850 resultados para Cromatografia líquida de alta resolução (HPLC)
Resumo:
A S(+) cetamina um frmaco amplamente utilizado na medicina para induzir anestesia e a associao com midazolam empregada para minimizar seus efeitos adversos. Associaes medicamentosas podem resultar em interaes farmacocinticas e a disponibilidade de mtodos bioanalticos para a determinao da cetamina em plasma constitui ferramenta til para a avaliao do perfil cintico do frmaco administrado isoladamente ou em associao. O presente estudo teve como objetivo o desenvolvimento e validao de um mtodo analtico para determinao da cetamina em plasma por cromatografia líquida de alta eficincia (HPLC) e a investigao do perfil farmacocintico da cetamina em quatro ces hgidos da raa Beagle. A S(+) cetamina (10mg/kg) foi administrada pela veia ceflica em dose nica isoladamente (protocolo I) ou associada ao midazolam (0.2mg/kg) (protocolo II) em estudo cruzado com intervalo de uma semana para washout. Amostras seriadas de sangue foram coletadas no intervalo de oito horas e analisadas por HPLC para a avaliao do perfil farmacocintico utilizando modelo bicompartimental. O mtodo bioanaltico apresentou limites de confiana aceitveis para sua aplicao em estudos de farmacocintica e os parmetros rea sob a curva (ASC0-8), volume de distribuio (Vd), clearance total (Clt), meia vida de eliminao (t/12 ), constante de eliminao (), meia vida de distribuio (t1/2) e constante de distribuio () no mostraram diferenas estatsticas significativas entre os grupos (p < 0.05, Wilcoxon). Os resultados obtidos sugerem que a reduo dos efeitos colaterais da cetamina decorrente do uso da associao cetamina-midazolam no est relacionada a alteraes no perfil farmacocintico da cetamina.
Resumo:
Fundao de Amparo Pesquisa do Estado de So Paulo (FAPESP)
Resumo:
Dentre os principais desafios para o controle da malria no Brasil e no mundo, o advento da resistncia do plasmdio, em especial do Plasmodium falciparum, se apresenta como o de maior relevncia. A mefloquina o frmaco de primeira linha para o tratamento da malria falciparum, e a disponibilidade de mtodos sensveis e baixo custo para monitorizao das concentraes sanguneas do frmaco e da carboximefloquina auxilia na otimizao dos esquemas teraputicos. Neste sentido, foi validada metodologia analtica, de acordo com parmetros sugeridos pelos rgos regulamentadores oficiais, para determinao de mefloquina e seu derivado carboxilado em amostra de sangue total adsorvida em papel de filtro. Foi empregado cromatografia líquida de alta eficincia aps extrao lquido-lquido dos analitos de interesse. A deteco foi realizada em = 222nm. No foi observada interferncia de outros antimalricos comumente utilizados. O mtodo foi linear em intervalo de concentrao de 0,25 a 2,5 g/mL, para mefloquina e seu derivado carboxilado. O limite de deteco foi de 35 ng/mL e do de quantificao de. 70 ng/mL, para mefloquina e carboximefloquina, respectivamente. A preciso intra ensaio mdia foi 314 % para mefloquina e de 215 % para carboximefloquina. A preciso inter ensaio mdia foi de e 384% para mefloquina e de 257% para carboximefloquina. A recuperao mdia para concentraes de mefloquina variando de 0,25 a 2,5 g/mL foi de 83 14%, e de carboximefloquina nas concentraes de 0,375 a 3740 g/mL foi de 8811%. O frmaco foi estvel nas amostras adsorvidas em papel de filtro pelo perodo de um ms. O mtodo foi robusto para pequenas variaes de pH da fase mvel. Para avaliar a aplicabilidade do mtodo foi realizada determinao dos analtos em amostras de sangue adsorvidas em papel de filtro de pacientes com malria falciparum. A concentrao mdia de mefloquina foi de 0,8610,723 g/mL e de carboximefloquina de 0,4720,086 g/mL. Os parmetros de validao da metodologia analtica seguem as recomendaes propostas pelos rgos oficiais sendo o mtodo adequado para determinao de mefloquina e carboximefloquina em amostras de sangue total adsorvidas em papel de filtro.
