五步蛇蛇毒磷脂酶A_(2)的纯化及部分性质

从五步蛇蛇毒中纯化一种均一的酸性磷脂酶A_(2)。SDS-PAGE测得分子量为15.8KD, 按氨基酸残基计算其分子量为14.352KD, IEF-PAGE测得等电点为5.32。氨基酸组分分析表明磷脂酶A_(2)分子由128个氨基酸残基组成, 富含Asp和Glu, 不含中性糖。PLA_(2)酶活性 的最适温度为45℃, 最适pH为8.5左右, 没有抗胰蛋白酶的活性, 具有一定的热稳定性。K~(+)、Ca~(++)和Na~(+)离子激活, 而Ca~(++)、Sn~(++)、Cu~(++)、Li~(++)、Hg~(++)、Zn~(++)、Fe~(++)和Co~(++)离子可抑制或完全丧失酶活力。图5表2参 10

湖南尖吻吻蝮蛇毒两个出血毒素的纯化和理化性质

经Sephadex G-75凝胶过滤, QAE-Sephadex A-50和CM-Sephadex C-25离子交换层析, 从尖吻蝮蛇毒中纯化出两个出血毒素(DaHT-1和DaHT-2)。SDS-PAGE测得分子量均为23.5kD,IEF-PAGE测得等电点分别为5.6和5.2, DaHT-1和DaHT-2的最小出血剂量分别为0.5#mu#g和0.8#mu#g。都具蛋白水解酶活性, DaHT-1和DaHT-2的最适温度分别为35℃和40℃, 最 适pH为6-9, 对热均不稳定, 温度高于60℃活性完全丧失。图7表1参13

尖吻蝮蛇蛇毒出血毒素DaHT-3的纯化与性质

通过Sephadex G-75,DEAE-Sephadex A-50,Sephadex G-200和两次PBE聚焦层析,从尖吻蝮蛇(Dienagkistrodon acutus)蛇毒中纯化到一个分子量为56 000的出血毒素(DaHT-3),经氨基酸组成测定计算,由487个氨基酸残基组成。此成分在SDS-PAGE上显示出一条均一的蛋白染色带,用等电聚焦电泳测定,其pI为5.50。该出血成分的最小出血剂量是2.6#mu#g,具有蛋白水解酶活力,其活力为3.68,但没有精氨酸酯酶和磷脂酶A_(2)活力。用红外光谱仪研究DaHT-3在溶液中酰胺Ⅰ带的吸收谱,该毒素含有31.8%的#alpha#螺旋、56.1%的#beta#折叠和12.1%的转角;当加入EDTA螯合剂去除金属离子后,它们的#alpha#螺旋、#beta#折叠、转角和无规卷曲分别变为11%、26.4%、46.2%和16.5%,而出血活力和蛋白水解酶活力均丧失,表明该出血毒素是金属蛋白酶。

竹叶青(Trimeresurus stejnegeri)蛇毒五种磷脂酶A_(2)的分离纯化和氨基酸序列分析

用超细Sephadex G-75凝胶色谱和C4反相高效液相色谱从竹叶青(Trimeresurus stejnegeri)蛇毒中分离纯化5种磷脂酶A_(2),并分别命名为PLA_(2)-Ⅰ(SWISS-PROT,P82892)、Ⅱ(SWISS-PROT,P82893)、Ⅲ(SWISS-PROT,P82894)、Ⅳ(SWISS-PROT,P82895)、Ⅴ(SWISS-PROT,P82896)。SDS-PAGE测定它们的分子量分别为14.0、15.8、15.0、14.0和14.0kDa。等电聚焦电泳测得PLA_(2)-Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ呈碱性,等电点大于8.8;PLA_(2)-Ⅳ和Ⅴ呈酸性,等电点分别为5.2和4.7。PLA_(2)-Ⅳ和Ⅴ有水解卵磷脂活性。用自动Edman降解法测定了PLA_(2)-Ⅴ的全部氨基酸序列和PLA_(2)-Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ的N-端部分氨基酸序列。PLA_(2)-Ⅴ由122个氨基酸残基组成,有14个Cys,并与其它来源的PLA_(2)的氨基酸序列进行了比较。

欧洲鳗鲡免疫球蛋白阳性细胞的组织化学定位与分布特点

采用蛋白A亲和层析法分离纯化欧洲鳗鲡(Anguilla anguilla,欧鳗)血清免疫球蛋白(Ig),制备其特异性兔抗血清,并运用免疫组织化学技术研究了嗜水气单胞菌(Aeromonas hydrophila)感染的试验组鳗鲡和未经感染的对照组鳗鲡脾脏、肾脏和肝脏Ig阳性(Ig+)细胞定位与分布特点。结果表明:纯化后的Ig经SDS-PAGE检测含有分子质量约68 ku重链和26 ku轻链的2条清晰蛋白条带,由其制备的兔抗Ig血清效价达1∶51 200。对照组欧鳗脾脏Ig+细胞数较少,肾脏相对较多,肝脏未发

四种方法对鲢血清免疫球蛋白的纯化及分子量测定

采用mannan-binding protein(MBP)、TG及免疫亲和层析法和饱和硫酸铵沉淀法纯化鲢血清免疫球蛋白IgM,并比较了4种纯化方法的纯化效果.SDS-PAGE显示鲢血清免疫球蛋白的重链和轻链分子量分别为76.4 kD和27.2 kD,推算其总分子量约828.8kD.

