Argamassas com base em cal a��rea e cinzas de casca de arroz para conserva����o do patrim��nio constru��do

2�� Congresso Nacional de Argamassas de Constru����o, APFAC, Lisboa, 2007 (CD-ROM)

Desenvolvimento de nanofilmes �� base de ��xido de tungst��nio para aplica����es em trans��stores electrocr��micos

Disserta����o para obten����o do Grau de Mestre em Engenharia de Materiais

Seguran��a estrutural em geotecnia atrav��s de m��todos de base probabil��stica

Disserta����o elaborada no Laborat��rio Nacional de Engenharia Civil para obten����o do Grau de Mestre em Engenharia Civil no Ramo de Geotecnia pela Faculdade de Ci��ncias e Tecnologia da Universidade Nova de Lisboa, no ��mbito do protocolo de coopera����o entre a FCT/UNL e o LNEC

Caracteriza����o in situ de rebocos com base em cal e metacaulino aplicados em muretes experimentais

Disserta����o para obten����o do Grau de Mestre em Engenharia Civil ��� Perfil de Constru����o

Efeitos da laquea����o proximal dos vasos curtos e da fundoplicatura total sobre a microcircula����o do fundo g��strico : estudo microvascular em cobaias

RESUMO: A opera����o de Nissen, por laparoscopia, �� considerada a cirurgia antirefluxo mais adequada por ser a que melhor replica a fisiologia normal da v��lvula gastresof��gica na maioria dos doentes com sintomas t��picos de doen��a do refluxo gastresof��gico (DRGE). S��o crit��rios t��cnicos o encerramento seguro dos pilares do diafragma e a cria����o de fundoplicatura completa (360 graus), curta (inferior a dois cent��metros), lassa e sem tens��o ��� desiderando para o qual a laquea����o proximal dos vasos curtos g��stricos �� crucial. Realizei a opera����o de Nissen, por laparoscopia, em sessenta mulheres e quarenta homens com DRGE, sem mortalidade operat��ria, no Servi��o de Cirurgia 6 do Hospital dos Capuchos, CHLC, EPE. Os cem doentes apresentavam m��dia et��ria de 46 anos e queixas, com tempo de evolu����o entre 1 e 43 anos, de pirose (90%), regurgita����o (80%), azia (73%), epigastralgias (54%). A endoscopia alta revelou esofagite de grau Savary-Miller 0-I (62%), II (23%), III (8%), IV (7%); h��rnia de deslizamento (71%), h��rnia paraesof��gica (8%), sem h��rnia (21%); a pHmetria de 24h diagnosticou padr��o misto (38%), levantado (20%), deitado (20%), inconclusiva (22%) e a manometria diagnosticou EEI hipot��nico (35%), perist��lise esof��gica normal (88%), hipomotilidade ligeira (5%) e foi omissa (7%). H��rnia hiatal, esofagite grave, inefic��cia do controlo sintom��tico com inibidor da bomba de prot��es e desejo de descontinuidade terap��utica constitu��ram as indica����es para tratamento cir��rgico. Por celioscopia, efetuei laquea����o dos vasos curtos g��stricos (70%), cruroplastia e fundoplicatura total (seda 2/0), curta (dimens��o m��dia 1,5-2 cm), lassa, sem tens��o e sem calibra����o intraoperat��ria do es��fago. A fundoplicatura de Nissen laparosc��pica mostrou-se segura e eficaz no tratamento da DRGE. A sua idoneidade foi ainda comprovada pela normaliza����o da pHmetria de 24 horas e da manometria p��s-operat��rias, com significado estat��stico, num grupo de catorze volunt��rios assintom��ticos. Em catamnese com recuo m��dio 30,7 meses 94% dos indiv��duos persistem assintom��ticos. Interrogando-me acerca das repercuss��es desta opera����o sobre a microcircula����o do fundo g��strico coloquei, como premissa, a possibilidade de na opera����o de Nissen a laquea����o dos vasos curtos poder induzir modifica����o no di��metro arteriolar da parede do fundo g��strico. Para pesquisar a influ��ncia da laquea����o dos vasos curtos g��stricos e da fundoplicatura total sobre o calibre arteriolar da parede do est��mago no c��rdia, no fundo e na regi��o dos vasos curtos g��stricos, idealizei um Projeto de investiga����o experimental em cobaias. O Projeto foi desenvolvido no Centro de Investiga����o do Departamento de Anatomia da FCM-UNL. Para a sua realiza����o obtive autoriza����o da Comiss��o Cient��fica e Pedag��gica da FCM-UNL, requeri a acredita����o como investigador �� Dire����o Geral de Veterin��ria e, por recorrer �� utiliza����o de animais, submeti-o �� Comiss��o de ��tica da FCM-UNL, que o aprovou por unanimidade. Para limitar o n��mero de animais utilizados ao m��nimo necess��rio, calculei, por m��todo estat��stico, a quantidade de cobaias necess��rias. Subdividindo-as num grupo de ensaio (GE), onde realizei a opera����o de Nissen, e num grupo de controlo (GC), onde apenas procedi a tra����o g��strica, defini e apliquei