Resumo:
Ps-graduao em Qumica - IQ
Resumo:
The Mediterranean species Cynara cardunculus L. is recognized in the traditional medicine, for their hepatoprotective and choleretic effects. Biomass of C. cardunculus L. var. altilis (DC), or cultivated cardoon, may be explored not only for the production of energy and pulp fibers, but also for the extraction of bioactive compounds. The chemical characterization of extractable components, namely terpenic and phenolic compounds, may valorize the cultivated cardoon plantation, due to their antioxidant, antitumoral and antimicrobial activities. In this study, the chemical composition of lipophilic and phenolic fractions of C. cardunculus L. var. altilis (DC), cultivated in the south of Portugal (Baixo Alentejo region) was characterized in detail, intending the integral valorization of its biomass. The biological activity of cultivated cardoon extracts was evaluated in terms of antioxidant, human tumor cell antiproliferative and antibacterial effects. Gas chromatography-mass spectrometry (GC-MS) was used for the chemical analysis of lipophilic compounds. Sixty-five lipophilic compounds were identified, from which 1 sesquiterpene lactone and 4 pentacyclic triterpenes were described, for the first time, as cultivated cardoon components, such as: deacylcynaropicrin, acetates of - and -amyrin, lupenyl acetate and -taraxasteryl acetate. Sesquiterpene lactones were the major family of lipophilic components of leaves (94.5 g/kg), mostly represented by cynaropicrin (87.4 g/kg). Pentacyclic triterpenes were also detected, in considerably high contents, in the remaining parts of cultivated cardoon, especially in the florets (27.5 g/kg). Taraxasteryl acetate was the main pentacyclic triterpene (8.9 g/kg in florets). High pressure liquid chromatography-mass spectrometry (HPLC-MS) was utilized for the chemical analysis of phenolic compounds. Among the identified 28 phenolic compounds, eriodictyol hexoside was reported for the first time as C. cardunculus L. component, and 6 as cultivated cardoon components, namely 1,4-di-O-caffeoylquinic acid, naringenin 7-O-glucoside, naringenin rutinoside, naringenin, luteolin acetylhexoside and apigenin acetylhexoside. The highest content of the identified phenolic compounds was observed in the florets (12.6 g/kg). Stalks outer part contained the highest hydroxycinnamic acids abundance (10.3 g/kg), and florets presented the highest flavonoids content (10.3 g/kg). The antioxidant activity of phenolic fraction was examined through 2,2-diphenyl-1-picrylhydrazyl (DPPH) free radical scavenging assay. Stalks outer part, and receptacles and bracts extracts demonstrated the highest antioxidant effect on DPPH (IC50 of 34.35 g/mL and 35.25 g/mL, respectively). (cont.) abstract (cont.) The DPPH scavenging effect was linearly correlated with the total contents of hydroxycinnamic acids (r = -0.990). The in vitro antiproliferative activity of cultivated cardoon lipophilic and phenolic extracts was evaluated on a human tumor cells line of triple-negative breast cancer (MDA-MB-231), one of the most refractory human cancers to conventional therapeutics. After 48 h of exposition, leaves lipophilic extract showed higher inhibitory effect (IC50 = 10.39 g/mL) than florets lipophilic extract (IC50 = 315.22 g/mL), upon MDA-MB-231 cellular viability. Pure compound of cynaropicrin, representative of the main compound identified in leaves lipophilic extract, also prevented the cell proliferation of MDA-MB-231 (IC50 = 17.86 M). MDA-MB-231 cells were much more resistant to the 48 h- treatment with phenolic extracts of stalks outer part (IC50 = 3341.20 g/mL) and florets (IC50 > 4500 g/mL), and also with the pure compound of 1,5-di-O-caffeoylquinic acid (IC50 = 1741.69 M). MDA-MB-231 cells were exposed, for 48 h, to the respective IC50 concentrations of leaves lipophilic extract and pure compound of cynaropicrin, in order to understand their ability in modelling cellular responses, and consequently important potentially signaling pathways for the cellular viability decrease. Leaves lipophilic extract increased the caspase-3 enzymatic activity, contrarily to pure compound of cynaropicrin. Additionally, leaves lipophilic extract and pure compound of cynaropicrin caused G2 cell cycle arrest, possibly by upregulating the p21Waf1/Cip1 and the accumulation of phospho-Tyr15-CDK1 and cyclin B1. The inhibitory effects of leaves lipophilic extract and cynaropicrin pure compound, against the MDA-MB-231 cell proliferation, may also be related to the downregulation of phospho-Ser473-Akt. The antibacterial activity of cultivated cardoon lipophilic and phenolic extracts was assessed, for the first time, on two multidrug-resistant bacteria, such as the Gram-negative Pseudomonas aeruginosa PAO1 and the Gram-positive methicillin-resistant Staphylococcus aureus (MRSA), two of the main bacteria responsible for health care-associated infections. Accordingly, the minimum inhibitory concentrations (MIC) were determined. Lipophilic and phenolic extracts of florets did not have antibacterial activity on P. aeruginosa PAO1 and MRSA (MIC > 2048 g/mL). Leaves lipophilic extract did not prevent the P. aeruginosa PAO1 growth, but pure compound of cynaropicrin was slightly active (MIC = 2048 g/mL). Leaves lipophilic extract and pure compound of cynaropicrin blocked MRSA growth (MIC of 1024 and 256 g/mL, respectively). The scientific knowledge revealed in this thesis, either by the chemical viewpoint, or by the biological viewpoint, contributes for the valorization of C. cardunculus L. var. altilis (DC) biomass. Cultivated cardoon has potential to be exploited as source of bioactive compounds, in conciliation with other valorization pathways, and Portuguese traditional cheeses manufacturing.
