-1B secretion in vitro through activation of the Nalp3 inflammasome

Objectives: We tested the effects of the three forms of basic calcium phosphate (BCP) crystals (octacalcium phosphate (OCP), carbonate-substituted apatite (CA) and hydroxyapatite (HA)) on monocytes and macrophages on IL-1β secretion. The requirement for the NALP3 inflammasome and TLR2 and TLR4 receptors in this acute response was analyzed.

Fungitoxicidade de grupos químicos sobre Myrothecium roridum in vitro e sobre a mancha-de-mirotécio em algodoeiro

O objetivo deste trabalho foi avaliar a fungitoxicidade de produtos pertencentes aos grupos dos benzimidazóis, triazóis, estrobilurinas, isoftalonitrilas e ditiocarbamatos sobre a germinação conidial e o crescimento micelial in vitro de isolados de Myrothecium roridum e, in vivo, sobre a severidade da mancha-de-mirotécio em plantas de algodoeiro. Nos testes in vitro os fungicidas foram solubilizados em meio BDA, utilizando-se as concentrações de 0,1, 1, 10 e 100 mg L-1 de ingrediente ativo. A fungitoxidade dos produtos foi avaliada por meio da ED50 (dose necessária para inibir 50% da germinação conidial ou crescimento micelial). Em casa de vegetação, estimou-se a severidade da mancha-de-mirotécio pela porcentagem de área foliar lesionada nas plantas de algodoeiro tratadas antes (preventivo) e depois (curativo) da inoculação do patógeno. Os fungicidas tiofanato metílico, carbendazim, metconazol, tiofanato metílico + clorotalonil, piraclostrobina + epoxiconazol, piraclostrobina + metiram, triflostrobina + propiconazol e tebuconazol inibiram com alta eficácia (ED50<1 mg L-1), ou com eficácia (ED50 entre 1 e 10 mg L-1), a germinação conidial e o crescimento micelial in vitro de M. roridum. Os fungicidas piraclostrobina + epoxiconazol, tebuconazol, metconazol e azoxistrobina + ciproconazol são os mais eficazes em testes in vivo. O tratamento preventivo é mais eficaz que o curativo.

Desenvolvimento in vitro de Agaricus brasiliensis em meios suplementados com diferentes farelos

O cogumelo Agaricus brasiliensis normalmente é cultivado em meios à base de batata ou composto orgânico. O objetivo deste trabalho foi avaliar o desenvolvimento in vitro da linhagem ABL 97/11 de A. brasiliensis, cultivada em meio à base de composto suplementado com diferentes concentrações de farelos de milho, trigo, arroz e soja, à temperatura constante de 28ºC. Avaliou-se, diariamente, o diâmetro da colônia e obteve-se, aos seis dias de cultivo, a massa miceliana. A adição de farelos de soja ou arroz não favorece o desenvolvimento in vitro de A. brasiliensis. O meio de cultura suplementado com 20% de farelo de trigo apresenta as maiores massa miceliana e velocidade de crescimento, comparado aos meios suplementados com outros farelos, na mesma concentração. Na concentração de 10% de farelo, o milho promove a maior velocidade de crescimento do cogumelo.

A novel cyclosporin a aqueous formulation for dry eye treatment: in vitro and in vivo evaluation.

PURPOSE: The aim of the present study was the in vitro and in vivo evaluation of a novel aqueous formulation based on polymeric micelles for the topical delivery of cyclosporine A for dry eye treatment. METHODS: In vitro experiments were carried out on primary rabbit corneal cells, which were characterized by immunocytochemistry using fluorescein-labeled lectin I/isolectin B4 for the endothelial cells and mouse monoclonal antibody to cytokeratin 3+12 for the epithelial ones. Living cells were incubated for 1 hour or 24 hours with a fluorescently labeled micelle formulation and analyzed by fluorescence microscopy. In vivo evaluations were done by Schirmer test, osmolarity measurement, CyA kinetics in tears, and CyA ocular distribution after topical instillation. A 0.05% CyA micelle formulation was compared to a marketed emulsion (Restasis). RESULTS: The in vitro experiments showed the internalization of micelles in the living cells. The Schirmer test and osmolarity measurements demonstrated that micelles did not alter the ocular surface properties. The evaluation of the tear fluid gave similar CyA kinetics values: AUC = 2339 ± 1032 min*μg/mL and 2321 ± 881.63; Cmax = 478 ± 111 μg/mL and 451 ± 74; half-life = 36 ± 9 min and 28 ± 9 for the micelle formulation and Restasis, respectively. The ocular distribution investigation revealed that the novel formulation delivered 1540 ± 400 ng CyA/g tissue to the cornea. CONCLUSIONS: The micelle formulation delivered active CyA into the cornea without evident negative influence on the ocular surface properties. This formulation could be applied for immune-related ocular surface diseases.

