Diagnóstico de criptosporidiose em amostras fecais de bezerros por imunofluorescência direta e microscopia de contraste de fase

Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP)

Aplicação da técnica de imunofluorescência direta para o diagnóstico da leishmaniose visceral canina em aspirado de linfonodo

Recentemente, foco de leishmaniose visceral canina (CVL) foi descrito na região noroeste do Estado de São Paulo - Brasil. O Hospital Veterinário - UNESP - Araçatuba, no ano de 2.000, desenvolveu 60 testes citopatológicos de casos suspeitos de leishmaniose usando aspirado por agulha fina (FNA). Os esfregaços de linfonodo foram corados pelo método de Romanowsky (Diff-Quik®) e observados em microscopia de luz. Os casos positivos mostraram formas amastigotas típicas de Leishmania livres ou em vacúolos de macrófagos. Sinais citopatológicos de reatividade do sistema linfo-histiocitário com ausência de parasitos foram também observados. Com o objetivo de implementar o diagnóstico da CVL, detectando parasitos e material antigênico nos esfregaços, aplicou-se a reação de imunofluorescência direta (IFD) usando anticorpo policlonal anti-Leishmania produzido em camundongo. Comparamos o método de IFD com a pesquisa direta do parasito em esfregaços corados pelo método de Romanowsky. Dos 60 cães com sinais clínicos da doença, o exame direto foi positivo em 50% (n=30), duvidoso em 36,7% (n=22) e negativo com reatividade do linfonodo em 13,3% (n=8). Quando os linfonodos foram submetidos a reação de IFD observamos reação positiva em 93,3% (n=56) e reação negativa em 6,7% (n=4). Nossos resultados mostraram que a reação de IFD apresentou alta sensibilidade quando comparada a pesquisa direta do parasito pela coloração de Romanowsky. A reação de IFD pode ser um método útil para confirmar os casos duvidosos da doença, onde as formas amastigotas não são identificadas com facilidade.

Emprego da imunofluorescência direta no estudo das alterações de mucosa de palato, compatíveis com candidíase atrófica crônica, em indivíduos portadores de próteses dentárias totais muco-suportadas.

Histopathology by hematoxilin-eosin (HE) and periodic acid Schiff (PAS), concomitant direct immunofluorescence (DI) against total human immunoglobulins and against Candida albicans, was effectuated in 25 persons dentures wearers. In 5 persons without chronic athrofic candidiasis (CAC) clinical signals in the palate the HE showed wise inflammatory elements in the connective tissue and the PAS marked the continuous basal layer, the intra-cellular grains of granular layer and the uniform parakeratin on epithelial surface. In 20 others, with palatal signals of CAC, in the HE was frequent the features encountered in Candida infected and PAS revealed, beside descontinuous lamina basal and epithelial surface covered by tide and discontinuous parakeratin, the presence of round bodies few largers that presents in the granular layer, casually isolated in the medial portion of ret pegs and connective papillae. In the first 5 persons the DI against total human immunoglobulins not showed signals of the humoral immunologic phenomena, the same was valid to others 20 patients with CAC clinical aspects. However the DI with conjugate against C. albicans in the 20 cases with CAC signals revealed suitable aspects of the structures assumed by Candida in tissues. Cultures of samples obtained of the persons with CAC signals was positive in 100% to Candida, 70% presumptively albicans, against 80% of positiviness to generus Candida, 67% presumptively albicans, in the persons without CAC signals.

Utilização do método de aglutina ção direta e da reação de imunofluorescência indireta na detecção de anticorpos para Toxoplasma gondii em cavalos naturalmente infectados

Infection by Toxoplasma gondii in equines is usually not apparent, it being characterized by presence of antibody titers and tissue cysts. This study was aimed at verifying the presence of anti-Toxoplasma antibodies in equine serum by modified agglutination test (MAT) and reaction to indirect immunofluorescent antibody test (IFAT). 1984 samples of serum were examined, by MAT, using whole formalin fixed tachyzoites of T.gondii as antigen. The samples reacting in the MAT test, and 150 other negative samples, chosen at random, were also tested by IFAT, utilizing anti-equine IgG. The association among the test results was verified by the McNemar test. 138 samples were positive in the MAT test, with 60 (46.38%) presenting reaction at a dilution of 1:64; 52 (37.7%) at 1:256; 19 (13.8%) at 1:1024; five (3.6%) at 1:4096; and two (1.45%) at 1:16384. Of 132 positive MAT samples, 14 were negative in the IFAT test, but the statistical analysis indicated general agreement in results of the tests. The results obtained showed agreement among the tests utilized, and the possibility of participation of equines in the transmission of toxoplasmosis to carnivorous animals, and also to humans.

