Influência do número e inclinação dos implantes para a ancoragem de prótese fixa em maxila atrófica: estudo comparativo com elementos finitos 3D

Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES)

Processos auto-organizados em agregados de larvas de moscas-varejeiras em dispersão pós-alimentar: experimentação, modelagem e validação

Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP)

Relação entre a fadiga muscular e a mudança da técnica de nado durante um exercício exaustivo no nado crawl

Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP)

Effect of melatonin on tumor growth and angiogenesis in xenograft model of breast cancer

Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP)

Alterações hematológicas associadas ao hifema em cães

Hyphema is an intraocular hemorrhage that can result from many ocular and/or systemic disorders. It is an important clinical sign, since it may appear in the initial stages of some diseases or haematological disorders, acting as an initial marker for early diagnosis. The hematologic disturbances that predispose animals to present hyphema are: Thrombocytopenia, von Willebrand Disease, Scott Syndrome, Disseminated Intravascular Coagulation and Hyperviscosity Syndrome due to Multiple Myeloma. Each of the differential diagnoses due to hematological changes from the appearance of hyphema in dogs shows clinical relevance and particular ocular signs

Thrombocytopenia and platelet hypoaggregation induced by Bothrops asper snake venom Toxins involved and their contribution to metalloproteinase-induced pulmonary hemorrhage

Thrombocytopenia and platelet dysfunction occur in patients bitten by Bothrops sp snakes in Latin America. An experimental model was developed in mice to study the effects of B. asper venom in platelet numbers and function. Intravenous administration of this venom induces rapid and prominent thrombocytopenia and ex vivo platelet hypoaggregation. The drop in platelet numbers was primarily due to aspercetin, a protein of the C-type lectin family which induces von Willebrand factor-mediated platelet aggregation/agglutination. In addition, the effect of class P-III hemorrhagic metalloproteinases on the microvessel wall also contributes to thrombocytopenia since jararhagin, a P-III metalloproteinase, reduced platelet counts. Hypoaggregation was associated with the action of procoagulant and defibrin(ogen)ating proteinases jararacussin-1 (a thrombin-like serine proteinase) and basparin A (a prothrombin activating metalloproteinase). At the doses which induced hypoaggregation, these enzymes caused defibrin(ogen)ation, increments in fibrin(ogen) degradation products and D-dimer and prolongation of the bleeding time. Incubation of B. asper venom with batimastat and α 2-macroglobulin abrogated the hypoaggregating activity, confirming the role of venom proteinases in this effect. Neither aspercetin nor the defibrin(ogen)ating and hypoaggregating components induced hemorrhage upon intravenous injection. However, aspercetin, but not the thrombin-like or the prothrombin-activating proteinases, potentiated the hemorrhagic activity of two hemorrhagic metalloproteinases in the lungs. © 2005 Schattauer GmbH, Stuttgart.

Purification of coagulation factor VIII using chromatographic methods. Direct chromatography of plasma in anion exchange resins

Coagulation factor VIII (FVIII) concentrates are used in the treatment of patients with Hemophilia A. Human FVIII was purified directly from plasma using anion exchange chromatography followed by gel filtration. Three Q-Sepharose resins were tested, resulting in 40% recovery of FVIII activity using Q-Sepharose XL resin, about 80% using Q-Sepharose Fast Flow and 70% using the Q-Sepharose Big Beads. The vitamin K-dependent coagulation factors co-eluted with FVIII from the anion exchange columns. In the second step of purification, when Sepharose 6FF was used, 70% of FVIII activity was recovered free from vitamin K-dependent factors.