Resumo:
O gnero Pterodon pertence famlia das Papilonaceas e inclui cinco espcies nativas do Brasil: P. pubescens Benth., P. emarginatus Vog., P. apparicioi Pedersoli e P. abruptus Benth., sendo a espcie objeto deste estudo a P. polygalaeflorus Benth.. Seus frutos so livremente comercializados em mercados da flora medicinal e utilizados pela medicina popular devido a propriedades anti-reumtica, analgsica, antiinflamatria, dentre outros efeitos associados a esses frutos. O principal uso popular est relacionado ao efeito antiartrtico que parece se encontrar na frao oleosa do fruto. O objetivo deste trabalho foi avaliar o extrato etanlico de Pterodon polygalaeflorus (EEPpg) quanto ao seu potencial antiinflamatrio crnico atravs do modelo de artrite induzida por colgeno (CIA) e seu efeito sobre os linfcitos in vitro, bem como sobre a expanso de clulas MAC-1+ induzida por adjuvante completo de Freund (AFC). A caracterizao qumica do EEPpg foi realizada por cromatografia em camada delgada (TLC), cromatografia líquida de alta performance (HPLC) e cromatografia gasosa acoplada a espectrmetro de massa (GC-MS), atravs dos quais uma gama de compostos, incluindo terpenides de polaridades variadas e flavonides, foram observados. No modelo de CIA, o EEPpg reduziu significativamente parmetros associados ao desenvolvimento e progresso da doena e severidade da doena , inibindo em at 99% o seu desenvolvimento e levando a ausncia de sinais clnicos evidentes aps tratamento com as menores doses do extrato (0,01 mg/kg e 0,001 mg/kg). O tratamento com EEPpg tambm reduziu caractersticas histopatolgicas tpicas de articulaes de animais com CIA, que tambm so observadas na artrite reumatide. O EEPpg reduziu significativamente o peso dos linfonodos dos camundongos, bem como o nmero absoluto de segmentados, moncitos e linfcitos no sangue. In vitro, O EEPpg mostrou uma atividade anti-proliferativa dos esplencitos estimulados com concanavalina A (Con A) ou lipopolissacardeo (LPS) analisada atravs do ensaio de reduo do sal de tetrazlio MTT, corroborada pelo seu efeito sobre o ciclo celular de linfcitos estimulados com Con A, onde o EEPpg nas concentraes de 5, 10 e 20 μg/mL reduziu significativamente, de maneira concentrao-dependente, o nmero de clulas nas fases S+G2/M e aumentou na fase G0/G1 do ciclo celular. O efeito anti-proliferativo do EEPpg parece tambm estar associado ao aumento da apoptose dos linfcitos aps estimulao com Con A, com aumento estatisticamente significativo no percentual de clulas mortas por apoptose nas maiores concentraes . O EEPpg inibiu a expanso de clulas Mac-1+ induzida por AFC no bao, porm no no peritnio. Esse resultado sugere um efeito inibidor do EEPpg sobre a migrao celular para as articulaes artrticas. Esses resultados contribuem para a validao do uso popular de P. polygalaeflorus contra doenas relacionadas a processos inflamatrios e imunes, sobretudo na artrite reumatide, antes nunca demonstrado.
Resumo:
A incorporao do diacetato de clorexidina em resinas macias para reembasamento de prteses pode se tornar uma boa alternativa na terapia com antimicrobianos usados para candidase oral, uma vez que independente da cooperao do paciente. Este trabalho teve como objetivo analisar a hiptese que a incorporao de diacetato de clorexidina em resinas macias no alteraria as suas propriedades fsico-qumicas. Foram analisadas duas resinas macias, uma base de polimetilmetacrilato (PMMA) e outra base de polietilmetacrilato (PEMA), com a incorporao de 0,5%, 1,0% e 2,0% de diacetato de clorexidina, alm do grupo controle sem diacetato de clorexidina. Os espcimes foram armazenadas em gua destilada a 37 durante 2hrs, 48 hrs, 7, 14, 21 e 28 dias e analisados quanto a cristalinidade do polmero atravs da difrao de Raios X, a dureza mensurada com durmetro na escala shore A, o grau de converso dos monmeros pela Espectroscopia de Infravermelho Transformada de Fourier (FTIR), a lixiviao de monmeros residuais e a liberao da clorexidina por Cromatografia Líquida de Alta Performace (HPLC). Os resultados mostraram que quanto cristalinidade dos polmeros nas resinas macias base de PMMA e de PEMA no alteraram aps a incorporao de clorexidina, o que est relacionado dureza Shore A, que aumentou ao longo do tempo, mas sem alterao significativa para nenhuma das concentraes de diacetato de clorexidina testadas. J quanto ao grau de converso, aps a incorporao de clorexidina, a resina macia base de PMMA no apresentou diferena estatisticamente significativa (р>0,05), porm a resina macia base de PEMA apresentou diminuio significativa do grau de converso (p<0,05), o que refletiu no aumento significativo da lixiviao de monmeros residuais nas concentraes 0,5% e 1,0% de clorexidina (p<0,05), principalmente nas primeiras 48 horas nessa resina. A resina macia base de PMMA no apresentou alteraes do padro de lixiviao desses monmeros (р>0,05) e para ambas as resinas a cintica de liberao de clorexidina foi relacionada lixiviao de monmeros residuais, que para a resina macia base de PEMA foi maior significativamente nas primeiras 48 horas (p<0,05) e para a resina macia base de PMMA no teve alterao estatisticamente significativa (р>0,05) se mantendo at o ltimo dia de anlise. Desse modo, conclui-se que a incorporao do diacetato de clorexidina no afetou a cristalinidade dos polmeros, inalterando a dureza nas duas resinas, porm o grau de converso sofreu diminuio aps a incorporao de diacetato de clorexidina na resina macia base de PEMA, o que levou ao aumento da lixiviao de monmeros residuais e curta liberao de clorexidina; enquanto que a resina macia base de PMMA, devido a no alterao significativa do seu grau de converso, ocorreu menor lixiviao de monmeros residuais e liberao prolongada de clorexidina.
