Factor Xa activation of factor V is of paramount importance in initiating the coagulation system: lessons from a tick salivary protein

BACKGROUND: Generation of active procoagulant cofactor factor Va (FVa) and its subsequent association with the enzyme activated factor X (FXa) to form the prothrombinase complex is a pivotal initial event in blood coagulation and has been the subject of investigative effort, speculation, and controversy. The current paradigm assumes that FV activation is initiated by limited proteolysis by traces of (meizo) thrombin. METHODS AND RESULTS: Recombinant tick salivary protein TIX-5 was produced and anticoagulant properties were studied with the use of plasma, whole blood, and purified systems. Here, we report that TIX-5 specifically inhibits FXa-mediated FV activation involving the B domain of FV and show that FXa activation of FV is pivotal for plasma and blood clotting. Accordingly, tick feeding is impaired on TIX-5 immune rabbits, displaying the in vivo importance of TIX-5. CONCLUSIONS: Our data elucidate a unique molecular mechanism by which ticks inhibit the host's coagulation system. From our data, we propose a revised blood coagulation scheme in which direct FXa-mediated FV activation occurs in the initiation phase during which thrombin-mediated FV activation is restrained by fibrinogen and inhibitors.

Cholesterol enhances phospholipid-dependent activated protein C anticoagulant activity

The influence of cholesterol on activated protein C (APC) anticoagulant activity in plasma and on factor Va inactivation was investigated. Anticoagulant and procoagulant activities of phosphatidylcholine/phosphatidylserine (PC/PS) vesicles containing cholesterol were assessed in the presence and absence of APC using factor Xa-1-stage clotting and factor Va inactivation assays. Cholesterol at approximate physiological membrane levels (30%) in PC/PS (60%/10% w/w) vesicles prolonged the factor Xa-1-stage clotting time dose-dependently in the presence of APC but not in the absence of APC. APC-mediated cleavage of purified recombinant factor Va variants that were modified at specific APC cleavage sites (Q306/Q679-factor Va; Q506/Q679-factor Va) was studied to define the effects of cholesterol on APC cleavage at R506 and R306. When compared to control PC/PS vesicles, cholesterol in PC/PS vesicles enhanced factor Va inactivation and the rate of APC cleavage at both R506 and R306. Cholesterol also enhanced APC cleavage rates at R306 in the presence of the APC cofactor, protein S. In summary, APC anticoagulant activity in plasma and factor Va inactivation as a result of cleavages at R506 and R306 by APC is markedly enhanced by cholesterol in phospholipid vesicles. These results suggest that cholesterol in a membrane surface may selectively enhance APC activities. © 2005 International Society on Thrombosis and Haemostasis.

Protein S is inducible by interleukin 4 in T cells and inhibits lymphoid cell procoagulant activity

Extravascular procoagulant activity often accompanies cell-mediated immune responses and systemic administration of pharmacologic anticoagulants prevents cell-mediated delayed-type hypersensitivity reactions. These observations suggest a direct association between coagulation and cell-mediated immunity. The cytokine interleukin (IL)-4 potently suppresses cell-mediated immune responses, but its mechanism of action remains to be determined. Herein we demonstrate that the physiologic anticoagulant protein S is IL-4-inducible in primary T cells. Although protein S was known to inhibit the classic factor Va-dependent prothrombinase assembled by endothelial cells and platelets, we found that protein S also inhibits the factor Va-independent prothrombinase assembled by lymphoid cells. Thus, protein S-mediated down-regulation of lymphoid cell procoagulant activity may be one mechanism by which IL-4 antagonizes cell-mediated immunity.

Coagulation initiated on herpesviruses

Herpesviruses have been previously correlated to vascular disease and shown to cause thrombogenic and atherogenic changes to host cells. Herein we show that even in the absence of cells, purified cytomegalovirus (CMV) and herpes simplex virus type 1 (HSV-1) and type 2 (HSV-2) can initiate thrombin production. Functional assays demonstrated that purified HSV-1 and HSV-2 provide the necessary phospholipid (proPL) for assembling the coagulation factors Xa and Va into prothrombinase, which is responsible for generating thrombin. These observations are consistent with our earlier studies involving CMV. The presence of proPL on all three herpesviruses was confirmed directly by flow cytometry and electron microscopy by using annexin V and factor Va, respectively, as proPL-specific probes. Of equal importance, we found that CMV, HSV-1, and HSV-2 were also able to facilitate factor Xa generation from the inactive precursor factor X, but only when factor VII/VIIa and Ca2+ were present. Monoclonal antibodies specific for tissue factor (TF), the coagulation initiator, inhibited this factor X activation and, furthermore, enabled identification of TF antigen on each virus type by flow cytometry and electron microscopy. Collectively, these data show that CMV, HSV-1, and HSV-2 can initiate the generation of thrombin by having essential proPL and TF activities on their surface. Unlike the normal cellular source, the viral activity is constitutive and, therefore, not restricted to sites of vascular injury. Thus cell-independent thrombin production may be the earliest event in vascular pathology mediated by herpesviruses.

