Tenascin-C is a novel RBPJkappa-induced target gene for Notch signaling in gliomas.

Tenascin-C (TNC) expression is known to correlate with malignancy in glioblastoma (GBM), a highly invasive and aggressive brain tumor that shows limited response to conventional therapies. In these malignant gliomas as well as in GBM cell lines, we found Notch2 protein to be strongly expressed. In a GBM tumor tissue microarray, RBPJk protein, a Notch2 cofactor for transcription, was found to be significantly coexpressed with TNC. We show that the TNC gene is transactivated by Notch2 in an RBPJk-dependent manner mediated by an RBPJk binding element in the TNC promoter. The transactivation is abrogated by a Notch2 mutation, which we detected in the glioma cell line Hs683 that does not express TNC. This L1711M mutation resides in the RAM domain, the site of interaction between Notch2 and RBPJk. In addition, transfection of constructs encoding activated Notch2 or Notch1 increased endogenous TNC expression identifying TNC as a novel Notch target gene. Overexpression of a dominant negative form of the transcriptional coactivator MAML1 or knocking down RBPJk in LN319 cells led to a dramatic decrease in TNC protein levels accompanied by a significant reduction of cell migration. Because addition of purified TNC stimulated glioma cell migration, this represents a mechanism for the invasive properties of glioma cells controlled by Notch signaling and defines a novel oncogenic pathway in gliomagenesis that may be targeted for therapeutic intervention in GBM patients.

Stable masking by H-2Dd cis ligand limits Ly49A relocalization to the site of NK cell/target cell contact.

Ly49A is an inhibitory receptor, which counteracts natural killer (NK) cell activation on the engagement with H-2D(d) (D(d)) MHC class I molecules (MHC-I) on target cells. In addition to binding D(d) on apposed membranes, Ly49A interacts with D(d) ligand expressed in the plane of the NK cells' membrane. Indeed, multivalent, soluble MHC-I ligand binds inefficiently to Ly49A unless the NK cells' D(d) complexes are destroyed. However, it is not known whether masked Ly49A remains constitutively associated with cis D(d) also during target cell interaction. Alternatively, it is possible that Ly49A has to be unmasked to significantly interact with its ligand on target cells. These two scenarios suggest distinct roles of Ly49A/D(d) cis interaction for NK cell function. Here, we show that Ly49A contributes to target cell adhesion and efficiently accumulates at synapses with D(d)-expressing target cells when NK cells themselves lack D(d). When NK cells express D(d), Ly49A no longer contributes to adhesion, and ligand-driven recruitment to the cellular contact site is strongly reduced. The destruction of D(d) complexes on NK cells, which unmasks Ly49A, is necessary and sufficient to restore Ly49A adhesive function and recruitment to the synapse. Thus, cis D(d) continuously sequesters a considerable fraction of Ly49A receptors, preventing efficient Ly49A recruitment to the synapse with D(d)+ target cells. The reduced number of Ly49A receptors that can functionally interact with D(d) on target cells explains the modest inhibitory capacity of Ly49A in D(d) NK cells. This property renders Ly49A NK cells more sensitive to react to diseased host cells.

CD1d-antibody fusion proteins target iNKT cells to the tumor and trigger long-term therapeutic responses.

Despite the well-established antitumor activity of CD1d-restricted invariant natural killer T lymphocytes (iNKT), their use for cancer therapy has remained challenging. This appears to be due to their strong but short-lived activation followed by long-term anergy after a single administration of the CD1d agonist ligand alpha-galactosylceramide (αGC). As a promising alternative, we obtained sustained mouse iNKT cell responses associated with prolonged antitumor effects through repeated administrations of tumor-targeted recombinant sCD1d-antitumor scFv fusion proteins loaded with αGC. Here, we demonstrate that CD1d fusion proteins bound to tumor cells via the antibody fragment specific for a tumor-associated antigen, efficiently activate human iNKT cell lines leading to potent tumor cell lysis. The importance of CD1d tumor targeting was confirmed in tumor-bearing mice in which only the specific tumor-targeted CD1d fusion protein resulted in tumor inhibition of well-established aggressive tumor grafts. The therapeutic efficacy correlated with the repeated activation of iNKT and natural killer cells marked by their release of TH1 cytokines, despite the up-regulation of the co-inhibitory receptor PD-1. Our results demonstrate the superiority of providing the superagonist αGC loaded on recombinant CD1d proteins and support the use of αGC/sCD1d-antitumor fusion proteins to secure a sustained human and mouse iNKT cell activation, while targeting their cytotoxic activity and cytokine release to the tumor site.

