Risco de introdu����o de novas esp��cies de Leishmania na Regi��o do Algarve

As leishmanioses s��o doen��as parasit��rias causadas por protozo��rios do g��nero Leishmania, transmitidas pela picada de fleb��tomos f��meas e que causam uma elevada morbilidade e mortalidade em ��frica, Am��rica Latina, ��sia, e na Regi��o Mediterr��nica. A vigil��ncia da preval��ncia das leishmanias e dos respectivos vectores, nas regi��es end��micas e envolventes, s��o cruciais para prever o risco de introdu����o e dissemina����o de novas esp��cies de Leishmania que poder��o dar origem a novos focos de doen��a(s). A monitoriza����o da infec����o por Leishmania nos fleb��tomos �� importante para a compreens��o da eco-epidemiologia e avalia����o de programas de controlo. Por outro lado, a transmiss��o de Leishmania pode envolver um elevado n��mero de hospedeiros vertebrados que podem ser identificados atrav��s da an��lise das refei����es hem��ticas dos vectores. A Regi��o do Algarve �� considerada um foco end��mico de leishmaniose(s), humana e canina, desde a d��cada de 1980. O principal objectivo deste estudo foi actualizar a distribui����o, a abund��ncia relativa, a densidade e outros aspectos vectoriais das esp��cies flebotom��nicas na Regi��o Algarvia para uma poss��vel aplica����o na vigil��ncia epidemiol��gica. De Maio a Novembro de 2007, foram capturados 1595 fleb��tomos, de ambos os sexos, atrav��s de armadilhas luminosas tipo CDC, em 175 bi��topos. Foram identificadas quatro esp��cies flebotom��nicas: Phlebotomus perniciosus, P. ariasi, P. sergenti e Sergentomyia minuta. Ap��s identifica����o realizaram-se PCRs com alvo no (i) kDNA e na regi��o ITS-1 para detec����o da presen��a de DNA de Leishmania nos fleb��tomos e (ii) gene do citocromo B mitocondrial para an��lise das refei����es hem��ticas. A presen��a de uma f��mea de P. perniciosus infectada com L. infantum (taxa de infec����o total de 0,12%) demonstrou que o Algarve continua a ser um foco de leishmaniose. A presen��a de P. sergenti e P. papatasi (esta ��ltima, encontrada em estudos anteriores) poder��o constituir indicadores de risco de introdu����o/dissemina����o de L. tropica e L. major devido �� mobilidade de turistas e imigrantes (e outros) de ��reas end��micas para esta regi��o. A realiza����o, pela primeira vez em Portugal, de uma t��cnica de biologia molecular para estudo das prefer��ncias hem��ticas, demonstrou ser uma ferramenta ��til, que no futuro poder�� eventualmente contribuir para verificar se os vectores apresentam capacidade de adapta����o a novos hospedeiros vertebrados.

Therapeutic trial in experimental tegumentary leishmaniasis caused by Leishmania (Leishmania) amazonensis. A comparative study between mefloquine and aminosidine

One hundred and eighty-two male inbred C57/BL/6 mice were infected with 3 x 106 Leishmania (Leishmania) amazonensis promastigotes of the MHOM/BR/PH8 strain by means of a subcutaneous injection in the right ear. The animals were separated in three groups: 1) oral mefloquine hydrochloride treatment (16mg/kg/day/10 days), 2) intramuscular aminosidine (Paromomycin��) treatment (20mg/kg/20 days) and 3) control. Twenty six mice of each treated group were sacrificed, one at the end of treatment (nine weeks after inoculation), and one six weeks later (fifteen weeks after inoculation). Control Group animals were sacrificed at weeks six, nine and fifteen after inoculation. There was no significant difference between Group 1 (mefloquine) and Group 3 (control) subjects. Group 2 animals (aminosidine) presented the smallest differences of all, both at the end of the treatment and six weeks later. The histopato-logical parameters have shown the following findings: a) there was no significant difference between the mefloquine treated group and the control group; the group treated with aminosidine showed fewer of vacuolated macrophages than the control group, at week 9 (end of treatment). b) both at the end of treatment and six weeks later, evaluation of tissue necrosis and tissue fibrosis revealed no differences between the treated groups. It was found that six weeks after the end of treatment, mice in the control group presented significantly more severe degrees of fibrosis than mice in the other groups. It can be concluded that mefloquine showed limited therapeutic effect in this experimental model, whereas aminosidine had a significant effect. Nevertheless, neither of them resulted in cure of the lesions.

