Alcoolismo e s��filis: preval��ncia e altera����es cl��nicas e bioqu��micas hep��ticas

Avalia-se a preval��ncia de s��filis em alcoolistas cr��nicos e as altera����es hep��ticas, cl��nicas e bioqu��micas, em pacientes portadores de ambas entidades. A preval��ncia de s��filis em doentes com outros diagn��sticos psiqui��tricos foi tomada para compara����o. Os pacientes eram assintom��ticos ou oligossintom��ticos com rela����o �� disfun����o hep��tica causada pelo alcoolismo e n��o apresentavam manifesta����es correspondentes aos est��gios cl��nicos da s��filis. Duzentos e seis alcoolistas e 228 pacientes com dist��rbios psiqui��tricos foram submetidos a exame cl��nico e ��s rea����es sorol��gicas quantitativas de Wasserman e VDRL para diagn��stico de s��filis. Encontrou-se preval��ncia de soropositividade em 6,3% e 3,1% dos alcoolistas e doentes psiqui��tricos, respectivamente. Nenhuma diferen��a estatisticamente significante foi observada entre os alcoolistas, com sorologias positivas e negativas para s��filis, quanto ��s frequ��ncias das manifesta����es cl��nicas e altera����es bioqu��micas indicativas de acometimento hep��tico.

Caracteriza����o da fun����o do mon��xido de azoto e glutationo hep��ticos na sensabilidade perif��rica �� insulina