Somatic embryogenesis and in vitro plant regeneration from pejibaye adult plant leaf primordia

The aim of this work was to evaluate a protocol for plant regeneration by means of somatic embryos obtained from isolated adult pejibaye leaf primordia, and to describe histological origin of embryos and morphogenetic response. Explants were cultivated in modified MS medium. Mesophyll parenchymatous cells originated meristemoids (preembryonic complex formation) induced with 7.1 µM BAP in the first two subculture periods. After polarized structures with 12.9 µM NAA and 3.55 µM BAP were formed in the third subculture, somatic embryos developed and regenerated normal plants. The mesophyll parenchymatous cells display high capacity of direct response to the auxin and cytokinin.

Multiplicação in vitro de Eucalyptus grandis sob estímulo com benzilaminopurina

O objetivo deste trabalho foi avaliar os efeitos do estímulo com benzilaminopurina (BAP) na multiplicação in vitro de Eucalyptus grandis. Foram avaliadas as interações entre concentrações de BAP (0, 200, 400 e 600 mg L-1), tempo de exposição (1, 2 e 3 horas), pH (3 e 5,8) da solução e alterações morfológicas dos explantes. Semanalmente, foi determinada a massa da matéria fresca dos explantes. Aos 21 dias de cultura, foram avaliados: o número de brotações por tratamento, o número de brotações obtidas por explante (taxa de multiplicação), e foi realizado o resgate das plântulas para avaliação histológica. O pH não apresentou interação com os demais fatores estudados. Os tratamentos com BAP a 200 mg L-1, durante 1 e 2 horas, apresentaram-se como os mais indicados na multiplicação do E. grandis. Houve intensificação da divisão celular, no parênquima cortical e no procâmbio, representada pelo surgimento de meristemóides, em resposta aos tratamentos com 200 mg L-1 de BAP, durante 1 e 2 horas. O estímulo com BAP na multiplicação in vitro de E. grandis é viável.

Role of dendritic cells in the lung: in vitro models, animal models and human studies

Dendritic cells (DCs) are the most potent antigen-presenting cells in the human lung and are now recognized as crucial initiators of immune responses in general. They are arranged as sentinels in a dense surveillance network inside and below the epithelium of the airways and alveoli, where thet are ideally situated to sample inhaled antigen. DCs are known to play a pivotal role in maintaining the balance between tolerance and active immune response in the respiratory system. It is no surprise that the lungs became a main focus of DC-related investigations as this organ provides a large interface for interactions of inhaled antigens with the human body. During recent years there has been a constantly growing body of lung DC-related publications that draw their data from in vitro models, animal models and human studies. This review focuses on the biology and functions of different DC populations in the lung and highlights the advantages and drawbacks of different models with which to study the role of lung DCs. Furthermore, we present a number of up-to-date visualization techniques to characterize DC-related cell interactions in vitro and/or in vivo.

Cultivo in vitro de embriões zigóticos e aclimatação de plântulas de coqueiro-anão

O objetivo deste trabalho foi ajustar os protocolos de cultivo in vitro de embriões zigóticos e de aclimatação de plântulas de coqueiro-anão-verde do Brasil de Jiqui (Cocos nucifera L.). Os embriões zigóticos maduros, colocados assepticamente em meio de cultura líquido Y3 suplementado com 27,8 mg L-1 de Fe2SO4.7H2O e 60 g L-1 de sacarose, apresentaram maior germinação e formação de plântulas normais. As plântulas transferidas para meio indutor de enraizamento Y3, gelificado e suplementado com 1 mg L-1 de ANA, 0,5 mg L-1 de BAP e 2,5 g L-1 de carvão ativado, apresentaram incremento do desenvolvimento radicular e da parte aérea. Na fase de aclimatação, o substrato composto por areia lavada e pó de casca de coco seco, na proporção de 1:1, proporcionou maior sobrevivência das plântulas (58,33%), maior crescimento da parte aérea (39,08 cm) e maior número de folhas (6,33). Os protocolos estabelecidos para o cultivo in vitro de embriões zigóticos e a aclimatação de coqueiro-anão-verde de Jiqui podem ser utilizados no intercâmbio e conservação de germoplasma.