Comparative analysis of prothrombin activators from the venom of Australian elapids

A key component of the venom of many Australian snakes belonging to the elapid family is a toxin that is structurally and functionally similar to that of the mammalian prothrombinase complex. In mammals, this complex is responsible for the cleavage of prothrombin to thrombin and is composed of factor Xa in association with its cofactors calcium, phospholipids, and factor Va. The snake prothrombin activators have been classified on the basis of their requirement for cofactors for activity. The two major subgroups described in Australian elapid snakes, groups C and D, are differentiated by their requirement for mammalian coagulation factor Va. In this study, we describe the cloning, characterization, and comparative analysis of the factor X- and factor V-like components of the prothrombin activators from the venom glands of snakes possessing either group C or D prothrombin activators. The overall domain arrangement in these proteins was highly conserved between all elapids and with the corresponding mammalian clotting factors. The deduced protein sequence for the factor X-like protease precursor, identified in elapids containing either group C or D prothrombin activators, demonstrated a remarkable degree of relatedness to each other (80%-97%). The factor V-like component of the prothrombin activator, present only in snakes containing group C complexes, also showed a very high degree of homology (96%-98%). Expression of both the factor X- and factor V-like proteins determined by immunoblotting provided an additional means of separating these two groups at the molecular level. The molecular phylogenetic analysis described here represents a new approach for distinguishing group C and D snake prothrombin activators and correlates well with previous classifications.

Transfer factor for carbon monoxide: a glance behind the scene.

The transfer factor for carbon monoxide (TLCO) is widely used in pulmonary function laboratories because it represents a unique non-invasive window on pulmonary microcirculation. The TLCO is the product of two primary measurements, the alveolar volume (VA) and the CO transfer coefficient (KCO). This test is most informative when VA and KCO are examined, together with their product TLCO. In a normal lung, a low VA due to incomplete expansion is associated with an elevated KCO, resulting in a mildly reduced TLCO. Thus, in case of low VA, a seemingly "normal KCO" must be interpreted as an abnormal gas transfer. The most common clinical conditions associated with an abnormal TLCO are characterised by a limited number of patterns for VA and KCO: incomplete lung expansion, discrete loss of alveolar units, diffuse loss of alveolar units, emphysema, pulmonary vascular disorders, high pulmonary blood volume, alveolar haemorrhage.

A mechanism for co-transcriptional recruitment of mRNA localization factor on nascent mRNAs in budding yeast

Le transport et la localisation des ARN messagers permettent de réguler l’expression spatiale et temporelle de facteurs spécifiques impliqués dans la détermination du destin cellulaire, la plasticité synaptique, la polarité cellulaire et la division asymétrique des cellules. Chez S.cerevisiæ, plus de trente transcrits sont transportés activement vers le bourgeon cellulaire. Parmi ces transcrits, l’ARNm ASH1 (asymetric synthesis of HO) est localisé à l’extrémité du bourgeon pendant l’anaphase. Ce processus va entrainer une localisation asymétrique de la protéine Ash1p, qui sera importée uniquement dans le noyau de la cellule fille, où elle entraine le changement de type sexuel. La localisation asymétrique de l’ARNm ASH1, et donc de Ash1p, implique la présence de différents facteurs de localisation. Parmi ces facteurs, les protéines She (She1p/Myo4p, She2p et She3p) et les répresseurs traductionnels (Puf6p, Loc1p et Khd1p) participent à ce mécanisme. La protéine navette She2p est capable de lier l’ARNm ASH1 et va entrainer le ciblage de cet ARNm vers l’extrémité du bourgeon en recrutant le complexe She3p-Myo4p. Des répresseurs traductionnels régulent la traduction de cet ARNm et évitent l’expression ectopique de la protéine Ash1p pendant son transport. Alors que la fonction cytoplasmique de She2p sur la localisation des ARNm est connue, sa fonction nucléaire est encore inconnue. Nous avons montré que She2p contient une séquence de localisation nucléaire non classique qui est essentielle à son import nucléaire médié par l’importine α (Srp1p). L’exclusion de She2p du noyau par mutation de son NLS empêche la liaison de Loc1p et Puf6p sur l’ARNm ASH1, entrainant un défaut de localisation de l’ARNm et de la protéine. Pour étudier plus en détail l’assemblage de la machinerie de localisation des ARNm dans le noyau, nous avons utilisé des techniques d’immunoprécipitation de chromatine afin de suivre le recrutement des facteurs de localisation et des répresseurs traductionnels sur les ARNm naissants. Nous avons montré que She2p est recruté sur le gène ASH1 pendant sa transcription, via son interaction avec l’ARNm ASH1 naissant. Puf6p est également recruté sur ASH1, mais d’une manière dépendante de la présence de She2p. De façon intéressante, nous avons détecté une interaction entre She2p et la plus grande sous-unité de l’ARN polymérase II (Rpb1p). Cette interaction est détectée avec la forme active en élongation de l’ARN polymérase II. Nous avons également démontré que She2p interagit avec le complexe d’élongation de la transcription Spt4p/Spt5p. Une délétion de SPT4 ou une mutation dans SPT5 (Ts spt5) à température restrictive empêche l’interaction entre She2p et Rpb1p, et diminue le recrutement de She2p au gène ASH1, entrainant un défaut de localisation de l’ARNm et un défaut de localisation asymétrique de la protéine Ash1p. De manière globale, nos résultats montrent que les facteurs impliqués dans la localisation cytoplasmique des ARNm et dans leur contrôle traductionnel sont recrutés de façon co-transcriptionnelle sur les ARNm naissants via leur interaction avec la machinerie de transcription, suggèrant un rôle important de la machinerie transcriptionelle dans la localisation des ARNm.