Infec����o por Leishmania (Leishmania) chagasi em crian��as de uma ��rea end��mica de leishmaniose visceral americana na Ilha de S��o Luis-MA, Brasil

Realizou-se estudo prospectivo com 648 crian��as de zero a cinco anos no munic��pio da Raposa-MA, de julho/97 a junho/98, com o objetivo de avaliar as caracter��sticas da infec����o por L.(L.)chagasi e verificar se existe associa����o entre desnutri����o e infec����o assintom��tica. Utilizou-se question��rio com dados socioecon��micos, ambientais e h��bitos de vida; realizou-se Intradermorrea����o de Montenegro(IDRM) com ant��geno de L. amazonensis e Enzyme Linked Immunosorbant Assay(ELISA) para detectar infec����o, e exame antropom��trico. A preval��ncia inicial, final e incid��ncia da infec����o foram 18,6%, 20,6% e 10,8% pelo IDRM, e 13,5%, 34,4% e 28% pelo ELISA, respectivamente. A preval��ncia da desnutri����o cr��nica (altura/idade) foi 26%. N��o houve associa����o estatisticamente significante entre desnutri����o e infec����o assintom��tica por L. (L.) chagasi. A forma assintom��tica da doen��a est�� presente nas ��reas estudadas, necessitando de medidas de controle mais efetivas.

Vaccination of C57BL/10 mice against cutaneous leishmaniasis using killed promastigotes of different strains and species of Leishmania

Antigenic extracts from five Leishmania stocks were used to vaccinate C57BL/10 mice. The Leishvacin�� and PH8 monovalent vaccine yielded the highest IFN-gamma levels in the supernatants of spleen cell culture from vaccinated animals. Each single strain immunized group showed evidence of protective immunity six months after the challenge with promastigotes of Leishmania (Leishmania) amazonensis. No differences were detected between the vaccinated groups. It can be concluded that vaccines composed of single Leishmania stocks can provide protection to C57BL/10 mice against L. (L.) amazonensis infection.

Identification of Leishmania chagasi from skin in Leishmania/HIV co-infection: a case report

A case of HIV/Leishmania co-infection presenting both visceral and cutaneous manifestations is reported. Leishmania infection was confirmed by conventional methods (parasitological approach and serology) and by PCR. Leishmania chagasi isolated from the skin lesion was characterized by enzyme electrophoresis and by restriction fragment length polymorphism of the internal transcribed spacer of the ribosomal gene.

Histological evaluation of the lesion induced by inoculation of Leishmania mexicana in the cheek pouch of the hamster

We have studied the role of the immune response in the morphology of the leishmaniotic granuloma induced in the cheek pouch of hamsters, an immunologically privileged site, after inoculation of 3 x 10(5) Leishmania mexicana. Animals were histologically and immunologically evaluated until 120 days after inoculation. Independent of the time of sacrifice, the animals were always non-reactors to the footpad test (FPT). At histology, the introduction of L. mexicana in the cheek pouch leads to an abscess that evolves to a granulomatous reaction rich in amastigote forms, and later it leads to resolution, even in the absence of immune response detectable by FPT. Our results demonstrate that the development of immune response is not preponderant for the control of infection induced by L. mexicana inoculated subcutaneously in the cheek pouch of the hamster. It also suggests that the macrophages present in the leishmaniotic granuloma are capable of eliminating this parasite, even in the absence of immune response evaluated by FPT.

Estudo das caracter��sticas epidemiol��gicas e cl��nicas de 332 casos de leishmaniose tegumentar notificados na regi��o norte do Estado do Paran�� de 1993 a 1998

Casos de leishmaniose tegumentar no norte do estado do Paran�� t��m sido assinalados desde os anos 50, mas no final dos anos 80, houve um surto epid��mico. Para conhecer o perfil epidemiol��gico da leishmaniose cut��nea na regi��o Norte do Paran�� foi feito um levantamento de casos, entre 1993 e 1998. Foram notificados 316 casos da doen��a em 35 munic��pios paranaenses. Dezesseis casos eram importados de outros estados e do Paraguai. Os indiv��duos do sexo masculino (61,2%), na faixa et��ria de 15 a 49 anos (70,8%) representaram a maioria dos casos de leishmaniose tegumentar. Sessenta e sete porcento dos pacientes apresentaram les��es ��nicas, 31% les��es m��ltiplas e 2% les��es de mucosas. Num total de 367 les��es analisadas 47,7% estavam localizadas nos membros inferiores, 26,7% nos membros superiores e 16% na face. Trinta e duas cepas de Leishmania isoladas foram identificadas, com base em 13 isoenzimas, como pertencentes �� esp��cie Leishmania (Viannia) braziliensis.

