Conservação in vitro de germoplasma de Petiveria alliacea L. utilizando cultura de tecidos e criopreservação

A implementação de estratégias visando à conservação de espécies medicinais apresenta grande importância, tanto do ponto de vista ecológico quanto econômico. Petiveria alliacea L., espécie da família Phytolacaceae, conhecida como guiné, erva-de alho, erva-tipi ou amansa-senhor, pode ser encontrada desde a América Central até a América do Sul. Esta espécie possui ampla utilização medicinal, devido à presença, em sua composição, de vários polissulfetos, como o DTS (dibenziltrissulfeto), com propriedades antifúngica, antineoplásica e imunomodulatória, entre outras. O objetivo deste trabalho foi a conservação in vitro de germoplasma de Petiveria alliacea obtido de diferentes populações ocorrentes no Rio de Janeiro, através de métodos baseados em cultura de tecidos e criopreservação. Plantas obtidas através da germinação in vitro foram utilizadas como matrizes para a micropropagação através da multiplicação de meristemas pré-existentes em meio MS sem reguladores de crescimento, e embriões somáticos foram obtidos de forma direta a partir da cultura de explantes foliares das linhagens estudadas (Magé MG; Marechal Hermes MH; Niterói NT; Vila Isabel VI e Planta envasada AL), em presença de PIC (20μM) e 2,4D (22,6 μM), após 60 dias de cultivo. Os ápices caulinares das plantas micropropagadas e os embriões somáticos obtidos foram submetidos à criopreservação através de técnicas de vitrificação, encapsulamento-vitrificação e encapsulamento-desidratação, com a avaliação da pré-cultura e de soluções crioprotetoras (PVS2 e PVS3), em diferentes concentrações e tempos de exposição. Os resultados mostraram uma taxa de 100% de germinação in vitro. As condições para a pré-cultura de ápices foram padronizadas, entretanto não foram obtidos resultados positivos após o descongelamento. Por outro lado, os embriões da linhagem AL (linhagem embriogênica em cultura há 24 meses) mantiveram sua capacidade multiplicativa (100%) (embriogênese secundária) quando submetidos à desidratação em sacarose (0,5M) e expostos às soluções de vitrificação PVS2 e PVS3 pelos menores tempos (15 e 30 minutos). Os diferentes meios de recuperação apresentaram respostas variáveis em relação à capacidade multiplicativa dos embriões. O encapsulamento/vitrificação foi a técnica que promoveu maior tolerância dos embriões ao congelamento. A recuperação dos embriões através de multiplicação após a criopreservação abre uma perspectiva de conservação de genótipos com alta produção de polissulfetos, de interesse para a indústria farmacêutica

A relação família-creche no programa Primeira Infância Completa

O tema central da presente dissertação está focalizado na relação família-creche. Este estudo possui, como objetivo principal, analisar como essa relação foi compreendida em três creches públicas cariocas que desenvolveram as atividades do programa Primeira Infância Completa (PIC). Tal programa fez parte das políticas públicas educacionais do município do Rio de Janeiro de 2009 a 2013. Foi direcionado a crianças de até 3 (três) anos de idade que não obtiveram matrícula regular nas creches. As atividades do PIC aconteciam aos sábados com crianças e, para as famílias, eram desenvolvidos os encontros da Escola de Pais. A pesquisa analisa os documentos oficiais (decretos, portarias, resoluções, relatórios, projetos, outras publicações internas) de criação e ampliação do programa, incluindo aqueles referentes às consultorias da UNESCO realizadas em 2012. Foi desenvolvido um levantamento bibliográfico sobre os temas família e a relação família-creche, nas bibliotecas eletrônicas SciELO e Google Acadêmico, com artigos publicados entre 2005 e 2014. A investigação empírica se deu no diálogo com alguns atores do programa, participantes das três creches municipais, totalizando 122 sujeitos, entre gestoras, professoras, agentes auxiliares de creche e familiares. As estratégias metodológicas utilizadas foram entrevistas, grupos focais e oficinas Os dados da segunda consultoria da UNESCO serviram de base para a construção das questões centrais desta pesquisa. Os resultados nos apontam que, para os sujeitos que participaram do programa, os propósitos do mesmo nem sempre foram claros. Embora tenha acontecido no espaço físico das creches (portanto, da Educação), com uma intenção intersetorial, seus objetivos tinham um forte cunho assistencial, caracterizando-o como uma modalidade alternativa de atividades para crianças e familiares. As famílias viam no programa o caminho para a conquista da vaga semanal para as suas crianças e, quando isso não acontecia, ficavam frustrados e deixavam de participar. O esforço das gestoras para a realização do programa foi sua marca de qualidade. A experiência do PIC deixou de legado para as instituições novas formas de pensar a proposta pedagógica e de lidar com as famílias, crianças e funcionários na jornada semanal

