Expressão de fatores de virulência, mecanismos de resistência aos agentes antimicrobianos e análise molecular da resistência aos beta-lactâmicos de enterobactérias isoladas de bolsas periodontais

Em estudo anterior, as espécies de enterobactérias apresentando perfis variados de resistência aos antimicrobianos foram detectadas em 20% dos sítios com lesões periodontais de pacientes sadios do ponto de vista sistêmico. Tais cepas microbianas foram submetidas a investigações com o intuito de determinar à expressão de enzimas hidrolíticas para substratos diversos, a multirresistência aos agentes antimicrobianos e os mecanismos de resistência aos antimicrobianos da classe dos β lactâmicos. A maioria das amostras expressou atividade de gelatinase (65%), caseinase (30%) e elastase (10%). Lipase, lecitinase e DNase foram observadas apenas para Serratia marcescens. A multirresistência (considerado como a resistência a pelo menos dois agentes antimicrobianos de famílias diferentes) foi observada em 56% das amostras isoladas. A maioria das cepas foi resistentes à ampicilina (93,75%) e amoxicilina/ácido clavulânico (81,25%). Investigações sobre a resistência aos antibióticos β-lactâmicos mostraram que três amostras resistentes à cefalosporinas de 2 geração, apresentaram perfis plasmidiais de diferentes pesos moleculares. A expressão fenotípica de β-lacatamases, foi detectada nas cepas de Enterobacter cloacae (PcOM46 e PcOM5) e S. marcescens (PcOM63). No entanto, na análise molecular, não foi possível confirmar a expressão fenotípica de diferentes β-lactamases, com exceção do E. cloacae PcOM46, que apresentou amplificação para AmpC e blaTEM. Embora sensível à maioria dos antibióticos β-lactâmicos (exceção feita à ampicilina e amoxicilina / ácido clavulânico), amostra de S. marcescens PcOM68 apresentou amplificação para o gene blaSHV. Os experimentos de conjugação não detectaram a transferência de plasmídios para uma cepa de Escherichia coli K12 sensívei aos β-lactâmicos, o mesmo ocorreu nos procedimentos de transformação por eletroporação e por CaCl2, sugerindo uma resistência dependente de genes cromossomiais. A expressão de diferentes atividades enzimáticas, juntamente com a resistência aos antimicrobianos, aponta estes grupos de bactérias como agentes patogênicos potenciais capazes de contribuir para a patogênese e resposta à quimioterapia antimicrobiana nas doenças periodontais, além da disseminação sistêmica para outros locais do corpo, especialmente em indivíduos imunocomprometidos. A colonização prévia de lesões periodontais por espécies resistentes aos β-lactâmicos, pode contribuir para a disseminação destes genes relacionados à resistência aos antimicrobianos em ambientes hospitalares.

Consumo materno de dois compostos bioativos da semente da linhaça sobre parâmetros bioquímicos e hormonais das mães e proles durante a lactação

Avaliamos o efeito do consumo materno de SDG (Diglicosídeo Secoisolariciresinol) e de óleo de Linhaça+SDG sobre parâmetros bioquímicos e hormonais das ratas e das proles machos e fêmeas na lactação. As ratas lactantes foram separadas em: controle (C), ração controle cuja proteína foi caseína; (SDG): ração C com 400mg de SDG/Kg de ração; OLSDG: ração C com 400mg de SDG/Kg de ração e 7% de óleo de linhaça. No 14 e 20 dias de lactação as ratas foram ordenhadas e no 21 dia foram sacrificadas por punção cardíaca. Leite e soro foram coletados para avaliação bioquímica e hormonal. Hormônios foram quantificados por radioimunoensaio. As proles machos e fêmeas foram sacrificadas aos 14 e 21 dias de idade. Os animais foram eviscerados para análise da composição corporal. Monitoramos a ingestão alimentar e a massa corporal (MC) durante o período experimental. As ratas SDG apresentaram maior gordura corporal (GC; +39%), enquanto as OLSDG menor conteúdo mineral (-20%) e trigliceridemia (TG) (-39%). As ratas SDG e OLSDG apresentaram hiperprolactinemia (+389% e 153%, respectivamente) sem alteração na concentração de estradiol. No 14 dia de lactação, o leite das ratas OLSDG apresentou menores teores de lactose(-17%) e de proteínas (-20%) e o das ratas SDG apenas menor teor de proteína (-21%). A partir do 13 dia de lactação tanto os machos quanto as fêmeas OLSDG apresentaram menor MC (-14%, -16%, respectivamente). No 14 dia de lactação os machos SDG e OLSDG apresentaram menor gordura corporal (-24%, -55%, respectivamente ) e a prole SDG maior massa de gordura visceral (+39%). Os machos SDG apresentaram maiores concentrações de TG (+105%) e hipoprolactinemia (-41%). Os machos OLSDG também apresentaram hipoprolactinemia (-41%). As fêmeas SDG e OLSDG apresentaram maior estradiol aos 14 dias (+86% e +176%) que se normalizou aos 21 dias, maior colesterolemia (+16%) e as SDG apresentaram maior trigliceridemia (+74%). Aos 21 dias os machos e as fêmeas SDG e OLSDG apresentaram menor trigliceridemia (-48%, -54%,42% e -59%, respectivamente). Os dois componentes principais da semente de linhaça produzem alterações bioquímicas e hormonais tanto nas mães, quanto nas proles, independente do sexo. Entretanto, as alterações observadas diferem entre mães e prole e de acordo com o gênero. Entre as alterações mais importantes ressaltamos a hiperprolactinemia materna que pode ser um dos motivos para a hipoprolactinemia da prole e a hipertrigliceridemia causada pela ingestão de SDG pelas mães.

