Identification of the regulatory subunit of Arabidopsis thaliana acetohydroxyacid synthase and reconstitution with its catalytic subunit

Acetohydroxyacid synthase (EC 4.1.3.18; AHAS) catalyzes the initial step in the formation of the branched-chain amino acids. The enzyme from most bacteria is composed of a catalytic subunit, and a smaller regulatory subunit that is required for full activity and for sensitivity to feedback regulation by valine. A similar arrangement was demonstrated recently for yeast AHAS, and a putative regulatory subunit of tobacco AHAS has also been reported. In this latter case, the enzyme reconstituted from its purified subunits remained insensitive to feedback inhibition, unlike the enzyme extracted from native plant sources. Here we have cloned, expressed in Escherichia coil, and purified the AHAS regulatory subunit of Ambidopsis thaliana. Combining the protein with the purified A. thaliana catalytic subunit results in an activity stimulation that is sensitive to inhibition by valine, leucine, and isoleucine. Moreover, there is a strong synergy between the effects of leucine and valine, which closely mimics the properties of the native enzyme. The regulatory subunit contains a sequence repeat of approximately 180 residues, and we suggest that one repeat binds leucine while the second binds valine or isoleucine. This proposal is supported by reconstitution studies of the individual repeats, which were also cloned, expressed, and purified. The structure and properties of the regulatory subunit are reminiscent of the regulatory domain of threonine deaminase (EC 4.2.1.16), and it is suggested that the two proteins are evolutionarily related.

Regulatory interactions in Arabidopsis thaliana acetohydroxyacid synthase

Acetohydroxyacid synthase (AHAS; EC 4.1.3.18) contains catalytic and regulatory subunits, the latter being required for sensitivity to feedback regulation by leucine, valine and isoleucine. The regulatory subunit of Arabidopsis thaliana AHAS possesses a sequence repeat and we have suggested preciously that one repeat binds leucine while the second binds valine or isoleucine, with synergy between the two sites. We have mutated four residues in each repeat, based on a model of the regulatory subunit. The data confirm that there are separate leucine and valine/isoleucine sites, and suggest a complex pathway for regulatory signal transmission to the catalytic subunit. (C) 2002 Published by Elsevier Science B.V. on behalf of the Federation of European Biochemical Societies.

The Phox Homology (PX) domain-dependent, 3-phosphoinositide-mediated association of sorting nexin-1 with an early sorting endosomal compartment is required for its ability to regulate epidermal growth factor receptor degradation

Recent studies have shown that phox homology (PX) domains act as phosphoinositide-binding motifs. The majority of PX domains studied show binding to phosphatidylinositol 3-monophosphate (Ptdlns(3)P), an association that allows the host protein to localize to membranes of the endocytic pathway. One issue, however, is whether PX domains may have alternative phosphoinositide binding specificities that could target their host protein to distinct subcellular compartments or allow their allosteric regulation by phosphoinositides other than PtdIns(3)P. It has been reported that the PX domain of sorting nexin 1 (SNX1) specifically binds phosphatidylinositol 3,4,5-trisphosphate (PtdIns(3,4,5)P-3) (Zhong, Q., Lazar, C. S., Tronchere, H., Sato, T., Meerloo, T., Yeo, M., Songyang, Z., Emr, S. D., and Gill, G. N. (2002) Proc. Natl. Acad. Sci. U. S. A. 99,6767-6772). In the present study, we have shown that whereas SNX1 binds PtdIns(3,4,5)P-3 in protein:lipid overlay assays, in liposomes-based assays, binding is observed to PtdIns(3)P and phosphatidylinositol 3,5-bisphosphate (PtdIns(3,5)P-2) but not to PtdIns(3,4,5)P-3. To address the significance of PtdIns(3,4,5)P-3 binding, we examined the subcellular localization of SNX1 under conditions in which plasma membrane PtdIns(3,4,5)P-3 levels were significantly elevated. Under these conditions, we failed to observe association of SNX1 with this membrane. However, consistent with the binding to PtdIns(3)P and PtdIns(3,5)P-2 being of more physiological significance was the observation that the association of SNX1 with an early endosomal compartment was dependent on a 3-phosphoinositide-binding PX domain and the presence of PtdIns(3)P on this compartment. Finally, we somal association of SNX1 is important for its ability to regulate the targeting of internalized epidermal growth factor receptor for lysosomal degradation.