Produção de plantas e metabólitos de Cleome dendroides Schult. & Schult. f. (Cleomaceae) utilizando diferentes sistemas de cultivo in vitro

Cleome dendroides é uma espécie endêmica da Mata Atlântica dos estados do Rio de Janeiro e Espírito Santo, bioma alterado por intensa atividade antrópica, o que constitui uma ameaça à preservação de suas populações. Não existem estudos dos pontos de vista fisiológico, biotecnológico, fitoquímico ou farmacológico sobre a espécie. Considerando-se o perfil fitoquímico e o potencial medicinal do gênero, torna-se relevante definirem-se protocolos para a produção de plantas e metabólitos de C. dendroides utilizando diferentes sistemas de cultivo in vitro. No presente trabalho, foram realizados estudos sobre a germinação in vivo da espécie, avaliando-se a influência do substrato, temperatura e luz. Não se observou qualquer tipo de dormência, sendo as temperaturas de 20, 25 e 20-30C, em areia ou vermiculita, apropriadas para a germinação in vivo. Definiu-se também uma metodologia eficiente de germinação sob condições in vitro, e as plântulas obtidas foram utilizadas como fonte de explantes para os estudos de propagação in vitro. A resposta morfogênica foi avaliada considerando-se a origem e tipo do explante, tipos e concentrações de reguladores de crescimento e número de subculturas. A metodologia empregada mostrou-se eficiente para a produção de brotos e manutenção de estoques de plantas in vitro que serviram como fonte de explantes. A melhor condição para a propagação in vitro foi definida em meio solidificado contendo BA, independentemente do tipo de explante e da origem. Os brotos obtidos foram alongados, enraizados e aclimatizados. Também foi estabelecida a cultura de raízes e a regeneração de brotos a partir destas culturas. Avaliou-se o efeito da origem do explante, assim como dos tipos e concentrações de fitorreguladores sobre a proliferação de raízes e a regeneração de brotos. O fitorregulador AIB propiciou maior multiplicação das raízes, enquanto BA mostrou-se eficiente na regeneração de brotos a partir das raízes recém-formadas. Foi estabelecido ainda um protocolo de cultura de calos e de suspensões celulares. Avaliou-se o efeito da origem e do tipo de explante, dos tipos e das concentrações de fitorreguladores sobre a calogênese. A combinação de PIC com KIN foi a mais eficiente para a indução de calos em explantes de plântulas obtidas a partir de germinação in vitro, produzindo calos que foram mantidos por pelo menos dois anos. As suspensões celulares também foram estabelecidas em meio contendo PIC + KIN, mantendo uma produção de biomassa de cerca de cinco vezes o peso fresco inicial por três sucessivas subculturas. Análises histoquímicas e fitoquímicas revelaram a presença de alcaloides nos calos e nas suspensões celulares. Foram realizadas análises fitoquímicas de plantas de campo, plantas aclimatizadas, plantas mantidas em estoque in vitro e culturas de raízes, as quais indicaram a presença de derivados de glicosinolatos. Os resultados demonstraram a viabilidade de produção de material vegetal de C. dendroides por meio de métodos biotecnológicos e a produção in vitro de metabólitos de importância medicinal

Produção in vitro, análise fitoquímica e avaliação da atividade antineoplásica de metabólitos de Hovenia dulcis Thunb. (Rhamnaceae) obtidos por diferentes estratégias biotecnológicas

