Extração de DNA a partir de sangue humano coagulado para aplicação nas técnicas de genotipagem de antígenos leucocitários humanos e de receptores semelhantes à imunoglobulina

O objetivo deste estudo foi padronizar uma metodologia de extração de DNA de alta qualidade a partir de amostras de sangue coagulado. Quarenta e oito amostras de sangue humano coagulado foram utilizadas para a extração de DNA pelo kit comercial EZ-DNA® (Biological Industries, Beit Haemek, Israel), pelo kit de coluna Neoscience® (One Lambda Inc., San Diego, CA) e pelo método modificado de salting out. Apenas o método de salting out foi capaz de extrair altas concentrações de DNA (média, 180ng/µL), as quais foram medidas pelo detector de fluorescência Qubit® (Invitrogen, USA). Este método permitiu a amplificação dos genes HLA (human leukocyte antigens) pela tecnologia PCR-SSO (polymerase chain reaction - specific sequence of oligonucleotides) Luminex, a qual exige DNA de boa qualidade, e de genes KIR (killer cell immunoglobulin-like receptors) pela técnica made in house PCR-SSP (polymerase chain reaction-sequence specific of primers), a qual demanda uma concentração específica de DNA (10ng/µL). Concluímos que a técnica de salting out modificada foi muito eficiente, simples e rápida para a extração de DNA de amostras de sangue humano coagulado, com o objetivo de realizar a genotipagem de genes HLA e KIR.

Hibridização reversa e sequenciamento na genotipagem do vírus da hepatite C

INTRODUÇÃO: Os métodos de genotipagem do vírus da hepatite C têm sido muito discutidos. O objetivo deste trabalho foi comparar as metodologias de hibridização reversa e sequenciamento direto para a genotipagem do vírus da hepatite C. MÉTODOS: Noventa e uma amostras de plasma de pacientes assistidos na Faculdade de Medicina de Botucatu da Universidade Estadual Paulista foram utilizadas. A genotipagem por hibridização reversa foi realizada utilizando o kit comercial INNO-LiPA® v.1.0. O sequenciamento direto foi efetuado em sequenciador automático utilizando protocolos in house. RESULTADOS: A genotipagem por sequenciamento direto mostrou-se eficiente na resolução dos resultados inconclusivos pelo kit comercial. O kit mostrou resultados errôneos em relação à subtipagem viral. Além disso, a genotipagem por sequenciamento direto revelou um erro do kit com relação à determinação genotípica questionando a eficiência do método também para a identificação do genótipo viral. CONCLUSÕES: A genotipagem realizada por meio de sequenciamento direto permite uma maior acurácia na classificação viral quando comparada à hibridização reversa.

Diagnosing schistosomiasis: where are we?

In light of the World Health Organization's initiative to extend schistosomiasis morbidity and mortality control programs by including a disease elimination strategy in low endemic settings, this paper reviews diagnostic tools described during the last decades and provide an overview of ongoing efforts in making an efficient diagnostic tool available worldwide. A literature search on PubMed using the search criteria schistosomiasis and diagnosis within the period from 1978 to 2013 was carried out. Articles with abstract in English and that used laboratory techniques specifically developed for the detection of schistosomiasis in humans were included. Publications were categorized according to the methodology applied (parasitological, immunological, or molecular) and stage of development (in house development, limited field, or large scale field testing). The initial research generated 4,535 publications, of which only 643 met the inclusion criteria. The vast majority (537) of the publications focused on immunological techniques; 81 focused on parasitological diagnosis, and 25 focused on molecular diagnostic methods. Regarding the stage of development, 307 papers referred to in-house development, 202 referred to limited field tests, and 134 referred to large scale field testing. The data obtained show that promising new diagnostic tools, especially for Schistosoma antigen and deoxyribonucleic acid (DNA) detection, which are characterized by high sensitivity and specificity, are being developed. In combination with international funding initiatives these tools may result in a significant step forward in successful disease elimination and surveillance, which is to make efficient tests accessible and its large use self-sustainable for control programs in endemic countries.