protocolos de anestesia, de cirurgia e de eutan��sia, segundo os princ��pios dos 3R ��� Replacement, Reduction, Refinement da t��cnica de experimenta����o humana de Russell e Burch (1959) ��� uma estrutura ��tica amplamente aceite para a realiza����o de experimenta����o cient��fica humanizada com animais. A utiliza����o das t��cnicas de estudo angiomorfol��gico permitiu-me analisar e descrever a anatomia normal, a vasculariza����o arterial macrosc��pica, a microangioarquitetura, por microscopia eletr��nica de varrimento de moldes de corros��o vascular, e a histologia da parede do est��mago da cobaia. Procedi, tamb��m, �� defini����o dos crit��rios morfol��gicos que considerei suscet��veis de valida����o deste modelo animal para o estudo proposto. Por raz��es acad��micas, foi necess��rio abreviar o Projeto encurtando, em cerca de dois anos, o prazo dispon��vel para conclus��o do estudo. Apreciando-o com o Gabinete de An��lise Epidemiol��gica e Estat��stica do Centro de Investiga����o do CHLC, EPE, optou-se, perante a escassez de elementos ap��s j�� terem sido recrutados 46 animais, por uma amostra, suplementar, de dimens��o de conveni��ncia de oito cobaias (quatro em cada grupo), condicionada pelo limite temporal universit��rio e pelo respeito pela dignidade dos animais. Neste subgrupo procedi, por microscopia eletr��nica de varrimento, �� medi����o dos calibres arteriolares nos moldes vasculares do c��rdia, do fundo e da zona dos vasos curtos g��stricos tanto no GC como no GE efetuando 469 medi����es no primeiro e 461 no ��ltimo. Os dados foram enviados ao Centro de Investiga����o do CHLC, EPE que procedeu �� sua an��lise estat��stica (ANOVA). A referida an��lise revelou que as arter��olas do plexo mucoso e as do plexo submucoso do c��rdia, do fundo e da regi��o dos vasos curtos g��stricos, mostraram aumento de calibre no GE. O aumento foi, estatisticamente, significativo por ser superior a 50% do calibre do GC. Nos vasos curtos, a diferen��a foi mais pequena, mas persistiu sendo, estatisticamente, significativa. Os vasos retos dilataram na base, na sua emerg��ncia do plexo seroso, apenas no fundo g��strico. Na cobaia a opera����o de Nissen ��� fundoplicatura total com laquea����o dos vasos curtos g��stricos ���, provocou vasodilata����o arteriolar do fundo g��strico. Considero que essa vasodilata����o constituiu acomoda����o �� modifica����o introduzida e infiro que o mesmo possa acontecer no ser humano. Admito, assim, que tamb��m ocorra vasodilata����o no ser humano, na sequ��ncia da laquea����o dos vasos curtos g��stricos, pela analogia microvascular entre as duas esp��cies e que essa vasodilata����o corresponda, igualmente, a um mecanismo de adapta����o arteriolar visando, por exemplo, suprir a perda incorrida pela laquea����o. A associa����o experimental entre laquea����o dos vasos curtos g��stricos e realiza����o de fundoplicatura total, que exerce aumento inerente de press��o sobre a JEG, n��o s�� n��o provocou d��fice da microcircula����o do es��fago distal ou do est��mago proximal como desencadeou um mecanismo de vasodilata����o f��ndica que refor��a o conceito de seguran��a da opera����o de Nissen para tratamento da DRGE. -------------- ABSTRACT: The laparoscopic Nissen operation is considered to be the most appropriate antirefluxsurgery because it suitably replicates the standard physiology of the gastroesophageal valve in most patients with typical symptoms of gastroesophageal reflux disease (GERD). The technical criteria includes the safe shutdown of the diafragmatic crura(cruroplasty) and the creation of a complete fundoplication (360 degrees), short (lesser than two inches), floppy and without tension ��� a goal for which the proximal ligation of the gastric short vessels is crucial. The laparoscopic Nissen operation was performed in sixty women and forty men with GERD, without any operative mortality, at the Surgical Department of the Hospital dos Capuchos, CHLC, EPE. The one hundred patients, averaged 46 years old, complained of heartburn (90%), regurgitation (80%) and upper abdominal pain (54 %). The endoscopy process revealed Savary-Miller esophagitis of grade 0-I (62%), II (23%), III (8%), IV (7%), sliding hernia (71%), paraesophageal hernia (8%) or no herniation (21%). The pHmetry/24h diagnosed mixed pattern (38%), raised (20%), lying (20%) or inconclusive (22%). The manometry diagnosed hypotensive LES (35%), normal esophageal peristalsis (88%), mild hypomotility (5%) and was absent (7%). Hiatal hernia, severe esophagitis, ineffective symptomatic control with proton pump inhibitor and request for treatment discontinuation were the signs for surgical action. A laparoscopic ligation of short gastric vessels (70%), cruroplasty and fundoplication (silk 2/0), short (average size 1.5���2 cm) and floppy, without tension and without intraoperative calibration of the esophagus were thus performed. The laparoscopic Nissen fundoplication behaved safe and effective in treating GERD. In a group of 14 asymptomatic volunteers its reputation was confirmed with statistical significance by normalization of postoperative pHmetry/24h and manometry. 