Monocyte urokinase-type plasminogen activator up-regulation reduces thrombus size in a model of venous thrombosis

Background - Our previous studies showed that the direct injection of an adenovirus construct expressing urokinase-type plasminogen activator (uPA) into experimental venous thrombi significantly reduces thrombus weight. The systemic use of adenovirus vectors is limited by inherent hepatic tropism and inflammatory response. As macrophages are recruited into venous thrombi, it is reasonable to speculate that these cells could be used to target the adenovirus uPA (ad-uPA) gene construct to the thrombus. The aims of this study were to determine whether macrophages transduced with ad-uPA have increased fibrinolytic activity and whether systemic injection of transduced cells could be used to target uPA expression to the thrombus and reduce its size. Methods - The effect of up-regulating uPA was examined in an immortalized macrophage cell line (MM6) and macrophages differentiated from human blood monocyte-derived macrophages (HBMMs). Cells were infected with ad-uPA or blank control virus (ad-blank). Fibrinolytic mediator expression, cell viability, and cytokine expression were measured by activity assays and enzyme-linked immunosorbent assays. Monocyte migration was measured using a modified Boyden chamber assay. A model of venous thrombosis was developed and characterized in mice with severe combined immunodeficiency (SCID). This model was used to study whether systemically administered macrophages over-expressing uPA reduced thrombus size. Uptake of HBMMs into the thrombus induced in these mice was confirmed by a combination of PKH2-labeled cell tracking and colocalization with human leukocyte antigen (HLA) by immunohistology. Results - Compared with ad-blank, treated HBMMs transduction with ad-uPA increased uPA production by >1000-fold (P = .003), uPA activity by 150-fold (P = .0001), and soluble uPA receptor (uPAR) by almost twofold (P = .043). Expression of plasminogen activator inhibitor (PAI-1) and PAI-2 was decreased by about twofold (P = .011) and threefold (P = .005), respectively. Up-regulation of uPA had no effect on cell viability or inflammatory cytokine production compared with ad-blank or untreated cells. Ad-uPA transduction increased the migration rate of HBMMs (about 20%, P = .03) and MM6 cells (>twofold, P = .005) compared with ad-blank treated controls. Human macrophage recruitment into the mouse thrombus was confirmed by the colocalization of HLA with the PKH2-marked cells. Systemic injection of uPA-up-regulated HBMMs reduced thrombus weight by approximately 20% compared with ad-blank (P = .038) or sham-treated controls (P = .0028). Conclusion - Transduction of HBBM with ad-uPA increases their fibrinolytic activity. Systemic administration of uPA up-regulated HBBMs reduced thrombus size in an experimental model of venous thrombosis. Alternative methods of delivering fibrinolytic agents are worth exploring.

A deimmunised form of the ribotoxin, α-sarcin, lacking CD4+ T cell epitopes and its use as an immunotoxin warhead

Fungal ribotoxins that block protein synthesis can be useful warheads in the context of a targeted immunotoxin. α-Sarcin is a small (17 kDa) fungal ribonuclease produced by Aspergillus giganteus that functions by catalytically cleaving a single phosphodiester bond in the sarcin–ricin loop of the large ribosomal subunit, thus making the ribosome unrecognisable to elongation factors and leading to inhibition of protein synthesis. Peptide mapping using an ex vivo human T cell assay determined that α-sarcin contained two T cell epitopes; one in the N-terminal 20 amino acids and the other in the C-terminal 20 amino acids. Various mutations were tested individually within each epitope and then in combination to isolate deimmunised α-sarcin variants that had the desired properties of silencing T cell epitopes and retention of the ability to inhibit protein synthesis (equivalent to wild-type, WT α-sarcin). A deimmunised variant (D9T/Q142T) demonstrated a complete lack of T cell activation in in vitro whole protein human T cell assays using peripheral blood mononuclear cells from donors with diverse HLA allotypes. Generation of an immunotoxin by fusion of the D9T/Q142T variant to a single-chain Fv targeting Her2 demonstrated potent cell killing equivalent to a fusion protein comprising the WT α-sarcin. These results represent the first fungal ribotoxin to be deimmunised with the potential to construct a new generation of deimmunised immunotoxin therapeutics.