Difficult-to-engage patients: a specific target for time-limited assertive outreach in a Swiss setting.

OBJECTIVE: Assertive community treatment (ACT) failed to develop in Europe, and its efficacy is debated. In Lausanne, Switzerland, ACT focuses on difficult-to-engage patients and aims to facilitate linkage with outpatient care through time-limited interventions. This study aimed to evaluate the applicability and efficiency of time-limited ACT. METHODS: We retrospectively assessed social, clinical, and functional outcomes and motivation for treatment in 75 consecutively seen subjects treated between 2000 and 2002. RESULTS: With 70% of the interventions lasting less than 6 months, we observed significant improvement in most clinical and social problems, in collaboration, in motivation for treatment, and in social network support, despite high baseline levels of clinical and social problems. The number of hospitalizations decreased significantly. CONCLUSIONS: Time-limited ACT is a useful treatment for difficult-to-engage patients with severe clinical and social problems, and it facilitates linkage to care. This narrower target for ACT may facilitate its implementation in Europe.

Target joining of duplicated insertion sequence IS21 is assisted by IstB protein in vitro.

Tandemly repeated insertion sequence IS21, located on a suicide plasmid, promoted replicon fusion with bacteriophage lambda in vitro in the presence of ATP. This reaction was catalyzed in a cell extract containing the 45-kDa IstA protein (cointegrase) and the 30-kDa IstB helper protein of IS21 after both proteins had been overproduced in Escherichia coli. Without IstB, replicon fusion was inefficient and did not produce the 4-bp target duplications typical of IS21.

Safety concerns about CCR5 as an antiviral target.

PURPOSE OF REVIEW: Clinical trials of CCR5 antagonists attest to their efficacy and tolerance in HIV treatment. However, there has been debate on their long-term safety because of the role of CCR5 in innate immunity. This review highlights gaps in our understanding of epidemiology of infections that are modulated by CCR5, in particular, in HIV-infected individuals. RECENT FINDINGS: In the mouse model, CCR5 has a role in the response against pathogens as diverse as Toxoplama gondii, West Nile virus, Mycobacterium tuberculosis, herpes simplex virus, Trypanosoma cruzi, Cryptococcus neoformans, Chlamydia trachomatis, Listeria, and plasmodia. In human cohorts, individuals carrying the defective CCR5Delta32 allele present an increased susceptibility to flavivirus (West Nile virus and tickborne encephalitis virus). The selective pressures that led to the spread of loss-of-function CCR5 mutations in humans (CCR5Delta32), and in mangabeys (CCR5Delta24) are not understood. SUMMARY: The recent availability of CCR5 antagonists has raised concern that genetic, biological, or chemical CCR5 knockout, although beneficial against some pathogens (i.e. HIV), could be deleterious for other processes implicated in pathogen response. The consequences of long-term pharmaceutical intervention on CCR5 should be carefully assessed through rigorous postmarketing surveillance.

The need for combination antihypertensive therapy to reach target blood pressures: what has been learned from clinical practice and morbidity-mortality trials?

Pharmacological treatment of hypertension represents a cost-effective way for preventing cardiovascular and renal complications. To benefit maximally from antihypertensive treatment blood pressure (BP) should be brought to below 140/90 mmHg in every hypertensive patient, and even lower (< 130/80 mmHg) if diabetes or renal disease co-exists. Most of the time such targets cannot be reached using monotherapies. This is especially true in patients who exhibit a high cardiovascular risk. The co-administration of two agents acting by different mechanisms considerably increases BP control. Such preparations are not only efficacious, but also well tolerated, and some fixed low-dose combinations have a tolerability profile similar to placebo. This is for instance the case for the preparation containing the angiotensin-converting enzyme inhibitor perindopril (2 mg) and the diuretic indapamide (0.625 mg), a fixed low-dose combination that has recently been shown in controlled interventional trials to be more effective than monotherapies in reducing albuminuria, regressing cardiac hypertrophy and improving macrovascular stiffness. Fixed-dose combinations are becoming more and more popular and are even proposed by current hypertension guidelines as a first-line option to treat hypertensive patients.