94% of the individuals remained asymptomatic up to 30.7 months (average) in the follow-up. Interrogating myself about the impact of this operation on the microcirculation of the gastric fundus I put premised on the possibility of the ligation of the short gastric vessels in the Nissen procedure can induce changes in the arteriolar diameter in the Wall of the gastric fundus. To explore the influence of ligation of the short gastric vessels and the fundoplication at the arteriolar caliber of the cardia, the fundus and the region of the short vessels of the gastric wall, I designed a project of experimental research in guinea pigs with two interdependent components: one veterinary and another technical where I applied angiomorphological studies. The project was developed at the Research Centre of the Department of Anatomy FCMUNL. For its accomplishment I got permission from the Scientific and Pedagogical Committee of the FCM-UNL, I requested for accreditation as a researcher at the General Directorate of Veterinary and, by resorting to the use of animals I submitted it to the Ethics Committee of the FCM-UNL, which approved it unanimously. The guinea pigs were divided into two experimental groups: an experimental group (EG), in which the Nissen procedure was performed and a control group (CG) in which only a gastric traction was done. Protocols of anesthesia, surgery and euthanasia were applied according to the 3Rs ��� Replacement, Reduction, Refinement of the technique of human experimentation of Burch and Russell (1959) ��� a widely accepted ethical framework for conducting scientific experiments using animals humanely. Using histological and angiomorphological techniques, I performed the analysis and the description of the normal, macro and microvascular, anatomy of the guinea pig stomach and I defined the morphological criteria that I considered susceptible for validation of this animal model for the proposed study. By means of scanning electron microscopy I measured the arteriolar calibers of the vascular casts of the cardia, of the fundus and of the short gastric vessels in both CG and EG, making 469 measurements in the former and 461 in the latter. The data were sent to the Research Center of the CHLC which conducted the statistical analysis (ANOVA). The data were sent to the Centre for Research of the CHLC, EPE which proceeded to statistical analysis (ANOVA). This analysis revealed that the arterioles plexus of the mucosal and submucosal plexus of the cardia, fundus and region of the short gastric vessels, showed increased caliber in EG. The increase was statistically significant for being greater than 50% CG gauge. In the short gastric vessels, the difference was smaller, but persisted and statistically significant. Straight vessels were dilated at the base, on its emergence of the plexus serous only in the fundus. In the guinea pig, the Nissen procedure - complete fundoplication with ligation of the short gastric vessels - caused arteriolar vasodilation on the gastric fundus. I believe that this vasodilation constituted some accommodation to the modification introduced and infer that the same might happen in humans. I admit therefore that vasodilation also occurs in humans following the ligation of the short gastric vessels by microvascular analogy between the two species and that this vasodilation corresponds also to na adaptation mechanism arteriolar, for example, to compensate the loss incurred by ligation. The association of experimental ligation of the short gastric vessels with conducting complete fundoplication, which exerts increased pressure on the EGJ, not only did not cause a microcirculation deficit of the distal esophagus or proximal stomach as triggered a mechanism of fundic vasodilation which reinforces the security concept of the Nissen procedure for treatment of GERD.

