刺参遗传连锁图谱构建及卵母细胞成熟过程研究

第一部分 刺参遗传连锁图谱的构建 利用AFLP和微卫星标记以一个远缘地理杂交家系为作图群体，以拟测交理论为作图策略，构建了刺参Apostichopus japonicus的雌性和雄性遗传连锁图谱。利用62对AFLP引物组合，对亲本和93个个体进行了分离分析，共得到3572个标记，其中具有多态性的标记为点数为1133个，多态性比例为31.5%。平均每个引物对产生18.3个多态片段。1133个多态性位点中，294个标记在父母本中都出现并在后代中分离，839个标记在父本或母本中出现并在子代分离，其中母本443(52.8%)个分离标记，父本396(47.2%)个分离标记。卡方检验显示，556个标记符合孟德尔1:1分离。筛选微卫星标记中30个在家系中具有作图信息，其中19个可用于母本作图，19个可用于父本作图。 利用Mapmaker 3.0/EXP软件对分离标记进行连锁分析。358个分子标记用于雌性遗传连锁分析，其中包括19个微卫星标记，199个AFLP标记和11个微卫星标记定位在雌性框架图谱中。雌性框架图谱共有25个连锁群，总长度为3148.3 cM。标记之间最大间隔为37.5 cM，平均间隔为17.0 cM，连锁群的分子标记数最大为21个最小为4个。用于雄性连锁分析的分子标记共有332个，其中包含19个微卫星标记。207个标记定位于23个连锁群上，其中AFLP标记数为196个，微卫星标记数为11个。23个连锁群总长度为3059.8 cM，标记间最大间隔38.6 cM，平均间隔16.6 cM。每个连锁群的长度范围在40 cM到271.4 cM之间，标记数在18到4个之间，包括二、三连体在内的雄性连锁图谱共覆盖3227 cM。雌雄基因组的预测长度分别为4053.7 cM和3816.3 cM，因此，所构建的雌雄连锁图谱覆盖率分别为84.0%和84.5%。通过共有微卫星标记，有3个连锁群在两个图谱中对应。分子标记在两个图谱中呈均匀分布，没有成簇现象。 分子标记筛选、遗传图谱的构建为刺参分子标记辅助选择育种，经济性状QTL定位和比较基因作图打下基础，并且最终将促进中国刺参遗传改良和新品种的培育工作。 第二部分 卵母细胞成熟过程研究 对刺参卵母细胞的体外诱导成熟方法进行探索，并且通过透射电子显微镜、扫描电子显微镜和激光共聚焦显微镜结合超薄切片技术及间接免疫荧光染色技术研究卵母细胞成熟的生物学过程。 分别利用在海参中有诱导作用的海星神经提取液和二硫苏糖醇(DTT)对从成熟卵巢解剖出的刺参卵母细胞进行诱导成熟试验，结果显示，刺参的卵母细胞在海水中不会发生自发成熟，海星神经提取液以及神经提取液加滤泡悬浮液对卵母细胞没有诱导成熟的作用，而二硫苏糖醇处理可以诱导卵母细胞生发泡破裂，当DTT溶液的浓度处于10-1 mol/L到10-3 mol/L之间时，对刺参卵母细胞的促熟作用较为明显，在10-2 mol/L左右时，卵母细胞的诱导成熟率可以达到90%以上。未成熟的卵母细胞处于第一次减数分裂前期，不具备受精能力。经DTT诱导后，生发泡发生移动并破裂，染色体排列到赤道板上，然后第一、二极体先后排出，诱导成熟的卵母细胞排出极体的时间与自然受精的卵子一致。在卵母细胞成熟过程中有受精膜举起的现象，说明精子入卵不是受精膜举起的必要条件。卵母细胞只有在生发泡破裂之后才具有受精能力，从生发泡破裂到第二极体排出前的整个减数分裂过程中，卵母细胞都可以受精，但是只有在第一极体排出前受精的卵母细胞才能发生卵裂。人工促熟的卵母细胞受精后，形成的胚胎似乎并不能正常发育，试验过程中最多只得到了8细胞期的胚胎，之后细胞便产生畸形并停止分裂，最终裂解消失。 利用DTT诱导刺参卵母细胞成熟，综合运用光镜、电子显微镜及激光共聚焦技术观察卵母细胞成熟过程，分析了卵母细胞表面动物极突起在卵母细胞脱滤泡中的作用，以及卵母细胞动物极突起和微管组织在生发泡移动过程中所起的作用。卵母细胞通过动物极突起连接到滤泡上，在脱滤泡作用开始时，卵母细胞动物极突起刺入并穿过滤泡膜，使得滤泡膜表面形成一个缺口，然后整个卵母细胞开始从缺口处挤出。脱滤泡的作用力来源有两种：胶膜层的水合作用以及滤泡的收缩。通过激光共聚焦显微镜观察，未成熟的卵母细胞中存在5种类型的微管，并且有两个微管组织中心锚定在卵母细胞突起下方。减数分裂重新启动时，生发泡沿微管向动物极移动，至细胞膜下时破裂。微管解聚对照实验证明驱动生发泡移动的细胞结构为微管束。生发泡破裂后，两个微管组织中心组织形成减数分裂纺锤体，然后第一极体以“收缩-排出”的独特方式排出。 本研究填补了刺参繁殖生物学研究中的缺失环节，为刺参人工繁育技术提供理论基础和指导。