抗对虾白斑综合症病毒单链抗体A1基因在酵母中表达及其与抗原结合活性

通过PCR从噬菌粒载体上扩增一种抗对虾白斑综合症病毒 (WSSV)的单链抗体A1(ScFvA1)基因 ,并构建于大肠杆菌 酵母穿梭质粒载体pPIC9K上。经PCR ,酶切 ,测序鉴定重组克隆 ,发现重组成功。将重组质粒pPIC9K ScF vA1转化毕赤酵母 (Pichiapastoris)GS115中 ,利用甲醇诱导 ,将单链抗体A1在酵母中进行了初步表达。经SDS PAGE电泳 ,发现其大小约为 32KD ,通过ELISA实验 ,证明表达上清液中的单链抗体具有很高的WSSV结合活性。

团头鲂卵壳蛋白的分离与纯化

报道了一种从团头鲂卵壳中提取卵壳蛋白的有效方法。该提取液经SDS PAGE电泳鉴定后 ,证明有三条主要的蛋白带 ,其分子量分别为 6 4KDa,5 6KDa和 5 2KDa ,借助于制备型SDS PAGE电泳和电洗脱分离纯化技术 ,获得了三种高纯度的卵壳蛋白。

草鱼呼肠孤病毒新分离株(GCRV_(991))的病毒学特性分析

从湖南长沙分离到一株致病性强的草鱼呼肠孤病毒 (GCRV991) ,该病毒能使草鱼CIK ,肥头鲤FHM细胞产生明显的CPE ,对水生动物BF2 ,EPC及哺乳动物BHK ,VERO细胞株不敏感。中和实验显示 ,GCRV873 抗体能有效地中和GCRV991病毒颗粒 ,形成抗原抗体免疫复合物。纯化的病毒核酸与蛋白经SDS PAGE分离 ,分别呈现 11条清晰的核酸带及 5条主要与 2条微量结构多肽图谱 ,其核酸蛋白分子量大小与GCRV873 相近似。该毒株基因组总分子量为 14.48× 10 6kD ,大

两种裸藻的无叶绿体突变株

利用 Ofloxacin处理获得了纤细裸藻和中型裸藻无叶绿体突变株。吸收光谱测定和自荧光显微观察证明突变株无叶绿素合成 ,DAPI染色方法显示突变株细胞不存在质体 DNA,而无色的长变胞藻细胞中仍有可检测质体 DNA,说明二突变株质体已消失。 SDS- PAGE显示野生种和突变株各有特异蛋白表达。

鲤和团头鲂幼鱼卵黄蛋白原的诱导、纯化及电泳比较

采用腹腔注射人工雌激素 1 7α 乙炔基雌二醇 (1 7α ethinyloestradiol,EE2 )的方法 ,在鲤幼鱼和团头鲂幼鱼体内诱导生成卵黄蛋白原 ;并结合利用阴离子交换介质DEAE SephraroseCL 6B和液相层析技术分离纯化了诱导后的鲤幼鱼和团头鲂幼鱼血浆中的卵黄蛋白原 ;SDS PAGE电泳结果表明所分离的两种鲤科鱼类卵黄蛋白原其亚基的分子量分别为 1 70KD和1 5 0KD。

雌核发育银鲫和两性生殖彩鲫精子蛋白组份的比较研究

对雌核发育银鲫和两性融合彩鲫精子蛋白组份进行了比较分析。通过分级抽提得到精子的不同组份精浆、精头的膜、鞭毛和脱膜精头等 ,然后经不同的凝胶电泳系统 ,比较分析了银鲫精子和其两性亲缘种彩鲫精子相应组份可溶性蛋白成份的差异。研究表明 ,经分级抽提的银鲫精子和彩鲫精子的各个组份都含有其特定的蛋白谱带。精浆蛋白在两种鱼之间和两种鱼的不同个体之间都存在一定差异。精头膜、鞭毛和脱膜精头的可溶性蛋白在同种鱼不同个体间高度一致 ,但在两种鱼之间表现出差异。两种鱼精头膜的可溶性蛋白在SDS PAGE电泳图谱上基本一致 ,而

雌核发育银鲫与两性生殖彩鲫卵壳蛋白组分的比较分析及其受精前后的变化

以雌核发育银鲫和两性生殖彩鲫的成熟卵为材料 ,分离卵壳 ,经处理得到卵壳可溶性蛋白组分。SDS -PAGE梯度凝胶电泳分析在雌核发育银鲫中揭示出3条较明显的差异蛋白带。同时 ,采用相同处理方法对受精前后卵壳蛋白组分进行比较分析后发现 ,这些差异蛋白带在受精后发生了变化 ,其带纹表现为减弱或消失 ,表明这些差异蛋白可能与受精过程相关。

雪松聚球藻金属硫蛋白的纯化及其性质的研究

在雪松聚球藻的培养基中逐渐增加氯化镉的浓度以诱导藻细胞内金属硫蛋白（NT）的合成，经SephedexG－50、DEAE－cellulose（DE－52）和SephadexG－25柱层析，获得的MT没有亚型，经SDS－PAGE分析是高度均一的。每个蛋白分子约含5个Cd原子，10个巯基，分子量约为7．6KD，等电点pH4、5左右，半胱氨酸含量约占总氨基酸量的15．5％，还含有少量的芳香族氨基酸，MT的最大紫外吸收在250nm左右，在低pH下稳定性较差。

光合细菌H_3菌株色素分析

H3菌株系由盐田微生物层中分离获得的光合细菌株。具有丰富的天然色素。经活细胞色素光谱吸收峰值测定，色素经有机溶剂提取、硅胶薄板层析、SDS－PAGE电泳等，结果表明H3菌株的主要色素包括细菌叶绿素a、细菌脱镁叶绿素（Bacteriophaeophytin）和三种类胡萝卜素。总胡萝卜素含量占细胞于重的0．6％，胡萝卜素蛋白复合体的分子量约11，000.培养条件的差异对色素形成及相对含量有不同程度的影响。