Hovenia dulcis Thunberg, natural da Ásia Oriental, é cultivada no Brasil onde é conhecida como uva-do-japão. A espécie possui várias indicações na medicina popular e alguns estudos apontam o seu potencial antineoplásico, tripanocida e hepatoprotetor. Metabólitos secundários são substâncias não essenciais para a sobrevivência celular, mas que fornecem vantagens adaptativas aos vegetais, sendo atribuído, para algumas delas, atividades biológicas importantes. Substâncias de interesse medicinal têm sido obtidas por técnicas da cultura de tecidos vegetais, como a calogênese e a cultura de células em suspensão, que permitem a síntese de matéria-prima de forma contínua e homogênea, independentemente de fatores ambientais e sazonais. O presente estudo objetivou o estabelecimento de culturas in vitro de H. dulcis, visando à produção de metabólitos de interesse, com vistas à avaliação do seu potencial antineoplásico sobre células K562. Foram testados protocolos para o estabelecimento de diferentes sistemas, como culturas de calos, de células em suspensão (CCS) e compact callus clusters (CCC) e ainda a avaliação do uso de elicitores na otimização de metabólitos produzidos in vitro. Foi verificado que a adição dos fitorreguladores KIN e TDZ, substituindo o BAP, não foi capaz de induzir a formação de calos friáveis, bem como a manutenção das culturas em ausência de luz. O uso do nitrato de prata promoveu a friabilidade de calos em todas as concentrações testadas, considerando-se 2,0 mg.L-1 a melhor concentração. Foram alcançadas taxas de 100% de formação de CCS tanto na presença, quanto em ausência de AgNO3. O maior acúmulo de biomassa foi verificado na concentração mais baixa de PIC (0,625 mg.L-1). A análise dos espectros de RMN indicou a presença de (+)-dihidromiricetina, (+)-galocatequina, hovenitina II, hovenosideo G, hodulosideo III, hodulosideo IV, hodulosideo I e hovenidulciosideo B1 nas culturas de calos friáveis. No estabelecimento de culturas CCC, observou-se a formação de calos compactos verdes em todas as concentrações de ANA testadas. O aumento da velocidade de rotação para 135 rpm aumentou a dispersão das células com consequente formação dos agregados celulares desejados. A seleção de linhagens celulares demonstrou ser um método eficiente na uniformização do tamanho desses agregados e tal uniformidade se manteve estável por mais de cinco subcultivos em 100% das culturas. Uma fração rica em saponinas foi obtida a partir dos agregados celulares, correspondendo a 1,46% da massa seca. A análise por RMN sugeriu a presença das saponinas Hovenosideo G e dos hovenidulciosideos A2 e B2. O uso de elicitores em cultura de calos mostrou-se adequado à produção de metabólitos secundários, sem alterações morfológicas nos mesmos. A elicitação alterou o perfil cromatográfico analisado por HPLC. Na elicitação com 5,0 mg.L-1 de extrato de levedura foi verificado um aumento de quase três vezes (12,280 3,396 equivalentes de quercetina/mg de extrato) na síntese de flavonoides. Finalmente, os estudos de ação antitumoral in vitro demonstraram citotoxicidade dos extratos de calos não elicitados de H. dulcis sobre linhagem de leucemia mieloide crônica (IC50 de 74,05 μg.mL-1.) e inibição do crescimento de tais células (K562), sugerindo o potencial antineoplásico para um produto biotecnológio (calo) desta espécie.

