Calpain-Mediated Processing of Adenylate Cyclase Toxin Generates a Cytosolic Soluble Catalytically Active N-Terminal Domain

Bordetella pertussis, the whooping cough pathogen, secretes several virulence factors among which adenylate cyclase toxin (ACT) is essential for establishment of the disease in the respiratory tract. ACT weakens host defenses by suppressing important bactericidal activities of the phagocytic cells. Up to now, it was believed that cell intoxication by ACT was a consequence of the accumulation of abnormally high levels of cAMP, generated exclusively beneath the host plasma membrane by the toxin N-terminal catalytic adenylate cyclase (AC) domain, upon its direct translocation across the lipid bilayer. Here we show that host calpain, a calcium-dependent Cys-protease, is activated into the phagocytes by a toxin-triggered calcium rise, resulting in the proteolytic cleavage of the toxin N-terminal domain that releases a catalytically active "soluble AC''. The calpain-mediated ACT processing allows trafficking of the "soluble AC'' domain into subcellular organella. At least two strategic advantages arise from this singular toxin cleavage, enhancing the specificity of action, and simultaneously preventing an indiscriminate activation of cAMP effectors throughout the cell. The present study provides novel insights into the toxin mechanism of action, as the calpain-mediated toxin processing would confer ACT the capacity for a space- and time-coordinated production of different cAMP "pools'', which would play different roles in the cell pathophysiology.

Diário da Constituinte [gravação de vídeo] : [programa n. 360]

Os Constituintes discutem e tentam entendimento sobre a mudança no regimento. A reforma tribuária é tema no plenário.

Diário da Constituinte [gravação de vídeo] : [programa n. 368]

Os constituintes discutem temas sobre a proteção do meio ambiente e proteção da Mata Atlântica . A frente ecológica busca a garantia do crime ecológico no projeto que se refere ao meio ambiente.

Diário da Constituinte [gravação de vídeo] : [programa n. 509]

Os constituintes decidem como vai ficar o Ministério Público, as Procuradorias Gerais e as Defensorias do povo, isto é, a assistência gratuita aos que não podem pagar advogado. Foi feita uma fusão de emendas em que fossem contemplados todos os que fizeram sugestões.O ponto polêmico é o que determina que o Ministério Público pode, em alguns circunstância, fiscalizar a polícia civil. A nova etapa da Constituinte será votar a Reforma Tributária. A polêmica neste item é como distribuir os recursos entre as regiões. Todos concordam em descentralizar a renda sem afetar o bolso do contribuinte.

Diário da Constituinte [gravação de vídeo] : [programa n. 471]

O presidente da Constituinte participou do 10º Congresso de Cooperatismo e ouviu muitas reivindicações. A principal: garantir o cooperativismo na nova Carta. E os constituintes propõem a ampliação deste sistema de associação com a criação de cooperativas de crédito. uma emenda aprovada muda o sistema de elegibilidade que existe hoje no país. Segundo a Emenda, o filho de um governador, por exemplo, pode se candidatar para suceder o pai. Este sistema vale para todos os cargos executivos, como o de prefeito e Presidente da República. Alguns constituintes esperam mudar esta emenda no segundo turno. Hoje à tarde, o Plenário volta a discutir o direito de greve do funcionalismo público. Deve ser votado o texto da Sistematização que propõe este direito. Até o fim da semana o Plenário começa a debater o Sistema de Governo. Também será definido o tamanho do mandato dos futuros presidentes. Parlamentaristas e presidencialistas articulam-se para a votação em Plenário das duas emendas. Os presidencialistas vão apoiar a emenda do senador Humberto Lucena que prevê mais poderes para o Congresso. Entre os constituintes as opiniões divergem. O presidente da Constituinte vem negociando o Sistema de Governo para evitar um impasse.

Diário da Constituinte [gravação de vídeo] : [programa n. 462]

O líder do PMDB, senador Mário Covas reuniu hoje os vice-líderes do partido para repassar o acordo feito com o Centrão em torno do capítulo 2, do título 3. Este capítulo trata da competência e dos bens da União. Pertencem à União por exemplo, o mar territorial, os recursos minerais, lagos, ilhas e rios, além do subsolo e das terras indígenas. Pelo acordo, esse bens continuam de posse da União, que dará concessões à iniciativa privada para a sua exploração. Os recursos minerais e os recursos do subsolo são bens da União. Uma emenda que concede royalties aos estados e municípios pela exploração de petróleo, energia hidráulica e elétrica e gás natural em seus territórios foi aprovada. Foi aprovada também a emenda que suprimiu do texto do Centrão a expressão "posse imemorial das terras indígenas", para que o texto ficasse de acordo com a realidade brasileira.

In Vitro and In Vivo Evaluation of a Folate-Targeted Copolymeric Submicrohydrogel Based on N-Isopropylacrylamide as 5-Fluorouracil Delivery System

Folate-targeted poly[(p-nitrophenyl acrylate)-co-(N-isopropylacrylamide)] nanohydrogel (F-SubMG) was loaded with 5-fluorouracil (5-FU) to obtain low (16.3 +/- 1.9 mu g 5-FU/mg F-SubMG) and high (46.8 +/- 3.8 mu g 5-FU/mg F-SubMG) load 5-FU-loaded F-SubMGs. The complete in vitro drug release took place in 8 h. The cytotoxicity of unloaded F-SubMGs in MCF7 and HeLa cells was low; although it increased for high F-SubMG concentration. The administration of 10 mu M 5-FU by 5-FU-loaded F-SubMGs was effective on both cellular types. Cell uptake of F-SubMGs took place in both cell types, but it was higher in HeLa cells because they are folate receptor positive. After subcutaneous administration (28 mg 5-FU/kg b.w.) in Wistar rats, F-SubMGs were detected at the site of injection under the skin. Histological studies indicated that the F-SubMGs were surrounded by connective tissue, without any signs of rejections, even 60 days after injection. Pharmacokinetic study showed an increase in MRT (mean residence time) of 5-FU when the drug was administered by drug-loaded F-SubMGs.

Diário da Constituinte [gravação de vídeo] : [programa n. 410]

Cerca de 1.000 pessoas participaram de um comício em defesa das reivindicações populares na Constituição. Principalmente a reivindicação das eleições diretas para a Presidente da República, em 1988. O senador Pompeu de Sousa quer que as emendas populares tenham a mesma prioridade em Plenário dado às emendas coletivas. O senador está colhendo assinaturas para um projeto de resolução que resgataria estas emendas. Os 559 constituintes começam a votar a nova Carta constitucional. A primeira discussão será sobre o Preâmbulo, depois virá o título dos Direitos Fundamentais. Para a aprovação de qualquer proposta serão necessários 280 votos e o Centrão espera ter mais de 290 hoje em Plenário. Ontem, foram montados 2 grupos para acompanhar os trabalhos: o grupo temático e o grupo regimental. O texto do Centrão tem preferência automática em Plenário, mas as emendas que aprimoram o texto serão acatadas. Os constituintes têm várias propostas que querem ver asseguradas em Plenário. A expectativa é a de que a nova Carta atenda a população e de que haja entendimento.

Diário da Constituinte [gravação de vídeo] : [programa n. 367]

Discussão sobre a proposta de proteção ao trabalhador contra dispensa imotivada.

Medida Provisória nº 699, de 2015

Tem por objetivo analisar as disposições contidas na Medida Provisória (MP) nº 699, de 10 de novembro de 2015, que “Altera a Lei nº 9.503, de 23 de setembro de 1997, que institui o Código de Trânsito Brasileiro”.