Video interaction using pen-based technology

Disserta����o para obten����o do Grau de Doutor em Inform��tica

Desigualdades socioecon��micas em sa��de : 1987-2006 : estudo com base nos inqu��ritos nacionais de sa��de

RESUMO - Introdu����o: Apesar do investimento para garantir universalidade nos cuidados de sa��de, estudos em v��rios pa��ses mostram o aumento das desigualdades socioecon��micas em sa��de. Este estudo analisa estas desigualdades e a sua evolu����o em Portugal entre 1987 e 2006. Metodologia: Utilizou-se os dados dos quatro Inqu��ritos Nacionais de Sa��de (INS) elaborados at�� hoje excluindo as pessoas com menos de 35 anos (INS87 ��� 12126 casos; INS95- 15795 casos; INS98/9- 11726 casos; INS 05/6- 11318 casos). Foram analisados cinco indicadores de sa��de (hipertens��o, diabetes, asma, bronquite e m�� sa��de autoreportada). O estatuto socioecon��mico foi medido pela educa����o e rendimento. As diferen��as entre escal��es mediram-se pelos Odds Ratio (OR) obtidos atrav��s de regress��es log��sticas multivariadas. As vari��veis de ajustamento utilizadas foram: idade, tabagismo, obesidade e possuir um seguro de sa��de. Os resultados foram analisados separadamente por sexo. Resultados: Para todos os indicadores e inqu��ritos observou-se uma preval��ncia inferior nos grupos de educa����o e rendimento mais elevados (OR entre 0,155 e 0,877). No entanto, as desigualdades n��o foram significativas para o rendimento no caso da hipertens��o, diabetes e bronquite, no sexo masculino e em todos os inqu��ritos. Na educa����o verifica-se uma diminui����o das desigualdades ao longo do tempo na hipertens��o, diabetes e M�� Sa��de, no sexo masculino; no caso do rendimento observa-se o mesmo para a diabetes, asma e M�� sa��de, no sexo feminino. Discuss��o: Confirma-se a exist��ncia de desigualdades socioecon��micas no estado de sa��de favorecendo os escal��es mais elevados. A diminui����o das desigualdades na maioria dos indicadores analisados contraria a evid��ncia recente.

SIG Municipais aplicados a Levantamento de V��deo e Respectiva Georreferencia����o (Mobile Mapping) e Carregamento em Base de Dados SIG

Relat��rio de Est��gio apresentado para cumprimento dos requisitos necess��rios �� obten����o do grau de Mestre em Gest��o do Territ��rio, especializa����o em Detec����o Remota e Sistemas de Informa����o Geogr��fica

Contributo para o ensino de projecto para fabrico em engenharia mec��nica com base na estimativa de custos

