Is p190 bcr-abl rearrangement necessary for acute transformation in some p210 CML of childhood?

Chronic myeloid leukemia (CML) is a rare disease in childhood which is almost exclusively associated with bcr-abl p210 (M-bcr) rearrangements. It has been suggested that co-expression of p 190 and p210 may be a pathway of CML progression in adult patients. We report two cases of pediatric patients with a diagnosis of CML who presented co-expression of the p210 and p190 transcripts during progression to the blastic phase. The present data suggest that p190 may be a secondary event in at least some cases of childhood CML, suggesting an association with progression to a blastic crisis in these patients. (c) 2008 Elsevier Ltd. All rights reserved.

Identification of the signal pathways modulated by expression of p210$\rm\sp{bcr-abl}$ and the inhibition of p210$\rm\sp{bcr-abl}$ transforming activity by polypeptides interacting with p210$\rm\sp{bcr-abl}$ in murine myeloid 32D cells

The Bcr-Abl fusion oncogene which resulted from a balanced reciprocal translocation between chromosome 9 and 22, t(9;22)(q11, q34), encodes a 210 KD elevated tyrosine specific protein kinase that is found in more than 95 percent of chronic myelogenous leukemia patients (CML). Increase of level of phosphorylation of tyrosine is observed on cell cycle regulatory proteins in cells overexpressing the Bcr-Abl oncogene, which activates multiple signaling pathways. In addition, distinct signals are required for transforming susceptible fibroblast and hematopoietic cells, and the minimal signals essential for transforming hematopoietic cells are yet to be defined. In the present study, we first established a tetracycline repressible p210$\rm\sp{bcr-abl}$ expression system in a murine myeloid cell line 32D c13, which depends on IL3 to grow in the presence of tetracycline and proliferate independent of IL3 in the absence of tetracycline. Interestingly, one of these sublines does not form tumors in athymic nude mice suggesting that these cells may not be completely transformed. These cells also exhibit a dose-dependent growth and expression of p210$\rm\sp{bcr-abl}$ at varying concentrations of tetracycline in the culture. However, p210$\rm\sp{bcr-abl}$ rescues IL3 deprivation induced apoptosis in a non-dose dependent fashion. DNA genotoxic damage induced by gamma-irradiation activates c-Abl tyrosine kinase, the cellular homologue of p210$\rm\sp{bcr-abl},$ and leads to activation of p38 MAP kinase in the cells. However, in the presence of p210$\rm\sp{bcr-abl}$ the irradiation failed to activate the p38 MAP kinase as examined by an antibody against phosphorylated p38 MAP kinase. Similarly, an altered tyrosine phosphorylation of the JAK1-STAT1 pathways was identified in cells constitutively overexpressing p210$\rm\sp{bcr-abl}.$ This may provided a molecular mechanism for altered therapeutic response of CML patients to IFN-$\alpha.$^ Bcr-Abl oncoprotein has multiple functional domains which have been identified by the work of others. The Bcr tetramerization domain, which may function to stabilize the association of the Bcr-Abl with actin filaments in p210$\rm\sp{bcr-abl}$ susceptible cells, are essential for transforming both fibroblast and hematopoietic cells. We designed a transcription unit encoding first 160 amino acids polypeptide of Bcr protein to test if this polypeptide can inhibit the transforming activity of the p210$\rm\sp{bcr-abl}$ oncoprotein in the 32D c13 cells. When this vector was transfected transiently along with the p210$\rm\sp{bcr-abl}$ expression vector, it can block the transforming activity of p210$\rm\sp{bcr-abl}.$ On the other hand, the retinoblastoma tumor suppressor protein (Rb), a naturally occurring negative regulator of the c-Abl kinase, the cellular homologue of Bcr-Abl oncoprotein, binds to and inhibits the c-Abl kinase in a cell cycle dependent manner. A polypeptide obtained from the carboxyl terminal end of the retinoblastoma tumor suppressor protein, in which the nuclear localization signal was mutated, was used to inhibit the kinase activity of the p210$\rm\sp{bcr-abl}$ in the cytoplasm. This polypeptide, called Rb MC-box, and its wild type form, Rb C-box, when overexpressed in the 32D cells are mainly localized in the cytoplasm. Cotransfection of a plasmid transcription unit coding for this polypeptide and the gene for the p210$\rm\sp{bcr-abl}$ resulted in reduced plating efficiency of p210$\rm\sp{bcr-abl}$ transfected IL3 independent 32D cells. Together, these results may lead to a molecular approach to therapy of CML and an in vitro assay system to identify new targets to which an inhibitory polypeptide transcription unit may be directed. ^