xi RESUMO A ac����o da insulina no m��sculo esquel��tico depende de um reflexo parassimp��tico hep��tico que conduz �� liberta����o de uma subst��ncia hep��tica sensibilizadora da insulina, designada por HISS, respons��vel por cerca de 55% do efeito hipoglicemiante da insulina. A ac����o da HISS �� finamente regulada pelo mon��xido de azoto (NO) hep��tico e pelo estado prandial, aumentando no per��odo p��s-prandial imediato e diminuindo progressivamente com as horas de jejum. A secre����o da HISS pode ser inibida cir��rgica ou farmacologicamente, quer por desnerva����o selectiva do plexo anterior hep��tico, quer por administra����o de atropina, quer por inibi����o do sintase do NO (NOS) hep��tico. O objectivo geral do trabalho apresentado nesta disserta����o foi a caracteriza����o da via de transdu����o de sinal que conduz �� liberta����o da HISS. O modelo utilizado neste estudo foi o rato Wistar. A sensibilidade �� insulina foi avaliada atrav��s do teste r��pido de sensibilidade �� insulina (RIST). A primeira hip��tese de trabalho testada foi que a sequ��ncia de eventos que conduzem �� secre����o da HISS inicia-se com a activa����o do sistema parassimp��tico hep��tico seguida de activa����o do NOS hep��tico com subsequente produ����o de NO e activa����o do guanilato ciclase (GC). Observou-se que a administra����o de um dador de NO reverteu a resist��ncia �� insulina induzida, quer por inibi����o do NOS hep��tico, quer por antagonismo dos receptores muscar��nicos com atropina. Em contraste, a resist��ncia �� insulina produzida por inibi����o do NOS hep��tico n��o foi revertida por administra����o intraportal de acetilcolina (ACh). Constatou-se que a inibi����o do GC hep��tico diminuiu a sensibilidade �� insulina. Estes resultados sugerem que: a ACh libertada no fígado induz a s��ntese de NO hep��tico que conduz �� liberta����o da HISS, que por sua vez �� modulada pelo GC hep��tico. A liberta����o da HISS em resposta �� insulina �� regulada pelo estado prandial. Uma vez que os n��veis hep��ticos de glutationo (GSH) se encontram, tal como a HISS, diminu��dos no estado de jejum e aumentados ap��s a ingest��o de uma refei����o, testou-se a hip��tese de que o GSH hep��tico est�� envolvido na secre����o da HISS. Observou-se que a deple����o do GSH hep��tico induziu resist��ncia �� insulina, compar��vel �� obtida ap��s inibi����o do NOS hep��tico. Estes resultados suportam a hip��tese de que o GSH hep��tico desempenha um papel cr��tico na ac����o perif��rica da insulina. Considerando que, no estado de jejum, tanto os n��veis de GSH hep��tico como os n��veis de NO hep��tico s��o baixos, testou-se a hip��tese de que a co-administra����o intraportal de um dador de GSH e de um dador de NO promove um aumento da sensibilidade �� insulina no estado de jejum, devido ao restabelecimento do mecanismo da HISS. Observou-se que a administra����o sequencial de dadores de GSH e de NO no fígado provocou um aumento na sensibilidade �� insulina, dependente da dose de dador de GSH administrada. Concluiu-se portanto que ambos, GSH e NO, s��o essenciais para que o mecanismo da HISS esteja completamente funcional. O GSH e o NO reagem para formar um S-nitrosotiol, o S-nitrosoglutationo (GSNO). Os resultados supra-mencionados conduziram �� formula����o da hip��tese de que a secre����o/ac����o da HISS depende da forma����o de GSNO. Observou-se que a administra����o intravenosa de S-nitrosoti��is (RSNOs) aumentou a sensibilidade �� insulina, em animais submetidos a um per��odo de jejum, ao contr��rio da administra����o intraportal destes f��rmacos, o que RSNOs t��m uma ac����o perif��rica, mas n��o hep��tica, na sensibilidade �� insulina. Os resultados obtidos conduziram �� reformula����o da hip��tese da HISS, sugerindo que a ingest��o de uma refei����o activa os nervos parassimp��ticos hep��ticos levando �� liberta����o de ACh no fígado que, por sua vez activa o NOS. Simultaneamente, ocorre um aumento dos n��veis de GSH hep��tico que reage com o NO hep��tico para formar um composto nitrosado, o GSNO. Este composto mimetiza a ac����o hipoglicemiante da HISS no m��sculo esquel��tico. SUMMARY Insulin action at the skeletal muscle depends on a hepatic parasympathetic reflex that promotes the release of a hepatic insulin sensitizing substance (HISS) from the liver, which contributes 55% to total insulin action. HISS action is modulated by hepatic nitric oxide (NO) and also by the prandial status so as to, in the immediate ostprandial state, HISS action is maximal, decreasing with the duration of fasting. HISS secretion may be inhibited by interruption of the hepatic parasympathetic reflex, achieved either by surgical denervation of the liver or by cholinergic blockade with atropine, or by prevention of hepatic NO release, using NO synthase (NOS) antagonists. The main objective of this work was to characterize the signal transduction pathways that lead to HISS secretion by the liver. Wistar rats were used and insulin sensitivity was evaluated using the rapid insulin sensitivity test (RIST). The first hypothesis tested was that the sequence of events that lead to HISS secretion starts with an increase in the hepatic parasympathetic tone, followed by the activation of hepatic NOS and subsequent triggering of guanylate cyclase (GC). We observed that insulin resistance produced either by muscarinic receptor antagonism with atropine or by hepatic NOS inhibition was reversed by the intraportal administration of an NO donor. In contrast, intraportal acetylcholine (ACh) did not restore insulin sensitivity after NOS inhibition. We also observed that GC inhibition lead to a decrease in insulin sensitivity.These results suggest that the release of ACh in the liver activates hepatic NO synthesis in order to allow HISS secretion, through a signaling pathway modulated by GC. HISS release in response to insulin is controlled by the prandial status. The second hypothesis tested was that glutathione (GSH) is involved in HISS secretion since the hepatic levels of GSH are, like HISS action, decreased in the fasted state and increased after ingestion of a meal. We observed that hepatic GSH depletion led to insulin resistance of the same magnitude of that observed after inhibition of hepatic NOS. These results support the hypothesis that hepatic GSH is crucial in peripheral insulin action. Since, in the fasted state, both hepatic GSH and NO levels are low, we tested the hypothesis that intraportal o-administration of a GSH donor and an NO donor enhances insulin sensitivity in fasted Wistar rats, by restoring HISS secretion. We observed that GSH and NO increased insulin sensitivity in a GSH dose-dependent manner. We concluded that HISS secretion requires elevated levels of both GSH and NO in the liver. GSH and NO react to form a S-nitrosothiol, S-nitrosoglutathione (GSNO). The last hypothesis tested in this work was that HISS secretion/ action depends on the formation of GSNO. We observed that intravenous administration of -nitrosothiols (RSNOs) increased insulin sensitivity in animals fasted for 24 h, in contrast with the intraportal administration of the drug. This result suggests that RSNOs enhanced insulin sensitivity through a peripheral, and not hepatic, mechanism. The results obtained led to a restructuring of the HISS hypothesis, suggesting that the ingestion of a meal triggers the hepatic parasympathetic nerves, leading to the release of Ach in the liver, which in turn activates NOS. Simultaneously, hepatic GSH levels increase and react with NO to form a nitrosated compound, GSNO. S-nitrosoglutathione mimics HISS hypoglycaemic action at the skeletal muscle.

