Padronização de técnica manual para obtenção de plasma rico em plaquetas de bovino

To evaluate the biochemical profile and protein concentration of whey from milk samples of healthy Murrah primiparous and pluriparous buffaloes, 30 female buffaloes were analyzed during a complete lactation. The animals were divided into three groups: G1 = 10 primiparous buffaloes, G2 = 10 pluriparous buffaloes with 2-3 lactations and G3 = 10 pluriparous buffaloes with > 3 lactations. The lactation period was divided into: early stage (I: 1-3 months of lactation), intermediate stage (T: 4-6 months of lactation) and final stage (F: 7-9 months of lactation). Before milk sampling, physical examination of the mammary gland, strip cup test and California Mastitis Test (CMT) were performed. After mammary quarters asepsis, 20mL of milk were collected monthly from each mammary quarter, during a complete lactation, in sterilized plastic bottles without preservative, in order to perform microbiological isolation, biochemical profile and protein electrophoresis in sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis (SDS-PAGE), and 30mL of milk from each mammary quarter were collect, in sterilized plastic bottles containing preservative bronopol to perform the somatic cell count (SCC). A total of 1,042 milk samples were collected from the experimental groups during lactation, of which 923 samples showed negative reaction to CMT and negative microbiological isolation and were selected to biochemical profile analysis and protein electrophoresis in SDS-PAGE. There were influence of parity order and stage of lactation in biochemical profile and protein concentration of healthy Murrah buffaloes'whey. Primiparous buffaloes (G1) showed higher gamma-glutamyltransferase (GGT: 2,346 U/L), alkaline phosphatase (ALP: 181 U/L), phosphorus (P; 56.6mg/dL), potassium (K; 32.0mg/dL) and alpha-lactalbumin (458mg/dL). Buffaloes with 2-3 lactations (G2) showed higher SCC (70,700 cells/mL) and higher concentrations of total protein (1.55g/dL), albumin (100mg/dL), magnesium (Mg; 8.80mg/dL), chlorides (Cl; 176mg/dL), iron (Fe; 10.7 mu g/dL), sodium (Na; 178mMol/L) and lactoferrin (59.5mg/dL). Bufalloes with > 3 lactations (G3) showed higher concentrations of total calcium (Ca; 41.8mg/dL), ionized calcium (iCa; 2.92mMol/L), immunoglobulin A (IgA; 1.32mg/dL), serum albumin (99.1mg/dL), immunoglobulin G (IgG; 49.7mg/dL) and beta-lactoglobulin (1,068mg/dL). During lactation it was observed increase in SCC, GGT, ALP, total protein, albumin, P, Mg, Cl, Na, lactoferrin, serum albumin, IgG and alpha-lactalbumin, as well as decrease in concentrations of Ca, Fe, iCa, K, IgA and beta-lactoglobulin in buffaloes'whey. The results may be used as reference for buffaloes and to support diagnosis and prognosis of diseases common to lactation periods.

Storage media for avulsed teeth: a literature review

Dental avulsion is the most severe type of traumatic tooth injuries because it causes damageto several structures and results in the complete displacement of the tooth from its socketin the alveolar bone. The ideal situation is to replant an exarticulated tooth immediatelyafter avulsion because the extraoral time is a determinant factor for treatment successand for a good prognosis. However, it is not always possible. The success of replantationdepends on a number of factors that may contribute to accelerate or minimize theoccurrence of root resorption or ankylosis, among which is the type and characteristicsof the medium used for temporary storage during the time elapsed between avulsionand replantation. Maintaining the tooth in an adequate wet medium that can preserve,as longer as possible, the vitality of the periodontal ligament cells that remain on rootsurface is the key to success of replantation. Recent research has led to the developmentof storage media that produce conditions that closely resemble the original socketenvironment, with adequate osmolality (cell pressure), pH, nutritional metabolites andglucose, and thus create the best possible conditions for storage. Although these storagemedia can now be purchased in the form of retail products, the most common scenariois that such a product will not be readily available at the moment of the accident Thispaper reviews the literature on the different storage media that have been investigatedfor avulsed teeth based on full-length papers retrieved from PubMed/Medline, Lilacs, BBOand SciELO electronic databases using the key words storage medium , transportationmedium , avulsion , tooth avulsion , replantation , tooth replantation , milk and propolis .After application of inclusion and exclusion criteria, 39 papers were selected and criticallyreviewed with respect to the characteristics, efficacy and ease of access of the storagemedium. The review of the lite