Disserta����o para obten����o do Grau de Mestre em Engenharia Mec��nica

Development of population-specific function assessment intrument in Lebanon

RESUMO: Contexto: O funcionamento tem sido reconhecido como um dos principais indicadores de resultados para avaliar se as pessoas beneficiam das interven����es destinadas a melhorar a sua sa��de mental. O funcionamento refere-se �� forma como um indiv��duo consegue responder ��s suas tarefas e solicita����es, dos seus familiares e da sua comunidade, de acordo com os requisitos do local e a cultura em que vive (eg, tarefa de cozinhar e limpar para as mulheres em algumas culturas ). O funcionamento �� altamente dependente da cultura - por isso, tem sido recomendado o desenvolvimento de medidas de funcionamento espec��ficas de cada cultura. Desenvolver localmente os instrumentos de medida evita problemas de adequa����o, associados com a adapta����o de instrumentos ocidentais. Embora os instrumentos criados desta forma sejam espec��ficos de um meio cultural, eles s��o simultaneamente "transculturais", no sentido em que cada um se refere ��s tarefas mais importantes para a popula����o local . Esta abordagem mostrou-se ��til para investigadores e ag��ncias de ajuda (eg, ONGs) que trabalham em pa��ses n��o-ocidentais . Este estudo descreve o trabalho da ag��ncia International Medical Corps (IMC) na cria����o e valida����o de um question��rio de funcionamento espec��fico nas dimens��es cultura e g��nero, no L��bano, destinado a avaliar eventuais melhorias em pessoas que receberam interven����es de para problemas de sa��de mental, a n��vel dos cuidados prim��rios de sa��de. M��todo: O instrumento foi desenvolvido usando um m��todo que �� uma alternativa �� abordagem existente de adapta����o de instrumentos ocidentais a outras culturas e situa����es; esta abordagem �� r��pida e exequ��vel, tendo j�� demonstrado ser ��til no desenvolvimento de instrumentos v��lidos e fidedignos. Inicialmente, foi solicitado que as pessoas identificassem, de uma lista livre, as tarefas mais importantes para cuidar de si pr��prias, da sua fam��lia e da sua comunidade; as tarefas identificadas foram posteriormente usadas como base para um instrumento de avalia����o de funcionamento culturalmente v��lido. A partir daqui, foram desenvolvidos question��rios espec��ficos da comunidade em quest��o, posteriormente testados no terreno nas vertentes da validade (de conte��do, facial e de constructo) e da fiabilidade (teste-reste e inter-entrevistadores). Resultados. O estudo resultou na cria����o e valida����o de um question��rio de funcionamento espec��fico de cultura e g��nero capaz de medir efectivamente a capacidade de execu����o de tarefas importantes do quotidiano,como parte da avalia����o de resultados levada a cabo por profissionais da CSP previamente treinados na identifica����o, suporte e encaminhamento de pessoas com problemas de sa��de mental no L��bano. Conclus��o. Neste trabalho descreve-se o desenvolvimento de um question��rio de funcionamento espec��fico de cultura e g��nero, orientado para a avalia����o de resultados, num contexto mais lato de um sistema abrangente de avalia����o e monitoriza����o de um servi��o comunit��rio. --------------ABSTRACT: Background. Functioning has been recognized as one of the most important key outcomes to assess whether people benefit from interventions aimed to improve their mental health. Functioning refers to how well na individual can complete the tasks and demands for themselves, their family, and their community which are required by them depending on the setting and the culture they live in (e.g. task of cooking and cleaning for women in some cultures). Functioning is highly dependent on culture. Therefore, it has been recommended to develop culture-specific measures of function. Developing instruments locally avoids the problems of limited local relevance and appropriateness associate with adapting western instruments. Although each instrument created in this way is culturally bound, they are ���cross cultural��� in the sense that each refers to the tasks most important to local people. This approach proves useful for both researchers and aid agencies working in non-western countries. This study describes International Medical Corps��� (IMC) work in Lebanon to create and validate a culture and gender specific functioning questionnaire to assess improvements in people who received treatment interventions for mental health problems at the primary health care (PHC) level. Method. The measure was developed using a method that is an alternative to the existing approach of adapting western function instruments to other cultures and situations; an approach which has been demonstrated as rapid, feasible and which can yield valid and reliable instruments. Function was assessed by first asking local people what tasks are important to care for themselves, their family and their community using free listing, then using these tasks as the basis for a culturally valid function assessment instrument. Community specific function questionnaires based on these tasks were then created, and field-tested for validity using content, face and construct validity methods, and also field tested for reliability using inter-rater and test retest reliability methods. Results. The study resulted in the creation and validation of a culture and gender specific functioning questionnaire that would effectively measure the ability to do tasks important to daily existence, as part of assessing client level outcomes where PHC providers were trained in the identification, management and referral of people with mental health problems in Lebanon. Conclusion. The paper describes a successful pilot for developing culture and gender specific functioning questionnaires that evaluate client level outcomes as part of a more comprehensive system for monitoring and evaluation of community based case management supports and services.