Protein tyrosine phosphatase PTP1B suppresses p210 bcr-abl-induced transformation of Rat-1 fibroblasts and promotes differentiation of K562 cells

The bcr-abl chimeric oncoprotein exhibits deregulated protein tyrosine kinase activity and is implicated in the pathogenesis of Philadelphia chromosome (Ph)-positive human leukemias, such as chronic myelogenous leukemia (CML). Recently we have shown that the levels of the protein tyrosine phosphatase PTP1B are enhanced in p210 bcr-abl-expressing cell lines. Furthermore, PTP1B recognizes p210 bcr-abl as a substrate, disrupts the formation of a p210 bcr-abl/Grb2 complex, and inhibits signaling events initiated by this oncoprotein PTK. In this report, we have examined whether PTP1B effects transformation induced by p210 bcr-abl. We demonstrate that expression of either wild-type PTP1B or the substrate-trapping mutant form of the enzyme (PTP1B-D181A) in p210 bcr-abl-transformed Rat-1 fibroblasts diminished the ability of these cells to form colonies in soft agar, to grow in reduced serum, and to form tumors in nude mice. In contrast, TCPTP, the closest relative of PTP1B, did not effect p210 bcr-abl-induced transformation. Furthermore, neither PTP1B nor TCPTP inhibited transformation induced by v-Abl. In addition, overexpression of PTP1B or treatment with CGP57148, a small molecule inhibitor of p210 bcr-abl, induced erythroid differentiation of K562 cells, a CML cell line derived from a patient in blast crisis. These data suggest that PTP1B is a selective, endogenous inhibitor of p210 bcr-abl and is likely to be important in the pathogenesis of CML.

Regulated expression of P210 Bcr-Abl during embryonic stem cell differentiation stimulates multipotential progenitor expansion and myeloid cell fate

P210 Bcr-Abl is an activated tyrosine kinase oncogene encoded by the Philadelphia chromosome associated with human chronic myelogenous leukemia (CML). The disease represents a clonal disorder arising in the pluripotent hematopoietic stem cell. During the chronic phase, patients present with a dramatic expansion of myeloid cells and a mild anemia. Retroviral gene transfer and transgenic expression in rodents have demonstrated the ability of Bcr-Abl to induce various types of leukemia. However, study of human CML or rodent models has not determined the direct and immediate effects of Bcr-Abl on hematopoietic cells from those requiring secondary genetic or epigenetic changes selected during the pathogenic process. We utilized tetracycline-regulated expression of Bcr-Abl from a promoter engineered for robust expression in primitive stem cells through multilineage blood cell development in combination with the in vitro differentiation of embryonal stem cells into hematopoietic elements. Our results demonstrate that Bcr-Abl expression alone is sufficient to increase the number of multipotent and myeloid lineage committed progenitors in a dose-dependent manner while suppressing the development of committed erythroid progenitors. These effects are reversible upon extinguishing Bcr-Abl expression. These findings are consistent with Bcr-Abl being the sole genetic change needed for the establishment of the chronic phase of CML and provide a powerful system for the analysis of any genetic change that alters cell growth and lineage choices of the hematopoietic stem cell.

