Demonstration of epithelial-mesenchymal transition in kidney - The contribution of a coupled histochemical and immunohistochemical staining with Periodic Acid-Thionin Schiff

Traditional Periodic Acid Schiff has been extensively used, coupled with immunohistochemistry for epithelia or mesenchymal cells, to highlight renal tubular basement membrane (TBM). We recently tried to perform such technique in a 5/6 nephrectomy model of progressive renal fibrosis to demonstrate TBM disruption as an evidence for epithelial-mesenchymal transdifferentiation. Despite excellent basement membrane staining with traditional fuchsin-Periodic Acid Schiff, the interface between epithelial and mesenchymal cells was frequently blurred when revealed with 3`3 diaminobenzidine tetrachloride-peroxidase. Also, it was inadequate when revealed with alkaline phosphatase-fast red. We devised a triple staining method with Periodic Acid-Thionin Schiff to highlight basement membrane in blue, after double immunostaining for epithelium and mesenchymal cells. Blue basement membrane rendered a brisk contrast and highlighted boundaries between epithelial-mesenchymal interfaces. This method was easy to perform and useful to demonstrate the TBM, yield a clear demonstration of the very focal TBM disruption found in this model of progressive renal fibrosis.

Lactobacillus acidophilus ATCC 4356 inhibits biofilm formation by C. albicans and attenuates the experimental candidiasis in Galleria mellonella

Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP)

A influência da fixação na demonstração do glicogénio

A fixação é fundamental para a preservação dos tecidos e é o primeiro passo de uma técnica histológica de rotina cujo objectivo final é obter uma boa visualização das estruturas e, no caso da anatomia patológica, um diagnóstico. Algumas substâncias presentes nos tecidos, como é o caso do glicogénio, necessitam de uma solução fixadora específica capaz de prevenir a dispersão das suas moléculas, sendo a fixação do glicogénio favorecida se essa solução contiver álcool ou ácido pícrico na sua constituição. A preservação do glicogénio é fundamental porque da sua identificação podem depender diagnósticos, utilizando-se colorações histoquímicas como o Periodic Acid Schiff e o Carmim de Best para a sua visualização. Este estudo pretende comparar a qualidade da demonstração do glicogénio com PAS e Carmim de Best, em tecidos fixados com diferentes soluções fixadoras. O estudo foi efectuado a partir de cortes histológicos de fígados de porco, fixados em formol 10%, formol 10% tamponado, formol alcoólico, solução de Bouin e solução de Gendre e procedeu-se à análise estatística das avaliações feitas às lâminas. As soluções fixadoras que apresentaram melhores resultados para ambas as colorações foram o formol 10% tamponado e a solução de Gendre. Foi possível concluir que, numa fixação de 24 horas, o formol 10% tamponado pode ser utilizado com um risco mínimo de comprometer a preservação e demonstração do glicogénio. Em alternativa a esta solução fixadora, utilizada na rotina laboratorial, a solução de Gendre mostrou ser um fixador eficaz.

THE SERO-CONVERSION AND EVALUATION OF RENAL ALTERATIONS IN DOGS INFECTED BY Leishmania (Infantum) chagasi

This study investigated the sero-conversion period in which dogs from endemic areas test positive for visceral leishmaniasis (VL) as well as the early post-infection period in which renal alterations are observed. Dogs that were initially negative for Canine Visceral Leishmaniasis (CVL) were clinically evaluated every three months by serological, parasitological and biochemical tests until sero-conversion was confirmed, and six months later a subsequent evaluation was performed. Samples of kidney tissues were processed and stained with Hematoxylin and Eosin (H&E), Periodic Acid Schiff (PAS) and Masson’s trichrome stain and lesions were classified based on the WHO criteria. Of the 40 dogs that initially tested negative for VL, 25 (62.5%) exhibited positive serological tests during the study period. Of these 25 dogs, 15 (60%) tested positive within three months, five (20%) tested positive within six months and five (20%) tested positive within nine months. The dogs exhibited antibody titers between 1:40 and 1:80 and 72% of the dogs exhibited clinical symptoms. The Leishmania antigen was present in the kidneys of recently infected dogs. We found higher levels of total protein and globulin as well as lower levels of albumin in the infected dogs when compared to the control dogs. Additionally, infected dogs presented levels of urea and creatinine that were higher than those of the uninfected dogs. Glomerulonephritis was detected in some of the dogs examined in this study. These data suggest that in Teresina, the sero-conversion for VL occurs quickly and showed that the infected dogs presented abnormal serum proteins, as well as structural and functional alterations in the kidneys during the early post-infection period.

