150 resultados para Detecção e diagnóstico de avarias
Resumo:
Onicomicose ou infeco fngica das unhas das mos ou dos ps pode ser provocada por fungos que invadem primariamente a lmina ungueal saudvel. Embora existam outros agentes, como por exemplo bactrias, que podem causar infeces ungueais, as infeces causadas por fungos so mais frequentes e so consideradas uma das principais onicopatias do homem. Os efeitos psicolgicos e emocionais que resultam dos aspectos clnicos da onicomicose podem ser marcantes e ter um impacto significativo na qualidade de vida dos portadores. uma doena com grande potencial crnico associada a uma sria dificuldade teraputica, sendo estes os principais factores agravantes do seu prognstico. Conforme a extenso do comprometimento e a poro da unha envolvida na onicomicose, a infeco causada por fungos pode ser classificada em 5 tipos: onicomicose subungueal distal e lateral, onicomicose superficial leitosa, onicomicose subungueal proximal, onicomicose com distrofia total e onicomicose por candidose. So causadas por diferentes agentes etiolgicos sendo que os mais comuns so os fungos dermatfitos (80 a 90%), seguidos pelas leveduras (5 a 17%) e fungos filamentosos no dermatfitos (2 a 12%). Neste trabalho foram estudadas 54 amostras recolhidas de unhas de doentes com hiptese clnica de onicomicose, das quais 25,93% (14/54) pertenciam a indivduos do sexo masculino e 74,07% (40/54) a indivduos do sexo feminino. As tcnicas convencionais de diagnóstico so morosas e muitas vezes de difcil caracterizao a nvel fenotipico, o que condiciona grandemente a implementao da teraputica adequada. O presente trabalho teve como principal objectivo a aquisio de conhecimentos que permitissem um correcto diagnóstico micolgico das onicomicoses, atravs do isolamento e identificao das espcies de fungos causadoras de infeco. De uma forma global, consistiu inicialmente no isolamento e posteriormente na identificao dos agentes etiolgicos de onicomicoses, utilizando para tal metodologias convencionais e moleculares. Foi realizado o diagnóstico laboratorial baseado no exame directo e na cultura de fragmentos de unhas provenientes de doentes com infeco. Paralelamente, foi extrado o DNA fngico das mesmas amostras clnicas que, aps amplificao da regio ITS dos genes ribossmicos foi utilizado para confirmao e comparao dos resultados. Foi igualmente estudada a ocorrncia de fungos no dermatfitos responsveis por onicomicose. Os mtodos moleculares de diagnóstico podem no s constituir uma alternativa mais rpida de diagnóstico micolgico como tambm, por serem mais sensveis, permitir a detecção de espcies que, por serem de crescimento fastidioso, no se desenvolvem em cultura.
Resumo:
Dissertao apresentada para obteno do Grau de Doutor em Nanotecnologias e Nanocincias pela Universidade Nova de Lisboa, Faculdade de Cincias e Tecnologia.