Carbamazepine augmentation for schizophrenia: How good is the evidence?

Background: Augmentation strategies in schizophrenia treatment remain an important issue because despite the introduction of several new antipsychotics, many patients remain treatment resistant. The aim of this study was to undertake a systematic review and meta-analysis of the safety and efficacy of one frequently used adjunctive compound: carbamazepine. Data sources and study selection: Randomized controlled trials comparing carbamazopine (as a sole or as an adjunctive compound) with placebo or no intervention in participants with schizophrenia or schizoaffective disorder were searched for by accessing 7 electronic databases, cross-referencing publications cited in pertinent studies, and contacting drug companies that manufacture carbamazepine. Method: The identified studies were independently inspected and their quality assessed by 2 reviewers, Because the study results were generally incompletely reported, original patient data were requested from the authors; data were received for 8 of the 10 randomized controlled trials included in the present analysis, allowing for a reanalysis of the primary data. Dichotomous variables were analyzed using the Mantel-Haenszel odds ratio and continuous data were analyzed using standardized mean differences, both specified with 95% confidence intervals. Results: Ten studies (total N = 283 subjects) were included. Carbamazepine was not effective in preventing relapse in the only randomized controlled trial that compared carbamazepine monotherapy with placebo. Carbamazepine tended to be less effective than perphenazine in the only trial comparing carbamazepine with an antipsychotic. Although there was a trend indicating a benefit from carbamazepine as an adjunct to antipsychotics, this trend did not reach statistical significance. Conclusion: At present, this augmentation strategy cannot be recommended for routine use. The most promising targets for future trials are patients with excitement, aggression, and schizoaffective disorder bipolar type.

Avaliação da qualidade dos serviços prestados pela Biblioteca Central da UFES utilizando o método Servqual

O presente trabalho objetiva avaliar a qualidade dos serviços prestados pela Biblioteca Central (BC) da Universidade Federal do Espírito Santo (UFES) utilizando o método Servqual. Esta pesquisa é um estudo de caso de natureza quantitativa e qualitativa. A triangulação dos dados foi realizada por meio de uma survey com 363 usuários, entrevista com nove servidores que atuam na Biblioteca e consulta a documentos da universidade que descrevem as características básicas da Biblioteca Central. A survey foi aplicada utilizando-se questionário desenvolvido com base na escala Servqual em pré-teste realizado na Biblioteca Setorial Tecnológica (BST) da UFES. Foram utilizadas duas modalidades de coleta na survey aplicada na BC: presencial e online. Foram coletados 110 questionários presenciais e 253 online. As entrevistas com os servidores da BC foram baseadas nos 116 registros de reivindicações dos usuários, coletados pela BC anteriormente à pesquisa. Além desses documentos, consultaramse informações institucionais divulgadas no catálogo de serviços da BC e em páginas da BC e da UFES na internet. Identificaram-se quatro dimensões da qualidade dos serviços prestados pela BC, com médias negativas, indicando necessidade de melhoria nos serviços prestados. As ações prioritárias recomendadas para a BC são: a) melhorar instalações físicas e equipamentos; e b) capacitar e motivar os trabalhadores para atendimento aos usuários. Essas ações devem conduzir a soluções de problemas relacionados a condições de estudo (iluminação, climatização, água, banheiros, espaço físico, móveis e silêncio) e acesso a informação (internet, autoempréstimo, quantitativo de exemplares, limitação do empréstimo e alerta quanto à data de renovação).