Desindustrializa����o. Reindustrializa����o. Terciariza����o

pp. 75-88

Schistosomose em modelo murino: estudo sobre granuloma hep��tico causado por ovos de Schistosoma mansoni

A schistosomose �� uma doen��a parasit��ria que afecta cerca de 200 milh��es de pessoas, com alta preval��ncia nos tr��picos e que origina um grave problema de sa��de p��blica. Ao longo da infec����o, o sistema imunit��rio tenta de v��rias formas combater a presen��a do parasita. Inicialmente ocorre uma resposta imune mediada por c��lulas do tipo Th1, com o progresso da infec����o, a resposta �� substitu��da por uma resposta do tipo Th2 induzida durante a forma����o de granulomas. Este surge como resposta �� presen��a de produtos t��xicos libertados pelos ovos do parasita retido nos tecidos. O fígado �� o principal alvo do dep��sito de ovos, sofrendo altera����es fisiopatol��gicas, e histol��gicas. O Mus musculus tem sido muito utilizados na infec����o experimental por Schistosoma mansoni, para melhor se conhecer o papel da resposta imunit��ria na forma����o de granulomas hep��ticos. No decorrer da infec����o o granuloma sofre altera����es desencadeadas pelas citocinas que o sistema imunit��rio produz. Estas altera����es dividem-se em cinco fases: reac����o inicial, exsudativa, exsudativa-produtiva, produtiva e involutiva granuloma. O presente trabalho, estudou as altera����es sofridas pelo granuloma hep��tico (quantidade, dimens��o e fase do granuloma), em tr��s diferentes per��odos de infec����o (55, 90 e 125 dias) no modelo animal Mus musculus infectado com Schistosoma. mansoni, estirpe SmBh distribu��dos por tr��s grupos experimentais com diferente n��mero de cerc��rias (50, 80, e 100). Verificou-se que ao longo da infec����o a quantidade de granulomas aumenta, as dimens��es t��m uma tend��ncia inicial para aumentar mas a partir dos 90 dias ap��s a exposi����o sofrem uma diminui����o. No grupo experimental com maior intensidade de infec����o inicial a diminui����o deu-se mais cedo. Em rela����o ��s fases de desenvolvimento do granuloma este sofre altera����es ao longo de toda a infec����o. Assim, aos 55 dias predomina a fase exsudativa, aos 90 todos os grupos apresentam maior percentagem de granulomas na fase produtiva e por fim aos 125 dias prevalece a fase involutiva. Todos estes resultados sugerem que a caracteriza����o do granuloma nas diferentes fases de infec����o pode depender do n��mero de cerc��rias da exposi����o.

Post-transcriptional regulation of HFE gene expression

Thesis presented to obtain the Ph.D. degree in Biology (Molecular Genetics), by the Universidade Nova de Lisboa, Faculdade de Ci��ncias e Tecnologia.