中国及邻近地区水龙骨科星蕨亚科植物的分类

本文在形态学、解剖学、孢粉学研究的基础上，结合细胞学和植物地理学资料，对中国及邻近地区分布的星蕨亚科植物进行了全面的分类学修订，就水龙骨科分亚科的问题进行了初步讨论，重新确定了星蕨亚科的范围和该亚科一些属的限和系统位置。在星蕨亚科中，孢子囊群的类型，根状茎的横切面的类型，叶背面孢子囊群中鳞片状隔丝的有无以及孢子的微形态特征等，在属和种的的等级上有重要的分类学意义。褐叶线蕨和胄叶线蕨的孢子囊群中的隔丝的发现，为星蕨亚科范围的重新确定提供了依据。通过对线蕨属的复杂的羽裂类型的形态形状的统计分析，将它们处理为1种5变种。综合各方面研究，初步认为星蕨亚科应包括星蕨属Microsorum Link、瘤蕨属Phymatosorus Pic. Serm.、鳞果星蕨属Lepidomicrosorum Ching et Shing、毛鳞蕨属Tricholepidium Ching、盾蕨属Neolepisorus Ching、扇蕨Neocheiropteris Christ、线蕨属Colysis C. Presl和薄唇蕨属Leptochilus Kaulf.,以及只在菲律宾分布的还不甚清楚的单种属Podosorus Holttum等9属。文中详细列举了中国及邻近地区星蕨亚科植物有8属35种，其中1种为新种，1种3变种和1变型为新组合。

猪STCH 基因的Bi2PASA 遗传标记及多态性研究

微粒体应激70 蛋白三磷酸腺苷酶( S TCH) 基因属于应激70 蛋白基因伴侣家族, 在机体免疫反应 和疾病抵抗力等方面起重要作用。根据人和小鼠S TCH 基因的保守序列设计引物, PCR 扩增到猪S TCH 基因第 5 外显子445 bp 片段。序列测定显示, 猪S TCH 基因与人和小鼠S TCH 基因分别具有87113 %和80145 %的同源 性。通过测定和比较中国梅山猪、欧洲约克夏猪及PIC 商品猪的S TCH 基因序列, 发现在猪S TCH 基因编码区 第5 外显子1 050 位点上存在一个单碱基突变位点。利用双向特定等位基因PCR 扩增法(Bi2PASA) 建立了检测 猪S TCH 基因变异的遗传标记, 并用该标记分析了S TCH 基因在中国家猪(梅山猪、荣昌猪和金华猪) 、欧洲家 猪(约克夏猪、大白猪) 、商品猪(PIC 合成系) 以及欧洲野猪的基因频率和多态性。本研究建立的Bi2PASA 遗 传标记和基因变异信息, 将为进一步分析猪S TCH 基因变异与经济性状的相关分析提供基础资料。

长臀遗传多样性的微卫星标记分析

利用55对微卫星引物对珠江和海南长臀基因组DNA进行了扩增,有23对能扩增出清晰条带,其中有11对在珠江长臀中表现多态性,9对在海南长臀中表现多态。这些多态性位点的等位基因数在2~4之间,平均等位基因数2.91个。结果显示:珠江长臀的平均观测杂合度(Ho)是0.45,平均期望杂合度(He)是0.46,平均多态信息含量(PIC)为0.377;海南长臀的平均观测杂合度(Ho)和平均期望杂合度(He)分别是0.58、0.53,平均多态信息含量(PIC)为0.426。两群体间的遗传相似度为0.875、遗

利用17个微卫星标记分析鳙鱼的遗传多样性

选用实验室克隆的17个鳙鱼微卫星分子标记分析四川泸州和江西鄱阳湖的两个种群鳙鱼的遗传多样性及种质特性,计算和统计了杂合度、多态信息含量(PIC)、有效等位基因数、等位基因频率、遗传距离、遗传相似系数、Hardy-Weinberg平衡偏离指数等方面内容。结果表明:选择使用17个微卫星标记,其中有4个为单态标记,13个为多态标记。江西和四川鳙鱼群体每个微卫星位点的平均等位基因数分别为3.325及3.882,平均有效等位基因数分别为3.531及2.676,多态位点百分率分别为82.4及70.5,17个微卫星标记

Isolation and characterization of six microsatellite markers in the large yellow croaker (Pseudosciaena crocea Richardson)

Six polymorphic microsatellite markers were isolated and characterized using an enriched library technique in the large yellow croaker (Pseudosciaena crocea Richardson, 1864), a commercially important marine fish in China. They showed PIC (polymorphism information content) ranging from 0.064 to 0.885 (average of 0.580) and allele numbers ranging from two to 13 (average of 7.5), which were useful for the studies on population genetics and selective breeding of the large yellow croaker.