Avaliação in vitro do efeito remineralizante de diferentes princípios bioativos no esmalte dental bovino submetido à erosão

O objetivo deste estudo in vitro foi avaliar por meio da fluorescência de Raios X, oefeito remineralizante de dois diferentes princípios bioativos contidos no Desensibilize Nano P (nanopartículas de hidroxiapatita de cálcio) e no GC Tooth Mousse (CPP-ACP,fosfopeptídios de caseína e fosfato de cálcio amorfo) assim como da saliva artificial e do fluoreto de sódio gel neutro no esmalte dental bovino submetido a desafio erosivo. Foram utilizados 20 incisivos bovinos, seccionados na linha amelo-cementária, fixados em resina epóxi e padronizados pela planificação da superfície. Foram obtidos 20 corpos de prova (CP) que foram divididos aleatoriamente em 4 grupos. Todos os dentes foram avaliadosinicialmente para a obtenção da contagem dos elementos fósforo (P), cálcio (Ca) e estrôncio (Sr) interpretados a partir de um espectro de Fluorescência de Raios X obtidos pelo Artax 800. Após uma semana da medição inicial, cada grupo de amostras foi imerso em uma solução de 10 ml de ácido cítrico a 2% (pH 2,6) por 90 minutos. Imediatamente após obtenção dos espectros dos dentes submetidos ao desafio erosivo, cada grupo recebeu seus tratamentos correspondentes. Grupo 1 (Saliva) - saliva; Grupo 2 (Flúor) - Flúor; Grupo 3 (Nano P) - Desensibilize Nano P; Grupo 4 (Recaldent) - GC Tooth Mousse. A leitura e os tratamentos eram realizados a cada sete dias sendo repetidos por de 3 semanas. Foi utilizado inicialmente o teste de Bonferroni para comparação das médias de P, Ca e Sr dentro de cada grupo, com um nível de significância de 0,05 (p=0,05), que demonstrou remineralização efetiva na terceira semana de tratamento no grupo Nano P. Posteriormente foi utilizado o teste T-Student para comparação das médias de P, Ca e Sr entre os diferentes grupos, também com um nível de significância de 0,05 (p=0,05). O grupo Nano P foi mais efetivo do que todos os outros grupos e o grupo Saliva menos efetivo que Fluor e Recaldent após três semanas de tratamento. Nestas condições expirimentais in vitro a pasta Desensibilize Nano P foi eficaz noprocesso de remineralização dental desde a primeira semana de tratamento e estável após 3 semanas de tratamento do que os tratamentos com Saliva, Flúor e GC Tooth Mousse.