Weight concerns scale applied to college students : Comparison between pencil-and-paper and online formats

Online data collection is becoming increasingly common and has some advantages compared to traditional paper-and-pencil formats, such as reducing loss of data, increasing participants' privacy, and decreasing the effect of social desirability. However, the validity and reliability of this administration format must be established before results can be considered acceptable. The aim of this study was to evaluate the validity, reliability, and equivalence of paper-and-pencil and online versions of the Weight Concerns Scale (WCS) when applied to Brazilian university students. A crossover design was used, and the Portuguese version of the WCS (in both paper-and-pencil and online formats) was completed by 100 college students. The results indicated adequate fit in both formats. The simultaneous fit of data for both groups was excellent, with strong invariance between models. Adequate convergent validity, internal consistency, and mean score equivalence of the WCS in both formats were observed. Thus, the WCS presented adequate reliability and validity in both administration formats, with equivalence/stability between answers.

Tribunais nacionais e tutela jurisdicional efetiva: da cooperação à integração judiciária no contencioso da união europeia

Tese de Doutoramento em Ciências Jurídicas (área de especialização em Ciências Jurídicas Públicas).

Racionalização de processos administrativos: Sonae SR

Dissertação de mestrado integrado em Engenharia e Gestão Industrial

Racionalização e redução de custos das TIC na Administração Pública: o caso da PSP

Dissertação de mestrado integrado em Engenharia e Gestão de Sistemas de Informação

Avaliação de projetos de eficiência energética na iluminação pública

Dissertação de mestrado em Engenharia Industrial

O impacto do projeto mais sucesso escolar no desempenho educativo dos alunos do 3º ciclo da Escola Secundária da Ramada – estudo de caso

Dissertação de Mestrado em Administração Pública – Especialização em Administração da Educação

Infección por toxocara canis: detección en suelo y en niños y adolescentes de comunidades de la provincia de Córdoba (Programa: enfermedades transmisibles y emergentes).

Toxocara canis es un parásito cosmopolita frecuentemente hallado en el intestino delgado de los caninos. El hombre adquiere la infección con Toxocara por la ingestión de huevos embrionados que se encuentran en el suelo contaminado. En Argentina, las cifras reales de prevalencia de esta infección no se conocen por tratarse de una patología que no es de notificación obligatoria y por la existencia de casos asintomáticos. Los objetivos de este proyecto de investigación son: a) determinar el grado de contaminación con huevos de Toxocara canis de suelos en áreas de uso público y privado de las comunas de Villa El Prado y Los Cedros de la Provincia de Córdoba, b) detectar la presencia de anticuerpos anti-Toxocara canis en niños y adolescentes de estas Comunas, c) relacionar la presencia de anticuerpos con factores de riesgo y d) obtener antígenos excreción/secreción de larvas L2 de Toxocara canis para el desarrollo de un técnica inmunoenzimática "in house". La presencia de huevos de Toxocara se evaluará en suelo (tierra, arena, mixta) del área de recreo de las escuelas y de áreas externas de cada vivienda (patio, jardín). La presencia de anticuerpos específicos será detectada en niños y adolescente entre 1 a 15 años de edad de ambos sexos que asistan a los dispensarios de las comunas. Para elaborar un sistema de detección de anticuerpos específicos se obtendrán antígenos excreción/secreción de larvas L2 de Toxocara canis. Este proyecto permitirá comparar la seroprevalencia de infección por Toxocara en niños y adolescentes, con otras regiones del país y el extranjero y analizar la relación entre títulos y manifestaciones clínicas. Además, posibilitará caracterizar asociaciones entre infección y factores de riesgo. Debido a la carencia de información sobre esta infección parasitaria en nuestro medio, esta investigación aportará datos útiles para las campañas de desparasitación de mascotas, saneamiento ambiental, tratamiento antiparasitario en personas afectadas y caracterización de manifestaciones clínicas asociadas a esta parasitosis.