Resumo:
O objetivo deste trabalho foi estabelecer um modelo empregando-se ferramentas de regresso multivariada para a previso do teor em steres metlicos e, simultaneamente, de propriedades fsico-qumicas de misturas de leo de soja e biodiesel de soja. O modelo foi proposto a partir da correlao das propriedades de interesse com os espectros de reflectncia total atenuada no infravermelho mdio das misturas. Para a determinao dos teores de steres metlicos foi utilizada a cromatografia líquida de alta eficincia (HPLC), podendo esta ser uma tcnica alternativa aos mtodo de referncia que utilizam a cromatografia em fase gasosa (EN 14103 e EN 14105). As propriedades fsico-qumicas selecionadas foram ndice de refrao, massa especfica e viscosidade. Para o estudo, foram preparadas 11 misturas com diferentes propores de biodiesel de soja e de leo de soja (0-100 % em massa de biodiesel de soja), em quintuplicata, totalizando 55 amostras. A regio do infravermelho estudada foi a faixa de 3801 a 650 cm-1. Os espectros foram submetidos aos pr-tratamentos de correo de sinal multiplicativo (MSC) e, em seguida, centralizao na mdia (MC). As propriedades de interesse foram submetidas ao autoescalamento. Em seguida foi aplicada anlise de componentes principais (PCA) com a finalidade de reduzir a dimensionalidade dos dados e detectar a presena de valores anmalos. Quando estes foram detectados, a amostra era descartada. Os dados originais foram submetidos ao algoritmo de Kennard-Stone dividindo-os em um conjunto de calibrao, para a construo do modelo, e um conjunto de validao, para verificar a sua confiabilidade. Os resultados mostraram que o modelo proposto por PLS2 (Mnimos Quadrados Parciais) foi capaz de se ajustar bem os dados de ndice de refrao e de massa especfica, podendo ser observado um comportamento aleatrio dos erros, indicando a presena de homocedasticidade nos valores residuais, em outras palavras, o modelo construdo apresentou uma capacidade de previso para as propriedades de massa especfica e ndice de refrao com 95% de confiana. A exatido do modelo foi tambm avaliada atravs da estimativa dos parmetros de regresso que so a inclinao e o intercepto pela Regio Conjunta da Elipse de Confiana (EJCR). Os resultados confirmaram que o modelo MIR-PLS desenvolvido foi capaz de prever, simultaneamente, as propriedades ndice de refrao e massa especfica. Para os teores de teres metlicos determinados por HPLC, foi tambm desenvolvido um modelo MIR-PLS para correlacionar estes valores com os espectros de MIR, porm a qualidade do ajuste no foi to boa. Apesar disso, foi possvel mostrar que os dados podem ser modelados e correlacionados com os espectros de infravermelho utilizando calibrao multivariada
Resumo:
Em Portugal, as indstrias corticeira e de pasta de papel constituem um importante sector econmico, contudo, gerando elevadas quantidades de subprodutos. Estes subprodutos poderiam ser explorados em aplicaes de alto valor acrescentado, como fonte de compostos fenlicos, por exemplo, em vez de serem apenas queimados para produo de energia. Estes compostos so conhecidos pelas suas inmeras propriedades, entre as quais, antioxidante, anti-inflamatria e anti-trombtica. Neste estudo as fraes fenlicas da maior parte dos subprodutos gerados nas indstrias corticeira e de pasta de papel foram caracterizados em detalhe, com vista sua valorizao. A frao fenlica das cascas de Eucalyptus globulus, E. grandis, E. urograndis e E. maidenii, bem como da cortia de Quercus suber e resduos provenientes da sua explorao, nomeadamente, o p de cortia e os condensados negros, foi obtida por processos convencionais de extrao slido-lquido. No caso da casca de E. globulus, foi ainda avaliado o potencial de metodologias verdes no processo de extrao de compostos fenlicos, usando extrao com CO2 supercrtico. Esta tcnica foi otimizada com recurso a