Avaliação do teste de aglutinação direta na detecção da infecção por Leishmania (Viannia) braziliensis em possíveis reservatórios de leishmaniose tegumentar americana no estado do Ceará

Com o objetivo de avaliar a aplicabilidade do Teste de Aglutinação Direta (TAD) como método de detecção da infecção natural canina por Leishmania (Viannia) braziliensis, foi realizado um estudo envolvendo soros de cães residentes em uma área endêmica de leishmaniose tegumentar, Serra de Baturité, CE e soros de cães provenientes da cidade de Curitiba, PR, área não endêmica de leishmaniose. Os resultados obtidos com o TAD neste trabalho indicam a possibilidade do uso deste teste sorológico para levantamentos epidemiólogicos da infecção em reservatórios; neste estudo, o cão doméstico.

Anticorpos antipromastigotas vivas de Leishmania (Viannia) braziliensis, detectados pela citometria de fluxo, para identificação da infecção ativa na leishmaniose tegumentar americana

Neste estudo, descrevemos etapas iniciais de padronização de uma nova metodologia para detecção de anticorpos antipromastigotas vivas de Leishmania (Viannia) braziliensis, pela citometria de fluxo e a análise de sua aplicabilidade para estudos clínicos. Foram avaliados 39 indivíduos com sorologia convencional (RIFI) positiva para leishmaniose, classificados quanto à ausência/presença de lesão (L- e L+). Os resultados foram expressos sob a forma de percentual de parasitas fluorescentes positivos (PPFP). A análise dos dados, na diluição 1:1.024, permitiu distinguir 95% dos pacientes L+ como um grupo de alta reatividade (PPFP>50%) e 72% dos indivíduos L- como um grupo de baixa reatividade (PPFP<50%). A análise dos títulos da reação de imunofluorescência indireta não demonstrou nenhuma relação com a ausência/presença de lesão. Em conjunto, nossos dados sugerem a aplicabilidade da citometria de fluxo na identificação dos casos de infecção ativa, o que não tem sido possível através das reações sorológicas convencionais.

Clonagem funcional como metodologia na identificação de marcadores de virulência de Leishmania (Viannia) braziliensis

Dissertação apresentada na Faculdade de Ciências e Tecnologia da Universidade Nova de Lisboa para obtenção do grau de Mestre em Biotecnologia.

Aspectos ecológicos da leishmaniose tegumentar americana: 8. avaliação da atividade enzoótica de Leishmania (Viannia) braziliensis, em ambiente florestal e peridomiciliar, região do Vale do Ribeira, Estado de São Paulo, Brasil

A evidência da transmissão extraflorestal da leishmaniose cutâneo-mucosa na região do Vale do Ribeira ensejou o presente estudo epidemiológico prospectivo, visando avaliar a atividade enzoótica de L. (V.) braziliensis. A pesquisa paratisológica da infecção natural em pequenos mamíferos e população canina foi complementada com o teste de imunofluorescência indireta (IFI) para cães e captura de flebotomíneos em ambiente florestal e peridomiciliar. A positividade para o teste sorológico e exame parasitológico somente foi observada para cães residentes e com taxas de 5,6 e 2,4%, respectivamente. Entre animais silvestres e sinantrópicos capturados, destacam-se os pertencentes a Oryzomys (Oligoryzomys) e Rattus rattus, ambos assinalados em proporções equivalentes (29,3%), em ambiente peridomiciliar. Foram capturados apenas 166 exemplares femininos de Lutzomyia intermedia, fato atribuído à borrifação das habitações humanas e anexos com DDT. No contexto epidemiológico mais amplo, discute-se a fragilidade do ciclo extraflorestal da L. (V.) braziliensis; o papel do cão e de pequenos mamíferos, como fonte de infecção domiciliar, além de analisar o potencial deles na dispersão do parasita na área estudada.

Leishmaniose tegumentar americana causada por Leishmania (Viannia) braziliensis, em área de treinamento militar na Zona da Mata de Pernambuco

Este estudo tem como objetivo geral caracterizar a epidemiologia da leishmaniose tegumentar americana em unidade de treinamento militar, localizada no Estado de Pernambuco. Entre 2002 e 2003, vinte e três casos foram diagnosticados através de exame clínico, detecção do parasita e teste de intradermoarreação de Montenegro. Sete amostras de Leishmania (Viannia) braziliensis foram isoladas destes pacientes, identificadas através de reações com anticorpos monoclonais específicos e perfil eletroforético com isoenzimas. Um inquérito epidemiológico de prevalência da infecção por IDRM foi realizado na população que realizou treinamento neste período, no qual foi identificada uma prevalência de 25,3% de infecção. Os dados obtidos, associados com achados prévios nesta área, apresentam evidências da manutenção de um ciclo enzoótico, com a ocorrência de surtos periódicos de leishmaniose tegumentar americana posteriormente à realização de treinamentos nas áreas de floresta Atlântica remanescente.