Influ��ncia das condi����es operat��rias na s��ntese de adsorventes �� base de CaO com carv��o ativado na Captura de CO2.

Disserta����o para obten����o do Grau de Mestre em Engenharia Qu��mica e Bioqu��mica

Valida����o de metodologia para dete����o de Bacillus cereus em arroz e produtos �� base de cereais

Disserta����o para obten����o do Grau de Mestre em Tecnologia e Seguran��a Alimentar

Produ����o de matrizes �� base de quitosano para o tratamento de feridas

A pele �� o maior ��rg��o do corpo humano cuja fun����o �� comprometida pela ocorr��ncia de feridas. O tratamento de feridas representa uma frac����o consider��vel dos gastos em sa��de, sendo o desenvolvimento de novos m��todos de tratamento alvo de grande interesse. Uma das vertentes desta investiga����o �� a utiliza����o de novas mat��rias-primas na produ����o de dispositivos m��dicos(DM) para o tratamento de feridas. O quitosano �� um derivado da quitina, o segundo biopol��mero mais abundante. As propriedades biol��gicas do quitosano tornam-no um bom candidato �� produ����o de dispositivos m��dicos. Este trabalho teve como objectivo o desenvolvimento de DM para o tratamento de feridas �� base de quitosano. Foram desenvolvidos tr��s dispositivos: um hidrogel obtido a partir da coagula����o de uma solu����o de quitosano, uma matriz porosa por liofiliza����o, e uma matriz combinada de microfibras e nanofibras por fia����o h��mida e electrofia����o, respectivamente. Verificou-se que o quitosano acelera o processo de cicatriza����o de feridas, levando a uma diminui����o mais r��pida do seu tamanho quando comparado com o tratamento tradicional e uma reepiteliza����o compat��vel com um processo de regenera����o adequado. O melhor desempenho no tratamento de feridas foi obtido com a utiliza����o da matriz combinada pela conjuga����o das propriedades biol��gicas do quitosano com a elevada ��rea superficial das nanofibras. Neste trabalho foram comparados pela primeira vez em paralelo tr��s produtos �� base de quitosano com caracter��sticas distintas como DM para o tratamento de feridas. O sucesso da concep����o e desenvolvimento do hidrogel e da matriz porosa de quitosano permitiu a sua certifica����o e industrializa����o com os nomes comerciais HidroKi�� e AbsorKi��, respectivamente. Concluiu-se que o quitosano �� um material adequado �� produ����o de DM inovadores e que pode ser manipul��vel em estruturas para diferentes aplica����es.

Produ����o de cimentos ��sseos �� base de fosfato de c��lcio

Os cimentos fosfato de c��lcio (CPC) t��m vindo a despertar cada vez mais interesse por apresentarem vantagens em rela����o a outros materiais, tais como o cimento acr��lico ou os blocos cer��micos, usualmente utilizados na repara����o ��ssea. Estes s��o constitu��dos por um ou mais fosfato de c��lcio, e uma solu����o l��quida, originando uma pasta que endurece rapidamente, e que resulta num material cristalino, biocompat��vel e osteocondutor. O objectivo deste estudo foi investigar algumas das propriedades de um novo CPC �� base de ��-Fosfato tric��lcico (��-TCP) que se caracteriza por incluir na sua fase l��quida, al��m de um ��cido carbox��lico, um aditivo polim��rico, o hidroxipropilo quitosano (HPCS), cuja s��ntese foi optimizada por varia����o dos par��metros temperatura e dura����o da reac����o. As propriedades mec��nicas e de manuseio, assim como o produto final do CPC foram estudados efectuando-se testes de compress��o, flex��o, tempo de presa, injectabilidade e difrac����o de raios-X (DRX). Al��m disto investigou-se o comportamento in vitro e in vivo realizando-se testes de citotoxicidade e implantando-se o CPC no f��mur de 8 coelhos durante um per��odo de 4 meses. Verificou-se que o CPC produzido neste trabalho �� um cimento de brushite, que endurece em 10 min, conferindo tempo suficiente para a coloca����o da pasta numa seringa e sua f��cil injec����o, e que apresenta uma resist��ncia �� compress��o at�� 9MPa e flex��o at�� 6MPa, sendo por isso aceit��vel para aplica����es cir��rgicas, em locais n��o sujeitos a grandes tens��es. Por outro lado verificou-se que apesar da sua aparente toxicidade este �� bem tolerado in vivo, resultando num material biocompat��vel.