Implementation of an Integrated Activity-Based Costing in a Holistic Database Management System and its Implications for Operations Management

Diplomityössä on tutkittu reaaliaikaisen toimintolaskennan toteuttamista suomalaisen lasersiruja valmistavan PK-yrityksen tietojärjestelmään. Lisäksi on tarkasteltu toimintolaskennan vaikutuksia operatiiviseen toimintaan sekä toimintojen johtamiseen. Työn kirjallisuusosassa on käsitelty kirjallisuuslähteiden perusteella toimintolaskennan teorioita, laskentamenetelmiä sekä teknisessä toteutuksessa käytettyjä teknologioita. Työn toteutusosassa suunniteltiin ja toteutettiin WWW-pohjainen toimintolaskentajärjestelmä case-yrityksen kustannuslaskennan sekä taloushallinnon avuksi. Työkalu integroitiin osaksi yrityksen toiminnanohjaus- sekä valmistuksenohjausjärjestelmää. Perinteisiin toimintolaskentamallien tiedonkeruujärjestelmiin verrattuna case-yrityksessä syötteet toimintolaskentajärjestelmälle tulevat reaaliaikaisesti osana suurempaa tietojärjestelmäintegraatiota.Diplomityö pyrkii luomaan suhteen toimintolaskennan vaatimusten ja tietokantajärjestelmien välille. Toimintolaskentajärjestelmää yritys voi hyödyntää esimerkiksi tuotteiden hinnoittelussa ja kustannuslaskennassa näkemällä tuotteisiin liittyviä kustannuksia eri näkökulmista. Päätelmiä voidaan tehdä tarkkaan kustannusinformaatioon perustuen sekä määrittää järjestelmän tuottaman datan perusteella, onko tietyn projektin, asiakkuuden tai tuotteen kehittäminen taloudellisesti kannattavaa.

Product costing in SAP environment

Kustannuslaskennan ala on muuttumassa. IT teknologian hämmästyttävän nopea kehitys viime vuosina on luonut kustannuslaskennalle uusia mahdollisuuksia. Toisaalta myös kustannuslaskennalle asetetut vaatimukset ovat muuttuneet. Nykyisin kustannustietoutta tarvitaan erityisesti päätöksenteon tueksi. Kaikesta huolimatta yleisesti käytetyt laskentamenetelmät eivät ole muuttuneet. Työn tavoite on tutkia mahdollisia tapoja tuotekohtaisen kustannuslaskennan toteuttamiseksi SAP toiminnanohjausjärjestelmän avulla. Erityisesti toiminnanohjausjärjestelmien nopea kehitys on mahdollistanut aikaisempaa nopeamman ja tarkemman kustannuslaskennan. On kuitenkin muistettava, että järjestelmät ovat vaintyökaluja. On siis erittäin tärkeää valita tarkoituksenmukainen laskentamenetelmä. Työn perimmäinen tarkoitus onkin valita kyseessä olevaan tilanteeseen sopivin menetelmä.Viime vuosien akateemisessa kirjoittelussa on esitelty useita uusia kustannuslaskentamenetelmiä. Toimintolaskennan uusi versio, Time-Driven Activity-Based Costing, on eräs varteenotettava vaihtoehto tuotekohtaisen kustannuslaskennan toteuttamiseksi SAP-ympäristössä. Toinen hyvin soveltuva menetelmä on Resource Consumption Accounting (RCA), joka soveltuu erityisen hyvin SAP-ympäristöön.Molemmilla menetelmillä on hyvät ja huonot puolet, mutta tässä tapauksessa RCA soveltuu tehtävään paremmin. RCA on joustava ja tarjoaa laaja-alaista tietoa. Tästä syystä Resource Consumption Accounting oli paras vaihtoehto.Työssä rakennettu RCA malli testattiin kolmen erilaisen tuotteen historiallisella datalla. RCA:ntuomia mahdollisuuksia pohdittiin ja ongelmia selvitettiin. RCA on hyvin saman tyyppinen yrityksessä jo käytettävän laskentamenetelmän kanssa. Implementointi ei siis olisi mahdoton tehtävä. RCA kuitenkin tarjoaa mahdollisuuksia, joita nykyisellä menetelmällä ei voida saavuttaa.