Necessidade de vigilância epidemiológica para Leishmania infantum (syn. Leishmania chagasi) e Leishmania (Viannia) braziliensis em flebotomíneos e gatos errantes no Bosque Municipal de Marília-SP

Pós-graduação em Medicina Veterinária - FMVZ

Mucosal Leishmaniasis Caused by Leishmania (Viannia) braziliensis and Leishmania (Viannia) guyanensis in the Brazilian Amazon

Background: Leishmania (Viannia) braziliensis is a parasite recognized as the most important etiologic agent of mucosal leishmaniasis (ML) in the New World. In Amazonia, seven different species of Leishmania, etiologic agents of human Cutaneous Leishmaniasis, have been described. Isolated cases of ML have been described for several different species of Leishmania: L. (V.) panamensis, L. (V.) guyanensis and L. (L.) amazonensis. Methodology: Leishmania species were characterized by polymerase chain reaction (PCR) of tissues taken from mucosal biopsies of Amazonian patients who were diagnosed with ML and treated at the Tropical Medicine Foundation of Amazonas (FMTAM) in Manaus, Amazonas state, Brazil. Samples were obtained retrospectively from the pathology laboratory and prospectively from patients attending the aforementioned tertiary care unit. Results: This study reports 46 cases of ML along with their geographical origin, 30 cases caused by L. (V.) braziliensis and 16 cases by L. (V.) guyanensis. This is the first record of ML cases in 16 different municipalities in the state of Amazonas and of simultaneous detection of both species in 4 municipalities of this state. It is also the first record of ML caused by L. (V.) guyanensis in the states of Para, Acre, and Rondonia and cases of ML caused by L. (V.) braziliensis in the state of Rondonia. Conclusions/Significance: L. (V.) braziliensis is the predominant species that causes ML in the Amazon region. However, contrary to previous studies, L. (V.) guyanensis is also a significant causative agent of ML within the region. The clinical and epidemiological expression of ML in the Manaus region is similar to the rest of the country, although the majority of ML cases are found south of the Amazon River.

Leishmania (Viannia) braziliensis transfectants overexpressing the miniexon gene lose virulence in vivo

The miniexon gene has a central role in the processing of polycistronic pre-mRNA of kinetoplastids. It is added to the 5` extremity of each mRNA, supplying the 5`-capped structure to the molecule. Previous studies in Leishmania (Leishmania) major showed that the overexpression of the miniexon array attenuates the Virulence of the parasite in in vivo assays. The results presented here extend those findings to Vionnia subgenus. Leishmania (Vionnia) braziliensis was transfected with a cosmid harboring a tandem array of one hundred miniexon gene copies and then characterized by Northern blot analysis. The overexpression of the exogenous gene was confirmed and its effect on the virulence of L (V.) braziliensis was investigated in hamsters. In BALB/c mice we could not detect parasites during the course of 15 weeks of infection. In addition, hamsters infected with transfectants overexpressing the miniexon gene exhibited only a minor footpad swelling of late onset and failed to develop progressive lesion, these attenuated parasites could be recovered from the inoculation site 1 year after infection. The persistence of parasites in the host indicates that a stable line overexpressing the miniexon may be tested as live vaccine against leishmaniasis. (C) 2008 Elsevier Ireland Ltd. All rights reserved.

Leishmania (Viannia) braziliensis identification by PCR in the state of Para, Brazil

The incidence of cutaneous leishmaniasis (CL) is increasing and there is limited surveillance of Leishmania species throughout the world. We identified the species associated with CL in a region of Amazonia, an area recognized for its Leishmania species variability. Clinical findings were analyzed and correlated with the species identified in 93 patients. PCR assays were based on small subunit ribosomal DNA (SSU-rDNA) and G6PD, and were performed in a laboratory located 3,500 km away. Leishmania (V.) braziliensis was identified in 53 patients (57%). The other 40 patients (43%) carried a different species (including six cases of L (L) amazonensis). Molecular methods can be employed, using special media, to allow transport to distant laboratories. L (V.) braziliensis is the most common species in the area of Para. The location of ulcers can suggest CL species (C) 2010 Royal Society of Tropical Medicine and Hygiene. Published by Elsevier Ltd. All rights reserved.