The assessment, management and ecological significance of Irish hedgerows

The vast network of hedges in Ireland provide habitats of great importance to the wildlife of the country, yet surprisingly enough, only very limited survey work has been carried out on our hedgerows in the past. Now with the implementation of the new Rural Environmental Protection Scheme, farmers will be paid to manage their hedgerows in such a way as to make them into increasingly attractive wildlife habitats. However, hedgerow management expertise seems to be somewhat lacking in Ireland and we must draw upon the knowledge of our neighbours in the E.U. where quite an amount of research has been carried out on this subject. The aim of this study is to present the relevant aspects of the research for the benefit of the people who will be involved in the administration of the Rural Environmental Protection Scheme and to anyone else involved in hedgerow management.

Zeichentheorie und BWL : Zur Anwendung semiotischer Erkentnisse im wirtschaftlichen Diskurs

Semiotics is hardly known in German business literature and management practice, despite the fact that its methodological approaches to discourse analysis have already been broadly absorbed by management theory in France and the United States. The present contribution points out why the general echo of semiotic theory and its numerous applications to business administration has remained limited so far, especially when compared with its potential for describing and explaining management problems. It is important, then, to show what the object of semiotic research is, independent of any semiotic orientation or school. What tools have been developed so far, and which discourses in business administration were chosen to apply these tools? The problems limiting a broader use of semiotic instruments in business administration are explained in detail, and the research perspectives are illustrated. Die in der deutschsprachigen Betriebswirtschaftslehre (BWL) noch wenig bekannte Semiotik und die in ihrem Rahmen entwickelten methodologischen Ansätze zur Analyse von Diskursen haben insbesondere in Frankreich und in den USA schon eine weite Verbreitung gefunden. Das Echo, auf welches die Semiotik trifft, bleibt im Vergleich zum Beitrag, den sie hinsichtlich der Beschreibung und Erklärung betriebswirtschaftlicher Tatbestände leisten könnte, noch sehr beschränkt - und dies, obwohl ihre grundsätzliche wissenschaftliche Leistungsfähigkeit inzwischen an Hand zahlreicher Beispiele aus dem betriebswirtschaftlichen Bereich belegt werden konnte. Es ist deshalb wichtig und interessant zu zeigen, was der Forschungsgegenstand der Semiotik ist - und zwar unabhängig von den verschiedenen Schulen der Semiotik. Welche Instrumente hat sie entwickelt? Auf welche betriebswirtschaftlichen Diskurse sind diese Instrumente bereits angewandt worden? Zum Schluss werden die Probleme dargestellt, die einen breiteren Einsatz semiotischer Instrumente in der Betriebswirtschaftslehre behindern und dabei auch die verschiedenen Forschungsrichtungen erläutert.

The NAD biosynthesis inhibitor APO866 has potent antitumor activity against hematologic malignancies.

APO866 inhibits nicotinamide phosphoribosyltransferase (NMPRTase), a key enzyme involved in nicotinamide adenine dinucleotide (NAD) biosynthesis from the natural precursor nicotinamide. Intracellular NAD is essential for cell survival, and NAD depletion resulting from APO866 treatment elicits tumor cell death. Here, we determine the in vitro and in vivo sensitivities of hematologic cancer cells to APO866 using a panel of cell lines (n = 45) and primary cells (n = 32). Most cancer cells (acute myeloid leukemia [AML], acute lymphoblastic leukemia [ALL], mantle cell lymphoma [MCL], chronic lymphocytic leukemia [CLL], and T-cell lymphoma), but not normal hematopoietic progenitor cells, were sensitive to low concentrations of APO866 as measured in cytotoxicity and clonogenic assays. Treatment with APO866 decreased intracellular NAD and adenosine triphosphate (ATP) at 24 hours and 48 to72 hours, respectively. The NAD depletion led to cell death. At 96 hours, APO866-mediated cell death occurred in a caspase-independent mode, and was associated with mitochondrial dysfunction and autophagy. Further, in vivo administration of APO866 as a single agent prevented and abrogated tumor growth in animal models of human AML, lymphoblastic lymphoma, and leukemia without significant toxicity to the animals. The results support the potential of APO866 for treating hematologic malignancies.