Leishmaniose tegumentar americana

A leishmaniose tegumentar americana permanence end��mica em vastas ��reas da Am��rica Latina. Os agentes causadores da doen��a s��o a L. (Viannia) braziliensis, L. (L. mexicana), L. (V.) panamensis, e outras esp��cies relacionadas. A apresenta����o cl��nica da doen��a varia dentro de um espectro amplo, incluindo ��lceras cut��neas m��ltiplas ou ��nica, leishmaniose cut��nea difusa e les��es mucosas. Os principais reservat��rios da L. (V.) braziliensis e da L. (Viannia) spp. s��o os pequenos roedores silvestres. A doen��a acomete mais freq��entemente os trabalhadores que invadem as florestas tropicais ou moram pr��ximo a elas. O per��odo de incuba����o varia de duas semanas a v��rios meses. As les��es cut��neas constituem ��lceras rasas, circulares com bordas elevadas e bem definidas e com o assoalho da ��lcera de aspecto granular. Nas infec����es pela L. (V.) braziliensis a linfoadenopatia regional geralmente precede o surgimento das ��lcera����es por uma a doze semanas. O diagn��stico definitivo depende da identifica����o de amastigotas em tecido ou promastigotas em meios de cultura. Os anticorpos anti-leishmania podem ser identificados no soro utilizando-se as t��cnicas de ELISA, imunofluoresc��ncia e testes de aglutina����o mas os t��tulos revelam-se baixos na maioria dos casos. A intradermorrea����o de Montenegro torna-se positiva durante a evolu����o da doen��a. Os antimoniais pentavalentes continuam sendo as drogas de escolha no tratamento da leishmaniose. A anfotericina B encontra indica����o nos casos mais graves ou nos indiv��duos que n��o respondem ao tratamento com os antimoniais. A imunoterapia e a imunoprofilaxia constituem alternativas promissoras no tratamento e profilaxia da leishmaniose tegumentar americana.

Identification and purification of immunogenic proteins from nonliving promastigote polyvalent Leishmania vaccine (Leishvacin��)

Immunogenic proteins from nonliving promastigote polyvalent Leishmania vaccine against American tegumentary leishmaniasis (Leishvacin��), produced by Biobr��s (Biochemistry of Brazil ), Montes Claros, State of Minas Gerais, Brazil, were identified and purified by polyacrylamide electrophoresis gel and electroelution. C57BL/10 mice were vaccinated with proteins with estimated molecular weights of 42, 46, 63, 66, 73, 87, 97, and 160kDa in three doses of 30��g of each protein at 15-day intervals combined with 250��g of Corynebacterium parvum followed by a challenge infection with 10(5) infective promastigotes from Leishmania (Leishmania) amazonensis. The ability of these proteins to induce immune response and protection was analyzed. No statistical difference was observed in the level of IFN-g induced by proteins in vaccinated groups in comparison with control groups. Six months after challenge infection, protection levels of 28.57; 42.86; 57.14; 42.86; 42.86, 57.14; 42.86 and 57.14% were demonstrated for each purified protein.

Estudo comparativo da efic��cia de isotionato de pentamidina administrada em tr��s doses durante uma semana e de N-metil-glucamina 20mgSbV/kg/dia durante 20 dias para o tratamento da forma cut��nea da leishmaniose tegumentar americana

Setenta e nove pacientes com leishmaniose tegumentar americana, forma cut��nea, foram divididos em dois grupos: o grupo experimental (I), formado por 38 pessoas que receberam isotionato de pentamidina, 4mg/kg/dia, tr��s aplica����es, IM, durante uma semana, e o grupo controle (II), formado por 41 doentes tratados com N-metilglucamina, 20mgSbV/kg/dia por 20 dias, EV. Foram identificados, por t��cnica de anticorpos monoclonais, 21 isolados com predomin��ncia de Leishmania (Viannia) braziliensis. Encontrou-se cura cl��nica em 71,05% do grupo experimental e 73,17% do grupo controle (p=0,47). Altera����es de ECG foram mais freq��entes utilizando antimonial pentavalente, com signific��ncia (p<0,05). O tratamento com a pentamidina mostrou efic��cia semelhante quando comparado ao antimonial e apresenta vantagens como dura����o reduzida de tratamento e baixa toxicidade cardiol��gica.

Inefic��cia in vivo da terbinafina em leishmaniose cut��nea causada por Leishmania (Leishmania) amazonensis em camundongos C57BL/6

Testou-se, em camundongos C57BL/6 inoculados com a cepa MHOM/BR/PH8 de Leishmania (Leishmania) amazonensis, terbinafina via oral 100mg/kg/dia, por 20 dias, solu����o salina 0,9% via oral como controle e stibogluconato de s��dio 400mg SbV/kg/dia via subcut��nea como padr��o-ouro. A terbinafina mostrou-se ineficaz, cl��nica e parasitologicamente, e pelo ensaio por dilui����o limitante, quando comparada aos controles.