Resumo:
Mycobacterium tuberculosis o agente etiolgico da tuberculose em humanos e segundo as estimativas da Organizao Mundial da Sade, um tero da populao mundial est infectada com esta bactria, calculando-se que no ano de 2008 aproximadamente 9,4 milhes de pessoas contraram tuberculose activa. Associada a esta tendncia, encontra-se o aumento alarmante da incidncia de tuberculose resistente aos antibiticos, mais propriamente da tuberculose multirresistente e extensivamente resistente. Nesta Dissertao estudaram-se trs sistemas de detecção molecular (INNO-LiPA Rif. TB, Innogenetics, Ghent, Blgica, MTBDRplus e MTBDRsl, GenoType, GmbH, Nehren, Alemanha), que permitem detectar o complexo M. tuberculosis e as mutaes mais comuns associadas resistncia aos antibiticos de primeira e segunda linha. Para o efeito, na primeira parte do trabalho os trs sistemas em estudo foram testados em 21 isolados clnicos pertencentes coleco do Laboratrio de Micobactrias do Instituto de Higiene e Medicina Tropical (IHMT, UNL), com o propsito de avaliar a sua capacidade para identificar o complexo M. tuberculosis e detectar mutaes ligadas resistncia aos frmacos de primeira e segunda linha. Na segunda parte do trabalho, os sistemas INNO-LiPA Rif. TB e MTBDRplus foram testados em 33 amostras respiratrias com baciloscopia positiva, com o propsito de aferir a performance destes sistemas para a detecção directa de tuberculose multirresistente em amostras respiratrias. Na primeira parte do trabalho os trs sistemas em estudo apresentaram elevada sensibilidade na identificao do complexo M. tuberculosis em culturas, bem como na detecção de mutaes ligadas resistncia aos antibiticos de primeira linha, com excepo do etambutol. No que diz respeito detecção da resistncia aos antibiticos de segunda linha, no foi possvel calcular os valores de sensibilidade e especificidade. Na segunda parte do trabalho, o INNO-LiPA Rif. TB demonstrou ser o sistema mais robusto para a anlise directa de amostras respiratrias com baciloscopia positiva, para um diagnóstico precoce de tuberculose e detecção de resistncia rifampicina. O MTBDRplus no se mostrou uma alternativa vivel ao INNO-LiPA Rif. TB, pois apresentou baixa sensibilidade para a identificao do complexo M. tuberculosis e vrios problemas no passo de amplificao. O MTBDRsl no foi testado, por no ter sido detectada nenhuma amostra multirresistente.
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Dissertao apresentada para a obteno do Grau de Mestre em Gentica Molecular e Biomedicina, pela Universidade Nova de Lisboa, Faculdade de Cincias e Tecnologia
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Dissertao para a obteno do Grau de Mestre em Gentica Molecular e Biomedicina
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Dissertao para obteno do Grau de Mestre em Engenharia Biomdica
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Dissertao para obteno do Grau de Mestre em Engenharia Biomdica
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Dissertao para obteno do Grau de Mestre em Engenharia Biomdica
Resumo:
Cryptosporidium parvum um protozorio intracelular, de distribuio ubiquitria, que causa enterite em humanos e animais. A diarreia autolimitada em indivduos imunocompetentes, podendo ser fatal em imunocomprometidos. Actualmente no existem teraputicas especficas ou preventivas disponveis, e o elevado custo dos actuais mtodos de diagnóstico, sustentam a importncia do desenvolvimento de novas abordagens. Vrios estudos salientam a importncia das clulas T CD4+ na resposta imunitria infeco por C. parvum; outros direccionam a sua ateno para as clulas reguladoras (Treg); e outros tentam esclarecer qual o papel das citocinas especficas produzidas pelas clulas Th1 e Th2, na regulao da resposta imune, acompanhada pela produo de imunoglobulinas particulares. Na rea do diagnóstico, vrios e diferentes mtodos tm sido utilizados, variando entre a rapidez de execuo, especificidade e custo. Vrias questes colocam-se, relacionadas com as caractersticas das clulas