Subgingival microbiota of Sri Lankan tea labourers naïve to oral hygiene measures.

AIM To characterize the subgingival microbiota within a cohort of adult males (n = 32) naïve to oral hygiene practices, and to compare the composition of bacterial taxa present in periodontal sites with various probing depths. MATERIAL AND METHODS Subgingival plaque samples were collected from single shallow pocket [pocket probing depth (PPD)≤3 mm] and deep pocket (PPD≥6 mm) sites from each subject. A polymerase chain reaction based strategy was used to construct a clone library of 16S ribosomal RNA (rRNA) genes for each site. The sequences of ca. 30-60 plasmid clones were determined for each site to identify resident taxa. Microbial composition was compared using a variety of statistical and bioinformatics approaches. RESULTS A total of 1887 cloned 16S rRNA gene sequences were analysed, which were assigned to 318 operational taxonomic units (98% identity cut-off). The subgingival microbiota was dominated by Firmicutes (69.8%), Proteobacteria (16.3%), and Fusobacteria (8.0%). The overall composition of microbial communities in shallow sites was significantly different from those within deep sites (∫-Libshuff, p < 0.001). CONCLUSIONS A taxonomically diverse subgingival microbiota was present within this cohort; however, the structures of the microbial communities present in the respective subjects exhibited limited variation. Deep and shallow sites contained notably different microbial compositions, but this was not correlated with the rate of periodontal progression.

Confusion over live/dead stainings for the detection of vital microorganisms in oral biofilms--which stain is suitable?

BACKGROUND There is confusion over the definition of the term "viability state(s)" of microorganisms. "Viability staining" or "vital staining techniques" are used to distinguish live from dead bacteria. These stainings, first established on planctonic bacteria, may have serious shortcomings when applied to multispecies biofilms. Results of staining techniques should be compared with appropriate microbiological data. DISCUSSION Many terms describe "vitality states" of microorganisms, however, several of them are misleading. Authors define "viable" as "capable to grow". Accordingly, staining methods are substitutes, since no staining can prove viability.The reliability of a commercial "viability" staining assay (Molecular Probes) is discussed based on the corresponding product information sheet: (I) Staining principle; (II) Concentrations of bacteria; (III) Calculation of live/dead proportions in vitro. Results of the "viability" kit are dependent on the stains' concentration and on their relation to the number of bacteria in the test. Generally this staining system is not suitable for multispecies biofilms, thus incorrect statements have been published by users of this technique.To compare the results of the staining with bacterial parameters appropriate techniques should be selected. The assessment of Colony Forming Units is insufficient, rather the calculation of Plating Efficiency is necessary. Vital fluorescence staining with Fluorescein Diacetate and Ethidium Bromide seems to be the best proven and suitable method in biofilm research.Regarding the mutagenicity of staining components users should be aware that not only Ethidium Bromide might be harmful, but also a variety of other substances of which the toxicity and mutagenicity is not reported. SUMMARY - The nomenclature regarding "viability" and "vitality" should be used carefully.- The manual of the commercial "viability" kit itself points out that the kit is not suitable for natural multispecies biofilm research, as supported by an array of literature.- Results obtained with various stains are influenced by the relationship between bacterial counts and the amount of stain used in the test. Corresponding vitality data are prone to artificial shifting.- As microbiological parameter the Plating Efficiency should be used for comparison.- Ethidium Bromide is mutagenic. Researchers should be aware that alternative staining compounds may also be or even are mutagenic.

Bacterial infections in cirrhosis: a position statement based on the EASL Special Conference 2013.