Heterose sobre os pesos de bovinos Canchim e Aberdeen Angus e de seus cruzamentos recíprocos

O trabalho foi conduzido para estimar a heterose sobre os pesos ao nascimento (PNT), à desmama (P210) e ao ano (P365) e sobre os ganhos de pesos médios diários do nascimento à desmama (G210) e da desmama ao ano (G365) nas quatro primeiras gerações do sistema de cruzamentos alternados entre as raças Canchim (C) e Aberdeen Angus (A). Os dados de 1.147 bezerros nascidos de 1981 a 1998 foram analisados pelo método dos mínimos quadrados, ajustando-se um modelo linear que incluiu os efeitos linear e quadrático da idade da mãe do bezerro e os efeitos fixos de sexo, grupo genético, mês e ano de nascimento do bezerro. Estimativas de heterose e de outras diferenças genéticas foram estimadas por contrastes entre médias e testadas pelo teste t. O contraste "CA" foi positivo e significativo (P<0,001) para as cinco características. O contraste F1CAF1AC teve sinal negativo e foi altamente significativo (P<0,001) para P210 e G210 e significativo (P<0,05) para P365. A geração F1 exibiu heterose de 4,8% para P210 e de 4,9% para G210. A heterose materna foi de 3,7%, 5,8%, 6,3% e 20,4%, respectivamente, para P210, G210, P365 e G365. A heterose média das terceira e quarta gerações do cruzamento alternado entre C e A foi de 4,6% para P210, 5,3% para G210 e de 3,5% para P365.

Seleção para peso pós-desmama em um rebanho Gir. 2. Estimativas de variâncias e parâmetros genéticos dos efeitos direto e materno para características de crescimento

Componentes de variância e parâmetros genéticos para características de crescimento foram estimados usando diferentes modelos em um rebanho da raça Gir. Utilizou-se o método da máxima verossimilhança restrita sob modelo animal univariado. Os modelos de análise incluíram os efeitos fixos de mês de nascimento, grupo contemporâneo e idade da vaca. Cinco modelos diferindo quanto aos efeitos aleatórios foram testados. Para todas as características da fase pré-desmama, o teste de razão de verossimilhança (LRT) indicou o modelo com efeito genético aditivo direto e efeitos maternos (genético e de ambiente permanente) como o de melhor ajuste. As estimativas de herdabilidade direta para peso ao nascer (PN), peso aos quatro meses corrigido para 120 dias (P120), peso à desmama corrigido para 210 dias (P210) e ganho diário na fase pré-desmama (GPRE) foram, respectivamente, 0,31± 0,07; 0,14 ± 0,06; 0,23 ± 0,07 e 0,22 ± 0,07. Para as características da fase pós-desmama, o modelo que forneceu o melhor ajuste aos dados incluiu apenas o efeito genético aditivo direto. As estimativas de herdabilidade direta para peso de machos ao final da prova de ganho de peso (P378), peso de fêmeas corrigido para 550 dias (P550), ganho diário na prova de ganho de peso (G112), altura aos 378 dias em machos (AM) e altura aos 550 dias, em fêmeas (AF) foram, respectivamente: 0,45 ± 0,11; 0,29 ± 0,11; 0,37 ± 0,11; 0,79 ± 0,13 e 0,36 ± 0,0. Os efeitos maternos, tanto o genético quanto o de ambiente permanente, foram fontes de variação importantes para as características da fase pré-desmama, não sendo verificada influência desses efeitos sobre as características da fase pós-desmama.

