Expression of neuronal nitric oxide synthase in the hippocampal formation in affective disorders

Hippocampal output is increased in affective disorders and is mediated by increased glutamatergic input via N-methyl-D-aspartate (NMDA) receptor and moderated by antidepressant treatment. Activation of NMDA receptors by glutamate evokes the release of nitric oxide (NO) by the activation of neuronal nitric oxide synthase (nNOS). The human hippocampus contains a high density of NMDA receptors and nNOS-expressing neurons suggesting the existence of an NMDA-NO transduction pathway which can be involved in the pathogenesis of affective disorders. We tested the hypothesis that nNOS expression is increased in the human hippocampus from affectively ill patients. Immunocytochemistry was used to demonstrate nNOS-expressing neurons in sections obtained from the Stanley Consortium postmortem brain collection from patients with major depression (MD, N = 15), bipolar disorder (BD, N = 15), and schizophrenia (N = 15) and from controls (N = 15). nNOS-immunoreactive (nNOS-IR) and Nissl-stained neurons were counted in entorhinal cortex, hippocampal CA1, CA2, CA3, and CA4 subfields, and subiculum. The numbers of Nissl-stained neurons were very similar in different diagnostic groups and correlated significantly with the number of nNOS-IR neurons. Both the MD and the BD groups had greater number of nNOS-IR neurons/400 µm² in CA1 (mean ± SEM: MD = 9.2 ± 0.6 and BD = 8.4 ± 0.6) and subiculum (BD = 6.7 ± 0.4) when compared to control group (6.6 ± 0.5) and this was significantly more marked in samples from the right hemisphere. These changes were specific to affective disorders since no changes were seen in the schizophrenic group (6.7 ± 0.8). The results support the current view of the NMDA-NO pathway as a target for the pathophysiology of affective disorders and antidepressant drug development.

BMP-2 and titanium particles synergistically activate osteoclast formation

A previous study showed that BMP-2 (bone morphogenetic protein-2) and wear debris can separately support osteoclast formation induced by the receptor activator of NF-κB ligand (RANKL). However, the effect of BMP-2 on wear debris-induced osteoclast formation is unclear. In this study, we show that neither titanium particles nor BMP-2 can induce osteoclast formation in RAW 264.7 mouse leukemic monocyte macrophage cells but that BMP-2 synergizes with titanium particles to enhance osteoclast formation in the presence of RANKL, and that at a low concentration, BMP-2 has an optimal effect to stimulate the size and number of multinuclear osteoclasts, expression of osteoclast genes, and resorption area. Our data also clarify that the effects caused by the increase in BMP-2 on phosphorylated SMAD levels such as c-Fos expression increased throughout the early stages of osteoclastogenesis. BMP-2 and titanium particles stimulate the expression of p-JNK, p-P38, p-IkB, and P50 compared with the titanium group. These data suggested that BMP-2 may be a crucial factor in titanium particle-mediated osteoclast formation.

Formation of the Employer Brand Image

The purpose of this study was to explore the employer brand image and its formation of a Finnish (yet international) service company in B2B sector. In the research qualitative case study method was used to explore the most preferred attributes in employer attraction, the employer brand perceptions towards the case company, and the effectors behind these brand perceptions among the prospective group of employees. The research was conducted through in-depth semistructured interviews among 23-30 undergraduate or graduate business students in Finnish universities close to their graduation. After deriving the attributes of an attractive employer, and exploring their relation to the case company, the employer brand image of the case company was determined and its attractiveness level evaluated. Moreover, the formation of the employer brand image was investigated and its sources detected. The most important factors for the target group in employer attractiveness were found to be company reputation and company culture/work atmosphere. Also career opportunities and international opportunities were seen important. The case company was found to hold a positive, attractive image on company culture and international opportunities, but failing to hold a good reputation as a fair employer. The main and most impactful source of employer brand image was former and current employees - directly or indirectly. Company’s own actions played only small part in employer brand formation as credibility is a critical factor in brand image formation and corporate communication found not to be perceived genuine. Based on the findings, suggestions for further employer branding were made.

