Lymnaea truncatula em Portugal: contribuição para o estudo da bioecologia e da variação genética

Lymnaea truncatula é um gastrópode de água doce com importância em medicina por ser hospedeiro intermediário do tremátode parasita Fasciola hepatica. É o único hospedeiro intermediário desta espécie encontrado até agora em Portugal. A fasciolose é responsável por perdas de produtividade em gado. Nos humanos, é uma parasitose emergente com relevo em saúde pública em várias regiões do globo. Portugal é o segundo país europeu com maior prevalência. L. truncatula é de difícil controlo por ser anfíbia e ter boa capacidade de sobrevivência e adaptação. A eficácia dos programas de controlo e monitorização depende da correcta identificação das espécies de hospedeiros intermediários, dado que nem todas as espécies apresentam a mesma sensibilidade à infecção por F. hepatica. A morfologia da concha e a anatomia dos órgãos são insuficientes na identificação das espécies, sendo necessário usar técnicas de biologia molecular. Os objectivos deste estudo foram: estudar a distribuição, a variação da densidade populacional ao longo do ano, a diversidade genética, os habitats e a influência de parâmetros físicos, químicos e biológicos, na densidade populacional de L. truncatula em cinco distritos portugueses (Coimbra, Évora, Leiria, Lisboa e Funchal). Realizaram-se inquéritos malacológicos bimestrais durante 2 anos, entre Janeiro de 2006 e Dezembro de 2007 em Portugal continental e dois (Julho e Novembro de 2009) na ilha da Madeira. No continente, encontrou-se L. truncatula em: ribeiros temporários, com pouca vegetação, substrato de argila e matéria em decomposição e com água límpida, incolor e inodora, e com concentração de cálcio e de sulfatos até 50 mg/l e 267mg/l, respectivamente. A presença de outras espécies de moluscos, como Planorbarius metidjensis, Lymnaea peregra e da subclasse Prosobronchiata, assim como concentrações elevadas de nitratos, estão associados a uma menor densidade populacional. Na ilha da Madeira, os habitats foram predominantemente: escorrimentos de encosta, permanentes, com fraca exposição solar, pouca vegetação, substrato de rocha, argila e matéria em decomposição e com água límpida, incolor e inodora, acima dos 14,4ºC. A densidade populacional diminui com o aumento dos valores de nitratos e aumenta com a concentração de cálcio na água. As fezes de animais presentes junto às colecções de água não apresentaram ovos de F. hepatica. Foi encontrado um exemplar de F. hepatica no fígado de um gamo da Tapada Nacional de Mafra (distrito de Lisboa)Estudou-se a diversidade genética de L. truncatula através de RAPD-PCR e sequenciação do gene ribossomal 18S e da região ITS-2 (este também por PCR-RFLP). Identificou-se pela primeira vez em Portugal continental e na ilha da Madeira uma espécie, geneticamente diferente mas morfologicamente muito semelhante a L. truncatula – Lymnaea schirazensis. Na ilha da Madeira, foi detectado um haplotipo distinto do presente no continente. O marcador de RAPD - OPA2 e PCR-RFLP com HpaII, são bons marcadores para distinção entre L. truncatula e L. schirazensis. Adicionalmente, detectou-se pela primeira vez na ilha da Madeira L. (Pseudosuccinea) columella, conhecido hospedeiro intermediário de F. hepatica. Este estudo permitiu melhorar o conhecimento sobre hospedeiros intermediários de F. hepatica em Portugal, o que poderá melhorar o controlo e monitorização da fasciolose.

Evolutionary implications of a high selfing rate in the freshwater snail Lymnaea truncatula.

Self-compatible hermaphroditic organisms that mix self-fertilization and outcrossing are of great interest for investigating the evolution of mating systems. We investigate the evolution of selfing in Lymnaea truncatula, a self-compatible hermaphroditic freshwater snail. We first analyze the consequences of selfing in terms of genetic variability within and among populations and then investigate how these consequences along with the species ecology (harshness of the habitat and parasitism) might govern the evolution of selfing. Snails from 13 localities (classified as temporary or permanent depending on their water availability) were sampled in western Switzerland and genotyped for seven microsatellite loci. F(IS) (estimated on adults) and progeny array analyses (on hatchlings) provided similar selfing rate estimates of 80%. Populations presented a low polymorphism and were highly differentiated (F(ST) = 0.58). Although the reproductive assurance hypothesis would predict higher selfing rate in temporary populations, no difference in selfing level was observed between temporary and permanent populations. However, allelic richness and gene diversity declined in temporary habitats, presumably reflecting drift. Infection levels varied but were not simply related to either estimated population selfing rate or to differences in heterozygosity. These findings and the similar selfing rates estimated for hatchlings and adults suggest that within-population inbreeding depression is low in L. truncatula.