Tecnologias e metodologias na ensinagem de inglês no século XXI : elaboração e análise de webquests

Este trabalho tem como objetivo geral apresentar mecanismos de análise e validação de propostas de material didático na forma de Webquests e, com base nesses mecanismos, elaborar e validar três propostas de material didático em forma de WebQuests criticamente situados para a ensinagem de inglês como língua adicional. As WebQuests elaboradas visam priorizar o desenvolvimento do letramento digital crítico e da competência comunicativa em inglês como língua adicional do aprendiz. A WebQuest se insere na perspectiva de uma metodologia que tem esse mesmo nome e consiste na proposta de uma pesquisa orientada e organizada em etapas em que toda ou grande parte do conteúdo a ser acessado e necessário para a realização da(s) tarefa(s) encontra-se disponível online (DODGE, 1995). A metodologia deste estudo é de cunho qualitativo e também se insere na perspectiva da metodologia de desenvolvimento. O design metodológico dessa investigação foi organizado em três etapas, quais sejam, a análise de necessidades, a elaboração de três WebQuests e a análise das WebQuests elaboradas a partir de uma rubrica. A revisão de literatura, que constituiu parte da análise de necessidades, sugere que as demandas do século XXI exigem maior atenção e investimento para o desenvolvimento de letramentos múltiplos e críticos, de competências comunicativas e interacionais e de formação de cidadania. A análise de WebQuests disponíveis para ensinagem de inglês no principal sítio brasileiro de WebQuests, que compôs a segunda parte da análise de necessidades desse estudo, evidenciou a escassez de WebQuests que abordam de forma significativa tanto as questões do letramento digital crítico quanto os aspectos da competência comunicativa na língua adicional do indivíduo. A análise de necessidades como um todo forneceu subsídios relevantes para o processo de elaboração das WebQuests propostas neste estudo, que também se embasou nas diretrizes e princípios do modelo WebQuest e em grande parte do seu embasamento teórico. Como fase final deste estudo, as três WebQuests elaboradas foram submetidas à validação a partir de uma rubrica criada especialmente para esse propósito. Os resultados das análises de validação das três WebQuests elaboradas sugerem que a proposta desses materiais é válida sob o ponto de vista teórico, pois mostram que as ferramentas criadas vão ao encontro da proposta do modelo WebQuests de Dodge (1995, 2001) e das recomendações de qualidade sugeridas por Bottentuit Junior e Coutinho (2008a, 2012), bem como estão ancoradas na teoria sócio-construtivista e do ensino situado e nos princípios metodológicos da abordagem de ensino baseada em tarefas e da abordagem de ensino de conteúdos diversos por meio da língua (CLIL). Concluímos que as três WebQuests são materiais de ensinagem de inglês que fogem do enfoque tradicional conteudista historicamente voltado para o ensino de vocabulário e gramática na língua-alvo, extrapolando os objetivos linguísticos para alcançar também objetivos sociais e culturais da ensinagem de inglês como língua adicional, na medida em que se trabalha paralelamente (e intencionalmente, por entender que ambos se complementam) o desenvolvimento da competência comunicativa e do letramento digital crítico do indivíduo, contribuindo, assim, para a sua formação cidadã e colaborando para a “inclusão” do aprendiz no mundo social e digital.

Diagnóstico de estruturas de madeira em serviço num palacete do século XIX

Dissertação para obtenção do grau de Mestre em Engenharia Civil na Área de Especialização em Edificações