Genetic differentiation in populations of the cestode Bothriocephalus acheilognathi (Cestoda, Pseudophyllidea) as revealed by eight microsatellite markers

The genetic structure of populations of the fish cestode, Bothriocephalus acheilognathi collected from Bailianhe Reservoir (BLH), Changshou (CSH) and Liangzi (LZH) Lakes was investigated by using 8 microsatellite loci. A total of 108 adult worms were genotyped at each of the 8 loci. For the 3 populations, the mean number of alleles per locus ranged from 2.38 to 5.5, and the mean expected heterozygosity ranged from 0.432 to 0.559. The average polymorphic information content (PIC) was from 0.384 to 0.492. The significant F-is values indicated non-random mating within LZH and BLH populations. On the other hand, when samples were further classified into subpopulations at the level of host fish species, no or little heterozygote deficiency was detected at most loci, showing that cross-fertilization, predominantly, but not exclusively, must have occurred within the subpopulations. Microsatellite markers also revealed an unexpected high level of genetic differentiation, as measured by R-st and N-m values or by deltau(2) genetic distance among subpopulations from different hosts. Factors influencing the population genetic structure and the parasite host specificity are discussed.

Experimental demonstration of distributed feedback semiconductor lasers based on reconstruction-equivalent-chirp technology

In this paper we report, to the best of our knowledge, the first experimental realization of distributed feedback (DFB) semiconductor lasers based on reconstruction-equivalent-chirp (REC) technology. Lasers with different lasing wavelengths are achieved simultaneously on one chip, which shows a potential for the REC technology in combination with the photonic integrated circuits (PIC) technology to be a possible method for monolithic integration, in that its fabrication is as powerful as electron beam technology and the cost and time-consuming are almost the same as standard holographic technology. (C) 2009 Optical Society of America

Superluminescent diode monolithically integrated with novel Y-branch by bundle integrated waveguide for fiber optic gyroscope - art. no. 68380D

We have developed a novel InP-based, ridge-waveguide photonic integrated circuit (PIC), which consists of a 1.1-um wavelength Y-branch optical waveguide with low loss and improved far field pattern and a 1.3-um wavelength strained InGaAsP-InP multiple quantum-well superluminescent diode, with bundle integrated guide (BIG) as the scheme for monolithic integration. The simulations of BIG and Y-branches show low losses and improved far-field patterns, based on the beam propagation method (BPM). The amplified spontaneous emission of the device is up to 10 mW at 120 mA with no threshold and saturation. Spectral characteristics of about 30 nm width and less than I dB modulation are achieved using the built-in anti-lasing ability of Y-branch. The beam divergence angles in horizontal and vertical directions are optimized to as small as 12 degrees x8 degrees, resulting in good fiber coupling. The compactness, simplicity in fabrication, good superluminescent performance, low transmission loss and estimated low coupling loss prove the BIG and Y-branch method to be a feasible way for integration and make the photonic integrated circuit of Y-branch and superluminescent diode an promising candidate for transmitter and transceiver used in fiber optic gyroscope.

Wavelength tunable distributed Bragg reflector laser integrated with electro-absorption modulator by a combined method of selective area growth and quantum well intermixing - art. no. 68240N

Wavelength tunable electro-absorption modulated distributed Bragg reflector lasers (TEMLs) are promising light source in dense wavelength division multiplexing (DWDM) optical fiber communication system due to high modulation speed, small chirp, low drive voltage, compactness and fast wavelength tuning ability. Thus, increased the transmission capacity, the functionality and the flexibility are provided. Materials with bandgap difference as large as 250nm have been integrated on the same wafer by a combined technique of selective area growth (SAG) and quantum well intermixing (QWI), which supplies a flexible and controllable platform for the need of photonic integrated circuits (PIC). A TEML has been fabricated by this technique for the first time. The component has superior characteristics as following: threshold current of 37mA, output power of 3.5mW at 100mA injection and 0V modulator bias voltage, extinction ratio of more than 20 dB with modulator reverse voltage from 0V to 2V when coupled into a single mode fiber, and wavelength tuning range of 4.4nm covering 6 100-GHz WDM channels. A clearly open eye diagram is observed when the integrated EAM is driven with a 10-Gb/s electrical NRZ signal. A good transmission characteristic is exhibited with power penalties less than 2.2 dB at a bit error ratio (BER) of 10(-10) after 44.4 km standard fiber transmission.