Harmonisation of short-term in vitro culture for the expansion of antigen-specific CD8(+) T cells with detection by ELISPOT and HLA-multimer staining.

Ex vivo ELISPOT and multimer staining are well-established tests for the assessment of antigen-specific T cells. Many laboratories are now using a period of in vitro stimulation (IVS) to enhance detection. Here, we report the findings of a multi-centre panel organised by the Association for Cancer Immunotherapy Immunoguiding Program to investigate the impact of IVS protocols on the detection of antigen-specific T cells of varying ex vivo frequency. Five centres performed ELISPOT and multimer staining on centrally prepared PBMCs from 3 donors, both ex vivo and following IVS. A harmonised IVS protocol was designed based on the best-performing protocol(s), which was then evaluated in a second phase on 2 donors by 6 centres. All centres were able to reliably detect antigen-specific T cells of high/intermediate frequency both ex vivo (Phase I) and post-IVS (Phase I and II). The highest frequencies of antigen-specific T cells ex vivo were mirrored in the frequencies following IVS and in the detection rates. However, antigen-specific T cells of a low/undetectable frequency ex vivo were not reproducibly detected post-IVS. Harmonisation of the IVS protocol reduced the inter-laboratory variation observed for ELISPOT and multimer analyses by approximately 20 %. We further demonstrate that results from ELISPOT and multimer staining correlated after (P < 0.0001 and R (2) = 0.5113), but not before IVS. In summary, IVS was shown to be a reproducible method that benefitted from method harmonisation.

Seal properties of TachoSil: in vitro hemodynamic measurements.

Fibrin glue products and collagen patches are frequently used as a sealing product, preventing surgical side bleedings. This is especially true in the field of cardiovascular surgery, where increasing numbers of patients are being operated with antiplatelet and anticoagulation therapy. The aim of this report was, in an in vitro hemodynamic setting, to examine the sealant properties of the TachoSil (Nycomed Pharma, Linz, Austria) patch. Burst pressure and normal force of 15 TachoSil sealed defects were measured. This was determined in a closed hydraulic system. Mean burst pressure load for a 5-mm defect was 69+/-11.4 mmHg; for a 7-mm defect was 63+/-16 mmHg; and, 62+/-16 mmHg for the defect with a diameter of 10 mm (P>0.05). The mean calculated normal force was as follows: 0.91+/-0.15 N for the 5 mm defect, 6.5+/-1.6 N for the 7 mm, and 8.1+/-0.75 N for the 10 mm defect. The TachoSil patch has the capability to seal small defects. However, at the larger defects the seal character was significantly reduced. These results suggest that the device may be a good alternative for hemostasis for small defects. The capacity to curtail or stop hemorrhage at the larger defects is unlikely.

Plantas autotetraplóides de citros sob tratamento in vitro com colchicina

O objetivo deste trabalho foi obter plantas autotetraplóides de tangerina 'Ponkan', laranja 'Pêra-de-abril' e tangor 'Murcott', que serão usadas em cruzamentos com cultivares diplóides, visando à obtenção de indivíduos triplóides sem sementes. Utilizou-se o método de cultivo in vitro de segmentos de epicótilo em meio com colchicina (0,025, 0,05 e 0,1%), por diversos períodos (1, 2, 3, 7 e 14 dias), com subseqüente regeneração de brotações em meio sem a presença do alcalóide. As brotações foram microenxertadas in vitro e aclimatizadas em estufas. A determinação do nível de ploidia das plantas foi realizada por citometria de fluxo. A colchicina demonstrou ser tóxica aos explantes das três variedades, ocasionando redução significativa no número médio de brotações adventícias e aumento na porcentagem de explantes não-responsivos, em comparação com o controle. Entre as quatro plantas de laranja e uma de tangor obtidas, duas plantas de laranja e a de tangor, demonstraram ser autotetraplóides, apresentando folhas com maior espessura, arredondadas e coloração verde intensa. O método utilizado na duplicação cromossômica, com uso de colchicina, é eficiente em produzir plantas autotetraplóides de citros.