Melhoria do processo produtivo da Yazaki Porto Technical Centre

No actual contexto macroeconómico, a melhoria dos processos e o aproveitamento de todas as sinergias, são factores que se tornaram ainda mais importantes e nalguns casos, condição sine qua non para a sobrevivência das próprias empresas. Cada vez mais as empresas são obrigadas a produzir mais com menos recursos, com a qualidade desejada pelos clientes e a preços competitivos. A qualidade do produto final não deve ser afectada com a desculpa da implementação de uma política da redução de custos. Pelo contrário, deve existir a preocupação de eliminar da cadeia de valor tudo o que não contribui com valor acrescentado, melhorando nalguns casos a própria qualidade do produto final. A realização deste projecto tem como objectivo, analisar e implementar, através de ferramentas relacionadas com a metodologia Lean, melhorias na produção de aplicadores de cravação numa empresa multinacional ligada ao ramo automóvel. Pretende-se um aumento da taxa de produção diária em 50%, obtida essencialmente através do balanceamento dos recursos humanos e no desenvolvimento de um sistema kanban incorporado no sector produtivo. A parte inicial do trabalho incidiu no estudo e análise do produto e respectivo processo produtivo. Posteriormente e por várias fases efectuaram-se análises aos tempos de fabrico e ao sequenciamento das operações, com vista ao conhecimento de todo o processo de montagem de modo a identificar os aspectos de melhoria. Após o registo dos pontos a eliminar e/ou a melhorar, procedeu-se a uma análise criteriosa dos dados recolhidos, efectuando-se o balanceamento dos recursos de modo a tornar eficaz a implementação do sistema kanban. Este sistema é a base da melhoria proposta para este tema de dissertação. Após implementação do sistema kanban, foi avaliado o seu desempenho e foram registadas melhorias na produção diária dos aplicadores bem como no lead time despendido no processamento dos mesmos.

Implementação e integração do modelo de acreditação da Joint Commission International na unidade de imagiologia do Hospital Privado da Boavista

Este trabalho descreve a abordagem abrangente sobre a melhoria do sistema de gestão da qualidade na Unidade de Imagiologia do Hospital da Boavista através da implementação das normas de acreditação da Joint Commission International (JCI). Fundamental para a melhoria geral da qualidade é a redução contínua de riscos para os doentes e para os profissionais da Unidade. Tais riscos podem existir ao nível do ambiente físico assim como no circuito dos exames e dos doentes. A acreditação em Saúde é uma das prioridades estratégicas do Ministério da Saúde e tem como objetivo fortalecer a confiança dos cidadãos nos profissionais de saúde bem como nas instituições de saúde. É importante que Portugal cultive a melhoria da qualidade e segurança nas instituições de saúde mantendo uma relação adequada custo/benefício. A União Europeia tem feito um esforço para que a acreditação seja harmoniosa nos seus princípios, no entanto é respeitada sempre a prevalência da legislação de cada país, bem como as suas especificações culturais e religiosas (Shaw, 2006), responsabilizando-o pelo seu sistema de saúde O trabalho aqui apresentado tem como objetivo principal fundamentar a escolha do modelo de acreditação da JCI para o Hospital da Boavista, nomeadamente para a Unidade de Imagiologia, ver se os padrões estão de acordo com os procedimentos da Unidade, identificar falhas e apontar possiveis melhorias. Pretende-se ainda mostrar a importância da implementação dos sistemas de certificação e acreditação da gestão da qualidade, documentada pela experiência profissional, bem como o know-how do Hospital da Boavista, assim como a complementaridade dos programas da gestão da qualidade, certificação e acreditação. A escolha do modelo de acreditação da JCI, foi uma opção do Hospital da Boavista baseada na credibilidade e no grau de exigência que a entidade impõe. Foi imperativo que a Unidade de Imagiologia realizasse as suas funções de forma válida e fiável e que disponibilizasse produtos / serviços de qualidade. A monitorização e consequente controlo de qualidade do serviço prestado pela Unidade de Imagiologia, foi difícil mas simplificado, em parte, devido ao sistema de gestão da qualidade ISO 9001:2008 já implementado, tendo este sido consolidado com a implementação da acreditação da JCI, com padrões específicos bem definidos na gestão do controlo de qualidade na Unidade de Imagiologia do Hospital da Boavista.