envolvidas na resposta infeco e com a especificidade/sensibilidade de cada tcnica. Com o objectivo de estudar a resposta imunitria de longo-termo infeco por C. parvum, no modelo animal imunocompetente, murganhos Balb/c foram inoculados por via oral com oocistos de C. parvum, e efectivadas colheitas e anlise de amostras fecais, intestino, sangue e bao, segundo um protocolo previamente definido. A caracterizao das populaes celulares do sangue e bao foi feita por citometria de fluxo e a identificao e quantificao de imunoglobulinas e citocinas no soro, por tecnologia xMAP Luminex. A anlise por citometria de fluxo no revelou diferenas estatisticamente significativas entre os murganhos infectados e os controlos, tendo sido apenas observado um aumento do nmero de neutrfilos e eosinfilos circulantes, e a sua posterior diminuio, no primeiro grupo de murganhos. Associada elevada variabilidade observada aps a reinfeco, tais variaes so sugeridas como sendo o perfil exibido por estas populaes de clulas no contexto de infeco por C. parvum no organismo imunocompetente, particularmente os eosinfilos, que apresentam um comportamento idntico em infeco por outros parasitas. O aumento da secreo de TNF- e IFN- (citocinas Th1) nos murganhos infectados, comparativamente com os grupos controlo, para alm da secreo de citocinas Th2, como IL-4, IL-5 e IL-10, aps a reinfeco, sugere um balano entre as respostas Th1, para controlar o crescimento do parasita, e Th2, para limitar a patologia. A IgG1 foi o isotipo predominante ao longo de toda a infeco e reinfeco, tendo-se observado um pico de IgG2a aps a reinfeco, seguido de diminuio. Esta variao poder estar relacionada com a funo da IgG1 e da IgG2a, ao nvel da opsonizao e neutralizao dos agentes patognicos, respectivamente. A obteno de hibridomas secretores de anticorpos especficos para antignios de C. parvum, por fuso celular, permitiu obter anticorpos e testar a sua aplicao detecção de oocistos de C. parvum, em amostras fecais humanas e de animais (bovinos). Em resumo, os resultados obtidos permitem sugerir o perfil de imunoglobulinas e citocinas envolvido na resposta infeco por C. parvum no modelo roedor imunocompetente, assim como desenvolver um futuro kit para detecção de C. parvum em amostras biolgicas, por tcnicas de imunofluorescncia
Resumo:
Dissertao apresentada para a obteno do Grau de Mestre em Gentica Molecular e Biomedicina, pela Universidade Nova de Lisboa, Faculdade de Cincias e Tecnologia
Resumo:
A pneumonia por Pneumocystis jirovecii (PPc) uma das principais causas de morte em doentes imunocomprometidos, revestindo-se assim de elevado interesse o diagnóstico precoce desta infeco, por forma a instaurar a teraputica adequada. Actualmente, os meios laboratoriais de diagnóstico baseiam-se fundamentalmente na detecção directa deste microrganismo nas secrees pulmonares dos doentes, o que implica a realizao de procedimentos invasivos. nessa perspectiva que surge o doseamento do -glucano no soro de doentes com presumvel infeco, uma vez que, este composto um dos principais componentes da parede dos quistos de P. jirovecii. Neste estudo procedeu-se ao doseamento do -glucano em amostras de soro de 66 indivduos e verificou-se que, nos 47 indivduos que confirmaram o diagnóstico de PPc, a mediana de -glucano obtida foi de 314,5 pg/mL, enquanto nos restantes 19 foi de 63,7 pg/mL. Estatisticamente obteve-se uma forte correlao entre nveis elevados de -glucano no soro de doentes e a presena de infeco por P. jirovecii. Em relao ao diagnóstico clnico, os resultados obtidos demonstraram correlao entre um diagnóstico clinico sugestivo de PPc e nveis elevados de -glucano no soro. Constatou-se ainda que, para a infeco por P. jirovecii o cut-off que apresentou melhores resultados para o teste Fungitell situa-se nos 100 pg/mL, obtiveram-se resultados de sensibilidade de 89% e especificidade de 74%. Estudos preliminares apontaram para o facto de nveis elevados de -glucano no soro corresponderem a nveis elevados de parasitmia e uma evoluo clnica negativa da doena.