Estudo da reatividade cruzada em amostras de soro de cães positivos para Leishmania sp., Babesia canis e Ehrlichia canis, pelo ensaio imunoenzimático indireto e pela reação de imunofluorescência indireta

To verify the presence of cross-reaction among leishmaniosis, ehrlichiosis and babesiosis in serological diagnostics used in human visceral leishmaniasis control programs, serum samples from leishmaniasis endemic and non-endemic areas were collected and tested by Indirect Fluorescent Antibody (IFAT) and Enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA). All serum samples from endemic areas were positive for Leishmania sp., by ELISA and IFAT, 51% positive for Babesia canis and 43% for Ehrlichia canis by IFAT. None of the serum samples from non-endemic areas were positive for Leishmania sp., by IFAT, but 67% were positive for B. canis and 78% for E. canis using the same test. When tested by ELISA for Leishmania sp., four samples from non-endemic area were positive. These dogs were then located and no clinical signs, parasites or antibody was detected in new tests for a six month period. Only one of these 4 samples was positive for B. canis by IFAT and ELISA and three for E. canis by IFAT. The results of the work suggest a co-infection in the endemic area and no serological cross-reaction among these parasites by IFAT and ELISA.

Avaliação da reatividade cruzada entre antígenos de Leishmania spp e Trypanosoma cruzi na resposta sorológica de cães pela técnica de imunofluorescência indireta (RIFI)

Visceral Leishmaniasis (VL) is a zoonosis caused by Leishmania spp. protozoa. Dog is the main parasite's reservoir, especially in urban areas. Indirect Immunofluorescent Antibody Test (IFAT) is commonly used for canine visceral leishmaniasis (CVL) diagnosis, by detection of antibodies against the parasite. However, Trypanosoma cruzi (T.cruzi) cross reactions can occur in serological diagnosis. In order to evaluate the occurrence of cross reactions between antigens of Leishmania spp. and T.cruzi, 150 blood samples of CVL epidemiological inquiry positive dogs were collected and sera were tested by IFAT. Dogs were culled at Zoonosis Control Center of Bauru (SP), an endemic area for VL. Another 150 dogs' blood samples were collected in Botucatu (SP), a non endemic area for LV, and sera were also tested by IFAT. Serum samples of dogs from Bauru were positive, both for Leishmania spp. and for T. cruzi, showing high cross-reactions incidence, reinforcing the need of diagnosis confirmation by other tests. Serum samples of dogs from Botucatu demonstrated low prevalence of positive results by IFAT, both for Leishmania spp. and T.cruzi. However, despite the low number of positive serological results for these parasites, the epidemiological and serological investigation for LV and Chagas disease in dogs from Botucatu must be kept, considering the importance of dog as domestic reservoir for both parasites.

Comparação entre os métodos de ELISA, imunofluorescência indireta e imunocromatografia para o diagnóstico da leishmaniose visceral canina

Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES)

Hemocultura, reação de imunofluorescência indireta (RIFI) e reação em cadeia pela polimerase (PCR) para Leishmania spp. em cães e gatos provenientes de área endêmica e não endêmica para leishmaniose

Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP)

Padronização da reação de imunofluorescência direta para detecção de oocistos de cryptosporidium parvum em amostras fecais de bezerros

Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES)

Detecção de reações cruzadas por Leishmania spp. e Trypanosoma spp. em cães pelo ensaio imunoenzimático indireto, pela reação de imunofluorescência indireta e reação em cadeia de polimerase

Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP)

Avaliação do teste ELISA durante o tratamento de pacientes com paracoccidioidomicose: comparação com a imunofluorescência indireta e a micro-imunodifusão dupla em gel de ágar

Pós-graduação em Patologia - FMB

Comparação das técnicas de ELISA indireto e Imunofluorescência indireta na detecção de anticorpos anti-Neospora caninum em búfalas (Bubalus bubalis)

Para comparar dois testes sorológicos na detecção de anticorpos anti-Neospora caninum em soros sanguíneos de búfalas, foram coletados amostras de 288 búfalas entre dois a dez anos de idade. Para identificar a presença de imunoglobulina G anti-N. caninum utilizou-se à reação de imunofluorescência indireta (RIFI), tendo o título 200 como ponto de corte, e o Ensaio Imunoenzimático indireto (ELISA-indireto), considerando-se positiva as amostras que obtiveram razão S/P>0,5. Observaram-se 153 (53,12%) animais soropositivos para N. caninum, através da RIFI, enquanto que 50 (17,36%) animais foram reagentes no ELISA. A ocorrência de anticorpos anti-N. caninum demonstram que o parasito esta circulando entre búfalas criadas no estado do Pará, sendo que ambos os teste de RIFI e ELISA podem ser utilizados para diagnosticar imunoglobulinas contra este agente. No entanto observou-se uma fraca correlação (Kappa=0,36) entre ambos os testes, considerando a RIFI como padrão ouro.