Seleção para peso pós-desmama em um rebanho Gir. 1. Resposta direta e correlacionada em 21 anos de seleção

Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES)

Estimativas de parâmetros genéticos de características de crescimento em um rebanho Caracu selecionado para peso ao sobreano

Foram analisados registros de 1.698 animais de um rebanho Caracu selecionado para peso pós-desmame entre os anos 1979 e 2002 com o objetivo de verificar a existência de variabilidade genética aditiva nas características de crescimento e suas interpretações. As características analisadas foram: peso ao nascer (PN), peso padronizado aos 120 dias (P120), peso ao desmame padronizado aos 210 dias (P210), peso de machos ao final da prova de ganho de peso (P378) e ganhos diários do nascimento ao desmame (GND), dos machos na prova de ganho de peso (G112), do desmame ao sobreano em machos (GDSm), peso de fêmeas padronizado aos 550 dias (P550) e ganhos das fêmeas em pastagem do desmame ao sobreano (GDSf), além da altura da garupa a um ano em machos (ALTm) e ao sobreano em fêmeas (ALTf). Os componentes de (co) variâncias, as herdabilidades e as correlações genéticas foram estimados por máxima verossimilhança restrita não-derivativa utilizando-se o software MTDFREML. As estimativas de herdabilidade e os erros-padrão foram iguais a 0,34±0,06; 0,11±0,05; 0,13±0,05; 0,11±0,05; 0,35±0,09; 0,42±0,09; 0,31±0,09; 0,13±0,06; 0,21±0,08; 0,55±0,11; 0,51±0,09 para PN, P120, P210, GND, P378, P550, GDSm, GDSf, G112, ALTm e ALTf, respectivamente. As correlações genéticas entre as características foram de moderadas a altas e positivas, com exceção de algumas correlações com a característica GDSf e o PN. A seleção com base no desempenho do próprio indivíduo, como tem sido realizada, proporciona progresso genético nas características de seleção direta, assim como em algumas características com alta correlação genética.

Efeito da seleção para peso pós-desmama sobre indicadores da eficiência produtiva de vacas da raça Nelore

O objetivo deste estudo foi avaliar indicadores da eficiência produtiva de vacas Nelore selecionadas para peso pós-desmama, enfocados nas relações peso bezerro e peso da vaca, nos rebanhos controle (NeC), não-selecionados para peso pós-desmama, seleção (NeS) e tradicional (NeT). As análises envolveram 3929 e 3906 pesos dos bezerros aos 120 (P120) e 210 (P210) dias de idade, respectivamente. Os pesos das vacas àquelas idades também foram considerados, obtendo-se 3824 (PV120) e 3777 (PV210) registros, respectivamente, para 120 e 210 dias. A análise incluiu 183, 375 e 554 vacas dos rebanhos NeC, NeS e NeT, respectivamente. Para as análises utilizou-se o procedimento GLM/SAS, em modelos que incluíram os efeitos fixos de rebanho, ano e mês de nascimento, sexo do bezerro, idade da vaca ao parto e as interações rebanho x ano de nascimento e ano x mês de nascimento. Todos os efeitos foram significativos. Os resultados mostraram respostas correlacionadas positivas na seleção para peso pós-desmama nos pesos dos bezerros e, em menor magnitude, no peso das vacas. As relações peso bezerro e peso da vaca apresentaram valores médios ajustados de 249,0±2,1; 253,7±1,6; e 255,8±1,2 g/kg para R120 e 362,9±2,8; 368,5±2,1; e 374,6±1,7 para NeC, NeS e NeT em R210, respectivamente, indicando que, nas duas idades, os rebanhos NeS e NeT produziram mais quilogramas de bezerro por quilogramas de vaca, quando comparados ao NeC.

Estimativas de parâmetros genéticos para altura do posterior, peso e circunferência escrotal em bovinos da raça Nelore