metodologias de superfcie de resposta. Na identificao e quantificao dos compostos fenlicos foi usada cromatografia líquida de alta resolução aliada a tcnicas de espectrometria de massa. O teor de fenlicos totais foi ainda determinado pelo mtodo de Folin- Ciocalteu, essencialmente para efeitos comparativos. A caracterizao da frao fenlica de cada extrato foi ainda complementada com a anlise da atividade antioxidante, usando o radical 2,2-difenil-1-picrilhidrazilo (DPPH). Foram identificados trinta compostos fenlicos na casca de E. globulus, 17 deles referenciados pela primeira vez como seus constituintes, nomeadamente os cidos qunico, di-hidroxifenilactic, cafeico e metil-elgico, bis-hexahidroxidifenoil( HHDP)-glucose, galoil- bis-HHDP-glucose, galoil-HHDPglucose, isoramnetinahexosdeo, quercetina-hexosdeo, cido metil-elgicopentosdeo, miricetina-ramnosdeo, isoramnetina-ramnosdeo, mearnsetina, floridzina, mearnsetina-hexosdeo, luteolina e uma proantocianidina B. Neste trabalho, foi estudada pela primeira vez a composio fenlica das cascas de E. grandis, E. urograndis e E. maidenii. Treze, doze e vinte e quatro compostos fenlicos foram identificados nas cascas de E. grandis, E. urograndis e E. maidenii, respetivamente. Entre estes compostos encontram-se os cidos qunico, glico, metilglico, protocatequnico, clorognico e elgico, catequina, galoil-bis-HHDP-glucose, digaloilglucose, epicatequina, quercetina-glucorondeo, di-hidroxiisopropilcromona- hexosdeo, isoramnetina-hexosdeo, cido elgicoramnosdeo, taxifolina, quercetina-hexosdeo, di-hidroxi- (metilpropil)isopropilcromona-hexosdeo, cido metil-elgico-pentosdeo, miricetina-ramnosdeo, isoramnetina-ramnosdeo, aromadendrina-ramnosdeo, mearnsetina, mearnsetina-hexosdeo, eriodictiol, quercetina, isoramnetina e naringenina. A anlise da frao fenlica da cortia permitiu identificar vinte e dois compostos fenlicos, dez deles referenciados pela primeira vez como seus constituintes, nomeadamente, os cidos qunico, saliclico, p-hidroxifenilltico e metilglico, cido carboxlico da brevifolina, eriodictiol, naringenina, um ster isoprenlico do cido cafeico, isoramnetina-ramnosdeo e isoramnetina. No p de cortia industrial foram identificados dezasseis compostos fenlicos, nomeadamente os cidos qunico, glico, protocatequnico, cafeico, ferlico, elgico e metilglico, esculetina, cido carboxlico da brevifolina, coniferaldedo, um ster isoprenlico do cido cafeico, uma dilactona do cido valoneico, cido elgico-pentosdeo, cido elgico-ramnosdeo, isoramnetinaramnosdeo e isoramnetina. Destes, apenas o cido elgico foi previamente referenciado como componente do p de cortia. Do mesmo modo, treze compostos fenlicos foram identificados no condensado negro, doze deles referenciados pela primeira vez como seus constituintes. So eles os cidos qunico, glico, p-hidroxifenil-lctico, protocatequnico, p-coumarico, cafeico e elgico, vanilina, esculetina, coniferaldedo, um ster isoprenlico do cido cafeico e o eriodictiol. A extrao supercrtica de compostos fenlicos da casca de eucalipto permitiu no s verificar os parmetros que afetam a qualidade e quantidade finais dos extratos, como tambm obter os valores timos para estes parmetros. Esta extrao mostrou ainda ser bastante seletiva para determinados grupos de compostos fenlicos, como as flavanonas eriodictiol e naringenina e para o flavonol O-metilado isoramnetina. Este tambm o primeiro estudo envolvendo a determinao da atividade antioxidante de extratos da cortia e dos resduos da sua explorao, bem como da casca de E. grandis, E. urograndis e E. maidenii. A vasta gama de compostos fenlicos identificados em cada extrato analisado, assim como as prominentes atividades antioxidantes, todas na mesma gama de valores do bem conhecido antioxidante comercial, cido ascrbico, so claramente um grande contributo para a valorizao destes subprodutos industriais.