Immunologically silent cancer clone transmission from mother to offspring

Rare cases of possible materno-fetal transmission of cancer have been recorded over the past 100 years but evidence for a shared cancer clone has been very limited. We provide genetic evidence for mother to offspring transmission, in utero, of a leukemic cell clone. Maternal and infant cancer clones shared the same unique BCR-ABL1 genomic fusion sequence, indicating a shared, single-cell origin. Microsatellite markers in the infant cancer were all of maternal origin. Additionally, the infant, maternally- derived cancer cells had a major deletion on one copy of chromosome 6p that included deletion of HLA alleles that were not inherited by the infant (i.e., foreign to the infant), suggesting a possible mechanism for immune evasion.

Proprioception in ankle sprain from exercises and bandages

Ankle sprains are the most common injuries in sports, usually causing damage to the lateral ligaments. Recurrence has as usual result permanent instability, and thus loss of proprioception. This fact, together with residual symptoms, is what is known as chronic ankle instability, CAI, or FAI, if it is functional. This problem tries to be solved by improving musculoskeletal stability and proprioception by the application of bandages and performing exercises. The aim of this study has been to review articles (meta-analisis, systematic reviews and revisions) published in 2009-2015 in PubMed, Medline, ENFISPO and BUCea, using keywords such as “sprain instability”, “sprain proprioception”, “chronic ankle instability”. Evidence affirms that there does exist decreased proprioception in patients who suffer from CAI. Rehabilitation exercise regimen is indicated as a treatment because it generates a subjective improvement reported by the patient, and the application of bandages works like a sprain prevention method limiting the range of motion, reducing joint instability and increasing confidence during exercise. As podiatrists we should recommend proprioception exercises to all athletes in a preventive way, and those with CAI or FAI, as a rehabilitation programme, together with the application of bandages. However, further studies should be generated focusing on ways of improving proprioception, and on the exercise patterns that provide the maximum benefit.

Células madre mesenquimales orales: estado del arte en Odontología

Desde la organogénesis y hasta estadios adultos, las células madre mesenquimales participan activamente dando origen y manteniéndola homeostasis del organismo. En la cavidad oral han sido aisladas desde variadas estructuras del órgano dental tales como el ligamento periodontal, pulpa dental, tejido gingival, folículo dental y papila apical significando una prometedora fuente de células madre mesenquimales las que pueden ser caracterizadas de acuerdo a los criterios mínimos establecidos por "The International Society for Cellular Therapy" que son: a) La adherencia al plástico; b) La expresión de marcadores CD73, CD90, CD105 y la carencia de CD34, CD45, CD14, CD11, CD79, CD19 y HLA-DR (clase II); c) Capacidad multipotencial de diferenciación hacia linaje osteogénico, condrogénico y adipogénico. El objetivo de esta revisión consiste en realizar un levantamiento de la situación actual de este tema efectuando una revisión comprensiva de la literatura en los campos de; identificación a través demarcadores de superficie, aislamiento por medio de mecanismos de digestión enzimática o explante, almacenamiento atendiendo a la necesidad de suprimir el uso de suero fetal bovino como medio de cultivo en un esfuerzo por avanzar hacia aplicaciones terapéuticas, banca o criopreservación destacando nuevas experiencia en este campo como lo es la criopreservación de piezas dentales completas gracias a la tecnología láser Nd:YAG. Y, finalmente, las aplicaciones clínicas que promete este grupo de células a través de la medicina regenerativa y la ingeniería tisular tanto en el campo de la odontología como la medicina general.