Estudo da expressão e participação de osteopontina durante a interação taquizoíto de Toxoplasma gondii célula hospedeira.

Toxoplasma gondii é um parasito do filo Apicomplexa que infecta uma grande variedade de hospedeiros, incluindo os humanos. O parasito invade a célula hospedeira por penetração ativa, com a participação das proteínas de suas organelas secretoras durante esse processo. Até o momento, somente um número limitado de proteínas secretoras tem sido descoberto, além disso, as moléculas efetoras envolvidas na invasão e sobrevivência do parasito não estão completamente compreendidas. A osteopontina (OPN) é uma glicofosfoproteína adesiva secretada, multifuncional, que contém o domínio arginina-glicina-ácido aspártico (RGD) de ligação à integrina, que está envolvida em uma variedade de eventos fisiológicos e patológicos, incluindo sinalização e sobrevivência celular. Pela primeira vez, nós demonstramos pelas técnicas de imunofluorescência e imunocitoquímica ultraestrutural que há uma intensa marcação para uma proteína OPN-like nos grânulos densos de taquizoítos de T. gondii extracelulares. O western blotting e o RT-PRC confirmaram a expressão de OPN-like nos taquizoítos. Nossos resultados também mostram que após a invasão dos macrófagos, a proteína OPN-like está localizada na membrana do vacúolo parasitóforo. Esses dados sugerem que os grânulos densos secretam uma proteína OPN-like, e nós podemos especular que essa proteína participa durante o processo de interação do parasito com as células hospedeiras. .

Adaptações transgeracionais do pâncreas endócrino em camundongos provenientes de restrição proteica materna In Utero

A exposição materna durante o período gestacional a uma dieta restrita em proteínas (LP) prejudica o desenvolvimento do pâncreas endócrino em sua prole e aumenta a susceptibilidade à hipertensão, diabetes e obesidade na vida adulta. Há evidências de que esse fenômeno pode persistir em gerações subsequentes. Objetivou-se avaliar o efeito da restrição proteica sobre o metabolismo da glicose e morfometria pancreática na prole F3 de camundongos ao nascimento e ao desmame. Para tanto, fêmeas virgens de camundongos Suíços (F0) foram acasaladas e receberam dieta normo-proteica (19% de proteína - NP) ou uma dieta isocalórica restrita em proteínas (5% de proteína - LP) durante toda a gravidez. Durante a lactação e o restante do experimento, todos os grupos receberam a dieta NP. Os filhotes machos foram nomeados F1 (NP1 e LP1). As fêmeas F1 e F2 foram acasaladas para produzir F2 e F3 (NP2, LP2, NP3 e LP3), respectivamente. Semanalmente, os filhotes foram pesados e calculada a taxa de crescimento alométrico (log [massa corporal] = log a + log b [idade]). Os animais foram sacrificados nos dias 1 e 21 de idade, a glicemia foi determinada e o pâncreas retirado, pesado e analisado por estereologia e imunofluorescência; a insulina foi mensurada aos 21 dias. Como resultados, os filhotes restritos na primeira geração (LP1) foram menores ao nascer, mas apresentaram um crescimento acelerado nos primeiros sete dias de vida, mostrando catch-up com os controles; a prole LP2 demonstrou a maior massa corporal ao nascimento e tiveram uma taxa de crescimento mais lenta durante a lactação; não houve diferença na massa corporal e na taxa de crescimento na geração F3. A massa de pâncreas foi diminuída em LP1-LP3 ao nascimento, contudo foi aumentada em LP2 ao desmame. A densidade de volume e o diâmetro das ilhotas foram menores em todos os grupos restritos no dia 1 e 21, somente LP1 teve o menor número de ilhotas. Ao nascer, a massa de células beta foi menor em LP1-LP3 e permaneceu baixa durante a lactação. No dia 1 e 21, os filhotes foram normoglicêmicos, entretanto foram hipoinsulinêmicos ao desmame. Portanto, a restrição de proteínas em camundongos durante a gestação produz alterações morfológicas nas ilhotas pancreáticas, sugerindo que a homeostase da glicose foi mantida por um aumento da sensibilidade à insulina durante os primeiros estágios de vida na prole ao longo de três gerações consecutivas.