Engraftment of human adipose derived stem cells delivered in a hyaluronic acid preparation in mice

PURPOSE: To evaluate the implant of human adipose derived stem cells (ADSC) delivered in hyaluronic acid gel (HA), injected in the subcutaneous of athymic mice. METHODS: Control implants -HA plus culture media was injected in the subcutaneous of the left sub scapular area of 12 athymic mice. ADSC implants: HA plus ADSC suspended in culture media was injected in the subcutaneous, at the contra lateral area, of the same animals. With eight weeks, animals were sacrificed and the recovered implants were processed for extraction of genomic DNA, and histological study by hematoxilin-eosin staining and immunufluorescence using anti human vimentin and anti von Willebrand factor antibodies. RESULTS: Controls: Not visualized at the injection site. An amorphous substance was observed in hematoxilin-eosin stained sections. Human vimentin and anti von Willebrand factor were not detected. No human DNA was detected. ADSC implants - A plug was visible at the site of injection. Fusiform cells were observed in sections stained by hematoxilin- eosin and both human vimentin and anti von Willebrand factor were detected by immunofluorescence. The presence of human DNA was confirmed. CONCLUSION: The delivery of human adipose derived stem cells in preparations of hyaluronic acid assured cells engraftment at the site of injection.

Low temperatures reduce skin healing in the Jacaré do Pantanal (Caiman yacare, Daudin 1802)

Studies of skin wound healing in crocodilians are necessary given the frequent occurrence of cannibalism in intensive farming systems. Air temperature affects tissue recovery because crocodilians are ectothermic. Therefore, the kinetics of skin wound healing in Caiman yacare were examined at temperatures of 33°C and 23°C. Sixteen caiman were selected and divided into two groups of eight maintained at 23°C or 33°C. The studied individuals' scars were photographed after 1, 2, 3, 7, 15 and 30 days of the experimental conditions, and samples were collected for histological processing after 3, 7, 15 and 30 days. Macroscopically, the blood clot (heterophilic granuloma) noticeably remained in place covering the wound longer for the caiman kept at 23°C. Microscopically, the temperature of 23°C slowed epidermal migration and skin repair. Comparatively, new blood vessels, labeled using von Willebrand factor (vWF) antibody staining, were more frequently found in the scars of the 33°C group. The collagen fibers in the dermis were denser in the 33°C treatment. Considering the delayed healing at 23°C, producers are recommended to keep wounded animals at 33°C, especially when tanks are cold, to enable rapid wound closure and better repair of collagen fibers because such lesions tend to compromise the use of their skin as leather.

Functional characterization of Streptococcus pyogenes pili

Group A Streptococcus is a Gram-positive human pathogen able to colonize both upper respiratory tract and skin. GAS is responsible for several acute diseases and autoimmune sequelae that account for half a million deaths worldwide every year (Cunningham et al., 2000). As other bacteria, GAS infections requires the capacity of the pathogen to adhere to host tissues and to form cell aggregates. The ability to persist in distinct host niches like the throat and the skin and to trigger infections is associated with the expression of different GAS virulence factors. GAS pili has been described as important virulence factors encoded by different FCT-operon regions. Based on this information, we decided to study the possible effect of environmental conditions that could regulate the pili expression. In this study we reported the influence of pH environment variations in biofilm formation for strains pertaining to a panel of different GAS FCT-types. The biofilm formation was promoted, excepted in the FCT-1 strains, by a changing in pH from physiological to acidic condition of growth in in vitro biofilm assay. By analyzing the possible association between biofilm formation and pH dependence, we have found that in FCT-2 and FCT-3 strains, the biofilm is promoted by pH reduction leading to an increase of pili expression. These data confirmed a direct link between pH dependent pilus expression and biofilm formation in GAS. As pili are a multi component structure we decided to investigate the functional role of one of its subunits, the AP-1 protein. AP-1 is highly conserved through the different FCT-types and suggests a possible essential role for the pili function. We focused our attention on the AP-1 protein encoded by the FCT-1 strains (M6). In particular this AP-1 protein contains the von Willebrand Factor A (VWFA) domain, which share an homology with the human VWFA domain that has been reported to be involved in adhesion process. We have demonstrated that the AP-1 protein binds to human epithelial cells by its VWFA domain, whereas the biofilm formation is mediated by the N-terminal region of AP-1 protein. Moreover, analyzing the importance of AP-1 in in vivo experiments we found a major capacity of tissue dissemination for the wild-type strain compared to the isogenic AP-1 deletion mutant. Pili have been also reported as potential vaccine candidates against Gram positive bacteria. For these reason we decided to investigate the relationship between cross reaction of sera raised against different GAS and GBS pilin subunits and the presence of a conserved Cna_B domain, in different pilin components. Our idea was to investigate if, using pilus conserved domains, a broad coverage vaccine against streptococcal infection could be possible.