Avaliação do potencial remineralizante de pastas e soluções com compostos bioativos no esmalte dental bovino submetido a ciclos de desafio erosivo

O objetivo deste estudo foi avaliar in vitro por meio da Fluorescência de Raios X por Dispersão de Energia (XRF), Microdureza Vickers (MV) e Microscopia Eletrônica de Varredura (MEV) o efeito remineralizante de diferentes princípios bioativos, tais quais, nanopartículas de hidroxiapatita de cálcio (nanoHAp) associadas ou não a fluoreto, fosfopeptídeos de caseína do leite e fosfato de cálcio amorfo (CPP-ACP) associados ou não a fluoreto, fluoreto de sódio e saliva no esmalte dental bovino submetido a ciclagem des-remineralizante simulando lesão erosiva por alto desafio ácido. Foram obtidos 58 corpos de prova (CP) a partir de 58 incisivos bovinos que foram divididos aleatoriamente em 8 grupos, com 7 CP cada um e 2 CP para obtenção de imagem em MEV do esmalte hígido. Cada grupo foi denominado conforme os respectivos tratamentos a serem utilizados. Grupo 1 (G1) Controle; Grupo 2 (G2) Desensibilize Nano P experimental (nanopartículas de hidroxiapatita de cálcio); Grupo 3 (G3) Desensibilize Nano P (nanopartículas de hidroxiapatita de cálcio e flúor); Grupo4 (G4) GC Tooth Mousse (CPP-ACP, fosfopeptídios de caseína e fosfato de cálcio amorfo Recaldent ); Grupo 5 (G5) GC Tooth Mousse Plus (CPP-ACP, fosfopeptídios de caseína e fosfato de cálcio amorfo Recaldent + 900 ppm de flúor); Grupo 6 (G6) solução aquosa de fluoreto de sódio (0,05%); Grupo 7 (G7) solução aquosa de nanopartículas de hidroxiapatita de cálcio (0,375%) e Grupo 8 (G8) solução aquosa de nanopartículas de hidroxiapatita de cálcio (0,375%) + flúor (0,05%). Foram obtidos os valores de XRF e MV antes e depois do tratamento. Durante um período experimental de 10 dias, os CPs foram submetidos a um processo cíclico de des-remineralização incluindo vários ataques diários com ácido cítrico 0,05M (pH 2,3), 6 vezes de 2 minutos ao dia, bem como as aplicações das soluções teste e períodos de remineralização em saliva artificial. O tempo entre os ciclos era de 1,5 h. Foram obtidas imagens em MEV para análise da superfície após o tratamento. Através da análise estatística pelo teste t student (p = 0,05), foram encontrados os seguintes resultados: o grupo controle teve uma desmineralização considerada severa; houve aumento na contagem de P em todos os grupos que receberam tratamento, exceto o G1, igualando ou até mesmo aumentando no caso do G5, em relação a contagem inicial; houve aumento na contagem de Ca em todos os grupos que receberam tratamento, exceto no G1, igualando ou até mesmo aumentando no caso do G4, em relação a contagem inicial; houve perda de microdureza superficial em todos os grupos; o G7 teve comportamento similar ao G1 e o G3 teve comportamento inferior ao G5 em relação ao P. E todos os outros grupos tiveram comportamento superior ao controle; o G4 e o G5 tiveram um comportamento superior ao G2 em relação ao Ca. O G5 teve comportamento superior ao G3 também em relação ao Ca e todos os grupos foram superiores ao controle; o G7 teve comportamento similar ao controle em relação a microdureza superficial e todos os outros grupos foram superiores ao controle.

水稻I型酪蛋白激酶的分离及生理功能研究

（第二部分的摘要） 酪蛋白激酶在许多物种的细胞分裂及分化过程中都有重要作用。在水稻中，以经过油菜素内酯处理的水稻幼苗为材料，通过cDNA微矩阵的方法得到了一个全长1939bp的基因OsCKI1（Accession number AJ487966）。该基因编码的蛋白产物属I型酪蛋白激酶（CKIs），含463个氨基酸。RT-PCR及Northern blot结果显示，基因OsCKI1在水稻各组织中表现为组成型表达，并且其表达受油菜素内酯（BR）及脱落酸（ABA）的诱导。在大肠杆菌中对该基因进行原核表达，并用表达后的蛋白粗提物进行酶活测定，显示该蛋白产物可磷酸化CKIs的特异性底物酪蛋白。通过构建OsCKI1的反义载体并转化水稻，对该基因的生理功能进行了研究。对转基因植株的纯系表型进行了观察，显示其根部发育异常，表现为具有较短的初生根、侧根及不定根数目少于对照。进一步研究显示初生根的变短是由于细胞延伸受抑制引起的。以CKI的特异性抑制剂，CKI-7处理野生型植株，也对OsCKI1缺失引起的表型进行了确认。值得注意的是，以外源生长素（IAA）处理转基因及经CKI-7处理过的野生型植株，都能恢复根部表型，使其生长正常。对反义植株初生根及次生根的游离生长素含量测定结果显示，OsCKI1可能在IAA的代谢途径中发挥作用。转基因植株的种子在萌发时对ABA及BR的处理都表现为不敏感，暗示该基因可能在各种激素信号转导途径中都有作用。OsCKI1-GFP双元表达载体的亚细胞定位的研究显示该基因主要定位于核中，可能参与了基因表达的调节。同时，以该反义转基因植株为材料，通过cDNA芯片的技术研究了受OsCKI1调节的基因的表达谱，结果显示该基因的缺失的确影响了参与信号转导及激素代谢途径的许多基因的表达。 （第四部分的摘要） 以OsCKI1反义转基因植株对照植株为材料，研究它们处于4℃低温胁迫下的反应情况。植株种子在室温下萌发并生长一段时间后，移入4℃低温下进一步生长。取对照及低温处理后的材料，对其表型进行观察，显示低温下转基因植株初生根生长受抑制程度小于对照，其生长的延缓程度低;相对电导率测定结果显示，经低温处理后，转基因植株相对电导率变化较小，质膜受害程度小;微管观察结果也显示在短期低温处理下对照根部延伸区细胞的皮层微管解聚，而转基因植株其根部延伸区细胞的皮层微管仍能保持正常状态。基因OsCKI1在低温下的表达模式表现为先升高之后又降低，推测其在低温信号的转导途径中发挥作用。通过总结以上结果，我们认为基因OsCKI1的反义转基因植株虽然在短期冷害下具有一定的抗冷能力，但其不具备形成长期稳定的冷适应的能力。