Paragenetic history of the Ordovician Trenton Group carbonates, Southwestern Ontario

Geochemical examination of the rock matrix and cements from core material extracted from four oil wells within southwestern Ontario suggest various stages of diagenetic alteration and preservation of the Trenton Group carbonates. The geochemical compositions of Middle Ordovician (LMC) brachiopods reflect the physicochemical water conditions of the ambient depositional environment. The sediments appear to have been altered in the presence of mixed waters during burial in a relatively open diagenetic microenvironment. Conodont CAl determination suggests that the maturation levels of the Trenton Group carbonates are low and proceeded at temperatures of about 30 - 50°C within the shallow burial environment. The Trenton Group carbonates are characterized by two distinct stages of dolomitization which proceeded at elevated temperatures. Preexisting fracture patterns, and block faulting controlled the initial dolomitization of the precursor carbonate matrix. Dolomitization progressed In the presence of warm fluids (60 75°C) with physicochemical conditions characteristic of a progressively depleted basinal water. The matrix is mostly Idiotopic-S and Idiotopic-E dolomite, with Xenotopic-A dolomite dominating the matrix where fractures occur. The second stage of dolomitization involved hydrothermal basinal fluid(s) with temperatures of about 60 - 70°C. These are the postulated source for the saddle dolomite and blocky calcite cements occurring in pore space and fractures. Rock porosity was partly occluded by Idiotopic-E type dolomite. Late stage saddle dolomite, calcite, anhydrite, pyrite, marcasite and minor sphalerite and celestite cements effectively fill any remaining porosity within specific horizons. Based on cathode luminescence, precipitation of the different diagenetic phases probably proceeded in open diagenetic systems from chemically homogeneous fluids. Ultraviolet fluorescence of 11 the matrix and cements demonstrated that hydrocarbons were present during the earliest formation of saddle dolomite. Oxygen isotope values of -7.6 to -8.5 %0 (PDB), and carbon isotope values of - 0.5 and -3.0 %0 (PDB) from the latest stage dog-tooth calcite cement suggest that meteoric water was introduced into the system during their formation. This is estimated to have occurred at temperatures of about 25 - 40°C. Specific facies associations within the Trenton Group carbonates exhibit good hydrocarbon generating potential based on organic carbon preservation (1-3.5%). Thermal maturation and Lopatin burial-history evaluations suggest that hydrocarbons were generated within the Trenton Group carbonates some time after 300 Ma . Progressively depleted vanadium trends measured from hydrocarbon samples within southwestern Ontario suggests its potential use as a hydrocarbon migration indicator on local (within an oilfield) and on regional scales.

Sedimentology and stratigraphy of the Lower Silurian Grimsby formation, in subsurface, Lake Erie and Southwestern Ontario