Bacterial infections are very common and represent one of the most important reasons of progression of liver failure, development of liver-related complications, and mortality in patients with cirrhosis. In fact, bacterial infections may be a triggering factor for the occurrence of gastrointestinal bleeding, hypervolemic hyponatremia, hepatic encephalopathy, kidney failure, and development of acute-on-chronic liver failure. Moreover, infections are a very common cause of repeated hospitalizations, impaired health-related quality of life, and increased healthcare costs in cirrhosis. Bacterial infections develop as a consequence of immune dysfunction that occurs progressively during the course of cirrhosis. In a significant proportion of patients, infections are caused by gram-negative bacteria from intestinal origin, yet gram-positive bacteria are a frequent cause of infection, particularly in hospitalized patients. In recent years, infections caused by multidrug-resistant bacteria are becoming an important clinical problem in many countries. The reduction of the negative clinical impact of infections in patients with cirrhosis may be achieved by a combination of prophylactic measures, such as administration of antibiotics, to reduce the occurrence of infections in high-risk groups together with early identification and management of infection once it has developed. Investigation on the mechanisms of altered gut microflora, translocation of bacteria, and immune dysfunction may help develop more effective and safe methods of prevention compared to those that are currently available. Moreover, research on biomarkers of early infection may be useful in early diagnosis and treatment of infections. The current manuscript reports an in-depth review and a position statement on bacterial infections in cirrhosis.

Internal bacterial colonization of implants: association with peri-implant bone loss

OBJECTIVES The aim of the present longitudinal study was to investigate bacterial colonization of the internal implant cavity and to evaluate a possible association with peri-implant bone loss. METHODS A total of 264 paper point samples were harvested from the intra-implant cavity of 66 implants in 26 patients immediately following implant insertion and after 3, 4, and 12 months. Samples were evaluated for Aggregatibacter actinomycetemcomitans, Fusobacterium nucleatum, Porphyromonas gingivalis, Prevotella intermedia, Treponema denticola, and Tannerella forsythia as well as total bacterial counts by real-time PCR. Bone loss was evaluated on standardized radiographs up to 25 months after implant insertion. For the statistical analysis of the data, mixed effects models were fitted. RESULTS There was an increase in the frequency of detection as well as in the mean counts of the selected bacteria over time. The evaluation of the target bacteria revealed a significant association of Pr. intermedia at 4 and 12 months with peri-implant bone loss at 25 months (4 months: P = 0.009; 12 months: P = 0.021). CONCLUSIONS The present study could demonstrate a progressive colonization by periodontopathogenic bacteria in the internal cavities of two-piece implants. The results suggest that internal colonization with Pr. intermedia was associated with peri-implant bone loss.

Predictive factors for vaginal douching and tampon use among US women: Are these behaviors risk factors for bacterial vaginosis and trichomonas?

The use of feminine products such as vaginal douches, tampons, and sanitary napkins are common among women. Despite the results of some studies that suggest an association between douching and bacterial vaginosis, douching remains a topic that is understudied. The possibility of an association between tampon use and infection has not been significantly investigated since the toxic shock outbreak in the 1980s. The first objective of our study was to evaluate demographic, reproductive health, and sexual behavior variables to establish an epidemiologic profile of menstruating women who reported douching and women who reported using sanitary napkins only. The second objective of our study was to evaluate whether the behaviors of douching and using tampons were associated with an increased risk of bacterial vaginosis or trichomonas. We analyzed these factors, using logistic regression, among the 3,174 women from the NHANES cross sectional data from 2001-2004, who met the inclusion criteria determined for our study. We established an epidemiologic profile for women who had the highest frequency of douching reported as women who were age 36-49, had a high school education or GED, black race, not taking oral contraceptives, reported vaginal symptoms in the last month, two or more sexual partners in the last year, or tested positive for bacterial vaginosis or trichomonas. The profile for those who had the highest frequency of exclusive sanitary napkin use included women with less than a high school education, married women, women classified as black or "other" in race, and women who were not on oral contraceptives. While we were able to establish a significant increase in the odds of douching among women who tested positive for bacterial vaginosis or trichomonas, we did not find any significant difference in the odds of exclusive napkin use and testing negative for bacterial vaginosis or trichomonas.^

A systematic review examining the relationship between oral health care practices and the oral lesions commonly associated with HIV/AIDS, and the implications for people living in developing countries