Fixação de nitrogênio e produção de ácido indolacético in vitro por bactérias diazotróficas endofíticas

O objetivo deste trabalho foi isolar e quantificar bactérias diazotróficas associadas a raízes de arroz, e avaliar a produção de ácido indolacético e o potencial de fixação biológica de nitrogênio dessas bactérias, a fim de selecionar isolados promissores para inoculação em plantas. Bactérias fixadoras de nitrogênio, habitantes do interior das raízes de cultivares de arroz do Rio Grande do Sul, foram isoladas e quantificadas em nove cultivares. Raízes de arroz superficialmente esterilizadas foram maceradas e introduzidas em meios de crescimento, elaborados sem fonte de nitrogênio e em condições semi-sólidas. Entre os 58 isolados nos meios NFb, LGI e LGI-P, foram escolhidos UFSM-BD-02-06, UFSM-BD-08-06, UFSM-BD-14-06, UFSM-BD-20-06, UFSM-BD-26-06, UFSM-BD-31-06, UFSM-BD-36-06, UFSM-BD-42-06, UFSM-BD-48-06, UFSM-BD-54-06. Avaliaram-se a fixação biológica de nitrogênio e a produção de ácido indolacético in vitro, pelos métodos Kjeldahl e colorimétrico, respectivamente. Azospirillum brasilense e A. lipoferum apresentam maiores valores para N total, 41,08 e 46,82 µg mL-1, respectivamente. A. brasilense e UFSM-BD-31-06 são os maiores produtores de ácido indolacético, 41,09 mg mL-1 e 13,47 µg mL-1, respectivamente.

Inhibition and enhancement of in vitro helper activity of apocytochrome c-specific murine T cell populations and clones by anti-apocytochrome c-specific monoclonal antibodies.

A murine monoclonal antibody (mAb) specific for apocytochrome c was found to be able to either inhibit or enhance the helper activity of mouse apocytochrome c-specific T cell clones and populations in a hapten (trinitrophenyl)-carrier (apocytochrome c) system of T-B cell cooperation. This effect of the mAb was carrier specific, could not be ascribed simply to a shift in the kinetics of the antibody response and was observed using apocytochrome c T helper cells of different mouse haplotypes. In addition, the anti-apocytochrome c mAb was able to inhibit specific T helper cell activity even when the T cells were triggered with antigen-presenting cells pulsed with antigen. Taken together, these results suggested that the mAb was inhibiting helper activity due to its ability to modify the interaction between T cells and antigen-presenting cells.

Establishment of an in vitro photoassay using THP-1 cells and IL-8 to discriminate photoirritants from photoallergens

At present, there are no in vivo or in vitro methods developed which has been adopted by regulatory authorities to assess photosensitization induced by chemicals. Recently, we have proposed the use of THP-1 cells and IL-8 release to identify the potential of chemicals to induce skin sensitization. Based on the assumption that sensitization and photosensitization share common mechanisms, the aim of this work was to explore the THP-1 model as an in vitro model to identify photoallergenic chemicals. THP-1 cells were exposed to 7 photoallergens and 3 photoirritants and irradiated with UVA light or kept in dark. Non phototoxic allergens or irritants were also included as negative compounds. Following 24 h of incubation, cytotoxicity and IL-8 release were measured. At subtoxic concentrations, photoallergens produced a dose-related increase in IL-8 release after irradiation. Some photoirritants also produced a slight increase in IL-8 release. However, when the overall stimulation indexes of IL-8 were calculated for each chemical, 6 out of 7 photoallergens tested reached a stimulation index above 2, while the entire set of negative compounds had stimulation indexes below 2. Our data suggest that this assay may become a useful cell-based in vitro test for evaluating the photosensitizing potential of chemicals.