Respuesta de las células HeLa y EA.hy926 al estrés por hipoxia y radiación ionizante a través de la vía JAK/STAT y la supervivencia celular

El comportamiento biológico de las células cancerosas es influenciado por el microambiente en el que se desarrollan y en este, factores como la angiogénesis o el estímulo de agentes estresores como la hipoxia, se han considerado críticos para su evolución y manejo terapéutico. Uno de los mecanismos moleculares implicados en la respuesta celular frente a estímulos estresores es la activación de vías de señalización intracelulares; en este estudio, se evaluó el estado de la vía JAK/STAT y en ella la expresión/activación de la proteína STAT3 en la línea tumoral (HeLa) y endotelial (EA.hy926), sometidas a hipoxia física y química con mesilato de deferoxamina durante 2, 6 y 24 horas. Adicionalmente, al considerar la importancia de la hipoxia como un agente modificador de la respuesta en el manejo del cáncer utilizando radiaciones ionizantes, se construyeron curvas de supervivencia celular que permitieron evaluar el comportamiento celular frente a estos estímulos. El presente estudio resalta la importancia de la hipoxia como un estímulo que modifica la activación de la proteína STAT3 y la supervivencia de células irradiadas en las dos líneas estudiadas.

Análisis de la política petrolera venezolana durante el gobierno de Hugo Chávez como factor determinante de la Revolución Bolivariana (período 1999-2012)

Desde 1999, la política petrolera se constituyó como base del proyecto político chavista conocido como la Revolución Bolivariana, e incluso se convirtió en el eje de la participación, polarización y de las relaciones entre los principales actores del oficialismo y de la oposición venezolana.

La formación profesional como factor clave para la mejora continua en la empresa.