Oral lesions, which may be bacterial, fungal or viral in nature may be characteristic of HIV/ AIDS, and have been observed on the oral mucosa as early signs of underlying disease. Some studies have suggested that there may be a correlation between poor oral hygiene, and the oral lesions seen among people living with HIV/AIDS.^ The objective of this study was to assess the nature of the relationship between oral health care practices, and the occurrence of oral lesions commonly seen in association with HIV/AIDS. A systematic review of the literature was conducted, and the databases searched were Medline and PubMed. Concepts that made up the search were oral hygiene promotion, HIV/AIDS and oral health care. Out of the 410 items identified through the search, only 11 met the inclusion criteria.^ The use of 0.12%–2% chlorhexidine gluconate, was found to be effective in reducing oral Candida counts in some studies, while other studies did not find such an association. However, 0.12%–2% chlorhexidine gluconate was consistently found to be effective in the management of periodontal lesions in people infected with HIV/AIDS. ^ Dental procedures such as treatment and filling of dental cavities, scaling and polishing, and use of fluoridated tooth paste were also found to be effective in the management of oral lesions seen in association with HIV/AIDS.^ The overall findings from the studies reviewed, suggest that effective oral health care may be necessary to reduce the morbidity, and mortality associated with the oral lesions seen among people living with HIV/AIDS. However, better designed studies with larger sample sizes need to be developed in order to ascertain the effectiveness of routine oral hygiene, and health care practices among people living with HIV/AIDS.^

Detecção dos herpesvirus humanos na mucosa oral de pacientes irradiados para tratamento de carcinoma epidermoide em região de cabeça e pescoço

A radioterapia para tratamento das neoplasias malignas em região de cabeça e pescoço é acompanhada de diversas complicações, decorrentes do comprometimento dos tecidos radiossensíveis localizados próximos ao tumor. Entre essas complicações a mucosite é a que merece maior destaque. A mucosite é uma reação tóxica inflamatória da mucosa oral causada pelo tratamento citorredutivo induzido pela radioterapia (RT) ou pela quimioterapia (QT). Ela manifesta-se com sinais de edema, eritema, úlcera e formação pseudomembrana, resultando em sintomas de ardência, que pode progredir para dor intensa e consequente prejuízo na alimentação e comunicação verbal. Infecções bacterianas, fúngicas ou virais podem acometer a mucosa bucal irradiada e exacerbar a manifestação da mucosite oral por meio da ativação de fatores de transcrição da resposta inflamatória. Existem poucos dados na literatura sobre a participação dos herpesvirus humanos na mucosite oral induzida pela radioterapia. A proposta desse trabalho foi avaliar a excreção oral dos herpesvirus humanos (HSV-1, HSV-2, EBV, CMV, VZV, HHV6, HHV7 e HHV8) e sua possível associação com o desenvolvimento e agravamento da mucosite oral, em pacientes diagnosticados com carcinoma epidermoide (CEC) de boca e orofaringe, submetidos à radioterapia associado à quimioterapia. Nesse estudo foram analisadas 158 amostras de lavado bucal, de 20 pacientes, submetidos à radioterapia para CEC em região de cabeça e pescoço, coletadas semanalmente, durante todo o tratamento. Foi realizada a extração do DNA dessas amostras e em seguida sua amplificação através da PCR utilizando dois conjuntos de primers: HSVP1/P2 para os subtipos HSV-1, HSV-2, EBV, CMV e HHV-8 e o VZVP1/P2 para os subtipos VZV, HHV-6 e HHV-7. As amostras positivas foram submetidas à digestão enzimática com enzimas de restrição BamHI e BstUI para determinação específica de cada um dos oito herpesvirus. Foi também avaliada clinicamente, a mucosite oral, em cada uma das coletas, seguindo os critérios da OMS e NCIC. As análises da amostra mostraram a excreção do EBV, HHV-6 e HHV-7, em todas as semanas de tratamento radioterápico, enquanto que a excreção do HSV1 não pode ser observada no momento da triagem. Considerando-se todos os períodos em conjunto (Triagem, semanas de radioterapia e Controle), a maior frequência foi de pacientes que excretaram EBV (55,0%), seguida daqueles que excretaram HHV-7 (20,5%). A frequência de excreção de EBV foi significativamente maior do que a dos demais vírus (Teste ?2, p<0.001 para todos os cruzamentos). A frequência de excreção de HHV-7 foi significativamente maior do que a de HSV-1 (5,9%) e HHV-6 (5,5%) (Teste ?2, p=0.001 para ambos os cruzamentos). Não houve diferenças estatísticas significantes entre as frequências de HSV-1 e HHV-6. Como conclusão, verificou-se uma correlação positiva entre a excreção oral do EBV e a presença de mucosite induzida pela associação de radioterapia e quimioterapia com graus >=2, sobretudo se considerarmos as três últimas semanas de radioterapia, período este em que a severidade da mucosite foi estatisticamente maior. Esses achados nos possibilitam inferir que o ambiente inflamatório local de mucosites com grau >=2 seja mais favorável para excreção oral do EBV.