Untersuchungen zur Plasmapheresetherapie bei Patienten mit thrombotisch thrombozytopenischer Purpura

Die thrombotische thrombozytopenische Purpura (TTP) ist charakterisiert durch eine Triade aus Thrombozytopenie, hämolytischer Anämie und Mikrothromben. Ursächlich für diese Mikroangiopathie ist ein Mangel der Von Willebrand Faktor (VWF)-spaltenden Protease, ADAMTS13, der durch Autoantikörper oder eine genetische Mutation bedingt sein kann. In der Folge treten hochmolekulare, prothrombotische VWF Multimere im Blut auf, die eine Plättchenadhäsion und -aggregation initiieren, die zu mikrovaskulären Thromben in den Arteriolen und Kapillaren zahlreicher Organe insbesondere im zentralen Nervensystem führt. rnMomentan ist der Goldstandard der Therapie dieser ansonsten tödlich verlaufenden Erkrankung, die Plasmapherese (PEX). Hierfür stehen mit Fresh Frozen Plasma (FFP) und solvent/detergent (s/d) Plasma zwei Präparate zur Verfügung. Die Effizienz der Therapie bei der TTP konnte in den letzten Jahrzehnten im klinischen Alltag belegt werden, dennoch geht die intensive und invasive Therapie mit vielen Risiken und Nebenwirkungen für die Patienten einher, die in dieser Arbeit herausgearbeitet werden sollten. rnIn einer deutschlandweiten Patientenstudie wurde retrospektiv, mittels Fragebögen, ein Nebenwirkungsprofil der Plasmapherese erstellt, sowie mögliche Prädispositionen für die TTP untersucht. Zudem wurden mögliche Auslöser für das Auftreten einer klinisch manifesten TTP analysiert. Die Auswertung zeigte, dass Parästhesien (64,4 %) und Schüttelfrost (61,2 %) als häufigste Nebenwirkungen der PEX bei den Patienten auftraten. Weitere Symptome waren vermehrte Kopfschmerzen (50,6 %) und Tachykardien (36,8 %). Nebenwirkungen wie schwerer Kollaps (9 %) traten selten auf. Patienten mit Allergien in der Anamnese reagierten nicht empfindlicher auf die PEX, als andere. Ein Unterschied in der Häufigkeit der Nebenwirkungen hinsichtlich der verschiedenen Plasmapräparate konnte nicht gezeigt werden, relativiert wird dies durch den sehr geringen Einsatz von Octaplas® bei der untersuchten Patientenkohorte.rnEs konnte eine deutliche Verbindung zwischen dem Auftreten der TTP und anderen Autoimmunerkrankungen gezeigt werden. Von insgesamt 87 Patienten leiden 20,8 % an einer weiteren Autoimmunerkrankung. Insbesondere die Hashimoto Thyreoiditis liegt bei den Befragten als häufige Begleiterkrankung vor. Die genetische Prädisposition hat sich in den vergangen Jahren als ein primärer Risikofaktor für die TTP herausgestellt.rnAls mögliche Trigger eines TTP Schubes konnten Infektionen (38,7 %), Medikamente (u.a. Kontrazeptiva, Chinolone, Clarithromycin) (24,3 %), und Schwangerschaft (5,4 %) ausgemacht werden.rnEin weiterer Untersuchungspunkt der Dissertation war die Beurteilung der ADAMTS13-Aktivität in den Plasmapräparaten. Hierfür wurden drei verschieden Methoden, zwei auf Fluoreszenz Resonanz Energie Transfer beruhende Assays und eine turbidimetrische Messung, verwendet. In allen Methoden konnte eine physiologische ADAMTS13-Aktivität, 646 ng/ml für FFP und 634 ng/ml für Octaplas®, gemessen werden, die sich für beide Präparate nicht signifikant unterschied. Auffällig waren jedoch die höheren Schwankungen der Aktivität bei den verschiedenen Chargen bei FFP gegenüber Octaplas®. rnAufgrund des Herstellungsverfahrens bietet Octaplas® einen sichereren Schutz vor Virusübertragungen und dem Auftreten von TRALI als FFP. Jedoch kann es aufgrund der niedrigen Konzentration an Protein S prothrombotisch wirken. FFP enthält dagegen einen höheren Gehalt an Gerinnungsfaktoren. rnAbschließend ist festzuhalten, dass beide Präparate für die Therapie der TTP geeignet sind. Welches Präparat gewählt wird, sollte individuell für den zu behandelnden Patienten entschieden werden. Bei TTP-Patienten, die in der Vergangenheit bereits sensibel auf FFP reagierten, bietet sich eine Therapie mit Octaplas® an. Die schnelle Bereitstellung einer adäquaten Therapie spielt bei der thrombotisch thrombozytopenischen Purpura die entscheidende Rolle.