Resumo:
Os incndios florestais so uma importante fonte de emisso de compostos gasosos e de aerossis. Em Portugal, onde a maioria dos incndios ocorre no norte e centro do pas, os incndios destroem todos os anos milhares de hectares, com importantes perdas em termos econmicos, de vidas humanas e qualidade ambiental. As emisses podem alterar consideravelmente a qumica da atmosfera, degradar a qualidade do ar e alterar o clima. Contudo, a informao sobre as caratersticas das emisses dos incndios florestais nos pases do Mediterrneo limitada. Tanto a nvel nacional como internacional, existe um interesse crescente na elaborao de inventrios de emisses e de regulamentos sobre as emisses de carbono para a atmosfera. Do ponto de vista atmosfrico da monitorizao atmosfrica, os incndios so considerados um desafio, dada a sua variabilidade temporal e espacial, sendo de esperar um aumento da sua frequncia, dimenso e severidade, e tambm porque as estimativas de emisses dependem das caratersticas dos biocombustveis e da fase de combusto. O objetivo deste estudo foi quantificar e caraterizar as emisses de gases e aerossis de alguns dos mais representativos incndios florestais que ocorreram no centro de Portugal nos veres de 2009 e de 2010. Efetuou-se a colheita de amostras de gases e de duas fraes de partculas (PM2.5 e PM2.5-10) nas plumas de fumo em sacos Tedlar e em filtros de quartzo acoplados a um amostrador de elevado volume, respetivamente. Os hidrocarbonetos totais (THC) e xidos de carbono (CO e CO2) nas amostras gasosas foram analisados em instrumentos automticos de ionizao de chama e detetores no dispersivos de infravermelhos, respetivamente. Para algumas amostras, foram tambm quantificados alguns compostos de carbonilo aps reamostragem do gs dos sacos Tedlar em cartuchos de slica gel revestidos com 2,4-dinitrofenilhidrazina (DNPH), seguida de anlise por cromatografia líquida de alta resolução. Nas partculas, analisou-se o carbono orgnico e elementar (tcnica termo-ptica), ies solveis em gua (cromatografia inica) e elementos (espectrometria de massa com plasma acoplado por induo ou anlise instrumental por ativao com neutres). A especiao orgnica foi obtida por cromatografia gasosa acoplada a espectrometria de massa aps extrao com recurso a vrios solventes e separao dos extratos orgnicos em diversas classes de diferentes polaridades atravs do fracionamento com slica gel. Os fatores de emisso do CO e do CO2 situaram-se nas gamas 52-482 e 822-1690 g kg-1 (base seca), mostrando, respetivamente, correlao negativa e positiva com a eficincia de combusto. Os fatores de emisso dos THC apresentaram valores mais elevados durante a fase de combusto latente sem chama, oscilando entre 0.33 e 334 g kg-1 (base seca). O composto orgnico voltil oxigenado mais abundante foi o acetaldedo com fatores de emisso que variaram desde 1.0 at 3.2 g kg-1 (base seca), seguido pelo formaldedo e o propionaldedo. Observou-se que as emisses destes compostos so promovidas durante a fase de combusto latente sem chama. Os fatores de emisso de PM2.5 e PM10 registaram valores entre 0.50-68 e 0.86-72 g kg-1 (base seca), respetivamente. A emisso de partculas finas e grosseiras tambm promovida em condies de combusto lenta. As PM2.5 representaram cerca de 90% da massa de partculas PM10. A frao carbonosa das partculas amostradas em qualquer dos incndios foi claramente dominada pelo carbono orgnico. Foi obtida uma ampla gama de rcios entre o carbono orgnico e o carbono elementar, dependendo das condies de combusto. Contudo, todos os rcios refletiram uma maior proporo de carbono orgnico em relao ao carbono elementar, tpica das emisses de queima de biomassa. Os ies solveis em gua obtidos nas partculas da pluma de fumo contriburam com valores at 3.9% da massa de partculas PM2.5 e 2.8% da massa de partculas de PM2.5-10. O potssio contribuiu com valores at 15 g mg-1 PM2.5 e 22 g mg-1 PM2.5-10, embora em massa absoluta estivesse maioritariamente presente nas partculas finas. Os rcios entre potssio e carbono elementar e entre potssio e carbono orgnico obtidos nas partculas da pluma de fumo enquadram-se na gama de valores relatados na literatura para emisses de queima de biomassa. Os elementos detetados nas amostras representaram, em mdia, valores at 1.2% e 12% da massa de PM2.5 e PM2.5-10, respetivamente. Partculas resultantes de uma combusto mais completa (valores elevados de CO2 e baixos de CO) foram caraterizadas por um elevado teor de constituintes inorgnicos e um menor contedo de matria orgnica. Observou-se que a matria orgnica particulada composta principalmente por componentes fenlicos e produtos derivados, sries de compostos homlogos (alcanos, alcenos, cidos alcanicos e alcanis), acares, biomarcadores esterides e terpenides, e hidrocarbonetos aromticos policclicos. O reteno, um biomarcador das emisses da queima de conferas, foi o hidrocarboneto aromtico dominante nas amostras das plumas de fumo amostradas durante a campanha que decorreu em 2009, devido ao predomnio de amostras colhidas em incndios em florestas de pinheiros. O principal acar anidro, e sempre um dos compostos mais abundantes, foi o levoglucosano. O rcio levoglucosano/OC obtido nas partculas das plumas de fumo, em mdia, registaram valores desde 5.8 a 23 mg g-1 OC. Os rcios levoglucosano/manosano e levoglucosano/(manosano+galactosano) revelaram o predomnio de amostras provenientes da queima de conferas. Tendo em conta que a estimativa das emisses dos incndios florestais requer um conhecimento de fatores de emisso apropriados para cada biocombustvel, a base de dados abrangente obtida neste estudo potencialmente til para atualizar os inventrios de emisses. Tem vindo a ser observado que a fase de combusto latente sem chama, a qual pode ocorrer simultaneamente com a fase de chama e durar vrias horas ou dias, pode contribuir para uma quantidade considervel de poluentes atmosfricos, pelo que os fatores de emisso correspondentes devem ser considerados no clculo das emisses globais de incndios florestais. Devido falta de informao detalhada sobre perfis qumicos de emisso, a base de dados obtida neste estudo pode tambm ser til para a aplicao de modelos no recetor no sul da Europa.