Nutrient digestibility coefficients of diets with varying energy to protein ratio for Japanese flounder, Paralichthys olivaceus

A laboratory trial was conducted in a sea water recirculatory system to study the nutrient digestibility coefficients of diets with varying energy to protein ratios in Japanese flounder Paralicthys olivaceus. Six different experimental diets with two protein levels (45 and 55%) having six different energy to protein ratio of 87, 90, 94, 107, 110 and 114 were formulated using white fish meal and casein as protein sources. The results of the study showed that the apparent protein digestibility (APD) value ranged between 90.59 to 91.61% and there were no significant differences (P>0.05) between the APD values of diets 1, 2, 3, 4 and 6. The apparent lipid digestibility (ALD) values of diets ranged between 88.24 to 90.18%. The apparent energy digestibility (AED) values ranged between 80.55 to 87.52% with diet 3 producing significantly the highest AED value. In general, except in diet 1 the ALD and AED values increased with the increase of dietary lipid at both protein levels. The results of the present investigation indicated that Japanese flounder can efficiently digest the dietary nutrients at varying energy to protein ratios.

Nutritional characteristics of the two fermented fish products: Hentak and Ngari of Manipur

Proximate composition and nutritional characteristics of the two fermented fish products Hentak and Ngari of Manipur (India) were evaluated. Percentage of moisture, protein, lipid and ash contents in Hentak and Ngari were respectively: 36.30 versus 36.03; 33.33 versus 38.38; 13.60 versus 13.34 and 11.43 versus 5.49. Digestibility values in feeding trials in laboratory rats for 28 days were 82.37% for Hentak 89.46% for Ngari and that of Casein was 92.69%. The biological value, food conversion ratio and protein efficiency ratio (PER) of Hentak were 96.94, 4.83 and 1.8 respectively and that of Ngari were 97.83, 3.17 and 1.8 respectively. The α amino nitrogen of Hentak and Ngari in Pepsin + Trypsin phase were 28.40 and 28.92 respectively. The TBA number, peroxide value and TVBN were within the acceptable limits.

Development of partially hydrolysed and deodourised fish flour

A process developed for preparation of partially hydrolysed and deodorised (PHD) fish flour, without solvent extraction is described. The PHD fish flour prepared from four varieties of trash fish had creamy white colour and contained 87-92% protein and 7-8% available lysine. The products had shelf life of more than a year at room temperature, and caused no grittiness when incorporated in snacks and bakery products at 10% and 7.5% level respectively. The flour prepared from Nemipterus spp. had a PER 2.32 compared to 2.68 of raw fish meat and 2.5 of standard casein.

Squilla protein: chemical composition and nutritive value

Protein extract prepared from squilla (Grato squilla nepa), a commercially unexploited crustacean, was analysed for crude protein and essential amino acids. All the essential amino acids except tryptophan and threonine were present in nutritionally adequate amounts. The protein was evaluated for its nutritional quality in respect of growth rate, protein efficiency ratio (PER) and liver nitrogen content by feeding on rats. Growth rates and protein efficiency ratios were similar in rats fed on casein, squilla protein and a combination of squilla protein and casein (1:1) diet. The weight of liver and kidneys were normal.