塞隆骨提取物对CFA诱导活化的小鼠腹腔巨噬细胞功能的影响

目的：研究塞隆骨提取物对弗氏完全佐剂诱导活化的腹腔巨噬细胞的免疫抑制作用。方法：小鼠腹腔注射弗氏完全佐剂诱导腹腔巨噬细胞活化并回收，体外加入LPS及IFN-γ刺激培养巨噬细胞，利用酶联免疫法测定培养上清中细胞因子（IL-1β、IL-6、IL-12p40、TNF-α水平。结果：塞隆骨水提物及90％醇沉部分体内给药均能够能显著抑制弗氏完全佐剂诱导的巨噬细胞向腹腔的浸润，能抑制巨噬细胞在LPS及IFN-γ刺激下生成细胞因子（IL-12p40、IL-1β、IL-6、TNF-α。结论：塞隆骨提取物对巨噬细胞功能有一定程度的影响，能够抑制其产生炎症因子，可能是其治疗类风湿性关节炎的作用机理之一。

两种新型方法防治高原鼢鼠的比较研究

利用窒息灭鼠弹和灭鼠雷两种新型地下鼠防治方法对高原鼢鼠（Myospalax baileyi）进行防治。结果表明：灭鼠雷的灭鼠率（86．65％）高于窒息灭鼠弹灭鼠率（59．64％）。两种方法灭鼠效果差异显著（F=96．47，P〈0．01）；两种方法的春季灭鼠率（87．84％和60．39％）均高于秋季灭鼠率（85．45％和58．89％）；两种方法在退耕地、幼林地和撂荒地的平均灭鼠率（66．30％）高于灌丛和次生林中的平均灭鼠率（49．65％）。结论是灭鼠雷比窒息灭鼠弹更适于防治高原鼢鼠。两种方法春季防治优于秋季，在造林时间较短的幼林地效果更好。

青海地区唐古特大黄药材HPLC指纹图谱研究

目的建立了青海地区唐古特大黄药材的HPLC指纹图谱.方法采用反相高效液相色谱法,乙腈-水（0.04%的磷酸）为流动相,梯度洗脱,体积流量1.0 mL/min,检测波长为280 nm,柱温为40 C.结果精密度、重现性、稳定性试验中共有峰面积和保留时间的RSD均小于5%.青海不同采集地唐古特大黄的平均相似度为0.925.结论该方法简便、实用、可靠,可用于以青海果洛地区为主产地不同海拔唐古特大黄药材质量标准的分析检测,也为栽培大黄代替野生大黄提供理论基础.