Gestión de recursos en nodos multi-core de memoria compartida

La gestión de recursos en los procesadores multi-core ha ganado importancia con la evolución de las aplicaciones y arquitecturas. Pero esta gestión es muy compleja. Por ejemplo, una misma aplicación paralela ejecutada múltiples veces con los mismos datos de entrada, en un único nodo multi-core, puede tener tiempos de ejecución muy variables. Hay múltiples factores hardware y software que afectan al rendimiento. La forma en que los recursos hardware (cómputo y memoria) se asignan a los procesos o threads, posiblemente de varias aplicaciones que compiten entre sí, es fundamental para determinar este rendimiento. La diferencia entre hacer la asignación de recursos sin conocer la verdadera necesidad de la aplicación, frente a asignación con una meta específica es cada vez mayor. La mejor manera de realizar esta asignación és automáticamente, con una mínima intervención del programador. Es importante destacar, que la forma en que la aplicación se ejecuta en una arquitectura no necesariamente es la más adecuada, y esta situación puede mejorarse a través de la gestión adecuada de los recursos disponibles. Una apropiada gestión de recursos puede ofrecer ventajas tanto al desarrollador de las aplicaciones, como al entorno informático donde ésta se ejecuta, permitiendo un mayor número de aplicaciones en ejecución con la misma cantidad de recursos. Así mismo, esta gestión de recursos no requeriría introducir cambios a la aplicación, o a su estrategia operativa. A fin de proponer políticas para la gestión de los recursos, se analizó el comportamiento de aplicaciones intensivas de cómputo e intensivas de memoria. Este análisis se llevó a cabo a través del estudio de los parámetros de ubicación entre los cores, la necesidad de usar la memoria compartida, el tamaño de la carga de entrada, la distribución de los datos dentro del procesador y la granularidad de trabajo. Nuestro objetivo es identificar cómo estos parámetros influyen en la eficiencia de la ejecución, identificar cuellos de botella y proponer posibles mejoras. Otra propuesta es adaptar las estrategias ya utilizadas por el Scheduler con el fin de obtener mejores resultados.

Creació d’un programari per a l’avaluació de la qualitat dels resultats analítics generats al laboratori

La validació de mètodes és un dels pilars fonamentals de l’assegurament de la qualitat en els laboratoris d’anàlisi, tal i com queda reflectit en la norma ISO/IEC 17025. És, per tant, un aspecte que cal abordar en els plans d’estudis dels presents i dels futurs graus en Química. Existeix molta bibliografia relativa a la validació de mètodes, però molt sovint aquesta s’utilitza poc, degut a la dificultat manifesta de processar tota la informació disponible i aplicar-la al laboratori i als problemes concrets. Una altra de les limitacions en aquest camps és la manca de programaris adaptats a les necessitats del laboratori. Moltes de les rutines estadístiques que es fan servir en la validació de mètodes són adaptacions fetes amb Microsoft Excel o venen incorporades en paquets estadístics gegants, amb un alt grau de complexitat. És per aquest motiu que l’objectiu del projecte ha estat generar un programari per la validació de mètodes i l’assegurament de la qualitat dels resultats analítics, que incorporés únicament les rutines necessàries. Específicament, el programari incorpora les funcions estadístiques necessàries per a verificar l’exactitud i avaluar la precisió d’un mètode analític. El llenguatge de programació triat ha estat el Java en la seva versió 6. La part de creació del programari ha constat de les següents etapes: recollida de requisits, anàlisi dels requisits, disseny del programari en mòduls, programació d les funcions del programa i de la interfície gràfica, creació de tests d’integració i prova amb usuaris reals, i, finalment, la posada en funcionament del programari (creació de l’instal·lador i distribució del programari).