Zelluläre und molekulare Mechanismen der angeborenen Immunität

Die myeloide Zelllinie MUTZ-3 konnte als geeignetes Modellsystem zur Charakterisierung der TREM-1-Signaltransduktion etabliert werden, da diese TREM-1 und dessen essentielles Adaptermoleküle DAP12 funktional exprimiert. Übereinstimmend mit bisherigen Daten wurden die Kinasen PI3K und p38-MAPK als wichtige Regulatoren in der Signalweiterleitung nach TREM-1-Aktivierung identifiziert, wobei sich einige Unterschiede in der exakten Signalhierarchie zwischen monozytären und granulozytären Zellen ergaben. So erfolgt die Aktivierung von PI3K und p38-MAPK in PMN unabhängig voneinander und in monozytären Zellen findet die Aktivierung von p38-MAPK vor der Akt-Phosphorylierung statt und ist für Letztere notwendig. Zudem ist die Ca2+-Mobilisierung in PMN nur von PI3K abhängig und in monozytären Zellen von PI3K und p38-MAPK. Bei der durch TLR- oder NLR-Koligation gesteigerten TREM-1-Aktivierung sind PI3K und p38-MAPK ebenfalls zentrale Regulatoren. Es ergaben sich ebenfalls Unterschiede in der exakten TREM-1-Signaltransduktion.rnrnEin Mausmodell für invasive Aspergillose (IA) wurde erfolgreich etabliert, wobei die wichtige Rolle der PMN bei der Abwehr von Pilzinfektionen durch deren Depletion mit unterschiedlichen Antikörpern belegt wurde. Für das Abtöten von A. fumigatus-Konidien sind oxidative und nicht-oxidative PMN-Effektormechanismen notwendig. Dabei konnte die essentielle Rolle der oxidativen PMN-Effektorfunktionen anhand NADPH-Oxidase-defizienter p47phox-/- und gp91phox-/- Mäuse für das Überleben von Pilzinfektionen gezeigt werden. Dagegen war die Infektion von Neutrophiler Elastase defizienter ELANE Mäuse nicht letal. Dies deutet darauf hin, dass diese als prototypische Serinprotease und wichtiger Bestandteil der NET-Formation nicht essentiell für das Überleben von IA ist oder durch andere, nicht-oxidative Effektormechanismen kompensiert werden kann. Keinen Einfluss auf die IA hatte die Depletion von Arginin mittels ADI-PEG, da weder das Überleben der Mäuse noch das Abtöten der Pilzkonidien beeinflusst wurde. Außerdem wurden keine Veränderung in der Einwanderung und Aktivierung von PMN nach Infektion quantifiziert. Dagegen induzierte die Defizienz in ADAMTS13 (ADAMTS13-/- Mäuse) eine verminderte Rekrutierung von PMN, einhergehend mit erhöhter Mortalität, vermindertem Abtöten von A. fumigatus-Konidien und erhöhter Schädigung der Lunge bei IA. Da in vitro keine generellen oder pilzspezifischen Defekte der PMN quantifiziert wurden, muss ADAMTS13 die Einwanderung der PMN beeinflussen. Normalerweise spaltet die Protease ADAMTS13 den von-Willebrand-Faktor (vWF), der die Quervernetzung und das Anhaften von Blutplättchen an beschädigte Gefäßwände steuert. Ob und wie ADAMTS13 oder der vWF die verminderte PMN-Einwanderung bei Pilzinfektionen verursacht, muss weiter untersucht werden.rnrnZusammenfassend verbessern die erhaltenen Daten für eine zellspezifische TREM-1-Signaltransduktion, ein von oxidativen und nicht-oxidativen PMN-Effektorfunktionen abhängiges sowie Arginin-unabhängiges Abtöten vom Pilz A. fumigatus als auch der Einfluss von ADAMTS13 und vWF bei der Rekrutierung von PMN nach A. fumigatus-Infektion unser Verständnis der angeborenen Immunität. Diese Erkenntnisse dienen der zukünftigen Entwicklung von Therapien zur Behandlung von schweren Entzündungsreaktionen wie Aspergillose und Sepsis.