Effect of mode of delivery on early oral colonization and childhood dental caries: a systematic review

Background: Oral colonization starts at birth by vertical transmission. Objective: To determine whether mode of delivery influences the oral colonization of infants and contributes to the risk of childhood dental caries. Methods: A systematic review was conducted in the electronic database Web of Science for articles published from January 1995 to December 2015 by using a set of keywords. Results: From 2,644 citations identified through electronic search, ten studies met the inclusion criteria. According to the studies mode of delivery influences oral microbial density, oral microbial profile and the timing of oral colonization by cariogenic microbiota. However, there are no consistent results concerning either the prevalence of children harboring cariogenic microbiota or the prevalence of early childhood caries by mode of delivery. Conclusion: Mode of delivery influences early oral colonization. However, it seems that other determinants rather than mode of delivery could be major contributors to the development of early childhood caries. Keywords: Early childhood caries, early oral colonization, acquisition of oral microflora, mode of delivery

Estudo comparativo da microflora fúngica de doentes portadores de prótese total acrílica mucosuportada e implantosuportada

Dissertação para obtenção do grau de Mestre no Instituto Superior de Ciências da Saúde Egas Moniz

Estudo comparativo da microflora bacteriana de doentes portadores de próteses totais acrílicas mucosuportadas e implantosuportadas

Dissertação para obtenção do grau de Mestre no Instituto Superior de Ciências da Saúde Egas Moniz

Methods to evaluate pesticide damage to the biomass of the soil microflora

Respiratory methods to estimate the amount of C in the soil microbial biomass and the relative contributions of prokaryotes and eukaryotes in the biomass were used to evaluate the influence of pesticides on the soil microflora. Experiments were conducted with 5 and 50 micrograms per gram of three fungicides, captan, thiram and verdesan. At 5 micrograms per gram they caused significant decreases (40%) in the biomass; the organomercury fungicide verdesan also caused a shift from fungal to bacterial dominance. Within 8 days, biomass in captan- and thiram-amended soils had recovered to that of controls. Although the fungal to bacterial balance was restored in verdesan-amended soils, biomass recovery was not complete. At 50 micrograms per gram the fungicides caused long-term decreases in the biomass and altered the relative proportions of the bacterial and fungal populations. Verdesan had the greatest effect on soil microbial biomass and competition.

Spirochaetes and other bacterial species associated with bovine digital dermatitis

The 16S rRNA genes from spirochaetes associated with digital dermatitis of British cattle were amplified by polymerase chain reaction from digital dermatitis lesion biopsies using one universal and one treponeme-specific primer. Two treponemal sequences were identified both of which shared a high degree of homology with the oral pathogen Treponema denticola (98%). Two further 16S rRNA gene sequences were obtained and shared similarity to Bacteroides levii (99%) and Mycoplasma hyopharyngis (98%). Polymerase chain reaction with T. denticola-specific primers amplified a potential virulence gene from digital dermatitis lesions which shared a high degree of homology to the 46-kDa haemolysin gene of T. denticola. The significance of the presence of organisms in digital dermatitis lesions of the bovine foot which are closely related to oral pathogens is discussed.

