Therapeutic trial in experimental tegumentary leishmaniasis caused by Leishmania (Leishmania) amazonensis. A comparative study between mefloquine and aminosidine

One hundred and eighty-two male inbred C57/BL/6 mice were infected with 3 x 106 Leishmania (Leishmania) amazonensis promastigotes of the MHOM/BR/PH8 strain by means of a subcutaneous injection in the right ear. The animals were separated in three groups: 1) oral mefloquine hydrochloride treatment (16mg/kg/day/10 days), 2) intramuscular aminosidine (Paromomycin®) treatment (20mg/kg/20 days) and 3) control. Twenty six mice of each treated group were sacrificed, one at the end of treatment (nine weeks after inoculation), and one six weeks later (fifteen weeks after inoculation). Control Group animals were sacrificed at weeks six, nine and fifteen after inoculation. There was no significant difference between Group 1 (mefloquine) and Group 3 (control) subjects. Group 2 animals (aminosidine) presented the smallest differences of all, both at the end of the treatment and six weeks later. The histopato-logical parameters have shown the following findings: a) there was no significant difference between the mefloquine treated group and the control group; the group treated with aminosidine showed fewer of vacuolated macrophages than the control group, at week 9 (end of treatment). b) both at the end of treatment and six weeks later, evaluation of tissue necrosis and tissue fibrosis revealed no differences between the treated groups. It was found that six weeks after the end of treatment, mice in the control group presented significantly more severe degrees of fibrosis than mice in the other groups. It can be concluded that mefloquine showed limited therapeutic effect in this experimental model, whereas aminosidine had a significant effect. Nevertheless, neither of them resulted in cure of the lesions.

Estudo da competência vetorial de Lutzomyia intermedia (Lutz & Neiva, 1912) para Leishmania (Viannia) braziliensis, Vianna, 1911

Estudou-se a competência vetorial de Lutzomyia intermedia (Diptera: Psychodidae) do Vale do Ribeira (SP) para estirpes de Leishmania (Viannia) braziliensis (Kinetoplastida: Trypanosomatidae), mediante pesquisa de infectividade natural; exposições de fêmeas silvestres e colonizadas (F1) às lesões de hamsters experimentalmente infectados e testes de transmissão via picada. A infectividade natural e os testes de transmissão revelaram-se negativos e, nas exposições, foram obtidas positividades de 74% (123+/166 dissecados) e 70% (115+/164 dissecados) para fêmeas silvestres e colonizadas respectivamente, e o desenvolvimento das formas evolutivas compatíveis com o modelo Peripilaria. A suscetibilidade às estirpes testadas associada aos indicadores epidemiológicos concorrem para a suspeita do papel vetorial de Lutzomyia intermedia na região estudada.

Infecção por Leishmania (Leishmania) chagasi em crianças de uma área endêmica de leishmaniose visceral americana na Ilha de São Luis-MA, Brasil

Realizou-se estudo prospectivo com 648 crianças de zero a cinco anos no município da Raposa-MA, de julho/97 a junho/98, com o objetivo de avaliar as características da infecção por L.(L.)chagasi e verificar se existe associação entre desnutrição e infecção assintomática. Utilizou-se questionário com dados socioeconômicos, ambientais e hábitos de vida; realizou-se Intradermorreação de Montenegro(IDRM) com antígeno de L. amazonensis e Enzyme Linked Immunosorbant Assay(ELISA) para detectar infecção, e exame antropométrico. A prevalência inicial, final e incidência da infecção foram 18,6%, 20,6% e 10,8% pelo IDRM, e 13,5%, 34,4% e 28% pelo ELISA, respectivamente. A prevalência da desnutrição crônica (altura/idade) foi 26%. Não houve associação estatisticamente significante entre desnutrição e infecção assintomática por L. (L.) chagasi. A forma assintomática da doença está presente nas áreas estudadas, necessitando de medidas de controle mais efetivas.

The effects of immunization with recombinant Sm14 (rSm14) in reducing worm burden and mortality of mice infected with Schistosoma mansoni

To investigate whether mice immunization with the recombinant form of a 14.7 KDa Schistosoma mansoni protein (rSm14) confers protection against a S. mansoni lethal challenge infection, rSm14-immunized mice were challenged with different cercarial burdens. A significant protection was detected in immunized mice challenged with 100 or 1,000 S. mansoni cercariae when compared with their controls (p< 0.004 and p< 0.01 respectively). Differently from previous report, none of the mice from the control group (not immunized and infected with 1000 cercariae) died before the 30th day post-infection. A direct correlation between the number of challenge cercariae and the precocity of mice death was found. IgM anti-rSm14 antibodies were significantly produced (p< 0.05) mainly in the groups of immunized mice infected with 500 or 1000 cercariae. IgG and IgA anti-rSm14 antibodies were not significantly detected. In Western immunoblots, all mice sera showed a specific antibody response with a 14.7 KDa antigen being reacted with particular intensity in sera from immunized mice. The results show that immunization with rSm14 reduced mice worm burden independently of the cercariae load of challenge infection. No correlation was found between serum antibodies and worm burden reduction. In relation to cercarial load and the rate and precocity of mice mortality a direct correlation was found.