Reconstrução de maxila severamente atrófica via enxerto ósseo autógeno de calota craniana: descrição de técnica

Bone reconstructions are traditionally conducted with autogenous grafts harvested from intra- or extra-oral donor sites to reestablish the lost bone volume for further implant-prosthetic rehabilitation. The calvarial bone has been studied as an excellent donor site in large atrophic situations, presenting low resorption rates, as well as complications and minimal morbidity. The hospitalization time is short, with low pain levels, short functional limitations, and invisible scars. The skull microarchitecture is predominantly cortical in the presence of growth factors that demonstrate their osteogenic, osteoinductive, and osteoconductive abilities resulting in low resorption rate and high predictability when compared to the iliac crest. Dural lacerations, extra and subdural bleeding, cerebrospinal fluid leakage, and brain damage have been minimized due to the development of surgical technique. The delimitation of diploe, preserving the internal skull cortex before osteotomy at the donor made it possible to reduce accidents and complications. The aim of this paper is to show a technical and to discuss aspects of the use of calvarial bone in the reconstruction of severely atrophic maxilla for oral rehabilitation with osseointegrated implants.

Lesão condral do joelho: comparação entre ressonância magnética e vídeo-artroscopia. Efeito da aplicação do plasma rico em plaquetas

Pós-graduação em Bases Gerais da Cirurgia - FMB

Uso de plasma rico em plaquetas em úlceras de córnea em cães

This study aims to clinically and macroscopically evaluate the adjuvant therapy with platelet-rich plasma in the form of eyedrops or clot, for corneal ulcers in dogs treated at the Veterinary Ophthalmology Service. We analyzed 20 eyes diagnosed with ulcerative keratitis, divided into two experimental groups. The eyedrop group (GC) was composed of eyes treated topically with eyedrops of autologous plateletrich plasma (PRP), and the clot group (GT) was composed of eyes treated with a platelet-rich clot and covered with a third eyelid for retention of the clot. The groups were evaluated by clinical and macroscopic analysis and by the analysis of epithelial defect reduction, at different times, at three, five, ten, 15 and 30 days, except for the third day in GT. The coverage of the third eyelid was removed on the fifth day. In both groups the inflammation signs reduced, there was an improvement in ocular sensibility and proper repair of epithelial defect. All GT eyes and 70% GC eyes showed complete healing on the fifth day, the remainder of GC completed healing on the tenth day. PRP in the form of eyedrops and clot is an excellent adjuvant therapy to be instituted in the clinical treatment for corneal ulcer in dogs, because it decreases the inflammatory signs and the ocular pain and it potentially assists in healing epithelial defects.

Inibição da metástase via transição epitélio-mesenquimal por shRNA, metformina e Y27632 em neoplasia mamária

Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP)

Interação entre Citocinas, Plaquetas e Fibrogênese na Investigação da Metaplasia Mielóide Hepática

Pós-graduação em Pesquisa e Desenvolvimento (Biotecnologia Médica) - FMB

Citotoxicidade de membranas à base de ácido polilático e poli-ε-caprolactona com a incorporação de fosfato de lantânio e oxiapatita dopada com lantânio