Caracterização do índice de biofilme oral em doentes internados no serviço de cuidados intensivos 1 do Centro Hospitalar do Porto

Introdução: A cavidade oral de um doente que esteja internado num serviço hospitalar apresenta uma flora diferente das pessoas saudáveis. Ao fim de 48 horas de internamento, a flora apresenta um maior número de microrganismos que rapidamente podem ser responsáveis por aparecimento de infeções secundárias, tais como pneumonias, resultante à proliferação bactérias que lhe está associada. Este risco é ainda superior em doentes críticos. Nesta população torna-se fundamental a implementação de um efetivo protocolo de higiene oral, procurando controlar ao máximo o desenvolvimento do biofilme oral. Objetivo: Avaliar o índice de biofilme oral dos doentes na admissão a um serviço de Cuidados Intensivos, procedendo á sua reavaliação após 7 dias de internamento e, procurando deste modo avaliar a eficácia de higienização oral efetuada no Serviço. Materiais e Métodos: Estudo prospetivo, institucional, descritivo, analítico e observacional realizado no Serviço de Cuidados Intensivos do CHP. Foram envolvidos no estudo doentes com mais de 18 anos, e com um tempo de internamento igual ou superior a 7 dias. Procedeu-se à colheita de dados demográficos, motivo de admissão, tempo de internamento, medicação prescrita, tipo de alimentação efetuada no serviço, necessidade ou não de suporte respiratório e qual o tipo de higiene realizada no serviço. Foi avaliado o índice de higiene oral simplificado de Greene & Vermillion (IHO-S) nas primeiras 24h e 7 dias após a 1ª avaliação. O IHO-S é um indicador composto que avalia 2 componentes, a componente de resíduos e a componente de cálculo, sendo cada componente avaliada numa escala de 0 a 3. São avaliadas 6 faces dentárias que são divididas em 3 porções clínicas (porção gengival, terço médio e porção oclusal). No final de cada avaliação é calculado o somatório do valor encontrado para cada face, sendo este total dividido pelo nº de faces analisadas. O cálculo do IHO-S por indivíduo corresponde à soma das componentes. Resultados: Foram avaliados 74 doentes, tendo-se excluído 42 por não terem a dentição mínima exigida. Os 32 doentes que completaram o estudo apresentaram uma idade média de 60,53 ± 14,44 anos, 53,1% eram do género masculino, e na sua maioria pertenciam a pacientes do foro médico e cirúrgico (37,5,5%). Os doentes envolvidos no estudo tiveram uma demora média de 15,69±6,69 dias de internamento, tendo-se verificado que 17 dos pacientes (53,1%) estiveram internados mais de 14 dias no Serviço de Cuidados Intensivos 1. Relativamente às características particulares da amostra verificou-se que durante o período de avaliação a maioria dos doentes estiveram sedados (75%), sob suporte ventilatório (81,3%) e a fazer suporte nutricional por via entérica por sonda nasogástrica (62,6%). O IHO-S inicial foi de 0,67±0,45tendo-se verificado um agravamento significativo ao fim de sete dias de internamento 1,04±0.51 (p<0,05).Este agravamento parece estar fundamentalmente dependente dos maus cuidados orais prestados aos doentes, não se tendo observado qualquer diferença significativa resultante dos aspetos particulares avaliados, com exceção para a nutrição entérica versus a soroterapia. Discussão e Conclusão: Apesar de vários estudos evidenciarem a necessidade de um boa higiene oral para evitar a proliferação bacteriana e o risco de infeção nosocomial, muitas das instituições de saúde continuam a não valorizar esta prática. Neste estudo observa-se que os doentes na admissão apresentam um bom índice de higiene oral tendo-se contudo observado um agravamento significativo ao fim de uma semana de internamento. Embora este agravamento possa não ser importante para o doente com uma semana de internamento ele poderá ser indicativo de um risco acrescido para infeções nosocomiais em doentes com internamentos mais prolongados, necessitando estes doentes de uma higiene oral mais eficaz.