Vaccination of C57BL/10 mice against cutaneous leishmaniasis using killed promastigotes of different strains and species of Leishmania

Antigenic extracts from five Leishmania stocks were used to vaccinate C57BL/10 mice. The Leishvacin® and PH8 monovalent vaccine yielded the highest IFN-gamma levels in the supernatants of spleen cell culture from vaccinated animals. Each single strain immunized group showed evidence of protective immunity six months after the challenge with promastigotes of Leishmania (Leishmania) amazonensis. No differences were detected between the vaccinated groups. It can be concluded that vaccines composed of single Leishmania stocks can provide protection to C57BL/10 mice against L. (L.) amazonensis infection.

Identification of Leishmania chagasi from skin in Leishmania/HIV co-infection: a case report

A case of HIV/Leishmania co-infection presenting both visceral and cutaneous manifestations is reported. Leishmania infection was confirmed by conventional methods (parasitological approach and serology) and by PCR. Leishmania chagasi isolated from the skin lesion was characterized by enzyme electrophoresis and by restriction fragment length polymorphism of the internal transcribed spacer of the ribosomal gene.

Histological evaluation of the lesion induced by inoculation of Leishmania mexicana in the cheek pouch of the hamster

We have studied the role of the immune response in the morphology of the leishmaniotic granuloma induced in the cheek pouch of hamsters, an immunologically privileged site, after inoculation of 3 x 10(5) Leishmania mexicana. Animals were histologically and immunologically evaluated until 120 days after inoculation. Independent of the time of sacrifice, the animals were always non-reactors to the footpad test (FPT). At histology, the introduction of L. mexicana in the cheek pouch leads to an abscess that evolves to a granulomatous reaction rich in amastigote forms, and later it leads to resolution, even in the absence of immune response detectable by FPT. Our results demonstrate that the development of immune response is not preponderant for the control of infection induced by L. mexicana inoculated subcutaneously in the cheek pouch of the hamster. It also suggests that the macrophages present in the leishmaniotic granuloma are capable of eliminating this parasite, even in the absence of immune response evaluated by FPT.

Anticorpos antipromastigotas vivas de Leishmania (Viannia) braziliensis, detectados pela citometria de fluxo, para identificação da infecção ativa na leishmaniose tegumentar americana

Neste estudo, descrevemos etapas iniciais de padronização de uma nova metodologia para detecção de anticorpos antipromastigotas vivas de Leishmania (Viannia) braziliensis, pela citometria de fluxo e a análise de sua aplicabilidade para estudos clínicos. Foram avaliados 39 indivíduos com sorologia convencional (RIFI) positiva para leishmaniose, classificados quanto à ausência/presença de lesão (L- e L+). Os resultados foram expressos sob a forma de percentual de parasitas fluorescentes positivos (PPFP). A análise dos dados, na diluição 1:1.024, permitiu distinguir 95% dos pacientes L+ como um grupo de alta reatividade (PPFP>50%) e 72% dos indivíduos L- como um grupo de baixa reatividade (PPFP<50%). A análise dos títulos da reação de imunofluorescência indireta não demonstrou nenhuma relação com a ausência/presença de lesão. Em conjunto, nossos dados sugerem a aplicabilidade da citometria de fluxo na identificação dos casos de infecção ativa, o que não tem sido possível através das reações sorológicas convencionais.

Identification and purification of immunogenic proteins from nonliving promastigote polyvalent Leishmania vaccine (Leishvacin®)

Immunogenic proteins from nonliving promastigote polyvalent Leishmania vaccine against American tegumentary leishmaniasis (Leishvacin®), produced by Biobrás (Biochemistry of Brazil ), Montes Claros, State of Minas Gerais, Brazil, were identified and purified by polyacrylamide electrophoresis gel and electroelution. C57BL/10 mice were vaccinated with proteins with estimated molecular weights of 42, 46, 63, 66, 73, 87, 97, and 160kDa in three doses of 30µg of each protein at 15-day intervals combined with 250µg of Corynebacterium parvum followed by a challenge infection with 10(5) infective promastigotes from Leishmania (Leishmania) amazonensis. The ability of these proteins to induce immune response and protection was analyzed. No statistical difference was observed in the level of IFN-g induced by proteins in vaccinated groups in comparison with control groups. Six months after challenge infection, protection levels of 28.57; 42.86; 57.14; 42.86; 42.86, 57.14; 42.86 and 57.14% were demonstrated for each purified protein.