Since the first offshore Lake Erie well was drilled in 1941, the Grimsby and Thorold formations of the Cataract Group have been economically important to the oil and gas industry of Ontario. The Cataract Group provides a significant amount of Ontario's gas production primarily from wells located on Lake Erie. The Grimsby - Thorold formations are the result of nearshore estuarine processes influenced by tides on a prograding shelf and are composed of subtidal channel complexes, discrete tidal channels, mud flats and non-marine deposits. Deposition was related to a regressive - transgressive cycle associated with eustatic sea level changes caused by the melting and resurgence of continental glaciation centred in Africa in the Late Ordovician/Early Silurian. Grimsby deposition began during a regression with the deposition of subtidal channel complexes incised into the marine deposits of the Cabot Head Formation. The presence of mud drapes and mud couplets suggest that these deposits were influenced by tides. These deposits dominate the lower half of the Grimsby. Deposition continued with a change from these subtidal channel complexes to laterally migrating, discrete, shallow tidal channels and mud flats. These were in turn overlain by the non-marine deposits of the Thorold Formation. Grimsby - Thorold deposition ended with a major transgression replacing siliciclastic deposition with primarily carbonate deposition. Sediment was sourced from the east and southeast and associated with a continuation of the Taconic Orogeny into the Early Silurian. The fluvial head of the estuary prograded from a shoreline that was located in western New York and western Pennsylvania running NNE-SSW and then turning NW-SE and paralleling the present day Lake Erie shoreline. iii The facies attributed to the Grimsby - Thorold formations can be ascribed to the three zones within the tripartite zonation suggested by Dalrymple et ale (1992) for estuaries, that is, a marine-dominated facies, a mixed energy facies, and a facies that is dominated by fluvial processes. Also, sediments within the Grimsby - Thorold are commonly fining upwards sequences which are common in estuarine settings whereas deltaic deposits are normally composed of coarsening upwards sequences in a vertical wedge shape with coarser material near the head. The only coarsening observed was in the Thorold Formation and attributed to non-marine deposition by palynological evidence. The presence of a lag deposit at the base of the sediments of the Grimsby Thorold formations suggests that they were incised into the Cabot Head Formation. Further, the thickness of Early Silurian sediments located between the top of the Queenston Formation, where Early Silurian sedimentation began, to the top of the Reynales - Irondequoit formation are constant whether the Grimsby - Thorold formations are present or not. Also, cross-sections using a sand body located in the Cabot Head Formation for correlation further imply that the Grimsby Formation has been incised into the previous deposits of the Cabot Head.

The formation of conscience : pedagogy of the sacred

This qualitative study explores Thomas Green's (1999) treatise, Voices: The Educational Formation of Conscience; for the purpose of reconstruing the transformative usefulness of conscience in moral education. Conscience is "reflexive judgment about things that matter" (Green, 1999, p. 21). Paul Lehmann (1963) suggested that we must "do the conscience over or do the conscience in" (p. 327). Thomas Green "does the conscience over", arguing that a philosophy of moral education, and not a moral philosophy, provides the only framework from which governance of moral behaviour can be understood. Narratives from four one-to-one interviews and a focus group are analysed and interpreted in search of: (a) awareness and understanding of conscience, (b) voices of conscience, (c) normation, (d) reflexive emotions, and (e) the idea of the sacred. Participants in this study (ages 16-21) demonstrated an active awareness of their conscience and a willingness to engage in a reflective process of their moral behaviour. They understood their conscience to be a process of self-judgment about what is right and wrong, and that its authority comes from within themselves. Narrative accounts from childhood indicated that conscience is there "from the beginning" with evidence of selfcorrecting behaviour. A maturing conscience is accompanied by an increased cognitive capacity, more complicated life experiences, and individualization. Moral motivation was grounded in " a desire to connect with things that are most important." A model for conscience formation is proposed, which visualizes a critical path of reflexive emotions. It is argued that schools, striving to shape good citizens, can promote conscience formation through a "curriculum of moral skills"; a curriculum that embraces complexity, diversity, social criticism, and selfhood.

Identity Formation and Negotiation of Afghan Female Youth in Ontario

The following thesis provides an empirical case study in which a group of 6 first generation female Afghan Canadian youth is studied to determine their identity negotiation and development processes in everyday experiences. This process is investigated across different contexts of home, school, and the community. In terms of schooling experiences, 2 participants each are selected representing public, Islamic, and Catholic schools in Southern Ontario. This study employs feminist research methods and is analyzed through a convergence of critical race theory (critical race feminism), youth development theory, and feminist theory. Participant experiences reveal issues of racism, discrimination, and bias within schooling (public, Catholic) systems. Within these contexts, participants suppress their identities or are exposed to negative experiences based on their ethnic or religious identification. Students in Islamic schools experience support for a more positive ethnic and religious identity. Home and community provided nurturing contexts where participants are able to reaffirm and develop a positive overall identity.