恒河猴TRIM5α 的组织分布及TRIMCyp 限制HIV-1 病毒颗粒产生的初步研究

三重基序蛋白TRIM5α(Tripartite motif protein 5 alpha)是哺乳动物细胞中一种重要的限制因子，广泛分布于各种哺乳动物细胞中。人类TRIM5α mRNA 广泛表达于人类各个组织中，并且I 型干扰素IFN-α/β/γ 均能与TRIM5α 基因启动子的ISRE 元件结合，上调TRIM5α mRNA 的表达。恒河猴(Macaca mulatta)TRIM5α 是恒河猴体内重要的限制因子。目前对恒河猴尤其是中国恒河猴TRIM5α 的组织分布以及在受到外界刺激时TRIM5α mRNA 表达量的变化研究还未见报道。本论文通过从中国恒河猴各组织中提取总RNA，以β-actin 基因作为内参照，通过逆转录PCR 检测各组织中TRIM5α mRNA 的表达。我们选择用HIV-GFP-VSVG 感染、用佛波脂(Phorbol myfismte acetate, PMA)+离子霉素(Ionomycin, Ion)，CD28 抗体+CD49d 抗体分别共刺激恒河猴PBMC，研究不同刺激对中国恒河猴TRIM5α mRNA 表达量的影响。研究发现：TRIM5α mRNA 广泛表达于恒河猴各组织中，在免疫系统和泌尿生殖系统各组织，如腹淋巴结、睾丸和附睾中表达量最高，而在神经系统各组织如大脑、脊髓中表达量比较少，在其他各组织中未见明显的表达差异。此外HIV-GFP-VSVG 感染、PMA+ Ion 与CD28 抗体+CD49d 抗体分别共刺激PBMC 均能促进PBMC TRIM5α mRNA 表达量的上调。 TRIM5α 作为恒河猴体内的最主要的限制HIV-1 感染的限制因子，除了可能通过促进HIV-1 的脱壳和阻止整合前复合物PIC(pre-integration complex)入核，恒河猴TRIM5α 还能限制HIV-1 病毒颗粒的产生。在这个过程中B30.2 结构域是非必需的，而B-box2 和Coiled-Coil 结构域起着决定性的作用。因为鹰猴(Aotes trivirgatus)TRIMCyp(omTRIMCyp) 蛋白和北平顶猴(Macaca leouina) TRIMCyp(npmTRIMCyp）蛋白的B-box2 和Coiled-Coil 结构域与恒河猴TRIM5α 的B-box2 和Coiled-Coil 具有很高的同源性，我们希望了解鹰猴TRIMCyp 蛋白和北平顶猴TRIMCyp 蛋白对HIV-1 病毒颗粒的产生是否有限制作用。本论文主要通过将质粒pNL4.3 分别与质粒pLPCX 、pLPCX-npmTRIMCyp-HA 、 pLPCX-omTRIMCyp-HA和pLPCX-rhTRIM5α-HA共转染293T细胞，通过western blot 检测细胞内Gag 蛋白和TRIM5 蛋白的表达情况，研究omTRIMCyp 蛋白和 npmTRIMCyp 蛋白对HIV-1 病毒颗粒产生的限制作用。结果表明：北平顶猴 TRIMCyp 蛋白、鹰猴TRIMCyp 蛋白都能不同程度的促进HIV-1 病毒Gag 蛋白的降解。

珊瑚礁区碳循环研究进展

珊瑚礁是海洋中生产力水平最高的生态系统之一，其碳循环受到有机碳代谢（光合作用／呼吸作用）和无机碳