Studies on lantern fish (Benthosema pterotum) 2. Nutritional evaluation

Various methods for processing and utilization of lantern fish (Benthosema pterotum) are reported. Nutritional evaluation of fish meal and fish hydrolysate from lantern fish has been carried out. Growth rate and PER of lantern fish meal are similar and better than that of the reference protein, casein. Lantern fish meal can therefore be extensively used for the formulation of poultry, fish and other animal feeds as a good protein supplement with beneficial effects.

Nutritional evaluation of fish solubles

This paper reports the results of a preliminary study on the biochemical composition and nutritional charactersitics of fish solubles from oil sardines (Sardinella longiceps) and white tailed pink perch (Nemipterus japonicus). The nutritional quality of sardine solubles has been evaluated by feeding trials using albino rats also. The studies have shown that compared to a control group of rats whose diet had casein as the sole source of protein, a group of rats in whose diet dried sardine solubles replaced half of the casein, had a noticeably higher growth rate. This higher growth rate was not prominent in the early stages of growth (4-7 weeks). But, during later stages (7-10 weeks), solubles incorporated diet supported a distinctly higher growth rate. This effect was more pronounced in female rats (17% over the control group) compared to the male rats (4% over the control group). Fish solubles are found to be poor sources of essential amino acids. Thus, the observed increase in growth rate is higher than the rate expected from the amino acid make up. This probably supports the view expressed by workers elsewhere that fish solubles contain some unidentified growth factors.

Nutritional evaluation of some freshwater fishes

The proximate composition, amino acid composition and the PER values of Rohu (Labeo rohita), Mrigal (Cirrhina mrigala) and Calbasu (Labeo calbasu) are reported. The proximate composition of all the three fishes was similar. However the amino acid composition varied considerably. Protein quality index of the three fish proteins calculated from the amino acid composition are also reported. The nutritional quality of the 3 types of proteins to meet the growth requirements of infants, children and adult human beings is discussed. The possibility of substantial improvement in nutritional quality of the three fish proteins to suit the requirements of infants and children by marginal supplementation with valine/valine-rich food for rohu and valine and isoleucine/food rich in valine and isoleucine for mrigal and calbasu is also discussed. The results indicate that of the three fishes rohu is the best in protein quality followed by mrigal and calbasu. All of them have a better amino acid make up than casein to meet the amino acid requirement of adults.

Formulation, processing and water stability of pelleted feeds with varying levels of protein used in carp nutrition studies

Four dry pelleted feeds containing 20%, 30%, 40% and 45% protein were formulated incorporating casein as the main source of protein for use in carp nutrition studies. The caloric content in all the feeds was maintained constant. The method of processing is described. The formulated diets were tested for water stability. This test has revealed that the diet containing 20%, 30% and 40% protein had better stability than that containing 45% protein. This was due to the relatively higher fat content in the former three diets. However, all the feeds were sufficiently stable at the end of one hour in which time carps are known to utilise supplementary diets.

Effect of chitin and prawn shell on the growth of albino rat

The effect of addition of pure chitin from prawn shell, deproteinised prawn shell, demineralized prawn shell and dry prawn shell in casein based control diet on albino rats was studied. The diets contained 0.5% chitin and 10% protein. The results obtained in the studies show that the weight gain and feed conversion were maximum in the control diet. While addition of pure chitin slightly brought down the weight gain, addition of deproteinsed prawn shell have the minimum weight gain showing that presence of minerals adversely affects both feed consumption and weight gain in the case of albino rats. Although it was reported that addition of pure chitin at 0.5% in the commercial feed of broiler chicken gave increased weight, in the case of albino rats the weight gain was slightly reduced compared to control diet.

Studies on two unexploited fish species: Peristedion adeni and Peristedion weberi

The chemical composition and nutritional quality of Peristedion adeni and Peristedion weberi, two unexploited fish species available in abundance in the Exclusive Economic Zone of India are reported. Size of the fish is small and separation of edible meat is difficult. Best method of utilization of the fish is conversion into meal. Meals having crude protein content varying from 55.0 to 57.0%, ash content from 17.0 to 19.6% and fat content from 17.7 to 18.1% can be prepared from the two species of fish. PER values of the meals are lower than that of casein. Amino acid analysis showed that isoleucine, leucine and valine are not present in the meals in adequate quantities compared to the FAO/WHO (1973) prescribed pattern.