Resumo:
A Leptospirose um problema emergente na Sade Pblica, devido s suas propores epidemiolgicas e pelo aumento da incidncia da doena em pases industrializados e em desenvolvimento (Meites et al., 2004). A doena tem uma ampla distribuio geogrfica e ocorre com maior frequncia nas zonas tropicais, subtropicais e temperadas (Vijayachari et al., 2008). Contudo, em algumas regies desconhece-se a verdadeira prevalncia, sendo reportada atravs de surtos espordicos (Pappas et al., 2007). As manifestaes clnicas inespecficas da infeco podem ser subdiagnosticadas nas regies tropicais, onde as doenas febris so comuns e onde podem ser confundidas com doenas mais conhecidas como a Malria, Hepatite Viral, Dengue e outras. Em Angola, o diagnóstico realizado apenas atravs da histria do paciente e suspeita clnica, dando origem a diagnósticos pouco precisos. Deste modo, importante o uso de mtodos laboratoriais, especialmente testes serolgicos especficos, para a confirmao do diagnóstico clnico (Levett, 2001). O objectivo principal deste estudo foi investigar a ocorrncia de Leptospirose humana em Lobito (Provncia de Benguela) e identificar os serovares circulantes de Leptospira interrogans sensu lato (s.l.), utilizando tcnicas serolgicas e moleculares. Entre Abril e Junho de 2011, aps o necessrio consentimento informado, fez-se um inqurito clnico-epidemiolgico a 141 pacientes (64 homens e 77 mulheres) assistidos no Hospital Geral do Lobito, por cefaleias e febre com diagnóstico desconhecido, dos quais se colheram 141 amostras sricas e 36 amostras de urina. A avaliao serolgica foi inicialmente feita no laboratrio local atravs da Tcnica de Aglutinao Macroscpica sobre Lmina (MACROLepto) teste de rastreio - e, posteriormente confirmada pela Tcnica de Aglutinao Microscpica (TAM) - teste de referncia - realizado no Laboratrio de Leptospirose (IHMT, em Lisboa). Para a detecção de DNA de Leptospira utilizou-se a Reaco da Polimerase em Cadeia (PCR) com primers baseados no gene hap 1. Procedeu-se ainda sequenciao dos produtos da PCR. As principais manifestaes clnicas foram: cefaleias (73,8%), febre (65,2%), mialgias (41,1%) e nuseas (33,3%). Dos dados epidemiolgicos observou-se que 131 dos pacientes tiveram contacto com os principais reservatrios de leptospiras, os roedores, e 76 ingeriram gua no potvel. Os resultados serolgicos revelaram no teste MACROLepto: 14 (10%) amostras positivas e 18 (13%) no-conclusivas, sendo os serogrupos Icterohaemorrhagiae (Copenhageni), Australis (Bratislava) e Sejroe os mais comuns. Destas amostras, cinco, foram confirmadas pela TAM (presena de aglutininas anti L. interrogans s.l.). Paralelamente, o DNA de Leptospira foi detectado em 13+/81 (16%) das amostras sricas e numa amostra de urina. A sequenciao identificou os serovares Copenhageni e Lai, ambos pertencentes ao serogrupo Icterohaemorrhagiae da espcie genmica L. interrogans. Os resultados obtidos mostraram que a maioria dos pacientes, mesmo aqueles que praticavam actividades de menor risco epidemiolgico, tiveram contacto com roedores e com guas no potveis. O estudo tambm provou que a Leptospirose afectou sobretudo as mulheres adultas, admitindo-se que este achado possa ser comum noutras regies do Pas. Por ltimo, ficou demonstrada a existncia de Leptospirose na regio, o que poder contribuir para a incluso da doena na lista de doenas febris em Angola e noutros pases tropicais.
Resumo:
O objectivo deste projeto consiste na elaborao de uma estratgia de comercializao para uma tira de teste electroqumica para detecção quantitativa da concentrao de glucose no sangue, visando o diagnóstico e a monitorizao da diabetes mellitus. O dispositivo baseia-se na tecnologia da microfludica em papel e encontra-se em fase de desenvolvimento laboratorial no Centro de Investigao de Materiais da Universidade Nova de Lisboa (CENIMAT). A estratgia elaborada foi desenvolvida para o mercado mexicano, aps ter sido realizada uma anlise comparativa entre os seis pases do mundo com maior nmero de casos de pessoas portadoras de diabetes mellitus (a China, a ndia, os Estados Unidos da Amrica, o Brasil, a Rssia e o Mxico). A comercializao das tiras de teste neste mercado iniciar em 2016 e depender da criao de uma start-up, a Diagnostic Medical Solutions (DMS), que ser responsvel pelo desenvolvimento das operaes relacionadas com a produo, marketing, atividade jurdica e financeira. Numa primeira fase, a executar em 2015, a DMS estabelecer uma parceria com o centro de investigao CENIMAT com o objectivo de desenvolver a investigao das tiras de teste at garantir o nvel de qualidade necessria para a introduo no mercado. No decorrer deste trabalho realizou-se uma estimativa para o custo de produo das tiras de teste em substrato de papel e props-se um preo de comercializao entre 3 a 5 vezes mais barato que o praticado entre os principais competidores diretos existentes no mercado mexicano. Foi ainda definida uma estratgia de entrada no mercado e, por forma a sustentar todas as operaes comerciais adoptadas, foi elaborado um plano financeiro que reflete o modelo de negcio desenvolvido. O projeto requer um investimento inicial de 400 000, com um perodo de reembolso de, aproximadamente 2 ano e um retorno esperado, aps 6 anos de atividade, 11 vezes superior ao investimento inicial.