An Exploration Into Doctoral Students' Sense of Community and its Influence on the Formation of Informal Mentoring Relationships

This exploratory mixed method research project was designed to investigate an area of doctoral education that has received little attention in the past. This research focused specifically on the non-intellectual, hoped-for by-products of doctoral education; the dynamic processes of developing and maintaining both a sense of community and informal mentoring relationships. The design of the study captured the experiences of doctoral students and alumni at various time periods in the doctoral program. Participants represented a diverse group of students with differences in professional and academic backgrounds and life stages. A pilot study for this research suggested that the presence of a sense of community and informal mentoring may provide the necessary relationships to support this diversity. The primary question at the forefront of this study was: Do doctoral students feel connected to one another? Five subquestions were developed to address this research topic: Does a sense of community already exist and flourish in doctoral education? Are the programs and resources of the doctoral program organized to nurture the creation and maintenance of a sense of community? Is a sense of community a foundational element in the formation of naturally occurring relationships among doctoral students? What educational and socio-emotional benefits are associated with informal mentoring relationships during the doctoral experience? and Do doctoral students perceive a change in their development as stewards of their discipline over time? The principal methods used to investigate these research questions combined both quantitative and qualitative techniques in a concurrent time sequence. The quantitative portion of the study involved a questionnaire, while the qualitative portion involved two approaches; face-to-face interviews and an open-ended question at the end of the questionnaire. Findings from the study indicated that the presence of both sense of community and informal mentoring enhance the overall quality of doctoral education. Program elements that enhanced or hindered connection between students were identified. Both the dynamics and the emotional, social, and academic benefits of informal mentoring were elucidated. Over time participants perceived changes in their development of the qualities assqciated with stewardship. This study brought the "hoped-for by-products" associated with doctoral education from the background shadows to an illuminated position at the forefront of inquiry.

Hyperosmotic Stress and the Impact on Metabolite Formation and Redox Balance in Saccharomyces cerevisiae and Saccharomyces bayanus strains

Wine produced using an appassimento-type process represents a new and exciting innovation for the Ontario wine industry. This process involves drying grapes that have already been picked from the vine, which increases the sugar content due to dehydration and induces a variety of changes both within and on the surface of the grapes. Increasing sugar contents in musts subject wine yeast to conditions of high osmolarity during alcoholic fermentations. Under these conditions, yeast growth can be inhibited, target alcohol levels may not be attained and metabolic by-products of the hyperosmotic stress response, including glycerol and acetic acid, may impact wine composition. The further metabolism of acetic acid to acetylCoA by yeast facilitates the synthesis of ethyl acetate, a volatile compound that can also impact wine quality if present in sufficiently high concentrations. The first objective of this project was to understand the effect of yeast strain and sugar concentration on fermentation kinetics and metabolite formation, notably acetic acid and ethyl acetate, during fermentation in appassimento-type must. Our working hypotheses were that (1) the natural isolate Saccharomyces bayanus would produce less acetic acid and ethyl acetate compared to Saccharomyces cerevisiae strain EC-1118 fermenting the high and low sugar juices; (2) the wine produced using the appassimento process would contain higher levels of acetic acid and lower levels of ethyl acetate compared to table wine; (3) and the strains would be similar in the kinetic behavior of their fermentation performances in the high sugar must. This study determined that the S. bayanus strain produced significantly less acetic acid and ethyl acetate in the appassimento wine and table wine fermentations. Differences in acetic acid and ethyl acetate production were also observed within strains fermenting the two sugar conditions. Acetic acid production was higher in table wine fermented by S. bayanus as no acetic acid was produced in appassimento-style wine, and 1.4-times higher in appassimento wine fermented by EC-1118 over that found in table wine. Ethyl acetate production was 27.6-times higher in table wine fermented by S. bayanus, and 5.2-times higher by EC-1118, compared to that in appassimento wine. Sugar utilization and ethanol production were comparable between strains as no significant differences were determined. The second objective of this project was to bring a method in-house for measuring the concentration of pyridine nucleotides, NAD+, NADP+, NADH and NADPH, in yeast cytosolic extract. Development of this method is of applicative interest for our lab group as it will enable the redox balance of the NAD+/ NADH and NADP+/ NADPH systems to be assessed during high sugar fermentations to determine their respective roles as metabolic triggers for acetic acid production. Two methods were evaluated in this study including a UV-endpoint method using a set of enzymatic assay protocols outlined in Bergmeyer (1974) and a colorimetric enzyme cycling method developed by Sigma-Aldrich® using commercial kits. The former was determined to be limited by its low sensitivity following application to yeast extract and subsequent coenzyme analyses, while the latter was shown to exhibit greater sensitivity. The results obtained from the kits indicated high linearity, accuracy and precision of the analytical method for measuring NADH and NADPH, and that it was sensitive enough to measure the low coenzyme concentrations present in yeast extract samples. NADtotal and NADPtotal concentrations were determined to be above the lower limit of quantification and within the range of the respective calibration curves, making this method suitable for our research purposes.