Establecer una estrategia que pueda ser aplicada independientemente de la vía productiva a la que pertenezca a una organización, con la finalidad de responder a las necesidades tanto de los trabajadores como de las empresas en materia de formación. Lograr una mayor flexibilidad en la empresa venezolana, actualmente responde a modelos muy jerarquizados de gestión. Necesidad de cambios de creencia que el aprendizaje obedece a necesidades inmediatas (la cultura del hacer es más importante que aprender).Lograr una estrategia que se inscriba en un modelo pedagógico, con una visión más humanista del aprendizaje en el trabajo a partir de la experiencia. Para la confección de la propuesta de investigación: bibliografía sobre la temática analizada. Objeto del trabajo: estudiantes de Formación Profesional de Venezuela. Para la confección de la propuesta de investigación: investigación sobre literatura científica, investigación teórica. Cuando la propuesta sea desarrollada: Método de la simulación en la estrategia de acción formativa y método de casos. Revisión bibliográfica. Análisis de contenido, análisis comparativo, análisis conceptual. La investigación analiza la formación, su definición y diferencias con respecto a los conceptos de educación y entrenamiento, las condiciones para la formación y las estrategias que se pueden aplicar de acuerdo con los objetivos que se persigue. Indica los pasos a seguir para confeccionar un plan de formación. Aborda el tema de la nueva empresa y sus características definitorias; realiza una propuesta organizacional que se inscribe dentro de los nuevos paradigmas. Analiza el impacto actual que tienen las nuevas tecnologías de la información y la comunicación en las organizaciones mostrando algunas de sus ventajas. Desarrolla los temas esenciales en la gestión de los recursos humanos dentro de la organización: la motivación, la satisfacción y la comunicación. Aborda el tema de las cualidades personales necesarias en un trabajador y el perfil profesional que la empresa hoy demanda. La última parte está dirigida al análisis del estado de la formación en la empresa dentro del ámbito venezolano y los objetivos que se persigue al confeccionar esta propuesta, así como la presentación y justificación de una estrategia formativa para desarrollar en los trabajadores las condiciones mínimas necesarias para desenvolverse eficientemente en sus puestos de trabajo. La escuela no forma adecuadamente a las nuevas generaciones para el desempeño laboral y profesional. La sociedad actual y demanda un aprendizaje constante y grandes exigencias de competencias de los empleados. Es necesario la confección de sistemas de aprendizaje permanente, donde se concibe la gestión de los empleados como un proceso continuo de adaptación y enriquecimiento profesional. Todos los procedimientos de formación tienen por objetivo el crecimiento de las competencias como el desarrollo de los conocimientos y la regulación de aptitudes. Es prioritario el desarrollo de competencias para el trabajo, competencias interpersonales y competencias relacionadas con el procesamiento de la información, para lo cual es necesario el desarrollo de programas formativos fundamentalmente desde el ámbito de la formación profesional.

Ocio y tiempo libre, como factor de integración social en personas deficientes mentales.

El presente estudio pretende el siguiente objetivo fundamental: analizar la problemática de la deficiencia mental y sus posibilidades de integración social a través de un aspecto tan concreto como es el tiempo libre.. Este trabajo es de carácter teórico-práctico; dividido en seis capítulos, que recogen los siguientes temas: ocio y tiempo libre, acotaciones al concepto de deficiente mental, normalización e integración, orientaciones para la integración del deficiente mental a través del tiempo, un modelo de intervención en el tiempo libre y otras experiencias de integración.. En términos generales se concluyen los siguientes puntos: 1. Todo programa de intervención social debe comenzar por analizar el modelo de sociedad en la que se va a actuar. En este terreno los problemas son múltiples, pues en una sociedad que genera marginación hay muchos problemas que habría que analizar. 2. Teniendo en cuenta la insuficiencia de la integración escolar para conseguir una integración social integral, surge la posibilidad de dar importancia al tiempo libre. 3. Es importante partir del principio de la igualdad de oportunidades para que esa organización del tiempo libre se ajuste a las posibilidades de la persona deficiente. 4. Los proyectos de intervención deberán partir de las necesidades de las personas deficientes mentales en los que se encuentran sus contactos y conexiones sociales, que se verán realizadas si se potencian su presencia en lugares públicos, participan en las actividades de la comunidad .5. Para llevar a cabo esto es necesario contar con un personal sensibilizado con el tema y que con una adecuada preparación, compartan su tiempo libre con las personas deficientes, sirviéndoles como marco de referencia y retirándose paulatinamente a medida que estas personas van adquiriendo responsabilidades. 6. Así el tiempo libre se convierte en un factor más de integración social de la persona deficiente..

La participación como factor de calidad en la educación.

La calidad educativa va ineludiblemente vinculada a la evaluación en todos sus ámbitos y niveles. La evaluación del sistema educativo se presenta como una necesidad para informar a los usuarios del mismo y para que los responsables políticos puedan tomar decisiones con conocimiento real de la situación y las necesidades de mejora. Pero la eficacia de las medidas que se tomen no sólo precisa de información objetiva sino también de compromiso por parte de los implicados, lo cual pasa por su participación en los mismos procesos evaluativos.

Los padres, factor importante y decisivo en la recuperación de inadaptados.

La actitud de los padres hacia hijos inadaptados es determinante para su recuperación y para el desarrollo de una vida completa. Hay varios argumentos que lo justifican: la familia es el primer ambiente en el que se manifiesta la inadaptación, es la obligación de los padres, como tales, de ser el apoyo y la ayuda fundamental del inadaptado, la actuación de la familia facilita la reeducación y la inadaptación de un niño bien atendido por su familia, tiene más fácil solución. Después se exponen una serie de principios educativos generales, con validez para todo tipo de inadaptación. Por ejemplo la creencia absoluta de que una correcta acción educativa va a producir los efectos deseados de reeducación, el iniciar la acción educativa tan pronto como se constate la inadaptación, y nunca esperar a que sea el niño por si sólo el que resuelva esta inadaptación, una actitud paciente y persistente, y por último mantener al niño inadaptado ocupado en actividades diversas.