A infecção por Leishmania infantum chagasi altera o metabolismo lipídico do hospedeiro

American visceral leishmaniasis (AVL), caused by Leishmania infantum chagasi (L.i.chagasi), stands as a public health problem in Brazil, with human and canine cases related in all states..Lipid metabolism can be modified in several status of infection. For example, experimental studies show that the cholesterol is necessary to internalization and replication of L.i.chagasi in macrophages through caveolar domains. Patients with AVL present low levels of cholesterol and a visible triglycerides increase. This work aimed to evaluate the lipid metabolism in several post-infection status by L.i.chagasi, including individuals with symptomatic infection (AVL), and asymptomatic. The levels of cholesterol, triglycerides, HDL and reactive C protein, were measured. Individuals with AVL were compared with individuals with assymptomatic infection and presented low levels of total cholesterol (128 ± 6.180 mg/dL vs. 158 ±5.733 mg/dL, p=0.0001), HDL (29 ± 1.746 mg/dL vs. 37 ± 1.647 mg/dL, p=0.0001), increased levels of triglycerides (149.5 mg/dL ± 12.72 vs. 78.00 ± 10.43 mg/dL, p=0.0095) and higher levels of reactive C protein (1.750± 0.4939 mg/dL vs. 0.40 ± 0.1707 mg/dL; p=0.0001). The expression of genes related to lipid metabolism, such as LXR-a, LXR-b, PPAR-a, PPAR-d, PPAR-g and APOE was evaluated by real time PCR. A reduction in the expression of those genes was found in the group of AVL patients corroborating the serum levels of the metabolites earlier quantified. Our findings suggest a modulation of metabolism of lipids, in the chronic phase of AVL, this could facilitate the survival of leishmania, due to the known reduction on the ability of macrophages in presenting antigens efficiently to the T cells due to the reduction in the cholesterol available, it results in a subversion of the host immunity.

Design and validation of a novel generic platform for the production of tetravalent IgG1-like bispecific antibodies

International audience

Impacto de la resiliencia en pacientes con Artritis Reumatoide

Introducción: La artritis reumatoide (AR) es una enfermedad autoinmune-inflamatoria, que compromete las articulaciones diartrodiales. Tiene una importante repercusión sistémica que incluye la depresión; por lo tanto, tiene un severo impacto sobre la calidad de vida. Es posible que mecanismos de defensa, tales como la resiliencia, puedan amortiguar dicho impacto. Metodología: estudio de corte transversal, multicéntrico (análisis inicial dentro del grupo AR, con muestra no probabilística de 66 pacientes, posterior selección aleatoria simple de 16 pacientes de la muestra inicial y selección de 16 individuos sanos pareados). Posteriormente, se comparó la resiliencia entre sujetos con AR y sujetos sanos, mediante las escalas RS y CD-RISC25. Adicionalmente, se aplicaron las escalas EEAE, EADZ, SF-36 y PANAS. Los datos fueron evaluados mediante el coeficiente de correlación de Spearman, las pruebas U Mann-Whitney, Kruskall-Wallis, T de Student y análisis de varianza. Resultados: se encontraron diferencias significativas en las estrategias de afrontamiento no espirituales en grupos de resiliencia baja, media y alta; diferencias en las medianas de resiliencia en los grupos de depresión por EAZD en los pacientes. No se encontraron resultados significativos en las variables clínicas de la AR ni en la comparación con sujetos sanos. Conclusiones: el uso de estrategias de afrontamiento no espirituales y la ausencia de depresión, se asoció a mayores niveles de resiliencia en los pacientes con AR, por lo cual, los componentes emocionales y cognitivos se asocian a la resiliencia.

Índice del perfil del donante renal (KDPI) como factor pronóstico del trasplante

La enfermedad renal crónica ha aumentado a nivel mundial y nacional, mientras que el número de donantes viene en descenso, y los pacientes en lista de espera aumentan. Los donantes cadavéricos son una opción para estos pacientes, y han sido utilizados en últimos años para aumentar los órganos disponibles. La evaluación de la calidad de estos es importante para optimizar su uso. Estudio analítico tipo cohorte retrospectiva, cálculo de KDPI en donantes cadavéricos, seguimiento función renal creatinina sérica 1 mes, 3 meses, 6 meses y un año. Correlación supervivencia del injerto, función renal, KDPI y EPTS. Análisis de supervivencia y regresión logística con variables del donante, receptor y acto quirúrgico.