Littératie et autogestion du diabète : impact à court terme d’un programme de formation de 4 jours versus un programme de 2 jours sur le développement des compétences chez les patients diabétiques de type 2

Réalisé en collaboration avec l'équipe de l'Unité de jour de diabète de l'Hôtel-Dieu du CHUM: Hortensia Mircescu M.D., Françoise Desrochers, Michelle Messier et Stéphanie Chanel Lefort.

L’exemption de paiement des soins associée à la supervision et à la formation au Burkina Faso : les effets sur la prescription de médicaments

L’accès financier limité aux soins de santé a suscité l’instauration de politiques sanitaires de subvention des soins en Afrique. Au Burkina Faso, une ONG, en complémentarité avec la politique sanitaire nationale subventionne à 100% depuis septembre 2008 les soins et les médicaments pour les enfants de moins de cinq ans dans le district sanitaire de Dori. L’intervention regroupe formation du personnel soignant, supervisions et suppression de paiement des soins et des médicaments. L’objectif de l’étude est d’analyser l’effet de cette intervention sur l’adéquation des prescriptions médicales. Neuf centres de santé ont été pris en compte. Au total 14956 ordonnances d’enfants de moins de cinq ans ciblés par l’intervention ont été sélectionnées par échantillonnage systématique à partir des registres de consultation un an avant et un an après l’instauration de l’intervention. Quatorze prescripteurs ont été interviewés. Les prescriptions ont été analysées par comparaison au référentiel de l’OMS ainsi qu’au référentiel national. Le discours des prescripteurs a été analysé en vue de comprendre leur perception de leur changement de pratiques depuis de début de la subvention. L’intervention a eu pour effet de diminuer l’utilisation des injections (Rapport de cote (RC) =0,28; p<0,005) dans le cas des infections respiratoires aiguës (IRA). Elle a entraîné une diminution de l’utilisation inappropriée des antibiotiques dans les cas de paludisme seul (RC=0,48; p<0,0005). Le nombre moyen de médicaments par ordonnance a également diminué de 14% dans les cas d’IRA (p<0,0005). Les prescripteurs ont affirmé pour la plupart que leurs pratiques se sont soit maintenues soit améliorées. L’intervention a entrainé une amélioration de l’adéquation des prescriptions médicales dans certains cas.