Distribution of Lymnaeidae (Mollusca: Pulmonata), intermediate snail hosts of Fasciola hepatica in Venezuela

An extensive malacological survey was carried out between 2005-2009 in order to clarify the exact number of lymnaeid species which may be intermediate hosts of Fasciola hepatica in Venezuela. Four species were discovered during this survey, including two local species: Lymnaea cubensis and Lymnaea cousini and two exotic species: Lymnaea truncatula and Lymnaea columella. The most common local species was L. cubensis which was found at 16 out of the 298 sampling sites. This species has a large distribution area throughout the Northern part of Venezuela and was encountered from sea level to an altitude of 1,802 m in state of Trujillo. The second local species L. cousini was collected at only two sites of the Andean Region at altitudes of 3,550 m and 4,040 m, respectively. The European L. truncatula was found at 24 sites all located in the states of Mérida and Táchira at an altitude varying between 1,540-4,000 m. The respective distribution areas of L. cubensis and L. truncatula do not appear to overlap, but more detailed malacological surveys are needed. The fourth lymnaeid species, L. columella was collected in a canal from Mérida at an altitude of 1,929 m and in an irrigation canal from the state of Guárico, at an altitude of 63 m. The role of these four lymnaeid species in the transmission of fascioliasis in Venezuela is discussed.

Pollen and macroremains from three sediment cores from Göttingen, Germany

In a borehole in the southern outskirts of the town of Göttingen, limnic sediments of several Pleistocene warm periods occur intercalated with coarse solifluction debris and gravel of the river Leine. Pollen analysis of the limnic sediments in a borehole at Ottostrasse gave evidence of three warm periods of interglacial character, followed by three interstadial phases. The warm phases are separated one from another by stadial phases with, at least in one case, indications of periglacial solifluction. This sequence belongs to the Brunhes magnetic epoch. The pollen data allow to exclude an Eemian or Holsteinian age of the warm period sediments. Thus a Cromerian age is assumed, though the exact position of the newly described warm periods within the ''Cromerian'' remains uncertain. A section in a borehole at Akazienweg is of Holsteinian age.

Alguns aspectos da biologia de Lymnaea columella Say, 1817 (Gastropoda, Pulmonata)

Foram estudados aspectos da biologia da Lymnaea columella Say, 1817, em condições de laboratório e determinadas as variações da duração do período embrionário em relação à temperatura da água.

Infecção experimental de Lymnaea columella por Fasciola hepatica

Os ovos de F. hepatica recolhidos em bilis de boi, fezes e em bilis de coelhos foram incubados a temperatura ambiente, dando origem a miracídios após 9 a 13 dias. Com estes miracídios recém-eclodidos foram infectados experimentalmente 233 exemplares de L. columella medindo 5,0 a 11,0 mm de comprimento. Das limneas infectadas apenas 3% sobreviveram até o desenvolvimento completo das cercarías. Houve formação de 190 a 1150 metacercárias entre o 46° ao 54° dia de infecção. Vários camundongos, ratos, cobaias e coelhos foram infectados com metacercárias de diferentes idades, mas somente os coelhos eliminaram ovos nas fezes 78 dias depois. Com a morte dos coelhos foram recuperados vermes adultos.

Ocorrência de infecção natural de Fasciola hepatica Linnaeus, 1758 em Lymnaea columella Say, 1817 no Vale do Paraíba, SP, Brasil

Foram registradas em Piquete, no vale do rio Paraíba do Sul (SP), Brasil, taxas de 1,22% e 0,14% de infecção natural em Lymnaea columella, por Fasciola hepatica. Em um único exemplar de Lymnaea columella dentre os 1.052 examinados, foram observadas rédias com xifidiocercárias, rédias com cercárias de Fasciola hepatica e metacercárias de Echinostomatidae.

Atração miraxonal exercida por Biomphalaria straminea, Lymnaea columella e Physa sp, sobre miracídios de Schistosoma mansoni da linhagem BH

Utilizando-se um artefato de vidro composto de duas câmaras unidas por um canal, testamos a atração miraxonal exercida por Biomphalaria straminea, Lymnaea columella e Physa sp, sobre larvas de Schistosoma mansoni da linhagem BH. Os moluscos, ou suas águas de condicionamento (SCW), foram colocados aleatoriamente em uma das câmaras, contendo o restante do artefato somente água declorada. Dez miracídios foram depositados no centro do canal. O comportamento dos miracídios foi observado por 15 min. Foram feitas dez replicações de cada experimento, utilizando-se espécimens de moluscos e miracídios diferentes. Verificou-se que todos os moluscos e suas SCW exerceram atração miraxonal, sendo que Physa sp atraiu mais que Lymnaea columella. Foi isolado um único exemplar de B. straminea que exerceu efeito repulsivo sobre os miracídios de S. mansoni.