Resumo:
O trabalho apresentado nesta tese teve como principais objectivos contribuir para o conhecimento da composio do lquido amnitico humano (LA), colhido no 2 trimestre de gravidez, assim como investigar possveis alteraes na sua composio devido ocorrncia de patologias pr-natais, recorrendo metabonmica e procurando, assim, definir novos biomarcadores de doenas da grvida e do feto. Aps uma introduo descrevendo o estado da arte relacionado com este trabalho (Captulo 1) e os princpios das metodologias analticas usadas (Captulo 2), seguida de uma descrio dos aspectos experimentais associados a esta tese (Captulo 3), apresentam-se os resultados da caracterizao da composio qumica do LA (gravidez saudvel) por espectroscopia de ressonncia magntica nuclear (RMN), assim como da monitorizao da sua estabilidade durante o armazenamento e aps ciclos de congelamento-descongelamento (Captulo 4). Amostras de LA armazenadas a -20C registaram alteraes significativas, tornando-se estas menos pronunciadas (mas ainda mensurveis) a -70C, temperatura recomendada para o armazenamento de LA. Foram tambm observadas alteraes de composio aps 1-2 ciclos de congelamento-descongelamento (a ter em conta aquando da reutilizao de amostras), assim como temperatura ambiente (indicando um perodo mximo de 4h para a manipulao e anlise de LA). A aquisio de espectros de RMN de 1H de alta resolução e RMN acoplado (LC-NMR/MS) permitiu a deteco de 75 compostos no LA do 2 trimestre, 6 dos quais detectados pela primeira vez no LA. Experincias de difuso (DOSY) permitiram ainda a caracterizao das velocidades de difuso e massas moleculares mdias das protenas mais abundantes. O Captulo 5 descreve o estudo dos efeitos de malformaes fetais (FM) e de cromossomopatias (CD) na composio do LA do 2 trimestre de gravidez. A extenso deste trabalho ao estudo dos efeitos de patologias no LA que ocorrem no 3 trimestre de gravidez descrita no Captulo 6, nomeadamente no que se refere ao parto pr-termo (PTD), pr-eclampsia (PE), restrio do crescimento intra-uterino (IUGR), ruptura prematura de membranas (PROM) e diabetes mellitus gestacional (GDM). Como complemento a estes estudos, realizou-se uma anlise preliminar da urina materna do 2 trimestre para o estudo de FM e GDM, descrita no Captulo 7. Para interpretao dos dados analticos, obtidos por espectroscopia RMN de 1H, cromatografia líquida de ultra eficincia acoplada a espectrometria de massa (UPLC-MS) e espectroscopia do infravermelho mdio (MIR), recorreu-se anlise discriminante pelos mtodos dos mnimos quadrados parciais e o mtodo dos mnimos quadrados parciais ortogonal (PLS-DA e OPLS-DA) e correlao espectral. Aps anlise por validao cruzada de Monte-Carlo (MCCV), os modelos PLS-DA de LA permitiram distinguir as FM dos controlos (sensibilidades 69-85%, especificidades 80-95%, taxas de classificao 80-90%), revelando variaes metablicas ao nvel do metabolismo energtico, dos metabolismos dos aminocidos e glcidos assim como possveis alteraes ao nvel do funcionamento renal. Observou-se tambm um grande impacto das FM no perfil metablico da urina materna (medido por UPLC-MS), tendo no entanto sido registados modelos PLS-DA com menor sensibilidade (40-60%), provavelmente devido ao baixo nmero de amostras e maior variabilidade da composio da urina (relativamente ao LA). Foram sugeridos possveis marcadores relacionados com a ocorrncia de FM, incluindo lactato, glucose, leucina, valina, glutamina, glutamato, glicoprotenas e conjugados de cido glucurnico e/ou sulfato e compostos endgenos e/ou exgenos (<1 M) (os ltimos visveis apenas na urina). No LA foram tambm observadas variaes metablicas devido ocorrncia de vrios tipos de cromossomopatias (CD), mas de menor magnitude. Os perfis metablicos de LA associado a pr- PTD produziram modelos que, apesar do baixo poder de previso, sugeriram alteraes precoces no funcionamento da unidade fetoplacentria, hiperglicmia e stress oxidativo. Os modelos obtidos para os grupos pr- IUGR pr- PE, pr- PROM e pr-diagnstico GDM (LA e urina materna) registaram baixo poder de previso, indicando o pouco impacto destas condies na composio do LA e/ou urina do 2 trimestre. Os resultados obtidos demonstram as potencialidades da anlise dos perfis metablicos do LA (e, embora com base em menos estudos, da urina materna) do 2 trimestre para o desenvolvimento de novos e complementares mtodos de diagnstico, nomeadamente para FM e PTD.