Etiologia da doença periodontal

A doença periodontal é caracterizada como um conjunto de condições inflamatórias, de carater crônico ou agudo, e de origem bacteriana, que começa por afetar o tecido gengival e pode levar, com o tempo, à perda dos tecidos de suporte dos dentes. As reações inflamatórias e imunológicas à placa bacteriana representam as características predominantes da gengivite e da periodontite. A reação inflamatória é visível, microscópica e clinicamente, no periodonto afetado e representa a reação do hospedeiro à microbiota da placa e seus produtos. O processo de infecção no sulco periodontal leva, inicialmente, a formação de uma mucosite periodontal, que pode ser definida como uma inflamação dos tecidos moles periodontáis, sem ocasionar perda óssea, sendo reversível, se o seu diagnóstico for atempado. Os processos inflamatórios e imunológicos atuam nos tecidos gengivais para proteger contra o agressãoes microbianas, impedindo os microrganismos de se disseminarem ou invadirem os tecidos. Em alguns casos, essas reações de defesa do hospedeiro podem ser prejudiciais porque também são passíveis de danificar as células e estruturas vizinhas do tecido conjuntivo. Além disso, as reações inflamatórias e imunológicas cuja extensão alcança níveis mais profundos do tecido conjuntivo, além da base do sulco, podem envolver o osso alveolar nesse processo destrutivo. Assim, tais processos defensivos podem, paradoxalmente, ser os responsáveis pela maior parte da lesão tecidual observada na gengivite e na periodontite. O objectivo desse trabalho é fazer uma revisão de literatura específica sobre a etiologia da doença periodontal respectivamente. Serão descritos os principais agentes microbianos que estão relacionados com a doença periodontal e a forma como influenciam o desenvolvimento da doença, procurando desta forma contribuir para a procura de tratamentos mais eficientes.

Aplicação de porfirinas como fotossensibilizadores para a inativação fotodinâmica de microrganismos da cavidade oral

A cavidade oral é um habitat favorável ao desenvolvimento de microrganismos, alguns dos quais podem causar doenças, sendo Enterococcus faecalis uma bactéria frequentemente encontrada em biofilmes instalados em diferentes nichos da cavidade oral. Este trabalho teve como objetivo testar a aplicabilidade da inativação fotodinâmica (PDI), usando porfirinas como fotossensibilizadores, como estratégia de controlo de biofilmes da cavidade oral, tomando E. faecalis como microrganismo modelo. Como fotossensibilizadores, foram testadas as porfirinas catiónicas Tetra-Py+-Me, Tri-Py+-Me-PF, PCat 2, PCat 3, PCat 4 e o corante azul de toluidina O (TBO), incluído como fotossensibilizador de referência. Os biofilmes de E. faecalis foram irradiados com luz branca (270 J.cm-2) a uma intensidade de 150 mW.cm-2, na presença de até 50 µM de porfirina ou até 20 µM de TBO. A cinética de inativação foi caracterizada pela variação da concentração de células viáveis ao longo da experiência. Foi também testada a inativação de células na forma livre, em condições equivalentes. Os biofilmes de E. faecalis mostraram-se muito resistentes à PDI com qualquer dos PS testados, não tendo sido conseguidos fatores de inativação superiores a 2 log com a concentração máxima de PS (50 µM) e a dose máxima de luz (270 J.cm-2). Na forma livre as células foram inativadas até ao limite de quantificação com concentrações de PS de 0,5 µM e doses de luz até 108 J.cm-2, com uma intensidade de 10 mW.cm-2. No entanto, a eficiência de ligação dos PS às células livres não foi maior do que aos biofilmes. Embora os fatores de inativação obtidos não permitam ainda considerar que a PDI com os compostos testados seja uma abordagem antimicrobiana eficiente contra biofilmes de E. faecalis, o facto de se confirmar uma relação entre as propriedades químicas e físicas do PS e a sua eficiência, bem como os resultados muito promissores obtidos com uma das famílias de porfirinas testadas apenas em células livres, justifica a prossecução do desenvolvimento de novos PS para o controle de biofilmes bacterianos na cavidade oral.