Caracteriza����o de m��ltiplos polimorfismos de Pneumocystis Jirovecii por multiplex-PCR/Single base extension

Pneumocystis jirovecii �� conhecido por causar infec����es espec��ficas no aparelho respirat��rio de seus hospedeiros, principalmente em doentes imunocomprometidos, manifestando-se por uma pneumonia grave e por vezes fatal, normalmente designada por pneumonia por Pneumocystis. A caracteriza����o da diversidade gen��tica de P. jirovecii tem demonstrado que determinados polimorfismos de base ��nica poder��o ser reconhecidos como marcadores moleculares de elei����o para o estudo da distribui����o geogr��fica, vias de transmiss��o, resist��ncia/susceptibilidade a f��rmacos, factores de virul��ncia e gen��tica populacional de subtipos gen��ticos. Este estudo teve como objectivo a caracteriza����o de polimorfismos de P. jirovecii, atrav��s da metodologia PCR multiplex/Extens��o de base ��nica (do ingl��s single base extension), com a principal finalidade de constatar eventuais associa����es entre polimorfismos de base ��nica, gen��tipos multilocus, e dados cl��nicos e demogr��ficos da infec����o. Sessenta e seis esp��cimes pulmonares, previamente considerados positivos para P. jirovecii, obtidos entre 2001 e 2012, a partir de doentes portugueses imunocomprometidos, foram seleccionados de forma aleat��ria para este estudo multilocus. PCR multiplex foi utilizada para a amplifica����o simult��nea de tr��s regi��es gen��micas: subunidade grande do rRNA mitocondrial, super��xido dismutase e dihidropteroato sintetase. Cinco polimorfismos de base ��nica, previamente correlacionados com par��metros da doen��a, foram genotipados por extens��o de base ��nica: mt85, SOD110, SOD215, DHPS165 e DHPS171. Um total de 330 polimorfismos de base ��nica e 29 gen��tipos multilocus putativos de P. jirovecii foram identificados e caracterizados nos esp��cimes pulmonares analisados. Os padr��es de distribui����o dos polimorfismos foram analisados, sendo considerada a varia����o temporal e/ou geogr��fica das suas formas al��licas. Constatou-se grande diversidade genot��pica entre os isolados de P. jirovecii que poder�� ter influ��ncia a n��vel epidemiol��gico. Foram observadas associa����es estat��sticas entre mt85/gen��tipos multilocus e par��metros demogr��ficos e cl��nicos. A correla����o mais importante verificou-se entre mt85C e cargas parasit��rias baixas a moderadas, enquanto mt85T foi associado com cargas parasit��rias altas; MLG5, MLG9 e MLG13 foram associados com cargas parasit��rias baixas, moderadas e altas, respectivamente. Tais associa����es demonstram que potenciais marcadores moleculares da infec����o por P. jirovecii poder��o existir e que polimorfismos/gen��tipos espec��ficos poder��o determinar perfis epidemiol��gicos da pneumonia por Pneumocystis. A an��lise gen��tica cruzada permitiu verificar associa����es entre polimorfismos de base ��nica. Os polimorfismos SOD110T e SOD215C, SOD110C e SOD215T, DHPS165A e DHPS171C, DHPS165G e DHPS171T foram associados estatisticamente. Os gen��tipos multilocus mais prevalentes foram considerados para o teste recombinat��rio d1. Dois gen��tipos multilocus (MLG7 e MLG9) foram observados com elevada frequ��ncia, e a an��lise gen��tica indicou que estes se encontravam sobre-representados na popula����o de P. jirovecii estudada. Estas evid��ncias indicam que o fen��meno de desequil��brio de liga����o e a propaga����o clonal de subtipos gen��ticos �� frequente, considerando que a esp��cie P. jirovecii poder�� ser representada por uma popula����o com estrutura epid��mica. O presente trabalho confirmou a import��ncia do estudo de polimorfismos em P. jirovecii, sugerindo que a caracteriza����o multilocus poder�� fornecer informa����o relevante para a compreens��o dos padr��es, causas e controlo da infec����o, melhorando assim a investiga����o deste importante patog��neo.