Émotions et identité : le rôle des émotions dans la formation de l'identité narrative

Cette thèse met en place un modèle permettant d'éclairer les relations entre certaines émotions et la conception que l'individu a de lui-même. En accord avec plusieurs auteurs contemporains, il est ici défendu que la conception que nous avons de nous-mêmes prend la forme d'une identité narrative, c'est-à-dire d'un récit à l'intérieur duquel nous tentons de structurer une image cohérente de nous-mêmes. Dans cette perspective, il est proposé qu'un certain groupe d'émotions, comme la honte, la fierté et la culpabilité, occupe une place cruciale dans la formation et le maintien de cette image de soi. Ces émotions, que nous pouvons qualifier d'auto-évaluatives, conditionnent l'évaluation que nous avons de nous-mêmes et participent ainsi à l'élaboration de la représentation de soi. De plus, cette identité narrative, à travers un certain aspect normatif et motivant, vient à son tour influencer la manifestation et l'interprétation de ces mêmes émotions. Ainsi, la relation entre les émotions auto-évaluatives et l'identité narrative serait une relation complexe d'influences réciproques. L’analyse proposée devrait permettre de clarifier de nombreux aspects de l’économie mentale de l’individu et plus particulièrement de sa motivation morale.

Élaboration d'une grille permettant l'analyse de la qualité de situations d'apprentissage et d'évaluation en lecture auprès d'élèves du parcours de formation axée sur l'emploi

Ce mémoire s’inscrit dans le cadre d’une recherche de développement pédagogique d’objet, destinée à des enseignants du secondaire. L’objectif porte sur la conception, et la validation auprès d’un groupe d’experts, d’une grille visant l’analyse de la qualité de situations d’apprentissage et d’évaluation en lecture (GASAEL) conçues pour des élèves de niveau secondaire en difficulté d’apprentissage, notamment ceux du parcours de formation axée sur l’emploi (PFAE). La problématique expose la nécessité chez les enseignants de trouver des réponses ajustées aux besoins d’apprentissage des élèves ciblés, dans un contexte de programmes élaborés par compétences. La situation d’apprentissage et d’évaluation (SAE) est une instrumentation pertinente, mais demeure sous-utilisée. Le cadre conceptuel, guidé par le modèle de la situation pédagogique de Legendre (2005), assure l’analyse du contexte de la SAE et permet d’identifier ses caractéristiques. Ce cadre est suivi par la méthodologie de l’Analyse de la valeur pédagogique de Roque, Langevin et Riopel (1998) exposant la procédure d’analyse des fonctions du produit, au regard des besoins des utilisateurs. L’innovation de ce produit pédagogique tient en son caractère pragmatique; il propose à la fois l’analyse de la qualité des SAE, et une référence rapide à propos des concepts porteurs d’une SAE, fournis par des exemples ou des explications.

La place de l’autonomie de l’apprenant en formation ouverte et à distance dans le contexte de l’enseignement supérieur ouest-africain