艾虎对猎物和捕食者气味的反应

在室内条件下通过双通道选择实验确定艾虎（Mustela eversmanni）在通过不同气味源的场所中的取食量以及利用时间和利用频次，由此分析捕食者气味和猎物气味对艾虎取食行为的影响。研究结果表明，在无任何气味源存在时，艾虎在对照气味和对照气味组这两个场所中的取食量、活动时间和活动频次基本一致。在猎物高原鼠兔（Ochotona curzoniae）气味和对照气味组及高原鼢鼠（Myospalax baileyi）气味和对照气味组的两组实验中，艾虎在通过猎物气味的场所中的取食量、活动时间和活动频次与对照气味场所中比较也无明显的差异，但是在天敌动物赤狐（Vulpes vulpes）气味存在的条件下，艾虎明显减少在通过赤狐气味的场所中的取食量、活动时间和活动频次。同时，当间接捕食风险天敌动物赤狐气味存在时，艾虎明显增加了总的取食量，减少了在巢箱中居住的时间，而将更多的时间停留在无风险的场所中，这说明艾虎能够利用天敌动物赤狐的气味，采用增加取食量和减少高风险区域活动时间的策略来降低被捕食风险。

高寒草甸藏嵩草种群繁殖对策的研究

对高寒草甸藏嵩草 (Kobresiatibetica)种群的繁殖对策进行了初步研究 .结果表明 :藏嵩草属寒冷中生密丛短根茎地下芽植物 ,在高寒生境中采用了以营养繁殖为主、有性繁殖为辅的繁殖策略 ,具体体现在以下几个方面 :藏嵩草种子产量nA=2 0 0 .1m-2 ,但种子萌发率较低 ,室内和野外萌发率分别仅有 4%和 2 % ,经氢氧化钠溶液和赤霉素溶液处理后的种子萌发率分别为 1%和 6 .7% ,而剥去种皮后种子萌发率达 47.3% ,所以种皮坚硬是造成种子萌发率低的主要原因 ;进入种子库、保留至返青期且具有活性的种子仅占种子总数的 31.49% ;单位面积上理论实生苗数仅为1.2 6m-2 ,与此相反 ,藏嵩草营养繁殖所形成的新个体数为 10 1.32m2 ,远远多于种子萌发所形成的实生苗数 .此外 ,藏嵩草营养繁殖效力也远高于有性繁殖效力，营养繁殖效力占总繁殖效力的83.46%（167）。

祁连山海北高寒草甸地区微气候特征的观测研究

对祁连山海北高寒草甸地区近夏至日微气象观测分析表明: (1) 14:00 (北京时,下同) 太阳总辐射瞬时值最高可达1061 W·m-2 , 净辐射、反射辐射、光合有效辐射和紫外辐射分别为670、218、380 和168 W·m-2 , 分别约为太阳总辐射的58 %、20 %、36 %和14 % , 6 月下旬日平均反射率约为0. 22 ; (2) 土壤热通量、感热通量和潜热通量瞬时值最大分别为91、274 和362 W·m-2 , 相应占净辐射的比例为20 %、38 %和42 %; (3) 地—气温度在一定范围的水平和垂直方向变化较为剧烈, 大气逆温约出现于20 :00 至次日11 :00 , 午夜01 :00 最强; (4)风速阵性强, 有显著日变化的时间性分布。

基于智能发育方法的操作臂实时轨迹规划

本文提出一种基于遗传算法的轨迹规划方法，以解决操作臂的动态轨迹优化问题，并且结合智能发育的方法进行学习和训练，以保证算法的实时性，较好的解决了操作臂的实时轨迹规划问题。