The role of ascorbate peroxidase, guaiacol peroxidase, and polysaccharides in cassava (Manihot esculenta Crantz) roots under postharvest physiological deterioration

Abstract This study aimed to investigate the role of ascorbate peroxidase (APX), guaiacol peroxidase (GPX), polysaccharides, and protein contents associated with the early events of postharvest physiological deterioration (PPD) in cassava roots. Increases in APX and GPX activity, as well as total protein contents occurred from 3 to 5 days of storage and were correlated with the delay of PPD. Cassava samples stained with periodic acid-Schiff (PAS) highlighted the presence of starch and cellulose. Degradation of starch granules during PPD was also detected. Slight metachromatic reaction with toluidine blue is indicative of increasing of acidic polysaccharides and may play an important role in PPD delay. Principal component analysis (PCA) classified samples according to their levels of enzymatic activity based on the decision tree model which showed GPX and total protein amounts to be correlated with PPD. The Oriental (ORI) cultivar was more susceptible to PPD.

An alternative technique to reveal polysaccharides in Toxoplasma gondii tissue cysts

Ultrathin sections of tissue cysts isolated from the brain of Toxoplasma gondii infected mice were submitted to two different methodologies derived from the periodic acid - Schiff's reagent (PAS) technique. The use of osmium tetroxide vapor as a developing agent of the aldehyde oxidation to reveal polysaccharides with periodic acid resulted in positive reaction in amylopectin granules in bradyzoites, as well as in the wall and matrix of the cysts, with excellent increment of the ultrastructural morphology. This technique can be used for study of T. gondii-host cell intracellular cycle, the differentiation tachyzoite-bradyzoite, and also for the formation of cysts into the host cells.

Occurrence and molecular characterization of cryptococcosis in dogs and cats in Mato Grosso, Brazil

Cryptococcosis is an infection that affects humans and animals, the etiology is attributed to Cryptococcus neoformans variety neoformans, C. neoformans var. grubii and Cryptococcus gattii. The infection is common in dogs and cats, causing respiratory, neurological, cutaneous and ocular infections. Aiming to better understand the epidemiology of cryptococcosis in animals in the region, this paper describe the occurrence and characterization of the Cryptococcus species involved in this illness in pet animals at Mato Grosso State, Brazil. Clinical samples of four cases, two in cats and two dogs, were submitted for pathological, microbiological and molecular analysis. Microscopically, in three cases, tissue sections stained with hematoxylin and eosin had absence to severe granulomatous reaction composed by histiocytes, multinucleated cells and lymphocytes infiltration. In one case, citological imprint analysis showed similar inflammatory mainly mononuclear and lymphocyte cells infiltration. All cases had variable amounts of intracellular and extracellular fungal structures compatible with Cryptococcus sp. on Periodic Acid-Schiff (PAS) stain. All clinical samples were positive for culture on Sabouraud Dextrose Agar (SDA) and morphologically classified as Cryptococcus sp. The isolates were PCR positive for C. gatti, being confirmed by sequencing technique. The findings characterize the molecular species involved in animal infections in the region, and may contribute to future studies of the epidemiology of C. gattii.

Histologic and inflammatory lamellar changes in horses with oligofructose-induced laminitis treated with a CXCR1/2 antagonist

Abstract: With the hypothesis that blocking chemokine signaling can ameliorate acute laminitis, the aim was to evaluate the therapeutic effect of intravenous DF1681B, a selective antagonist for CXCR1 and CXCR2 (chemokine receptors), in an oligofructose equine laminitis model. To twelve mixed breed clinically healthy hoses with no previous history of hoof-related lameness was administered oligofructose (10g/kg given by nasogastric tube) and divided into two groups: treated (intravenous DF1681B at 30mg/kg 6, 12, 18, and 24h after oligofructose) and non-treated groups. Laminar biopsies were performed before and 12, 36, and 72h after administering oligofructose. Samples were stained with periodic acid-Schiff (PAS) and scored from 0 to 6 according to epidermal cell and basal membrane changes. The IL-1β, IL-6, and CXCL1 RNA expressions were determined by RT-PCR. Parametric and non-parametric tests were used to compare times within each group (P<0.05). The PAS grades and IL-1β and IL-6 RNA expression increased in the non-treated group, but remained constant in the treated horses. In conclusion, DF1681B therapy reduced laminar inflammation and epidermal deterioration in treated horses. CXCR1/2 blockage should be considered therapeutically for equine acute laminitis.