Les difficultés croissantes de l’enseignement supérieur en matière d’accessibilité aux formations et de disponibilité de filières de qualité, dans les pays en voie de développement de l’Afrique de l’Ouest notamment, conjuguées avec le développement vertigineux des technologies de l’information et de la communication (TIC), suscitent un grand espoir de faire de la formation à distance une solution alternative crédible des formations présentielles (OCDE, 2006). Or, si la littérature s’accorde à reconnaitre aux TIC et l’interactivité qu’elles procurent des facteurs favorisant l’apprentissage (Karsenti, 2006), la réalité du terrain éducatif lui impose de reconnaitre que non seulement la révolution de la formation ouverte et à distance (FOAD) n’est pas encore d’actualité (OCDE, 2006), mais qu’elle ne le sera que si, pour faire face à la distance transactionnelle, plus accrue en formation à distance, l’apprenant ne se contente plus d’apprendre, mais d’apprendre à apprendre, ce qui exige de lui des compétences d’autonomie. Or, malgré des décennies d’intérêt et d’investissement de la recherche, le développement de l’autonomie sur le terrain reste toujours marginal, les débats philosophiques ayant pris le pas sur la quête de solutions pratiques (Albero ,2003). La question de savoir comment les éducateurs de la FOAD utilisent les solutions existantes, censées favoriser l’autonomie de l’apprenant, telles certaines formes de tutorat et de travail de groupes, n’est pas sans intérêt, puisqu’elle permet de mieux comprendre le terrain cible et sa part de responsabilité dans cet insuccès de l’autonomie. S’inscrivant en droite ligne des travaux d’Albero (2003), la présente étude organise les principes d’autonomie suivant un cadre conceptuel privilégiant l’action et le développement, selon une dimension dynamique symbolisant l’importance du soutien à accorder à l’apprenant, une dimension topologique indiquant la nécessité pour ce soutien de prendre en compte les différents aspects sur lesquels l’apprenant peut exercer son autonomie et une dimension chronologique exprimant l’importance du désétayage. De façon pratique, cette étude, démarrée en 2009 dans le contexte de la FOAD du 2IE (Institut International des Ingénieurs de l’Eau et de l’Environnement), sis à Ouagadougou au Burkina Faso, s’organise en trois articles : le premier tente de comprendre si les conditions d’efficacité de la FOAD, selon les apprenants, formulent un besoin d’apprentissage en autonomie; le second tente de comprendre, à partir des propos des tuteurs, si l’encadrement des apprenants respecte les principes d’autonomie; enfin, le troisième article s’est penché, sur la base des intentions exprimées par les concepteurs, sur le respect des principes d’autonomie par les cours. L’éloignement des apprenants et l’objectif de comprendre leurs perceptions de la FOAD, nous ont fait préférer une approche de recherche de type mixte, à la fois qualitative pour mieux comprendre leur perception (Karsenti & Savoie-Zajc, 2004) et quantitative, pour tenir compte de leur éloignement. Pour la perception des éducateurs, nous avons opté pour une approche qualitative/descriptive plus appropriée dès que l’étude vise la compréhension du phénomène social abordé (Karsenti & Savoie-Zajc, 2004). Des résultats obtenus, la perception des 62 apprenants sur les 170 initialement invités par courriel à répondre au questionnaire, semble confirmer l’autonomie de l’apprenant comme une condition de leur réussite en FOAD. La demande des apprenants pour un soutien accru, malgré l’effort actuellement consenti par l’encadrement, effort reconnu par les apprenants eux-mêmes et qu’attestent les 10 tuteurs interviewés sur une quarantaine au 2IE, devrait, toutefois, inviter à la réflexion, puisque ne s’opposant pas réellement à un apprentissage en hétéronomie. À l’analyse, il apparait que l’insatisfaction des apprenants s’expliquerait par la non-prise en compte des différents aspects susceptibles d’influencer leur apprentissage. De plus, en nous référant aux entretiens avec les 11 concepteurs de cours sur un total de 30, il apparait que, bien que conscients de la nécessité d’adapter les cours au contexte de la FOAD, ni la modularité des contenus, ni la flexibilité de la structure des cours ne semblent être prises en compte. Au final, l’étude révèle l’urgence de lutter contre les habitudes acquises en formation présentielle et la nécessité d’employer des pédagogues professionnels formés pour une pédagogie d’autonomisation. Encore faudrait-il que l’autonomie soit véritablement consacrée par la littérature comme une praxis pour signifier qu’elle n’a d’autre fin qu’elle-même, et non comme une poiesis, pour dire que l’autonomie vise une production et cesserait dès que son objectif est atteint.

The Role of Specific Amino Acids in the Formation of Ternary Complexes in Nitrogenase Regulation in the Photosynthetic Bacterium Rhodobacter capsulatus