Solea senegalensis como bioindicador da qualidade sedimentar estuarina

Disserta����o apresentada na Faculdade de Ci��ncias e Tecnologia da Universidade Nova de Lisboa para a obten����o do grau de Mestre em Engenharia do Ambiente

UMA ABORDAGEM YEAST TWO-HYBRID PARA O ESTUDO DA REPLICA����O E PATOG��NESE DO V��RUS DA HEPATITE DELTA

O v��rus da hepatite delta (HDV) �� o agente etiol��gico de uma das formas mais graves de hepatite viral e �� ainda end��mico em diversas regi��es do globo, nomeadamente em ��frica, na Amaz��nia e no Extremo Oriente. O HDV co-infecta ou super-infecta hepat��citos infectados com o v��rus da hepatite B (HBV) aumentando em cerca de 10 vezes o risco de cirrose e hepatite fulminante. A associa����o cl��nica entre os dois v��rus deve-se ao facto do inv��lucro do HDV ser constitu��do pelos antig��nios de superf��cie do HBV (HBsAgs) que s��o necess��rios para a propaga����o da infec����o. O genoma do HDV �� constitu��do por uma mol��cula de RNA de cadeia simples, circular, com cerca de 1.7 Kb, que possui cerca de 70% de emparelhamento interno. Foi identificada uma ��nica grelha de leitura aberta (ORF) no RNA viral que codifica para o antig��nio delta (HDAg). A ocorr��ncia de um mecanismo de editing do RNA, resulta na express��o de duas formas do HDAg, a pequena (S-HDAg) e a grande (L-HDAg). V��rias fun����es essenciais para a replica����o do HDV t��m sido atribu��das a ambas as formas do HDAg, sendo a S-HDAg essencial para a acumula����o de RNA viral e a L-HDAg respons��vel pela interac����o com os HBsAgs para formar part��culas virais. No entanto, dada a simplicidade dos seus componentes, admite-se que a replica����o viral depende das interac����es estabelecidas entre os HDAgs e factores celulares do hospedeiro. Apesar do n��mero consider��vel de factores celulares descritos como interactores dos HDAgs ou RNA virais, a import��ncia de muitas destas interac����es n��o foi elucidada e muitas etapas do ciclo de replica����o do HDV permanecem pouco claras. Para al��m disso, dado o n��mero limitado de factores do hospedeiro que est��o envolvidos na sua replica����o, �� muito prov��vel que um n��mero elevado de interactores do HDV permane��a por identificar. Este trabalho teve como objectivo a identifica����o de prote��nas de fígado humano capazes de interagir com os HDAgs, utilizando o sistema yeast Two-Hybrid (YTH). Identificaram-se trinta prote��nas com capacidade de interagir com a S-HDAg no sistema YTH, sendo que estas prote��nas se encontram envolvidas em diferentes processos celulares. Com base nas caracter��sticas funcionais, foram seleccionadas tr��s destas prote��nas e as suas interac����es com a S-HDAg foram investigadas com maior detalhe. As tr��s prote��nas seleccionadas foram a ribonucleoprote��na nuclear heterog��nea C (hnRNPC), a embryonic lethal abnormal vision like1 (ELAVL1/HuR) e a prote��na 2 de liga����o a EBNA1 (EBP2). As duas primeiras s��o prote��nas de liga����o a RNA, previamente descritas como envolvidas em processos de replica����es de outros v��rus com genoma RNA, enquanto a EBP2, �� uma prote��na de localiza����o preferencialmente nucleolar, tal como por vezes acontece com os HDAgs. As interac����es foram analisadas recorrendo a v��rios ensaios bioqu��micos. No caso da hnRNPC e da HuR, ap��s valida����o no sistema YTH, a capacidade de interac����o com a S-HDAg foi confirmada quer in vitro por blot overlay quer in vivo por co-imunoprecipita����o em c��lulas de hepatoma humano. Nas mesmas c��lulas, observou-se uma co-localiza����o consider��vel entre os HDAgs e os RNAs virais. Finalmente, de modo a investigar a contribui����o das prote��nas hnRNPC e HuR na replica����o do HDV, procedeu-se ao silenciamento destas prote��nas pela utiliza����o de short hairpin RNAs (shRNAs) espec��ficos para os mRNAs correspondentes Observou-se que o silenciamento de ambas as prote��nas hnRNPC e HuR end��genas, individualmente resultou numa diminui����o acentuada nos n��veis de express��o dos HDAgs. No que respeita �� EBP2, a interac����o com a S-HDAg foi confirmada em condi����es in vitro com recurso a ensaios de blot overlay e de cromatografia de afinidade. A an��lise por imunofluoresc��ncia indirecta e microscopia confocal revelou co-localiza����o elevada entre os HDAgs e a EBP2, principalmente nos nucl��olos de c��lulas de hepatoma humano. Finalmente, foi ainda utilizado o sistema YTH para estudar os mecanismos de importa����o dos HDAgs. Assim, este sistema foi utilizado com o prop��sito de identificar prote��nas celulares capazes de interagir com um dom��nio espec��fico dos HDAgs, o sinal de localiza����o nuclear (NLS). Na pesquisa YTH realizada obtiveram-se 161 clones positivos, sendo que um deles mostrou codificar para a carioferina ��4 (KPNA4). A interac����o da KPNA4 com a S-HDAg foi reproduzida em condi����es in vitro atrav��s de um ensaio de cromatografia de afinidade tendo sido utilizadas formas recombinantes das duas prote��nas. Este trabalho permitiu identificar v��rias prote��nas celulares que interagem com a S-HDAg. Obtiveram-se evid��ncias sugestivas de que algumas das prote��nas identificadas podem desempenhar fun����es importantes no ciclo de replica����o do HDV e que abrem novas perspectivas para o estudo do ciclo de replica����o do v��rus.