Ineficácia in vivo da terbinafina em leishmaniose cutânea causada por Leishmania (Leishmania) amazonensis em camundongos C57BL/6

Testou-se, em camundongos C57BL/6 inoculados com a cepa MHOM/BR/PH8 de Leishmania (Leishmania) amazonensis, terbinafina via oral 100mg/kg/dia, por 20 dias, solução salina 0,9% via oral como controle e stibogluconato de sódio 400mg SbV/kg/dia via subcutânea como padrão-ouro. A terbinafina mostrou-se ineficaz, clínica e parasitologicamente, e pelo ensaio por diluição limitante, quando comparada aos controles.

Leishmania (Viannia) braziliensis em cães naturalmente infectados

Foram estudados oito cães provenientes do Município de Maricá (RJ), com lesões sugestivas de leishmaniose tegumentar americana por métodos parasitológicos e sorológicos. Leishmania spp foi encontrada em seis cães através do cultivo in vitro. Anticorpos específicos foram detectados em seis animais pelo ELISA e em dois pela imunofluorescência indireta. Cinco isolados caninos analisados apresentaram zimodema similar a Leishmania (Viannia) braziliensis. Sugere-se que cães clinicamente suspeitos sejam acompanhados periodicamente, na tentativa de confirmar o diagnóstico da leishmaniose tegumentar canina.

Inoculação experimental de Equus asinus com Leishmania chagasi Cunha & Chagas, 1937

Quatro Equus asinus foram inoculados com promastigotas de Leishmania chagasi Cunha & Chagas, 1937 e acompanhados durante 12 meses através de: pesquisa de amastigotas em esfregaços e culturas de sangue periférico em fragmentos de tecido do lábio inferior, medula óssea, baço e fígado e de testes de ELISA e TRALd. Estes foram positivos nos 8º, 10º e 12º meses após a inoculação. O exame histopatológico pós necropsia, demonstrou discreto número de amastigotas no fígado de dois dos eqüídeos inoculados. Apesar de desafiados com elevado número de promastigotas, os animais não desenvolveram infecções patentes e não infectaram experimentalmente a vetora Lutzomya longipalpis. Os resultados induzem a acreditar que os eqüídeos são desprovidos de importância como reservatórios na cadeia de transmissão da leishmaniose visceral, embora sirvam como boa fonte de alimentação sangüínea e proliferação da vetora Lutzomyia longipalpis.

Leishmaniose tegumentar americana causada por Leishmania (Viannia) braziliensis, em área de treinamento militar na Zona da Mata de Pernambuco

Este estudo tem como objetivo geral caracterizar a epidemiologia da leishmaniose tegumentar americana em unidade de treinamento militar, localizada no Estado de Pernambuco. Entre 2002 e 2003, vinte e três casos foram diagnosticados através de exame clínico, detecção do parasita e teste de intradermoarreação de Montenegro. Sete amostras de Leishmania (Viannia) braziliensis foram isoladas destes pacientes, identificadas através de reações com anticorpos monoclonais específicos e perfil eletroforético com isoenzimas. Um inquérito epidemiológico de prevalência da infecção por IDRM foi realizado na população que realizou treinamento neste período, no qual foi identificada uma prevalência de 25,3% de infecção. Os dados obtidos, associados com achados prévios nesta área, apresentam evidências da manutenção de um ciclo enzoótico, com a ocorrência de surtos periódicos de leishmaniose tegumentar americana posteriormente à realização de treinamentos nas áreas de floresta Atlântica remanescente.

Risk factors for Leishmania chagasi infection in an urban area of Minas Gerais State

In order to understand the determinants of human infection by Leishmania chagasi in an urban area, a cross-sectional population based study was conducted using molecular and serologic methods to identify infection. Participants were interviewed using a pre-coded questionnaire. Two criteria were tested to identify risk factors: Model 1- including all participants positive in hybridization by Leishmania donovani complex probe; Model 2- including all participants positive for hybridization and at least one serologic test. In Model 1, the variables associated with infection were: ownership of birds, time spent outside house between 6:00-10:00 PM and garbage not collected. In Model 2, the variables associated with infection were: family with knowledge of the vector, garbage not collected, garbage not removed or buried, ownership of birds and eroded areas in the neighborhood. The risk factors identified were associated with household conditions, presence of animals and the likelihood of contact with phlebotomine sandflies.