Coloraciones histológicas vs microscopia electrónica de transmision para detección de Biopeliculas en pacientes con Rinosinusitis Crónica en el Hospital Universitario de la Samaritana en el año 2011

Objetivo: Determinar la concordancia entre microscopia de luz vs microscopia electrónica de transmisión para la detección de Biopeliculas en pacientes con Rinosinusitis Crónica Diseño: Estudio de concordancia. Materiales y Métodos: Analizamos 34 muestras de pacientes llevados a Cirugía Endoscópica Funcional por Rinosinusitis Crónica. Fueron procesadas para valoración mediante microscopia de luz usando Hematoxilina-Eosina, Gram, Acido Peryódico de Schiff, Giemsa y Microscopia Electrónica de Transmisión (MET). Resultados: No se identificaron Biopelícula en ninguna de las muestras analizadas bajo Microscopía Electrónica de Transmisión (MET), estos resultados son concordantes con los resultados obtenidos con las coloraciones histológicas Hematoxilina-Eosina (H-E), Gram, Giemsa y Acido Peryódico de Schiff (PAS), mostrando una concordancia absoluta con test de Kappa para resultados negativos del 100%. Conclusión: Existe una alta concordancia entre los hallazgos observados entre la MET y la Microscopia de luz para los resultados negativos

Morphology of glandular stomach (Ventriculus glandularis) and muscular stomach (Ventriculus muscularis) of the partrigde Rhynchotus rufescens

Vinte perdizes Rhynchotus rufescens adultas foram utilizadas para estudo morfológico do proventrículo e ventrículo gástricos da perdiz Rhynchotus rufescens. Os materiais foram coletados e os comprimentos do proventrículo e do ventrículo gástricos foram avaliados. Para o estudo histológico, fragmentos dos estômagos foram corados pelas técnicas de ácido periódico de Schiff (PAS) e tricromo de Masson. O proventrículo gástrico é alongado, com formato fusiforme direcionado no sentido craniocaudalmente e para a esquerda, e apresenta um comprimento médio 3,20cm nas fêmeas e 3,65cm nos machos. Histologicamente, o proventrículo gástrico é composto por vários lobos e glândulas. A mucosa é formada por epitélio cúbico, sendo bastante pregueada. O ventrículo gástrico tem o formato de uma lente biconvexa, com comprimento médio de 4,30cm nas fêmeas e 4,35cm nos machos. A mucosa é formada por pregas revestidas por células cilíndricas e pelo muco formador da cutícula. Há criptas na base das pregas. em seguida, há uma lâmina própria e uma espessa camada muscular lisa, que se encontra direcionada de acordo com o formato do ventrículo gástrico. A serosa é constituída por uma densa porção de tecido conjuntivo, entremeado por algumas células musculares lisas.

Morphology of beak and tongue of partrigde Rhynchotus rufescens

Vinte perdizes Rhynchotus rufescens foram utilizadas para estudar a morfologia do bico e da língua. Os comprimentos do bico e da língua foram avaliados, e secções histológicas foram coradas com Hematoxilina-Eosina (HE), ácido periódico de Schiff (PAS) e tricromo de Masson, posteriormente analisadas e descritas. O bico da perdiz em ambos os sexos são curvos, duros e com uma extremidade pontiaguda tendo em média de 4,90cm de comprimento para as fêmeas e 4,80 para os machos. A língua é caracterizada por um formato triangular e possui em média 1cm de comprimento para ambos os sexos, sendo sua extremidade pontiaguda. A organização histológica da língua apresenta epitélio estratificado queratinizado com papilas filiformes em toda a superfície, glândulas mucosas com ductos que se projetam na superfície epitelial e cartilagem hialina em todo o comprimento, localizada sobre a musculatura esquelética, a qual é orientada em várias direções.

Ocular melanoma and mammary mucinous carcinoma in an African lion

Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq)

Adenocarcinoma of the parotid salivary gland in a cow

Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq)

Freqüência de Candida sp. em biópsias de lesões da mucosa bucal

O objetivo desse trabalho foi determinar a freqüência da infecção por Candida sp. em biópsias de lesões da mucosa bucal, assim como associar a presença de Candida sp. com lesões malignas e lesões com vários graus de displasia. Foram utilizadas 832 biópsias da mucosa bucal, previamente incluídas em parafinas, cujos blocos foram obtidos dos arquivos da Disciplina de Patologia da Faculdade de Odontologia de Araraquara da UNESP, no período entre 1990-2001. Três cortes seqüenciais foram corados pelo ácido periódico de Schiff (PAS). do total de biópsias 27,2% foram PAS positivas, dessas 83,25% eram provenientes de pacientes do sexo masculino. Houve associação positiva entre infecção com displasia epitelial leve, moderada, severa, carcinoma espinocelular e hiperqueratose (p < 0,05). Não houve associação entre hiperplasia fibrosa inflamatória, líquen plano, granuloma piogênico (p < 0,05) com infecções fúngicas. A língua foi o sítio mais acometido por infecções em relação a outros sítios (p < 0,05). A partir dos dados quantitativos, concluiu-se que houve correlação positiva de infecção por fungos, lesões displásicas e carcinoma, sendo mais freqüente no sexo masculino. Estes dados não permitem inferir se o fungo causa displasia epitelial e carcinoma, mas confirmam a maior presença de Candida nessas lesões.