Desde a antiguidade, enxertos e membranas são estudados para promoverem um reparo ósseo otimizado. O reparo ósseo consiste na reabsorção do tecido necrosado e de seu coágulo, juntamente com um processo inflamatório que libera fatores de crescimento que irão reparar o osso danificado. Em algumas situações, o osso lesionado não tem a capacidade de se auto reparar, portanto, são necessárias intervenções cirúrgicas para inserir um enxerto ósseo. Entretanto, há uma grande dificuldade em se encontrar um material que forneça os fatores necessários para o crescimento ósseo. Para isso, foram confeccionadas membranas à base de ácido polilático e poli-ε-caprolactona (PLC) (Purasorb: PLC 7015 - Purac, Holanda), com a incorporação de fosfato de lantânio (PLC/LaPO4) e oxiapatita dopada com 20% de lantânio (PLC/La20OAP) pelo Instituto de Química de Araraquara, UNESP. Assim, o objetivo do presente estudo foi avaliar a citotoxicidade desses materiais por meio dos testes XTT e sobrevivência clonogênica. Os eluatos foram preparados com as membranas citadas de acordo com a ISO 10993-12. O cloridrato de doxorrubicina foi utilizado como controle positivo para ambos os testes. Como Controle Negativo (CN) foram utilizadas somente as células CHO-K1 (sem a ação de qualquer tratamento) por 24 horas. Os eluatos foram mantidos em contato com células CHO-K1 por 24 horas. Como os dados apresentaram aderência à curva normal, foi aplicada a análise de variância (ANOVA) one-way, seguido dos testes de Tukey e Dunnett (p<0,05). Verificou-se que os materiais testados não demonstraram absorbância estatisticamente diferente em relação ao CN (p>0,05; Dunnett - XTT) e também não causaram comprometimento na capacidade proliferativa das células (p>0,05; Dunnett - Sobrevivência clonogênica). Assim, pode-se concluir que as amostras de PLC, PLC/LaPO4 e PLC/La20OAP não apresentaram citotoxicidade em células CHO-K1.

Citotoxicidade de membranas à base de ácido polilático e poli-ε-caprolactona com a incorporação de fosfato de lantânio e oxiapatita dopada com lantânio

Desde a antiguidade, enxertos e membranas são estudados para promoverem um reparo ósseo otimizado. O reparo ósseo consiste na reabsorção do tecido necrosado e de seu coágulo, juntamente com um processo inflamatório que libera fatores de crescimento que irão reparar o osso danificado. Em algumas situações, o osso lesionado não tem a capacidade de se auto reparar, portanto, são necessárias intervenções cirúrgicas para inserir um enxerto ósseo. Entretanto, há uma grande dificuldade em se encontrar um material que forneça os fatores necessários para o crescimento ósseo. Para isso, foram confeccionadas membranas à base de ácido polilático e poli-ε-caprolactona (PLC) (Purasorb: PLC 7015 - Purac, Holanda), com a incorporação de fosfato de lantânio (PLC/LaPO4) e oxiapatita dopada com 20% de lantânio (PLC/La20OAP) pelo Instituto de Química de Araraquara, UNESP. Assim, o objetivo do presente estudo foi avaliar a citotoxicidade desses materiais por meio dos testes XTT e sobrevivência clonogênica. Os eluatos foram preparados com as membranas citadas de acordo com a ISO 10993-12. O cloridrato de doxorrubicina foi utilizado como controle positivo para ambos os testes. Como Controle Negativo (CN) foram utilizadas somente as células CHO-K1 (sem a ação de qualquer tratamento) por 24 horas. Os eluatos foram mantidos em contato com células CHO-K1 por 24 horas. Como os dados apresentaram aderência à curva normal, foi aplicada a análise de variância (ANOVA) one-way, seguido dos testes de Tukey e Dunnett (p<0,05). Verificou-se que os materiais testados não demonstraram absorbância estatisticamente diferente em relação ao CN (p>0,05; Dunnett - XTT) e também não causaram comprometimento na capacidade proliferativa das células (p>0,05; Dunnett - Sobrevivência clonogênica). Assim, pode-se concluir que as amostras de PLC, PLC/LaPO4 e PLC/La20OAP não apresentaram citotoxicidade em células CHO-K1.