新疆萨吾尔金矿带构造-流体地球化学及成矿作用

The Sawuer gold belt is located in the transition belt between Siberian plate and Kazakhstan-Junggar plate. Based on the geological and geochemical studies on the Kuoerzhenkuola and Buerkesidai gold deposits, in Sawuer gold mineralization belt, the time-space structure of mineralization and mineralizing factor are studied, the metallogenic regularity is concluded in thistheses. The ore bodies have the regularity that orebody are of the extensive and compressive in the sallow and depth of volcanic apparatue, respectively, and the vertical extension of orebody is more intensive than the horizontal extension. The gold deposits were controlled by the fractures of volcanic apparatus and regional faults, and featured by the hydrothermal alteration and metasomatism type disseminated mineralization and filling type vein mineralization. By virtue of the geological and geochemical studies on the two deposits that the formation of the two deposits are significantly related to the volcanic activity, we propose new ideas about their origin: (1) the two deposits are located in the same strata, and share the same genesis. (2) both of two deposits are volcanogenic late-stage hydrothermal gold deposits. Based on mapping of volcanic lithofacies and structure for the first time, it is discovered that a volcanic apparatus existed in the study area. Volcanic-intrusive activity can be divided into three cycles and nine lithofacies. where the two deposits are hosted in the same volcanic cycle, in this case, the wall-rock should belong to the same strata. The 40Ar-39Ar age method is employed in this work to analyze the fluid inclusions of quartz in the ore bodies from Kuoerzhenkuola and Buerkesidai gold deposits. The results show that the main mineralization occurred in 332.05 + 2.02-332.59 + 0.5IMa and 335.53 + 0.32Ma~336.78 + 0.50Ma for Kuoerzhenkuola and Buerkesidai gold deposits respectively, indicating that the two deposits are formed almost at the same time, and the metallogenic epoch of the tow deposits are close to those of the hosting rocks formed by volcanic activity of Sawuer gold belt. This geochronological study supplies new evidence for determining the timing of gold mineralization, the geneses of gold deposits? and identifies that in Hercynian period, the Altai developed tectonic-magmatic-hydrothermal mineralization of Early Carboniferous period, except known two metallogenic mineralization periods including tectonic-magmatic-hydrothermal mineralization of Devonian period and Late Carboniferous-Permian period respectively. The study of fluid inclusions indicates that the ore-forming fluid is a type of NaCl-HbO fluid with medium-low temperature and low salinity, Au is transported by the type of auric-sulfur complex (Au (HS)2-), the ore is formed in reduction condition. Hydrogen and oxygen isotopes of fluid inclusions in the major mineralizating stage show that the solutions mainly originated from magmatic water and meteoric water. The fluid mixing and water-rock reaction cause the deposition of Au. The helium and argon isotope compositions of fluid inclusions hosted in pyrite have been measured from Kuoerzhenkuola and Buerkesidai gold deposits in Sawuer gold belt. The results show that the ore-forming fluids of two deposits possessed the same source and is a mixture of mantle- and partial meteoric water-derived fluid, and the reliability of He and Ar isotopic compositions in Hercynian period is discussed. Isotopic studies including H, O, He, C, S, Pb and Sr reveal the same result that the ore-forming fluids of two deposits possessed the same source: the water derived mainly from magmatic water, partially from meteoric water; the mineralizers and ore materials derived mainly from mantle beneath the island arc, and partially from crust. The ore-forming fluids of two deposits are a mixture of mantle-derived fluids being incorporated by crust-derived fluid, and shallow partial meteoric water. Based on these results, it is proposed that the geneses of the two gold deposits are the same, being volcanogenic late-stage hydrothermal gold deposits that the ore-forming fluids filled in fractures of volcanic apparatus and metasomatized the host rocks in the volcanic apparatus. It is the first time we carried out the geophysical exploration, that is, the EH-4 continuous electrical conductivity image system measurement, the results show that relative large-size mineralizing anomalies in underground have been discovered.lt can confirm the law and genesis of the deposits mentioned above, and change the two abandoned mines to current large-size potenial exploration target.

