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Linhas imagin��rias : quest��es e representa����es de masculinidades em Equador

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Com que linhas se cose o g��nero. A import��ncia do vestu��rio infantil na constru����o do g��nero

Disserta����o de Mestrado em Estudos sobre as Mulheres, as Mulheres na Sociedade e na Cultura

Aplica����o de software CAD/CAE na concep����o de ferramentas de estampagem ��� um estudo de caso

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Software languages engineering: experimental evaluation

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Desenvolvimentos recentes na normaliza����o de tijolos cer��micos de alvenaria e telhas cer��micas

Disserta����o apresentada na Faculdade de Ci��ncias e Tecnologia da Universidade Nova de Lisboa para obten����o do grau de Mestre em Engenharia Civil ��� Perfil de Constru����o

Suporte t��cnico �� produ����o e comercializa����o de produtos cosm��ticos e detergentes

Disserta����o apresentada na Faculdade de Ci��ncias e Tecnologia da Universidade Nova de Lisboa para obten����o de grau de Mestre em Engenharia Qu��mica e Bioqu��mica

Manual de procedimentos ferramenta CRM. Projeto para a empresa Ibero Linhas (Porto) Transportes, Lda.

Nota: 17 valores

An��lise e avalia����o da interac����o dos utilizadores com um software de gest��o de empresas

Disserta����o apresentada no ��mbito do Mestrado em Engenharia Inform��tica na Faculdade de Ci��ncias e Tecnologia da Universidade Nova de Lisboa para a obten����o do Grau de Mestre em Engenharia Inform��tica

Estrogen receptor dependent genetic and epigenetic factors of tamoxifen resistance

Resumo: A decis��o da terap��utica hormonal no tratamento do cancro da mama baseiase na determina����o do receptor de estrog��nio alfa por imunohistoqu��mica (IHC). Contudo, a presen��a deste receptor n��o prediz a resposta em todas as situa����es, em parte devido a limita����es do m��todo IHC. Investig��mos se a express��o dos genes ESR1 e ESR2, bem como a metila����o dos respectivos promotores, pode estar relacionada com a evolu����o desfavor��vel de uma propor����o de doentes tratados com tamoxifeno assim como com a perda dos receptores de estrog��nio alfa (ER��) e beta (ER��). Amostras de 211 doentes com cancro da mama diagnosticado entre 1988 e 2004, fixadas em formalina e preservadas em parafina, foram utilizadas para a determina����o por IHC da presen��a dos receptores ER�� e ER��. O mRNA total do gene ESR1 e os n��veis espec��ficos do transcrito derivado do promotor C (ESR1_C), bem como dos transcritos ESR2_��1, ESR2_��2/cx, and ESR2_��5 foram avaliados por Real-time PCR. Os promotores A e C do gene ESR1 e os promotores 0K e 0N do gene ESR2 foram investigados por an��lise de metila����o dos dinucleotidos CpG usando bisulfite-PCR para an��lise com enzimas de restri����o, ou para methylation specific PCR. Atendendo aos resultados promissores relacionados com a metila����o do promotor do gene ESR1, complementamos o estudo com um m��todo quantitativo por matrix-assisted laser desorption/ionization time-of-flight mass spectrometry (MALDI-TOF MS) suportado pelo software Epityper para a medi����o da metila����o nos promotores A e C. Fez-se a avalia����o da estabilidade do mRNA nas linhas celulares de cancro da mama MCF-7 e MDA-MB-231 tratadas com actinomicina D. Baixos n��veis do transcrito ESR1_C associaram-se a uma melhor sobreviv��ncia global (p = 0.017). N��veis elevados do transcrito ESR1_C associaram-se a uma resposta inferior ao tamoxifeno (HR = 2.48; CI 95% 1.24-4.99), um efeito mais pronunciado em doentes com tumores de fen��tipo ER��/PgR duplamente positivo (HR = 3.41; CI 95% 1.45-8.04). A isoforma ESR1_C mostrou ter uma semi-vida prolongada, bem como uma estrutura secund��ria da regi��o 5���UTR muito mais relaxada em compara����o com a isoforma ESR1_A. A an��lise por Western-blot mostrou que ao n��vel da 21 prote��na, a selectividade de promotores �� indistinguivel. N��o se detectou qualquer correla����o entre os n��veis das isoformas do gene ESR2 ou entre a metila����o dos promotores do gene ESR2, e a detec����o da prote��na ER��. A metila����o do promotor C do gene ESR1, e n��o do promotor A, foi respons��vel pela perda do receptor ER��. Estes resultados sugerem que os n��veis do transcrito ESR1_C sejam usados como um novo potencial marcador para o progn��stico e predi����o de resposta ao tratamento com tamoxifeno em doentes com cancro da mama. Abstract: The decision of endocrine breast cancer treatment relies on ER�� IHC-based assessment. However, ER positivity does not predict response in all cases in part due to IHC methodological limitations. We investigated whether ESR1 and ESR2 gene expression and respective promoter methylation may be related to non-favorable outcome of a proportion of tamoxifen treated patients as well as to ER�� and ER�� loss. Formalin-fixed paraffin-embedded breast cancer samples from 211 patients diagnosed between 1988 and 2004 were submitted to IHC-based ER�� and ER�� protein determination. ESR1 whole mRNA and promoter C specific transcript levels, as well as ESR2_��1, ESR2_��2/cx, and ESR2_��5 transcripts were assessed by real-time PCR. ESR1 promoters A and C, and ESR2 promoters 0N and 0K were investigated by CpG methylation analysis using bisulfite-PCR for restriction analysis, or methylation specific PCR. Due to the promising results related to ESR1 promoter methylation, we have used a quantification method by matrixassisted laser desorption/ionization time-of-flight mass spectrometry (MALDITOF MS) together with Epityper software to measure methylation at promoters A and C. mRNA stability was assessed in actinomycin D treated MCF-7 and MDA-MB-231 cells. ER�� protein was quantified using transiently transfected breast cancer cells. Low ESR1_C transcript levels were associated with better overall survival (p = 0.017). High levels of ESR1_C transcript were associated with non-favorable response in tamoxifen treated patients (HR = 2.48; CI 95% 1.24-4.99), an effect that was more pronounced in patients with ER��/PgR double-positive tumors (HR = 3.41; CI 95% 1.45-8.04). The ESR1_C isoform had a prolonged mRNA half-life and a more relaxed 5���UTR structure compared to ESR1_A isoform. Western-blot analysis showed that at protein level, the promoter selectivity is undistinguishable. There was no correlation between levels of ESR2 isoforms or ESR2 promoter methylation and ER�� protein staining. ESR1 promoter C CpG methylation and not promoter A was responsible for ER�� loss. We propose ESR1_C levels as a putative novel marker for breast cancer prognosis and prediction of tamoxifen response.

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Tese submetida para provas de doutoramento em Qu��mica na Faculdade de Ci��ncias e Tecnologia da Universidade Nova de Lisboa

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