Chronic VEGF Blockade Worsens Glomerular Injury in the Remnant Kidney Model

VEGF inhibition can promote renal vascular and parenchymal injury, causing proteinuria, hypertension and thrombotic microangiopathy. The mechanisms underlying these side effects are unclear. We investigated the renal effects of the administration, during 45 days, of sunitinib (Su), a VEGF receptor inhibitor, to rats with 5/6 renal ablation (Nx). Adult male Munich-Wistar rats were distributed among groups S+V, sham-operated rats receiving vehicle only; S+Su, S rats given Su, 4 mg/kg/day; Nx+V, Nx rats receiving V; and Nx+Su, Nx rats receiving Su. Su caused no change in Group S. Seven and 45 days after renal ablation, renal cortical interstitium was expanded, in association with rarefaction of peritubular capillaries. Su did not worsen hypertension, proteinuria or interstitial expansion, nor did it affect capillary rarefaction, suggesting little angiogenic activity in this model. Nx animals exhibited glomerulosclerosis (GS), which was aggravated by Su. This effect could not be explained by podocyte damage, nor could it be ascribed to tuft hypertrophy or hyperplasia. GS may have derived from organization of capillary microthrombi, frequently observed in Group Nx+Su. Treatment with Su did not reduce the fractional glomerular endothelial area, suggesting functional rather than structural cell injury. Chronic VEGF inhibition has little effect on normal rats, but can affect glomerular endothelium when renal damage is already present.

Espermatogênese xenogênica pós-transplante de células tronco caninas no testículo de camundongos

As células tronco espermatogoniais (SSCs) são caracterizadas pela capacidade de autorrenovação, proliferação e transmissão das informações genéticas. Em caninos a primeira tentativa de xenotransplante não obteve o sucesso da produção de espermatozoides, no entanto, há evidências de que as células testiculares xenogênicas podem ser transplantadas no testículo do animal hospedeiro, e gerar espermatozoides viáveis do doador. Portanto, este estudo tem como objetivo realizar o xenotransplante das células germinativas caninas em camundongos imunosuprimidos, e com isto promover à produção de espermatozoides caninos viáveis, geneticamente modificados. E por meio desta técnica, analisar a eficiência da espermatogênese pós-transplante. Células germinativas testiculares foram caracterizadas, isoladas e cultivadas de cães pré-púberes, por meio de sistemas de cultura de enriquecimento e fatores de crescimento. As células foram transduzidas com um gene repórter GFP e LacZ, e por um vetor lentiviral para indentificar as SSCs nos testículos receptores. As SSCs transduzidas foram transplantadas nos testículos de camundongos (C57BL/6) tratados com Busulfan, após diferentes períodos os animais receptores foram eutanasiados e analisados. Aos 10 dias de cultivo as células germinativas adultas foram positivas para CD49f, CD117, e com 5 dias uma expressão semelhante de GFRA1 e DAZL, demonstrando a presença de SSCs e algumas células em meiose. Transplantamos 105 células e 20-43% das células transplantadas foram identificadas na membrana basal dos túbulos seminíferos do animal receptor. Portanto, o transplante das células germinativas caninas, mostrou que a purificação e o cultivo realizados são possíveis para obter SSCs caninas, as quais colonizaram os túbulos seminíferos dos camundongos imunodeficientes e mantiveram-se vivas na membrana basal por 90 dias após transplante, mesmo que estes animais tenham distância filogenética

Expressão gênica de metaloproteinases e de seus reguladores em neoplasias mieloproliferativas: associação com biomarcadores de angiogênese e status mutacional