2.0 GPa 块状斜长角闪岩部分熔融——时间和温度的影响

利用多顶砧压机,以青藏高原北喜马拉雅构造带的天然斜长角闪岩为样品,在2.0GPa,800~1000℃条件下进行了两个系列的块状样品脱水部分熔融实验:(1)保持压力p=2.0GPa,加热时间t=12h不变,改变温度(800℃~1000℃)的实验;(2)保持压力p=2.0GPa,温度T=850℃不变,改变加热时间(12~200h)的实验.结果表明,2.0GPa,加热12h的条件下,随温度升高,斜长角闪岩中依次生成了石榴石、熔体和单斜辉石,熔体的成分呈英云闪长质-花岗闪长质-英云闪长质的演化趋势.2.0GPa,850℃条件下,随加热时间增加,斜长角闪岩中依次生成了石榴石、熔体和单斜辉石,熔体的成分由英云闪长质向花岗闪长质演化.当块状岩石样品中熔体体积百分比的含量达到5%时,熔体已经相互连通.温度大于850℃的条件下生成的熔体其粘度在104Pas量级,已经满足了在地质时间尺度上熔体分凝形成岩浆的粘度要求.因此,可以认为在增厚地壳的下部,斜长角闪岩的脱水部分熔融可以形成英云闪长质-花岗质岩浆.

贵阳市表层土壤中镍的基线及污染研究

以贵州省贵阳市8 046 km2 为研究区域, 将土壤中镍的空间分布规律与环境地球化学机理研究相结合, 建立镍的区域土壤环境地球化学基线, 并进行污染分析. 通过对332 个样品的分析, 得到以下结论: 贵阳市表层土壤中镍的基线值为1710 mg/ kg , 大于5710 mg/ kg 的样品可能遭受人为污染. 地质累积指数分析结果显示贵阳市1912 %的表层土壤未受镍的污染, 6317 %的表层土壤在无污染到中度污染之间, 1618 % 的中度污染, 只有013 %的表层土壤介于中度污染到强污染之间. 污染程度指数分析则显示贵阳市64 %的表层土壤未受到镍的污染, 镍的污染程度最大为1156 , 总污染程度小于0 , 即总体未受到污染.

贵州省燃煤型氟中毒地区的氟源新认

目的：调查贵州省燃煤型氟中毒地区的氟源。方法：测定3个典型氟中毒重病村的煤、拌煤粘土、煤饼、煤饼灰的含氟量；调查贵州省煤含氟量。结果：化落、马家庄、偏坡寨3个村子的煤氟分别为107．8、104．1、117．6mg/kg，拌煤粘土氟分别为6103．7、1900．5、2619．7mg/kg，煤饼氟分别为805．3、480．7、1713．6mg/kg，煤饼灰氟分别为639．6、332．5、841．7mg/kg；贵州省煤氟均值为115．5mg/kg.结论:氟源主要是拌煤粘土，其含氟量一般很高。

MINEQL＋软件在地球化学研究中的应用

本文综述了MINEQL + 软件的发展历史、理论基础、功能、计算的典型类型及其在地球化学中的一些应用实例。它的理论基础是化学平稳原理,包括质量平衡、能量守恒和电荷守恒定律,以及热力学上的其它一些考虑。同时介绍了该软件在处理溶液吸附问题中的理论基础,以及所包含的三种常见表面络合模型—恒电容、双层及三层模型的相同点及差异性,并运用该软件模拟了Cu2 + 在水合氧化铁上的吸附行为,模拟结果与实验结果能较好地吻合。

临沧锗矿床的稀土元素地球化学研究

通过对临沧锗矿床中基底花岗岩、矿化煤以及硅质岩的稀土元素地球化学研究认为盆地基底花岗提供了形成锗矿化的锗和形成硅质岩的硅；本区陆相热水成因硅质岩的Ce异常不明显，相对富集LREE；矿化煤相对富集HREE，这可能主要与矿化煤在含锗热液的相互作用过程中，煤对重烯土的优先富集有关。

秦岭造山带大型一超大型矿床密集区构造定位与勘查新思路— — 热水沉积成矿盆地分析与研究方法之三

采用构造－沉积－成矿综合分析方法对秦岭造山带大型矿床的地质背景及构造定位进行了研究，认为秦岭泥盆绿聚矿沉积盆地位于两类大陆构造环境中，即秦岭微板声板内聚矿沉积盆地及秦岭微板块北缘被动陆缘上聚矿沉积盆地，这些聚矿盆地均属伸展盆地，提出秦岭造山带大型－超大型矿床定位模式及新勘查思想。