Inocula����o experimental de Equus asinus com Leishmania chagasi Cunha &amp; Chagas, 1937

Quatro Equus asinus foram inoculados com promastigotas de Leishmania chagasi Cunha &amp; Chagas, 1937 e acompanhados durante 12 meses atrav��s de: pesquisa de amastigotas em esfrega��os e culturas de sangue perif��rico em fragmentos de tecido do l��bio inferior, medula ��ssea, ba��o e f��gado e de testes de ELISA e TRALd. Estes foram positivos nos 8��, 10�� e 12�� meses ap��s a inocula����o. O exame histopatol��gico p��s necropsia, demonstrou discreto n��mero de amastigotas no f��gado de dois dos eq����deos inoculados. Apesar de desafiados com elevado n��mero de promastigotas, os animais n��o desenvolveram infec����es patentes e n��o infectaram experimentalmente a vetora Lutzomya longipalpis. Os resultados induzem a acreditar que os eq����deos s��o desprovidos de import��ncia como reservat��rios na cadeia de transmiss��o da leishmaniose visceral, embora sirvam como boa fonte de alimenta����o sang����nea e prolifera����o da vetora Lutzomyia longipalpis.

Preval��ncia da infec����o canina em ��reas end��micas de leishmaniose tegumentar americana, do munic��pio de Paracambi, Estado do Rio de Janeiro, no per��odo entre 1992 e 1993

No munic��pio de Paracambi, Estado do Rio de Janeiro, foi realizado um inqu��rito epidemiol��gico sobre a leishmaniose tegumentar americana na popula����o canina residente em ��reas end��micas rural e semiurbana. Foram cadastrados 179 c��es e 138 (77,1%) foram examinados, segundo seus aspectos cl��nicos e desenvolvimento de hipersensibilidade tardia ao ant��geno Imunoleish�� e respostas sorol��gicas �� rea����o de imunofluoresc��ncia indireta e ao ensaio imunoenzim��tico. Dos 9 (6,5.%) animais portadores de les��es/cicatrizes suspeitas, 66,7% foram causadas por Leishmania sp; 44,4% produziram infec����o em hamsters e apresentaram crescimento em meio de cultura, compat��veis com o comportamento de Leishmania do complexo braziliensis. A caracteriza����o molecular (an��lises isoenzim��ticas e do perfil de restri����o do KDNA) identificou 2 amostras como similares �� Leishmania (Viannia) braziliensis. A preval��ncia da infec����o canina observada atrav��s do teste cut��neo, RIFI e ELISA foi, respectivamente, 10,1%, 16,7% e 27,8%. A presen��a das formas cl��nica/subcl��nica da LTA na popula����o canina associada �� infec����o humana sugere que o c��o pode atuar como poss��vel fonte de infec����o, assim como na dissemina����o da doen��a.

Retrospective study of 151 patients with cutaneous leishmaniasis treated with meglumine antimoniate

We retrospectively analyzed a series of 151 cases of cutaneous leishmaniasis treated between 1967 and 1982. One-hundred-and-thirty-nine (92%) patients presented with active lesions and were treated with daily doses of meglumine antimoniate: 81 adults received a 5-ml vial IM and 58 children received 1 to 5ml. Forty-five (32.4%) patients underwent continuous treatment with meglumine antimoniate for 25 to 116 days without rest intervals, and 94 (67.6%) intermittent treatment with 2 to 5 series of meglumine antimoniate. Intermittent series could include schedules of daily IM applications for 10 to 25 days each and intervals varying from 10 to 60 days. Antimony dose was calculated for 66 (47.5%) patients and ranged from 3.9 to 28.7 Sb5+/kg/day. Of these, 35 patients received >10mg and 31 patients <10mg Sb5+/kg/day. Median time of healing was longer for lesions on the legs and feet - 67.5 days versus 48.7 days (p < 0.001) for other sites. However, there were no significant differences in the median time of healing between adults and children, intermittent and continuous regimens or high and low antimony doses. Fifty-one patients were reassessed 5 to 14 years after treatment and showed no evidence of disease. These results support further investigation (clinical trials) on treatment using low doses of antimony.

Risk factors for Leishmania chagasi infection in an urban area of Minas Gerais State

In order to understand the determinants of human infection by Leishmania chagasi in an urban area, a cross-sectional population based study was conducted using molecular and serologic methods to identify infection. Participants were interviewed using a pre-coded questionnaire. Two criteria were tested to identify risk factors: Model 1- including all participants positive in hybridization by Leishmania donovani complex probe; Model 2- including all participants positive for hybridization and at least one serologic test. In Model 1, the variables associated with infection were: ownership of birds, time spent outside house between 6:00-10:00 PM and garbage not collected. In Model 2, the variables associated with infection were: family with knowledge of the vector, garbage not collected, garbage not removed or buried, ownership of birds and eroded areas in the neighborhood. The risk factors identified were associated with household conditions, presence of animals and the likelihood of contact with phlebotomine sandflies.