Accounting system for activity standard costs formulation in ERP environment

Toiminnanohjausjärjestelmän implementointi ja sen mukanaan tuomat muutokset tuotekustannuslaskentaan asettavat haasteita yritykselle. Metallitoimialalla toimivassa yrityksessä on havaittu samat haasteet implementoitaessa SAP R/3 toiminnanohjausjärjestelmää ja sen tuotekustannuslaskentatoiminnallisuutta. SAP R/3 tuotekustannuslogiikka tarvitsee tietoa järjestelmän ulkopuolelta, minkä huomioimatta jättäminen vaikuttaa suoraan laskentatarkkuuteen. Diplomityössä kehitetään sekä standardoitu prosessi että laskentajärjestelmä, joiden avulla pystytään laskemaan tarvittavat niin toimintokustannukset eri teräspalvelukeskuksen kuormituspisteille kuin kustannustenvyörytysarvot. Lasketut arvot muodostavat tarvittavat tekijät SAP R/3 tuotekustannuslaskennan master dataan. Tavoitteena on edesauttaa läpinäkyvän kustannustiedon muodostumista. Diplomityö pohjautuu ns. vesiputousmalliin (SDLC). Ensin tunnistetaan reunaehdot ympäristöstä, jossa tuotekustannuslaskenta toteutetaan. Tämä asettaa joustamattomia komponentteja kehitettävälle laskentajärjestelmälle. Joustavat komponentit sen sijaan antavat vapautta laskentajärjestelmälle. Yhdistämällä joustamattomat ja joustavat komponentit saavutetaan järjestelmä, jolla voidaan täydentää SAP R/3 tuotekustannuslaskennan puutteellisuutta.

Using tools to help cost estimating and pricing: examination of costing model's and cost breakdown's workability and their capability to cooperative work

Tämä diplomityö käsittelee työkaluja, jotka on suunniteltu kustannusten ennakointiin ja hinnan asetantaan. Aluksi on käyty läpi perinteisen ja toimintoperusteisen kustannuslaskennan perusteita. Näiden menetelmien välisiä eroja on tarkasteltu ja toimintoperusteisen kustannuslaskennan paremmin sopivuus nykypäivän yrityksille on perusteltu. Toisena käsitellään hinnoittelu. Hinnan merkitys, hinnoittelumenetelmät ja päätös lopullisesta hinnasta on käyty läpi. Hinnoittelun jälkeen esitellään kustannusjärjestelmät ja kustannusten arviointi. Nämä asiat todistavat, että tarkat kustannusarviot ovat elintärkeitä yritykselle. Tuotteen kustannusarviointi, hinnan asetanta ja tarjoaminen ovat erittäin merkityksellisiä asioita ottaen huomioon koko projektin elinkaaren ja tulevat tuotot. Nykyään on yleistä käyttää työkaluja kustannusarvioinnissa ja joskus myös hinnoittelussa. Työkalujen luotettavuus on tiedettävä, ennenkuin työkalut otetaan käyttöön. Myös työkalujen käyttäjät täytyy perehdyttää hyvin. Muuten yritys todennäköisesti kohtaa odottamattomia ja epämiellyttäviä yllätyksiä.