Visando estimar parâmetros genéticos em bovinos, foram utilizados registros de pesos padronizados aos 120, 210, 365, 450 e 550 dias de idade (P120, P210, P365, P450 e P550), altura do posterior mensurada próxima ao sobreano (ALT) e circunferências escrotais (CE) padronizadas aos 365, 450 e 550 dias de idade (CE365, CE450 e CE550). Os dados foram provenientes de animais machos e fêmeas, nascidos entre 1998 e 2003 em dez fazendas de seis estados brasileiros. Os componentes de (co)variância foram estimados pela metodologia REML em análises uni, bi e trivariadas, utilizando-se modelos animal. As estimativas de herdabilidade do efeito direto com os respectivos erros-padrão foram: ALT 0,63 (0,09), P120 0,25 (0,03), P210 0,34 (0,03), P365 0,45 (0,04), P450 0,48 (0,04), P550 0,49 (0,04), CE365 0,48 (0,04), CE450 0,53 (0,04) e CE550 0,42 (0,09). As correlações genéticas entre a ALT e as variáveis P120, P210, P365, P450 e P550 foram de 0,68; 0,64; 0,53; 0,58 e 0,59, respectivamente. As associações genéticas do P120 com as CE ajustadas para peso e idade foram próximas de zero, entretanto, essas correlações foram positivas e moderadas, quando as CE foram ajustadas somente pela idade. As correlações genéticas da ALT com as CE, quando ajustadas para peso e idade, foram: -0,19 (CE365), -0,24 (CE450) e 0,00 (CE550). Utilizando um modelo que não incluiu o peso do animal como covariável, as correlações genéticas das CE com a ALT foram: 0,21 (CE365), 0,12 (CE450) e 0,39 (CE550). Essas estimativas indicam que as características de crescimento e CE apresentam variabilidade genética na raça Nelore, podendo ser incluídas em programas de melhoramento genético, e a seleção para peso em qualquer idade deve acarretar aumento na estatura dos animais. Desta forma, para obtenção de animais com tamanho e peso adequados ao sistema de produção, faz-se necessária a utilização de um índice de seleção aliando estas características.

Desempenho de bovinos Nelore e cruzados Blonde d'Aquitaine x Nelore do nascimento ao desmame

Objetivou-se avaliar o desempenho produtivo de bovinos Nelore e suas cruzas com Blonde d'Aquitaine (½ Nelore + ½ Blonde d'Aquitaine) do nascimento ao desmame, mantidos em sistema de pastejo, no Estado de Alagoas. Foram analisadas 1.279 medidas de peso ao nascimento (PN) e peso à desmama ajustado para 210 dias (P210) referentes ao período entre os anos de 2005 e 2010. Utilizou-se o delineamento inteiramente casualizado, adotando-se um nível de significância de 5%. Os pesos médios para PN e P210 foram respectivamente 31,60kg e 158,66kg, para os animais Nelore, e 33,05kg e 167,03kg, para os animais cruzados. Não houve interação (P<0,05) entre grupo genético e sexo do animal, para nenhuma variável analisada. Foram observados efeitos significativos do grupo genético, sexo e época de nascimento (P<0,05) sobre PN. O grupo genético e o sexo foram significativos sobre o P210. O efeito de época de nascimento foi significativo no peso ao nascimento, mas não houve efeito no P210, provavelmente devido à variação climática verificada na região. Animais machos apresentaram pesos superiores (P<0,05) evidenciando o dimorfismo sexual. Os animais cruzados são superiores aos da raça Nelore em todas as características consideradas, proporcionando, inclusive, bezerros mais pesados ao nascimento, sem, no entanto, apresentar partos distócicos. Os animais cruzados também são adequados em relação à grande adaptação às condições climáticas e de manejo às quais foram submetidos, constituindo-se uma excelente opção para cruzamentos na região Nordeste, em condições ambientais semelhantes às deste estudo.

Estimativa de componentes de (co)variância de características de crescimento na raça Brahman utilizando inferência bayesiana

Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq)

Estimativas de efeitos genéticos e ambientais para características de carcaça mediadas pelo ultra-som em bovinos da raça nelore

Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq)

Análise genética de características de crescimento e de carcaça em bovinos Nelore

Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES)

Estudo genético quantitativo de características de crescimento e reprodutivas em bovinos da raça Brahman no Brasil

Pós-graduação em Genética e Melhoramento Animal - FCAV