Tratamiento del rechazo mediado por anticuerpos en pacientes trasplantados renales revisión sistemática

Antecedentes: El trasplante renal es la mejor alternativa terapéutica para la enfermedad renal crónica terminal. Los medicamentos inmunosupresores previenen el rechazo. El rechazo mediado por anticuerpos es frecuente y disminuye la función y duración del injerto. Objetivo: Evaluar sistemáticamente la evidencia disponible relacionada con la eficacia y seguridad del tratamiento para el rechazo mediado por anticuerpos en pacientes trasplantados renales. Metodologia: Revisión sistemática en bases de datos MEDLINE, EMBASE, Scopus y Biblioteca virtual de la salud. Literatura gris google scholar, google academico, www.clinicaltrialsregister.eu, and https://clinicaltrials.gov/. Búsqueda manual referencias artículos pre-seleccionados así como de revisiones previamente publicadas. Se siguieron las recomendacioes guia PRISMA para la identificacion de artículos potenciales, tamizaje y selección teniendo en cuenta los criterios de inclusion. Extracción datos de acuerdo a las variables, revisión calidad de los artículos elegidos utilizando evaluación riesgo de segos de Cochrane. Resultados: Se seleccionaron 9 ensayos clínicos publicados entre 1980 y 2016, incluyeron 222 pacientes (113 brazo de intervención y 109 en el control), seguimiento promedio 16 meses. Intervenciones evaluadas plasmaféresis, inmunoadsorción y rituximab. Hubo una amplia heterogeneidad en la definición de criterios de inclusión, criterios diagnósticos de rechazo y medidas de evaluación de eficacia de las intervenciones. Tres estudios encontraron diferencias estadísticamente significativas entre los grupos de tratamiento. Conclusiones: La evidencia sobre la eficacia de los tratamientos del rechazo mediado por anticuerpos en injertos renales es de baja calidad. Son necesarios ensayos clínicos controlados para poder definir el tratamiento óptimo de estos pacientes.

Caracterización y prevalencia del compromiso ocular en pacientes con enfermedad autoinmune y autoinflamatoria en un centro de referencia reumatológica en Colombia entre los años 2000 a 2015

RESUMEN Objetivo: Estimar la prevalencia de las diferentes enfermedades oftalmológicas que aparecen en el contexto de una enfermedad autoinmune (EAI) en pacientes de un centro de referencia reumatológica en Colombia, según características clínicas y sociodemográficas durante un período de 15 años, comprendido entre los años 2000 a 2015. Métodos: Se realizó un estudio descriptivo, observacional de prevalencia. El tipo de muestreo fue aleatorio estratificado con asignación proporcional en el programa Epidat 3.4. Los datos se analizaron en el programa SPSS v22.0 y se realizó análisis univariado de las variables categóricas, para las variables cuantitativas se realizaron medidas de tendencia central. Resultados: De 1640 historias clínicas revisadas, se encontraron 634 pacientes (38,65%) con compromiso ocular. Si excluimos los pacientes con SS, que por definición presentan ojo seco, 222 pacientes (13,53%) presentaron compromiso oftalmológico. Del total de pacientes, el 83,3% fueron mujeres. La AR fue la enfermedad autoinmune con mayor compromiso oftalmológico con 138 pacientes (62,2%), y en último lugar la sarcoidosis con 1 solo paciente afectado. La QCS fue la manifestación más común en todos los grupos diagnósticos de EAI, con 146 pacientes (63,5%). De 414 pacientes con Síndrome de Sjögren (SS) y QCS 8 presentaron compromiso ocular adicional, siendo la uveítis la segunda patología ocular asociada en pacientes con SS y la primera causa en las espondiloartropatias (71,4 %). Los pacientes con catarata (4,1%) presentaron la mayor prevalencia de uso de corticoide (88.8%). De 222 pacientes, 28 (12,6%) presentaron uveítis. Del total de pacientes, 16 (7,2%) presentaron maculopatía por antimalaráricos y 6 (18,75%) de los pacientes con LES. Los ANAS se presentaron en el 100% los pacientes con trastorno vascular de la retina. Los pacientes con epiescleritis presentaron la mayor proporción de positivización de anticuerpos anti-DNA. La EAI que más presentó epiescleritis fue LES con 4 pacientes (12,5%) El 22% de paciente con anticuerpos anti-RNP presentaron escleritis y 32,1% de los pacientes con uveítis presentaron HLA-B27 positivo. Las manifestaciones oftalmológicas precedieron a las sistémicas entre un 11,1% y un 33,3% de los pacientes. Conclusión: Las enfermedades oculares se presentan con frecuencia en los pacientes colombianos con EAI (38.65%), siendo la AR la enfermedad con mayor compromiso ocular (62,2%) y la QCS la enfermedad ocular con mayor prevalencia en todas las EAI (63,5%). La uveítis se presentó en 28 pacientes (12,6%). Las manifestaciones oftalmológicas pueden preceder a las sistémicas. El examen oftalmológico debe ser incluido en los pacientes con EAI, por ser la enfermedad ocular una comorbilidad frecuente. Adicionalmente, los efectos oftalmológicos de las medicaciones sistémicas utilizadas en EAI deben ser estrechamente monitorizados, durante el curso del tratamiento.