As neoplasias mieloproliferativas (NMPs) BCR-ABL1 negativas compreendem a mielofibrose primária (PMF), trombocitemia essencial (TE) e a policitemia vera (PV). A patogênese e progressão dessas NMPs não estão completamente elucidadas. As metaloproteinases de matriz (MMPs) degradam a matriz extracelular, ativando citocinas e fatores de crescimento que, por sua vez, participam da tumorigênese e angiogênese. O objetivo deste estudo foi avaliar a relação da expressão gênica das MMPs, TIMPs, HIF1-α e SPARC com os marcadores angiogênicos bFGF e VEGFA em pacientes com MF e TE, considerando o status mutacional; bem como avaliar a regulação desses genes em camundongos submetidos à hipóxia, e em modelos HIF1-α(-/-) e VHL(-/-). Foram incluídos 21 pacientes com MF, 21 com MF pós-TE, 6 com MF pós-PV, 23 com TE e 78 indivíduos controle. As análises realizadas foram: dosagem sérica e expressão de RNAm de MMP2, MMP9, TIMP1, TIMP2 e SPARC, hemograma, determinação da proteína C reativa ultrassensível, determinação das concentrações de VEGFA e bFGF e avaliação das mutações nos genes JAK2, cMPL e CALR. A avaliação da densidade microvascular da medula óssea foi feita em 30 dos pacientes incluídos. Os pacientes com MFP, MFPTE e TE apresentaram maior expressão de MMP2, SPARC, TIMP1, TIMP2 e bFGF quando comparados aos seus controles (P<0,05), enquanto MMP9 foi mais expressa nos pacientes com MFPTE e TE (P= 0,011 e P=0,047, respectivamente). Os pacientes com TE apresentaram maior expressão de HIF1-α e VEGFA em relação ao grupo controle (P<0,05). Pacientes com MF JAK2V617F positivos apresentaram maiores concentrações de MMP9, TIMP2, bFGF e VEGFA quando comparados aos pacientes portadores de mutações na CALR (P<0,05). Os pacientes com TE JAK2V617F positivos apresentaram maiores concentrações de MMP2 e TIMP2 (P=0,049 e P=0,020, respectivamente). As concentrações das proteínas estudadas não apresentaram correlação com a carga alélica de JAK2V617F e nem com a densidade microvascular da medula óssea. Células de medula óssea de camundongos submetidos à hipóxia apresentaram maior expressão de MMP2 e TIMP1 comparados aos camundongos em normóxia. Camundongos VHL(-/-) apresentaram aumento na expressão dos genes MMP2, MMP9, TIMP1, TIMP2 e VEGFA. Diferentemente, embriões HIF1-α(-/-) não foram considerados um bom modelo para este estudo devido ao envolvimento das MMPs na embriogênese/organogênese. Frente aos resultados encontrados, pode-se sugerir que a maior expressão de MMP2, SPARC e de bFGF estão associadas às NMPs. A mutação JAK2V617F foi associada a maiores concentrações de MMPs, TIMP2 VEGFA e bFGF. HIF1-α foi mais expresso na PV e na TE, sugerindo uma possível regulação da expressão das MMPs e TIMPs nessas doenças.

Reparação e regeneração em endodontia: mito ou realidade?

Dissertação para obtenção do grau de Mestre no Instituto Superior de Ciências da Saúde Egas Moniz

Metastização no periodonto

Dissertação para obtenção do grau de Mestre no Instituto Superior de Ciências da Saúde Egas Moniz

Avaliação imuno-histoquímica das proteínas BMP-4, FGF-8 e Sindecan-1 em tumores odontogênicos

The development and progression of odontogenic tumors have been associated with an imbalance in the activity of growth factors, adhesion molecules, extracellular matrix proteins and their degradation enzymes, angiogenic factors and osteolytic. Some studies have shown that interaction relationships inductive epithelial / mesenchymal determinants of Odontogenesis are mimicked by these tumors. The objective of this research was to investigate the immunolocalization of growth factors (BMP-4 and FGF-8) and Sindecan-1 structural protein in a series of odontogenic tumors presenting different biological behaviors, to contribute to a better understanding of the role of these proteins in tumor development. The sample consisted of 21 of the solid ameloblastoma, odontogenic keratocysts 19 and 14 odontogenic adenomatoid tumors. Increased Sindecan-1 immunostaining was seen in the epithelium of the lesions when compared with mesenchyme. In ameloblastoma and odontogenic keratocysts, this expression was higher than in AOT. Epithelial expression of BMP4 showed quantitatively similar in the three studied lesions; however, when anlisada mesenchymal immunoreactivity, was detected significant higher expression when compared to the ameloblastoma keratocysts. In ameloblastoma, mesenchymal expression was predominantly (p = 0.008), while in keratocyst higher expression in the epithelium was observed (p = 0.046). In all injuries, strong or moderate correlation was observed in the BMP-4 immunoreactivity in the epithelium and mesenchyme. FGF-8, no injury was observed difference between the immunoreactivity in the epithelium or mesenchyme, however in ameloblastoma positive correlation was found (Spearman correlation, rho = 0.857, p <0.001). The results of this study suggest that the three evaluated biomarkers actively involved in the pathogenesis of lesions, especially the expression of ameloblastomas indicating a strong interaction between parenchymal and stromal cells which may contribute to its marked aggressiveness.