Ocorrência de Lymnaea columella (Gastropoda: Lymnaeidae), hospedeiro intermediário da Fasciola hepatica, para o Estado da Paraíba, Brasil

Foi registrada a ocorrência de Lymnaea columella (Gastropoda: Lymnaeidae), primeiro hospedeiro intermediário da Fasciola hepatica, para o Estado da Paraíba, Brasil, associado a macrófitas aquáticas.

Actividad molusquicida del Paraiso (Melia azedarach L.) (Meliaceae) sobre Lymnaea cubensis, molusco vector de Fasciolosis

INTRODUCCIÓN: La Fasciolosis constituye en diversas regiones una fuente importante de pérdidas económicas y cuando se descuidan las medidas de control de sus hospedadores (moluscos), junto a condiciones ecológicas favorables, pueden ocurrir casos aislados de Fasciolosis humana. Dentro de los métodos alternativos para su control está el uso de extractos vegetales y se pretendió evaluar el probable empleo del jugo extraído del fruto y semillas del Paraiso (Melia azedarach L.) en el control de Lymnaea cubensis, principal vector de la Fasciolosis en Cuba. MATERIAL Y MÉTODO: Diferentes concentraciones del jugo extraído del fruto y semillas del Paraiso (Melia azedarach L.) fueron testados para determinar las dosis letales media (DL50) y máxima (DL90) usando un programa computarizado Probit-Log. Siete series experimentales fueron probadas usando 72 moluscos en cada una. Para determinar la influencia sobre la frecuencia cardíaca fueron testados tres grupos de 10 moluscos, dos fueron tratados con las DL50=0,88627 y DL90=1,7641, respectivamente, mientras que el tercero fue considerado como testigo. RESULTADOS Y CONCLUSIONES: Se observó una marcada influencia de ambas dosis sobre la frecuencia cardíaca del molusco estudiado. Estos resultados son alentadores, pues demuestran el potencial empleo de esta planta en el control de moluscos indeseables.

Biotoxicity assays of quantum dots in in vitro cultures of Medicago sativa and Medicago truncatula

Dissertação apresentada na Faculdade de Ciências e Tecnologia da Universidade Nova de Lisboa para obtenção do grau de Mestre em Biotecnologia

Susceptibilidade de Lymnaea (pseudosuccinea) columella (Say, 1817) exposta à infecção por miracídios de Fasciola hepatica (Linnaeus, 1758)

Com o objetivo de estudar a susceptibilidade de Lymnaea (pseudosuccinea) columella de Minas Gerais, Estado onde ainda não se registraram casos autóctones de fasciolose hepática, foram utilizadas as amostras MG 1, MG 2, MG 3 e MG 4, provenientes de diferentes regiões deste Estado, para estudo comparativo com as amostras RJ e RGS procedentes dos Estados do Rio de Janeiro e Rio Grande do Sul, áreas de focos de fasciolose. A amostra de Fasciola hepatica utilizada era procedente de ovinos abatidos no município de Camapuã, no Rio Grande do Sul, e foi mantida em coelhos. Os moluscos foram infectados com 6, 8 e 10 miracídos por molusco, sendo estudadas as incidências de infecção e de mortalidade. Nas condições que se realizou o trabalho diante dos resultados obtidos, foram tiradas as seguintes conclusões: 1. A mortalidade dos caramujos parece não estar diretamente relacionada com a percentagem de infecção; 2. As amostras de Lymnaea (pseudosuccinea) columella de Minas Gerais, do Rio de Janeiro e do Rio Grande do Sul mostraram-se identicamente susceptíveis à infecção por Fasciola hepatica; 3. A população humana e os rebanhos bovino, ovino e suíno de Minas Gerais, particularmente aqueles do Vale do Rio Paraíba, podem ser considerados sujeitos à infecção por Fasciola hepatica.

Transformation of Medicago truncatula with the arginine decarboxylase gene to modify polyamine metabolism toward water deficit resistance

Dissertation submitted to obtain a Ph.D. (Doutoramento) degree in Biology at the Instituto de Tecnologia Química e Biológica da Universidade Nova de Lisboa