Estudio conformacional de péptidos modificados de las proteínas STARP, CelTOS, TRSP y SERA 5 de Plasmodium falciparum y su relación con una respuesta inmune en malaria

El desarrollo de una vacuna contra malaria es un área de exploración activa pero con enormes retos debido especialmente a la complejidad del ciclo del parásito. Así, es necesario bloquear las diferentes etapas de la invasión que tiene el Plasmodium falciparum y extraer de ellas la mayor información posible de la artillería que utiliza para su ataque. Para esto, péptidos de las proteínas STARP, CelTOS y TRSP (del esporozoito) y SERA 5 (del merozoito) que tienen alta afinidad de unión a células HepG2 y a glóbulos rojos respectivamente (conocidos como cHABPs), han sido modificados (conocidos como mHABPs), sintetizados y evaluados a nivel de respuesta inmune en monos Aotus así como estudiados en su conformación estructural por RMN de 1H. Los resultados muestran que los péptidos nativos no son inmunogénicos, pero pueden inducir altos títulos de anticuerpos cuando sus residuos críticos o sus vecinos son reemplazados por otro con un volumen y masa similar, pero diferente polaridad. El estudio conformacional pone de manifiesto que las estructuras de los péptidos nativos son diferentes de sus péptidos modificados ya sea que muestren regiones estructuradas más cortas o más largas o que no presenten ninguna, en comparación con sus análogos modificados altamente inmunogénicos. Las características estereoquímicas particulares en las cadenas laterales de algunos residuos de aminoácidos de estos péptidos modificados así como los rasgos fisicoquímicos parecen jugar un rol importante en la respuesta inmune apropiada cuando estos fueron inmunizados en grupos de monos Aotus confiriendo un avance al diseño de una vacuna contra malaria totalmente eficaz.

Evaluation of separation management algorithms in Class G airspace

Use of Unmanned Aerial Vehicles (UAVs) in support of government applications has already seen significant growth and the potential for use of UAVs in commercial applications is expected to rapidly expand in the near future. However, the issue remains on how such automated or operator-controlled aircraft can be safely integrated into current airspace. If the goal of integration is to be realized, issues regarding safe separation in densely populated airspace must be investigated. This paper investigates automated separation management concepts in uncontrolled airspace that may help prepare for an expected growth of UAVs in Class G airspace. Not only are such investigations helpful for the UAV integration issue, the automated separation management concepts investigated by the authors can also be useful for the development of new or improved Air Traffic Control services in remote regions without any existing infrastructure. The paper will also provide an overview of the Smart Skies program and discuss the corresponding Smart Skies research and development effort to evaluate aircraft separation management algorithms using simulations involving realworld data communication channels, and verified against actual flight trials. This paper presents results from a unique flight test concept that uses real-time flight test data from Australia over existing commercial communication channels to a control center in Seattle for real-time separation management of actual and simulated aircraft. The paper also assesses the performance of an automated aircraft separation manager.