Resumo:
Dissertao de Mestrado, Biologia Marinha, Faculdade de Cincias e Tecnologia, Universidade do Algarve, 2015
Resumo:
As sequelas fisiopatolgicas do stress oxidativo so difceis de quantificar. Apesar dos obstculos, a relevncia mdica do stress oxidativo tem vindo a ser cada vez mais reconhecida, sendo hoje em dia encarado como um componente chave de virtualmente todas as doenas. A disfuno ertil (DE) surge neste contexto como uma espcie de barmetro da funo endotelial e do dano oxidativo. A quantificao de biomarcadores de stress oxidativo poder apresentar um enorme impacto na avaliao de pacientes com DE. O rcio glutationa reduzida/oxidada (GSH/GSSG) e a nitrotirosina (3-NT) tm vindo a demonstrar relevncia clnica. A considerao de polimorfismos genticos constitui ainda uma abordagem promissora na avaliao destas relaes no futuro. Um mtodo altamente sensvel de cromatografia líquida de alta performance (HPLC) foi desenvolvido para a determinao de 3-NT em plasma humano. As concentraes de 3-NT medidos em indivduos com DE foram 6,62,1M (mdiaS.D., n = 46). A medio da concentrao plasmtica de 3-NT poder revelar-se til como marcador de dano oxidativo dependente do xido ntrico (NO). O nvel de stress oxidativo pode tambm ser quantificado atravs da medio do decrscimo do rcio GSH/GSSG, que tem mostrado alteraes numa mirade de patologias, como a DE e a diabetes mellitus. O mtodo proposto para a quantificao do rcio GSH/GSSG em HPLC apresenta a vantagem de avaliao concomitante dos dois parmetros em apenas uma corrida. O valor do rcio GSH/GSSG obtido a partir de sangue de indivduos com DE foi 11,99,8 (mdiaS.D., n = 49). Os resultados estatsticos revelaram diferenas significativas (p<0,001) entre ambos a concentrao plasmtica de 3-NT e o rcio GSH/GSSG de sangue de indivduos com DE e as respetivas medies em indivduos saudveis. Observaram-se ainda diferenas estatisticamente significativas (p0,027) entre o rcio GSH/GSSG do sangue de pacientes apenas com diagnstico de DE e a medio respetiva em indivduos com DE e comorbilidades cardiovasculares. Estes resultados enfatizam o papel do dano oxidativo na biopatologia da DE, elucidado com o auxlio destas duas metodologias, que podero ter um amplo campo de aplicao no futuro, dado que se mostraram simples, no dispendiosas e rpidas, podendo eventualmente adequar-se a estudos de rastreio em larga escala.
Resumo:
Trabalho Final de Mestrado para obteno do grau de Mestre em Engenharia Qumica e Biolgica
Resumo:
O leite um alimento complexo, pela sua composio rico em gua, protenas, lpidos, vitaminas e minerais. Devido ao seu alto valor nutricional fundamental para a amamentao de crianas e animais em crescimento, pois fornece componentes fundamentais para o desenvolvimento e manuteno da sade. Os antimicrobianos so amplamente utilizados como uma medida teraputica no tratamento de infees bacterianas, profilaxia e como promotores de crescimento (aditivos). A presena de resduos de antimicrobianos no leite pode representar riscos para a sade humana, como reaes alrgicas em indivduos hipersensveis e resistncias. Os objetivos deste estudo so o desenvolvimento de novos mtodos de limpeza e de pr-concentrao para amostras de leite, por meio de extrao em fase slida (SPE), com a finalidade de realizar uma melhor identificao e quantificao de antimicrobiana por Cromatografia Líquida de Alta Performance (HPLC). Todos os mtodos desenvolvidos so de fcil execuo, com taxas de recuperao dos agentes antimicrobianos viveis, com uma percentagem de recuperao a partir de 85%. O mtodo cromatogrfico utilizado para a deteo e quantificao (HPLC-DAD) tm os limites de deteo (LD) entre 2.43ng / mL e 1.62ng / mL e os limites de quantificao (LQ) entre 7,36 ng / mL e 4.92 ng / mL, o que significa este mtodo vai de encontro s diretrizes estipuladas pela Unio Europeia para os agentes antimicrobianos estudados. A combinao dos mtodos propostos de limpeza e pr-concentrao por SPE e multirresduo por HPLC-DAD permite, por conseguinte, a deteo e quantificao de resduos de antibiticos no leite, tornando esta uma alternativa importante e til no processo de controlo de qualidade para a indstria de alimentos e outras rea.