Estudo e Implementação de Ferramentas Lean

Neste documento, apresenta-se o reflexo sobre o trabalho de estágio desenvolvido entre 17 de Fevereiro e 31 de Julho de 2014, nas instalações da Fábrica das Estruturas Metálicas da Faurecia, em São João da Madeira, num Projecto Final no âmbito de Implementação de Ferramentas Lean. O objetivo proposto foi a participação na procura e implementação de soluções, com vista à melhoria contínua do sistema de produção. Foi utilizado, para esse efeito, um vasto conjunto de ferramentas entre as quais os 5S, QRCI, Standardized Work, entre outras e amplamente empregues na indústria automóvel (e nesta empresa em particular), através do Sistema de Excelência Faurecia (FES), aplicado ao ramo de negócio onde está solidamente implantada esta multinacional de origem francesa. O período de tempo em que decorreu o estágio constituiu uma oportunidade única para o estagiário contactar com os problemas existentes no departamento de produção, num mercado tão concorrencial e competitivo como é o da indústria de componentes para automóveis. O presente trabalho de estágio apresenta duas vertentes distintas: uma de caráter interno à empresa e outra relativa aos fornecedores e clientes. Em termos internos, foi visível a batalha pela diminuição das variabilidades que surgem no plano da produção ao absorver grande parte do esforço dos agentes que trabalham na otimização dos processos. Externamente, observou-se a dificuldade em encontrar fornecedores adequados a satisfazer os aprovisionamentos da Faurecia, em quantidade e qualidade, e um elevado grau de exigência imposto por parte dos vários clientes. Por fim, este Projeto possibilitou a aplicação de conhecimentos adquiridos não só ao longo do curso como também durante a realização do estágio, o conhecimento da realidade industrial e o enriquecimento técnico e pessoal.

Uma formação útil para a literacia no novo contexto de Bolonha

A Declaração de Bolonha (1999) obrigou a mudanças várias, reconfigurando os modelos formativos no espaço europeu do ensino superior, até 2010. A partir de 2006, em Portugal, com a criação e adequação dos cursos superiores existentes ao modelo de Bolonha, verificou-se uma generalizada redução da duração média dos diferentes ciclos de estudo e a definição de competências gerais e específicas para os cursos e estudantes. Reflecte-se sobre a importância da literacia da informação, conceito evolutivo e abrangente, que se pode traduzir, sumariamente, em saber quando e porquê se tem uma necessidade informacional, onde encontrar a informação, como avaliá-la, usá-la e comunicá-la de forma ética, incluindo as competências tecnológicas, definição que se inscreve na interdisciplinar Ciência da Informação e no comportamento informacional. Destaca-se a vantagem de uma formação para a literacia da informação no ensino superior, a qual contribuirá, certamente, para dotar os estudantes das referidas competências e melhorá-las. Defende-se a necessidade de uma desejável inter-acção entre múltiplos agentes educativos, com destaque para a trilogia estudantes, bibliotecários e professores, sendo os primeiros encarados como protagonistas activos das suas aprendizagens e devendo ser dotados de competências de literacia da informação, factor determinante para o seu sucesso. Quanto ao Bibliotecário, dotado de novas competências, entre as quais as tecnológicas, deve ser um facilitador do processo de formação para a literacia - preferencialmente integrada num projecto pedagógico e no currículo - articulando a sua acção educativa com estudantes e docentes. Corroborando a extensão educativa das Bibliotecas e aliando-a ao uso inevitável das novas tecnologias da informação e comunicação, sublinha-se o papel das Bibliotecas Digitais, que podem corresponder eficientemente aos anseios dos utilizadores no acesso a uma informação de qualidade, de forma cómoda, rápida, a baixo custo, com personalização dos serviços online, com inter-acção e socialização, através de ferramentas de edição colaborativa, típicas da Web 2.0.

Analysis of Synaptic Proteins in the Cerebrospinal Fluid as a New Tool in the Study of Inborn Errors of Neurotransmission