Marca����o da Anexina V para imagem funcional da apoptose celular

Disserta����o para obten����o do Grau de Mestre em Gen��tica Molecular e Biomedicina

Universidade inclusiva e o aluno com necessidades especiais: a investiga����o realizada em Portugal

A presente investiga����o tem como objetivo principal contribuir para a reflex��o e sensibiliza����o das NEE no Ensino Superior, atrav��s da sistematiza����o da investiga����o cient��fica realizada em Portugal, nos ��ltimos anos. Pretende-se, assim, contribuir para um maior conhecimento desta realidade no nosso pa��s. Para o efeito, procedeu-se a um levantamento bibliogr��fico dos documentos dispon��veis na ��rea das NEE no ES em tr��s bases de dados: RCAAP (Reposit��rio Cient��fico de Acesso Aberto em Portugal); B-On (Biblioteca de Conhecimento Online) e o motor de busca Google. Ap��s a consulta das bases de dados, foram encontrados trinta e cinco documentos, distribu��dos em oito Teses (seis Teses de Mestrado e duas Teses de Doutoramento), onze artigos em Revista (dez artigos em Revista Nacional e um artigo em Revista Internacional), quinze Documentos em Confer��ncia e um Cap��tulo de Livro. Os dados recolhidos permitem perceber que, paulatinamente, a quest��o das NEE no Ensino Superior tem despertado o interesse dos investigadores, sendo uma ��rea onde a possibilidade e necessidade de mais estudos �� uma realidade.

O Partido Comunista Portugu��s e a Guerra Fria: ���sectarismo���, ���desvio de direita���, ���Rumo �� vit��ria��� (1949-1965)

Disserta����o apresentada para cumprimento dos requisitos necess��rios �� obten����o do grau de Doutor em Hist��ria Institucional e Pol��tica Contempor��nea

Doen��as Hep��ticas num Servi��o de Medicina Interna

As doen��as hep��ticas constituem uma das causas frequentes de internamentos em servi��os de Medicina Interna. Os autores fizeram um trabalho de revis��o de cinco anos dos internamentos num Servi��o de Medicina Interna cujos diagn��sticos foram de doen��a hep��tica cr��nica, hepatite aguda e carcinoma hepatocelular. Conclu��ram que houve uma diminui����o de internamentos por doen��a hep��tica cr��nica ao longo dos anos e um crescente aumento de hepatites agudas, a maioria delas associada a doentes toxicodependentes e com SIDA.

