Marcação da Anexina V para imagem funcional da apoptose celular

Dissertação para obtenção do Grau de Mestre em Genética Molecular e Biomedicina

O cancro colorrectal é a segunda principal causa de morte a nível mundial por neoplasia. A externalização da fosfatidilserina é um dos primeiros eventos da apoptose. Assim, o uso da Anexina V radiomarcada com 99mTecnécio torna-se num importante método de detecção e monitorização terapêutica de cancro in vivo. A 99mTc-HYNIC-Anexina V foi usada para detecção de apoptose em células do cancro colorrectal (WiDr) in vitro e in vivo. A Anexina V foi marcada com o 99mTc usando o HYNIC como agente bifuncional. Foram realizados estudos in vitro na linha celular WiDr com e sem incubação do indutor de apoptose TRAIL em diferentes concentrações e incubados durante 2, 12 e 24h. Esses estudos incluíram a avaliação da captação entre os 5min e os 120min após a adição da 99mTc-HYNIC-Anexina V; e estudos de citometria com Anexina V-FITC para avaliação de células em apoptose em células incubadas com TRAIL. Os estudos in vivo efectuados incluíram estudos de biodistribuição e estudos de imagem da 99mTc-HYNIC-Anexina V em ratinhos Balb/c nu/nu normais e Balb/c nu/nu com xenotranplante de células WiDr. A eficiência de marcação da 99mTc-HYNIC-Anexina V foi superior a 90%. Através dos estudos in vitro observou-se que a captação celular de 99mTc-HYNIC-Anexina V na linha celular WiDr aumentou ao longo tempo. As células incubadas com TRAIL também evidenciam um aumento de captação ao longo do tempo, em todas as incubações. De acordo com os estudos de biodistribuição a captação pelo tumor (%ID/g), excluindo os órgãos de excreção, rins e fígado, é ligeiramente superior aos restantes órgãos. É também possível verificar que a captação no tumor se mantém ao longo do tempo. Comparando o tumor com o músculo existem diferenças estatisticamente significativas entre estes órgãos (p<0,05). Os dados obtidos demonstram que a 99mTc-HYNIC-Anexina V permite a avaliação funcional de apoptose, de forma não invasiva, na detecção de cancro colorrectal.