Abstract In a few rare diseases, specialised studies in cerebrospinal fluid (CSF) are required to identify the underlying metabolic disorder. We aimed to explore the possibility of detecting key synaptic proteins in the CSF, in particular dopaminergic and gabaergic, as new procedures that could be useful for both pathophysiological and diagnostic purposes in investigation of inherited disorders of neurotransmission. Dopamine receptor type 2 (D2R), dopamine transporter (DAT) and vesicular monoamine transporter type 2 (VMAT2) were analysed in CSF samplesfrom 30 healthy controls (11 days to 17 years) by western blot analysis. Because VMAT2 was the only protein with intracellular localisation, and in order to compare results, GABA vesicular transporter, which is another intracellular protein, was also studied. Spearman’s correlation and Student’s t tests were applied to compare optical density signals between different proteins. All these synaptic proteins could be easily detected and quantified in the CSF. DAT, D2R and GABA VT expression decrease with age, particularly in the first months of life, reflecting the expected intense synaptic activity and neuronal circuitry formation. A statistically significant relationship was found between D2R and DAT expression, reinforcing the previous evidence of DAT regulation by D2R. To our knowledge, there are no previous studies on human CSF reporting a reliable analysis of these proteins. These kinds of studies could help elucidate new causes of disturbed dopaminergic and gabaergic transmission as well as understanding different responses to L-dopa in inherited disorders affecting dopamine metabolism. Moreover, this approach to synaptic activity in vivo can be extended to different groups of proteins and diseases.

Projeto de molde para a injeção de peça plástica complexa para a indústria automóvel

A fabricação de moldes é um pilar da indústria metalomecânica nacional. A qualidade patenteada pelos moldes de fabrico nacional é reconhecida mundialmente. A fabricação de um molde é sempre um novo desafio, dadas as especificidades de cada peça e à complexidade geométrica que normalmente apresentam. Este trabalho teve por principal objetivo proceder ao projeto, fabricação e ajuste de um molde para uma peça plástica complexa, destinada à indústria automóvel, a qual, pela sua complexidade geométrica, elevada relação de área versus espessura e grande número de reforços bastante delgados, exige cuidados especiais no momento de se tomarem decisões quanto às melhores metodologias a adotar na sua fabricação, com vista a garantir a qualidade exigida pelo cliente final. O projeto foi desenvolvido e levado a cabo, permitindo constatar que algumas das opções tomadas na fase do projeto foram as mais adequadas, exigindo pouco trabalho de afinação no final e permitindo a extração de peças com elevada repetibilidade de características e a qualidade requerida pelo cliente.

Insights into the biological significance of alternative splicing in Arabidopsis: functional characterization of a dual-targeted E3 ligase and the SCL30a SR protein

Dissertation presented to obtain the Ph.D degree in Molecular Biology

Caracterização das estruturas de qualidade e segurança do doente

RESUMO - Título: “Caracterização das Estruturas de Qualidade e Segurança do Doente” A segurança dos doentes assume-se, hoje em dia, como prioridade máxima e é um paradigma de qualidade dos cuidados de saúde. Definida como um conjunto de medidas destinadas a melhorar a segurança e a qualidade de prestação de cuidados de saúde, surge a gestão de risco. Assim, um programa de gestão de risco poderá ser definido como um conjunto de procedimentos e de objetivos pré-definidos com o intuito de promover uma cultura de segurança no seio das organizações de saúde. A nível nacional, no processo de busca da excelência, é necessário estabelecer exigências que formalizem os mecanismos que as instituições de saúde e os seus profissionais terão que utilizar para assegurar que os cuidados de saúde que prestam aos cidadãos, respondem aos critérios da qualidade definidos pelo Departamento da Qualidade na Saúde. Tornou-se, então, pertinente verificar as estratégias que existem sobre a gestão de risco, a nível nacional, e por outro lado, como é que as unidades de saúde têm estruturada esta área nas suas organizações. Como tal, com este estudo pretendeu-se caracterizar as Estruturas de Qualidade e Segurança do Doente, tendo como população as unidades de saúde da região de Lisboa e Vale do Tejo. Foi utilizada uma abordagem metodológica do tipo observacional descritiva, que integrou a aplicação de um questionário. De forma geral, foi possível concluir que todas as unidades de saúde (N=7) afirmam ter implementada a gestão do risco, no entanto há unidades que não fazem a avaliação e identificação do risco (N=4) e a maioria não realizam auditorias clínicas regularmente (N=5). Considera-se que estes resultados podem contribuir para a criação de oportunidades para as organizações e para os profissionais, com o objetivo de melhorar a prestação de cuidados, com consequente melhoria na segurança do doente.