Resumo:
Este trabalho foi realizado no mbito do projecto Lab on Paper, desenvolvido no Centro de Investigao de Materiais (CENIMAT) da Faculdade de Cincias e Tecnologia da Universidade Nova de Lisboa (FCT - UNL)
Resumo:
Sendo a malria uma doena infecciosa que pe em risco uma elevada percentagem da populao mundial, a presente dissertao apresenta o desenvolvimento de um teste de diagnóstico rpido (RDT) para a detecção da infeco. Para a detecção dos antignios de Plasmodium falciparum (Pf), parasita da malria, foram estudadas nanopartculas de ouro (AuNPs) com dois dimetros mdios diferentes, 17nm e 48nm, funcionalizadas e conjugadas com anticorpos especficos, formando os bionanoconjugados. Este trabalho abrange dois focos de investigao, interligados, de forma a atingir-se o objectivo prosposto: i) Caracterizao fsico-quimica das AuNPs e dos bionanoconjugados em soluo, usando a espectrocopia de UV-Visvel, variando a fora inica e o pH do meio. A compreenso do comportamento e estabilidade das partculas consoante o seu dimetro e revestimento tem em vista o melhoramento do RDT, tanto em sensibilidade como em custo; ii) Desenvolvimento do RDT usando um mtodo que envolve uma ligao competitiva entre o antignio e o anticorpo especfico imobilizado superfcie das AuNPs. Os antignios correspondem a biomarcadores da presena de Pf: Heat Shock Protein 70 (PfHsp70) e Histidine Rich Protein II (PfHRPII). Como superfcies para o desenvolvimento do RDT foram usados a nitrocelulose e o papel de filtro. Quanto maior o dimetro das AuNPs, maior a estabilidade apresentada em soluo quando aumentada a fora inica. Quando variado o valor de pH do meio, as partculas adoptam um comportamento dependente do seu revestimento, independente do dimetro. Os bionanoconjugados formados com AuNPs de ambos os dimetros revelaram-se muito estveis em soluo, numa gama de foras inicas de 0 a 0,5M de cloreto de sdio, e de pH de 2 a 7. Uma vez que a protena Hsp70 produzida constitutivamente em diversas clulas humanas, necessrio trabalhar com protenas especficas da infeco, que nesta dissertao foi a PfHRPII. Foram efectuados testes no suporte de nitrocelulose que provaram o reconhecimento da PfHRPII pelos bionanoconjugados AuNPs-MUA-anti-PfHRPII. Estes ensaios necessitam ainda de algumas optimizaes. Ensaios de Western-Blot permitiram a identificao da presena da PfHRPII em culturas infectadas, bem como a confirmao da sua ligao ao anticorpo especfico, anti-PfHRPII. Um novo mtodo de revelao introduzido nesta tcnica, efectuado atravs do uso dos bionanoconjugados. Este mtodo mostrou-se promissor na medida em que rpido, especfico e de baixo custo. O principal contributo do trabalho consistiu no desenvolvimento, com sucesso, de um RDT para diagnóstico de malria, usando o antignio PfHsp70, tendo como base a detecção colorimtrica com AuNPs de 17nm de dimetro. Usando uma tira de nitrocelulose foi estabelecido um limite de detecção correspondente a 1600parasitas/L, valor este considerado vlido pela OMS para um correcto diagnóstico de malria. O limite de detecção obtido para as AuNPs de 48nm foi superior, no tendo trazido melhorias para o teste desenvolvido com AuNPs de menor dimetro.