Cirurgia de Ressec����o dos Tumores do P��ncreas Localmente Invasivos. Apresenta����o de uma Nova T��cnica de Revasculariza����o

A cirurgia dos tumores do p��ncreas continua a ser marcada pela pobreza dos resultados obtidos. No caso dos tumores localmente invasivos, os doentes s��o habitualmente sujeitos a uma mera cirurgia de deriva����o, com escassa sobreviv��ncia e m�� qualidade de vida. Os autores operaram sete doentes com tumores do p��ncreas localmente invasivos, sujeitos a cirurgia de ressec����o radical, com bons resultados. �� apresentada uma t��cnica original de reconstru����o da circula����o arterial hep��tica.

Tumores Hep��ticos Malignos Associados a Dep��sitos de Torotraste. Dois Casos Cl��nicos

Os A.A apresentam dois casos cl��nicos de tumores hep��ticos associados ao torotraste, dois colangiocarcinomas, observados numa enfermaria de Medicina Interna de um hospital de Lisboa. �� feito um coment��rio sobre o efeito nefasto das radia����es ionizantes em geral sobre o organismo humano, particularizando os efeitos do torotraste. Comenta-se, ainda, o prolongado tempo de lat��ncia que existiu nestes dois casos, bem como o facto de, provavelmente, estarmos perante os ��ltimos casos de tumores induzidos pelo torotraste.

Treatment of Hepatitis C Virus Infection in Kidney Transplant Recipients: Case Report

Chronic hepatitis C virus (HCV) infection exists in a large proportion of patients undergoing renal transplantation. Nowadays it is not considered to be an absolute contraindication to transplantation; however, it is associated with an increased risk for the patient and accounts for a shorter half-life of the renal allograft. We present three transplant recipients who displayed serious hepatic dysfunction after renal transplantation due to an HCV infection. In two of these cases, the liver biopsies established the diagnosis of FCH. In the third case, the liver biopsy was compatible with the early stages of FCH. All patients were started on peg-interferon alfa 2-b and ribavirin with subsequent normalization of hepatic function and early complete viral responses.

Predictive Variables Affecting Transfusion Requirements in Orthotopic Liver Transplantation

INTRODUCTION AND AIMS: Adult orthotopic liver transplantation (OLT) is associated with considerable blood product requirements. The aim of this study was to assess the ability of preoperative information to predict intraoperative red blood cell (RBC) transfusion requirements among adult liver recipients. METHODS: Preoperative variables with previously demonstrated relationships to intraoperative RBC transfusion were identified from the literature: sex, age, pathology, prothrombin time (PT), factor V, hemoglobin (Hb), and platelet count (plt). These variables were then retrospectively collected from 758 consecutive adult patients undergoing OLT from 1997 to 2007. Relationships between these variables and intraoperative blood transfusion requirements were examined by both univariate analysis and multiple linear regression analysis. RESULTS: Univariate analysis confirmed significant associations between RBC transfusion and PT, factor V, Hb, Plt, pathology, and age (P values all < .001). However, stepwise backward multivariate analysis excluded variables Plt and factor V from the multiple regression linear model. The variables included in the final predictive model were PT, Hb, age, and pathology. Patients suffering from liver carcinoma required more blood products than those suffering from other pathologies. Yet, the overall predictive power of the final model was limited (R(2) = .308; adjusted R(2) = .30). CONCLUSION: Preoperative variables have limited predictive power for intraoperative RBC transfusion requirements even when significant statistical associations exist, identifying only a small portion of the observed total transfusion variability. Preoperative PT, Hb, age, and liver pathology seem to be the most significant predictive factors but other factors like severity of liver disease, surgical technique, medical experience in liver transplantation, and other noncontrollable human variables may play important roles to determine the final transfusion requirements.