Product Line Profitability- Case Halton Indoors

Diplomityön tavoitteena on rakentaa malli kohdeyrityksen yhden strategisen liiketoimintayksikön tuoteryhmänkohtaisten kannattavuuksien selvittämiseksi yli kokotoimitusketjun. Työssä on keskitytty vain välillisiin kustannuksiin ja välittömien kustannusten osalta on luotettu toiminnanohjausjärjestelmän antamiin tietoihin. Työn lähtökohtana ja teoreettisena viitekehikkona on toimintoperustainen kustannuslaskenta, jonka periaatteita noudattaen kannattavuusmalli rakennettiin. Mallin periaatteet on esitetty työssä mutta sen tuottamia tuloksia ei ole syvemmin analysoitu. Ongelma osoittautui haasteelliseksi ja tulosten verifiointi lähes mahdottomaksi käytettyjen subjektiivisten arvioiden ja ennalta odottamattomien välittömien tuotekustannusten suurten virheiden vuoksi. Työn johtopäätöksissä keskitytään sisäisen laskentatoimen kulttuurin kehittämiseen tuotekustannuslaskennan ja yleisen kustannusvalvonnan näkökulmasta kohdeyrityksessä.

Tuotekustannus- ja kannattavuustiedon hallinta kartonkitehtaalla

Työssä keskitytään tuotekustannus- ja kannattavuustiedon hallintaan kartonkitehtaalla. Aiemmassa kohdeympäristöön tehdyssä lopputyössä osoitettiin selkeä tarve uudelle laskentajärjestelmälle. Uuden tehdasjärjestelmän myötä uuden laskentajärjestelmän hankkiminen tuli ajankohtaiseksi, joten työssä tutkitaan muun muassa tarkennetunlaskentajärjestelmän ominaisuuksia ja paperiteollisuuden sille asettamia vaatimuksia. Työssä tutkitaan myös määriteltyjen käyttäjäryhmien tuotekustannus- ja kannattavuustietotarpeita. Tarpeita peilataan reaaliaikaiseen kustannuslaskentajärjestelmän ja tarkennetun paperiteollisuuteen suunnitellun taloudellisenohjausjärjestelmän ominaisuuksiin. Lisäksi työssä käydään yleisellä tasolla kohdeympäristön tuotekustannuslaskentaa läpi ja tarkastellaan kriittisesti sen sekänykyisten laskentajärjestelmien toimivuutta nykyisessä toimintaympäristössä teorian pohjalta sekä case-esimerkkien avulla. Työn tuloksena voidaan sanoa, että laskentajärjestelmien ja -menetelmien kehittäminen on välttämätöntä kohdeympäristössä, sillä tämän hetkiset laskentajärjestelmät ja -menetelmät ovat riittämättömiä nykyisessä toimintoympäristössä. Lisäksi nykyisen tuotekustannus- jakannattavuustiedon hallinta tuotetasolla on liian epätarkka. Työssä käsitellyt laskentajärjestelmät tyydyttäisivät yhdessä käyttäjäryhmien tietotarpeet ja lisäksi vastaisivat paperiteollisuuden erityistarpeita laskentajärjestelmien osalta.

egr-4, a target of EGFR signaling, is required for the formation of the brian primordial and head regeneration in planarians

During the regeneration of freshwater planarians, polarity and patterning programs play essential roles in determining whether a head or a tail regenerates at anterior or posterior-facing wounds. This decision is made very soon after amputation. The pivotal role of the Wnt/β-catenin and Hh signaling pathways in re-establishing anterior-posterior (AP) polarity has been well documented. However, the mechanisms that control the growth and differentiation of the blastema in accordance with its AP identity are less well understood. Previous studies have described a role of Smed-egfr-3, a planarian epidermal growth factor receptor, in blastema growth and differentiation. Here, we identify Smed-egr-4, a zinc-finger transcription factor belonging to the early growth response gene family, as a putative downstream target of Smed-egfr-3. Smed-egr-4 is mainly expressed in the central nervous system and its silencing inhibits anterior regeneration without affecting the regeneration of posterior regions. Single and combinatorial RNA interference to target different elements of the Wnt/β-catenin pathway, together with expression analysis of brain- and anterior-specific markers, revealed that Smed-egr-4: (1) is expressed in two phases - an early Smed-egfr-3-independent phase and a late Smed-egfr-3-dependent phase; (2) is necessary for the differentiation of the brain primordia in the early stages of regeneration; and (3) that it appears to antagonize the activity of the Wnt/β-catenin pathway to allow head regeneration. These results suggest that a conserved EGFR/egr pathway plays an important role in cell differentiation during planarian regeneration and indicate an association between early brain differentiation and the proper progression of head regeneration.