Blood group O and black race are independent risk factors for thrombotic thrombocytopenic purpura associated with severe ADAMTS13 deficiency

It has been postulated that blood group O subjects may be partially protected against thrombotic thrombocytopenic purpura (TTP) because they have lower plasma levels of von Willebrand factor.

Humoral immune response to ADAMTS13 in acquired thrombotic thrombocytopenic purpura

The apparently spontaneous development of autoantibodies to ADAMTS13 in previously healthy individuals is a major cause of thrombotic thrombocytopenic purpura (TTP). Epitope mapping studies have shown that in most patients antibodies directed towards the spacer domain of ADAMTS13 are present. A single antigenic surface comprising Arg(660) , Tyr(661) and Tyr(665) that contributes to the productive binding of ADAMTS13 to unfolded von Willebrand factor is targeted by anti-spacer domain antibodies. Antibodies directed to the carboxyl-terminal CUB1-2 and TSP2-8 domains have also been observed in the plasma of patients with acquired TTP. As yet it has not been established whether this class of antibodies modulates ADAMTS13 activity. Inspection of the primary sequence of human monoclonal anti-ADAMTS13 antibodies suggests that the variable heavy chain germline gene segment VH1-69 is frequently incorporated. We suggest a model in which 'shape complementarity' between the spacer domain and residues encoded by the VH1-69 gene segment explain the preferential use of this variable heavy chain gene segment. Finally, a model is presented for the development of anti-ADAMTS13 antibodies in previously healthy individuals that incorporates the recent identification of HLA DRB1*11 as a risk factor for acquired TTP.

[Proteins influencing the blood coagulation]

This review describes some natural proteins, which can be employed, either as factor concentrates derived from human plasma or as recombinant drug, to modulate the coagulation system. I will address some biochemical characteristics and the physiological role of von Willebrand factor, the coagulation factors of the extrinsic and intrinsic pathways, and the physiological anticoagulant protein C. In addition, I will detail the pharmacological compounds, which are available for influencing or substituting the coagulation proteins: desmopressin (DDAVP), single coagulation factor concentrates, prothrombin complex concentrates, and protein C concentrate. In particular, I will address some treatment topics of general medical interest, such as the treatment of massive bleeding, the correction of the coagulopathy induced by vitamin K-antagonists in patients with cerebral haemorrhage, and of the coagulopathy of meningococcemia. Finally, I will describe some properties and practical clinical applications of the recombinant anticoagulans lepirudin and bivalirudin, which are derived from hirudin, the natural anticoagulant of the medical leech.