L'azote est l'un des éléments les plus essentiels dans le monde pour les êtres vivants, car il est essentiel pour la production des éléments de base de la cellule, les acides aminés, les acides nucléiques et les autres constituants cellulaires. L’atmosphère est composé de 78% d'azote gazeux, une source d'azote inutilisable par la plupart des organismes à l'exception de ceux qui possèdent l’enzyme nitrogénase, tels que les bactéries diazotrophique. Ces micro-organismes sont capables de convertir l'azote atmosphérique en ammoniac (NH3), qui est l'une des sources d'azote les plus préférables. Cette réaction exigeant l’ATP, appelée fixation de l'azote, est catalysée par une enzyme, nitrogénase, qui est l'enzyme la plus importante dans le cycle de l'azote. Certaines protéines sont des régulateurs potentiels de la synthèse de la nitrogénase et de son activité; AmtB, DraT, DraG, les protéines PII, etc.. Dans cette thèse, j'ai effectué diverses expériences afin de mieux comprendre leurs rôles détailés dans Rhodobacter capsulatus. La protéine membranaire AmtB, très répandue chez les archaea, les bactéries et les eucaryotes, est un membre de la famille MEP / Amt / Rh. Les protéines AmtB sont des transporteurs d'ammonium, importateurs d'ammonium externe, et ont également été suggéré d’agir comme des senseurs d'ammonium. Il a été montré que l’AmtB de Rhodobacter capsulatus fonctionne comme un capteur pour détecter la présence d'ammonium externe pour réguler la nitrogénase. La nitrogénase est constituée de deux métalloprotéines nommées MoFe-protéine et Fe-protéine. L'addition d'ammoniaque à une culture R. capsulatus conduit à une série de réactions qui mènent à la désactivation de la nitrogénase, appelé "nitrogénase switch-off". Une réaction critique dans ce processus est l’ajout d’un groupe ADP-ribose à la Fe-protéine par DraT. L'entrée de l'ammoniac dans la cellule à travers le pore AmtB est contrôlée par la séquestration de GlnK. GlnK est une protéine PII et les protéines PII sont des protéines centrales dans la régulation du métabolisme de l'azote. Non seulement la séquestration de GlnK par AmtB est importante dans la régulation nitrogénase, mais la liaison de l'ammonium par AmtB ou de son transport partiel est également nécessaire. Les complexes AmtB-GlnK sont supposés de lier DraG, l’enzyme responsable pour enlever l'ADP-ribose ajouté à la nitrogénase par DraT, ainsi formant un complexe ternaire. Dans cette thèse certains détails du mécanisme de transduction du signal et de transport d'ammonium ont été examinés par la génération et la caractérisation d’un mutant dirigé, RCZC, (D335A). La capacité de ce mutant, ainsi que des mutants construits précédemment, RCIA1 (D338A), RCIA2 (G344C), RCIA3 (H193E) et RCIA4 (W237A), d’effectuer le « switch-off » de la nitrogénase a été mesurée par chromatographie en phase gazeuse. Les résultats ont révélé que tous les résidus d'acides aminés ci-dessus ont un rôle essentiel dans la régulation de la nitrogénase. L’immunobuvardage a également été effectués afin de vérifier la présence de la Fe-protéine l'ADP-ribosylée. D335, D388 et W237 semblent être cruciales pour l’ADP-ribosylation, puisque les mutants RCZC, RCIA1 et RCIA4 n'a pas montré de l’ADP-ribosylation de la Fe-protéine. En outre, même si une légère ADP-ribosylation a été observée pour RCIA2 (G344C), nous le considérons comme un résidu d'acide aminé important dans la régulation de la nitrogénase. D’un autre coté, le mutant RCIA3 (H193E) a montré une ADP-ribosylation de la Fe-protéine après un choc d'ammonium, par conséquent, il ne semble pas jouer un rôle important dans l’ADP-ribosylation. Par ailleurs R. capsulatus possède une deuxième Amt appelé AmtY, qui, contrairement à AmtB, ne semble pas avoir des rôles spécifiques. Afin de découvrir ses fonctionnalités, AmtY a été surexprimée dans une souche d’E. coli manquant l’AmtB (GT1001 pRSG1) (réalisée précédemment par d'autres membres du laboratoire) et la formation des complexes AmtY-GlnK en réponse à l'addition d’ammoniac a été examinée. Il a été montré que même si AmtY est en mesure de transporter l'ammoniac lorsqu'il est exprimé dans E. coli, elle ne peut pass’ associer à GlnK en réponse à NH4 +.