Clonal variation within a mucosal isolate derived from a patient with Leishmania (Viannia) braziliensis infection

Three isolates over 5 years from a patient with persistent relapsing mucosal leishmaniasis due to Leishmania (Viannia) braziliensis and 7 clones from one of these isolates were studied by zymodemes and scrodemes analysis. Results showed evidences of clonal phenotypic variation. Eight isoenzymes markers demonstrated clear differences on Cellulose Acetate (CA) and thin starch gel electrophoresis. Also a panel of specific monoclonal antibodies showed such differences. Our observations provide additional evidence that Leishmania (Viannia) braziliensis is composed by subpopulations of parasites with peculiar biochemical and antigenic characteristics.

Leishmaniose cutânea acidental

Os autores relatam o 3º caso de Leishmaniose acidental em laboratório, ocorrido em aluna do curso de Biologia, que contaminou-se por ocasião da passagem de formas amastigotas de Leishmania (Viannia) braziliensis de hamster infectado para hamster são. Chamam atenção de que, apesar de usar toda proteção exigida, a aluna foi mordida pelo hamster são, havendo como conseqüência, ruptura da luva e contágio através do inóculo.

Cross-reactivity of antibodies in human infections by the kinetoplastid protozoa Trypanosoma cruzi, Leishmania chagasi and Leishmania (Viannia) braziliensis

We have detected antibodies, in the sera of Chagas disease, Kala-azar and Mucocutaneous leishmaniasis patients, that bind multiple antigens shared between the three causative agents. The Chagas disease sera showed 98 to 100% positive results by ELISA when the Leishmania braziliensis and Leishmania chagasi antigens were used, respectively. The Kala-azar sera showed 100% positive results with Trypanosoma cruzi or L. braziliensis antigens by immunofluorescence assays. The antibodies in the sera of Mucocutaneous leishmaniasis patients showed 100% positive results by ELISA assays with T. cruzi or L. chagasi antigens. Furthermore, the direct agglutination of L. chagasi promastigotes showed that 95% of Kala-azar and 35% of Mucocutaneous leishmaniasis sera agglutinated the parasite in dilutions above 1:512. In contrast, 15% of Chagas sera agglutinated the parasite in dilutions 1:16 and below. Western blot analysis showed that the Chagas sera that formed at least 24 bands with the T. cruzi also formed 13 bands with the L. chagasi and 17 bands with the L. braziliensis. The Kala-azar sera that recognized at least 29 bands with the homologous antigen also formed 14 bands with the T. cruzi and 10 bands with the L. braziliensis antigens. Finally, the Mucocutaneous leishmaniasis sera that formed at least 17 bands with the homologous antigen also formed 10 bands with the T. cruzi and four bands with the L. chagasi antigens. These results indicate the presence of common antigenic determinants in several protozoal proteins and, therefore, explain the serologic cross-reactions reported here.

Human cutaneous leishmaniasis caused by Leishmania (Viannia) braziliensis in Santiago del Estero, Argentina: identification of parasites by monoclonal antibodies and isoenzymes

Diagnostic and parasite characterization and identification studies were carried out in human patients with cutaneous leishmaniasis lesions in Santiago del Estero, Northern Province of Argentina. Diagnostic procedures were biopsies of lesions for smears and inoculations in hamster, needle aspirations of material from ulcers for "in vitro" cultures. Immunodiagnostic techniques applied were IFAT-IgG and Montenegro skin test. Primary isolation of eight stocks of leishmanial parasites was achieved from patients with active lesions. All stocks were biologically characterized by their behaviour in hamster, measurements of amastigote and promastigotes and growth "in vitro". Eight stocks were characterized and identified at species level by their reactivity to a cross-panel of sub-genus and specie-specific Monoclonal Antibodies through an Indirect Immunofluorescence technique and a Dot-ELISA. We conclude from the serodeme analysis of Argentina stocks that: stocks MHOM/AR/92/SE-1; SE-2; SE-4; SE-8; SE-8-I; SE-30; SE-34 and SE-36 are Leishmania (Viannia) braziliensis. Three Leishmania stocks (SE-1; SE-2 and SE-30) did not react with one highly specie-specific Monoclonal Antibody (Clone: B-18, Leishmania (Viannia) braziliensis marker) disclosing two serodeme group patterns. Five out of eight soluble extracts of leishmanial promastigotes were electrophoresed on thin-layer starch gels and examined for the enzyme MPI, Mannose Phosphate Isomerase; MDH, Malate Dehydrogenase; 6PGD, 6 Phosphogluconate Dehydrogenase; NH, Nucleoside Hydrolase, 2-deoxyinosinc as substrate; SOD, Superoxide Dismutase; GPI, Glucose Phosphate Isomerase and ES, Esterase. From the isoenzyme studies we concluded that stocks: MHOM/AR/92/SE-1; SE-2; SE-4; SE-8 and SE-8-I are isoenzymatically Leishmania (Viannia) braziliensis. We need to analyze more enzymes before assigning them to a braziliensis zymodeme.