La Formación Profesional como factor de desarrollo en el distrito universitario de Salamanca : situación, necesidades y perspectivas.

Tras un análisis del marco legal-educativo en el que se inscribe la Formación Profesional, analiza la estructura productiva y ocupacional y sus relaciones con la FP, circunscribiéndose al distrito universitario de Salamanca. Dos objetivos: 1. El estudio de la mano de obra, planteando la hipótesis de un predominio del sector primario con una cualificación media-baja y un progresivo incremento en el sector terciario. 2. Análisis de la oferta de la mano de obra que proporciona la FP en relación con sus componentes sociales, planteando como hipótesis el desajuste entre demanda y oferta y la aglutinación en la FP de las clases sociales media-baja y baja. Universo de alumnos: 11943 ss. Muestra seleccionada: 1500 ss. Margen de error: 2,5. Coeficiente de elevación: 12,5. Muestreo proporcional. Muestra real: 1262 ss. Margen de error: 2,5-3. Universo de profesores: 872 ss. La muestra es todo el universo. Muestra real obtenida: 286 ss. Representa el 32,7 del universo. 2 Apartados: 1. El marco legal de la FP. 2. Las tendencias de mercado desde 1960: evolución sectorial de la producción y evolución sectorial de la mano de obra. Analiza la estructura de la FP en el distrito universitario. Por último, examina la función real de la FP a través de 2 cuestionarios, uno para alumnos y otro para profesores, examinando los siguientes aspectos: nivel académico y sexo del profesorado y alumnos, expectativas de trabajo, grado de adecuación de la FP a las necesidades de desarrollo, clase social del alumno y sugerencias de mejora por parte de los profesores. En el alumno se recoge información sobre la especialidad cursada, profesión del padre, motivación y perspectivas de trabajo. Comparando los índices del PIB se observa que en el distrito universitario de Salamanca tiene un bajo crecimiento económico, con predominio del sector primario, expansión creciente del sector servicios y desarrollo escaso del secundario. Se deducen que los profesores tienen pocas expectativas de trabajo para sus alumnos, en especial los licenciados en Filosofía y Letras, Medicina y Farmacia. Las ramas de FP que consideran necesarias son Agropecuaria y, en menor grado, Informática. Sugieren que la colaboración con empresas y la mejora de planes, programas y dotaciones es la vía para adaptar la FP a las necesidades reales. Las preferencias de los alumnos se orientan al sector secundario (hombres) y al terciario (mujeres). Proceden de familias agrícolas y-o ganaderas y obreras. Los factores principales de motivación son la autorrealización y la seguridad personal. Se detecta conciencia de fracaso. Prefieren trabajar en su lugar de origen o alrededores, siendo importante el número de los que trabajarían en cualquier parte o en toda España. Desajuste entre la FP y la estructura productiva del distrito universitario de Salamanca, siendo los sectores secundario y terciario los más preferidos por los alumnos. El alumnado proviene de sectores sociales bajos. Casi todos los alumnos prefieren trabajar en su lugar de origen, lo que demuestra su escasa conciencia regional.

Religiosidad y Educación Humana : la religión como factor de maduración humana.

Estudiar la religiosidad como búsqueda de significado de la existencia como necesidad innata para la madurez humana. La religión es el acto humano específico que tienen su origen en el reconocimiento por parte del hombre de una realidad suprema, 'totalmente otra', e interpretar la existencia humana. Como respuesta a la de significado de la propia existencia es una necesidad innata a toda persona. Esta búsqueda de significado sigue un proceso de maduración de acuerdo con los presupuestos de la experiencia personal, lo biográfico individual y colectivo. Por eso han de distinguirse grados o etapas de religiosidad desde la niñez hasta la madurez adulta, coincidiendo con el nivel de integración de personalidad. Este desarrollo es fruto de sucesivas cosmovisiones que a través de la dialéctica pregunta-respuesta, va desde una respuesta provisional, fundamentada en el nivel de la realidad, la cultura, hasta alcanzar una respuesta de nivel último, la religión. Ambas son respuestas a un mismo objetivo, la autenticidad humana. No existe un vocabulario específicamente religioso sino vocablos de una cultura determinada que en su momento sean expresión de un significado religiosoUna escuela, fuente de educación, no será religiosa si no facilita la madurez humana, es decir, si no es creadora de cultura auténtica. La religión como búsqueda de significado a la propia existencia es necesaria a todo hombre, pero como concreción específica es relativa a cada contexto personal y cultural. Como tal puede tener en unas escuelas una manifestación específica y en otras no.