猴脑线粒体DNA提取及限制性内切酶分析

用冷碱法从2只恒河猴和1只食蟹猴的脑组织中提取mtDNA, 最后的得率大约 为0.7μg mtDNA/g脑组织, 是肝脏组织得率的1/3左右。经16 种限制性内切酶分 析, 并与来自同一个体肝脏组织的mtDNA比较, 结果进一步证实, mtDNA无组织 特异性。对12岁以上老年猴脑mtDNA的分 析表明, 在衰老中, 动物mtDNA的序列 可能没有变化, 甲基化程度也无显著增高。图2参4

黑叶猴和灰叶猴的线粒体DNA限制性片段长度多态研究

以15种限制性内切酶分析黑叶猴和灰叶猴种内及种间m+DNA多态。从各个样品中分别检出了41—50个酶切位点。综合15种限制性内切酶的酶切类型, 在2只黑叶猴和2只灰叶猴中分别检出了两种限制性类型, 并与其4个地理来源相对应。结合恒河猴和红面猴的资料, 构建了4种猴科动物的分子系统树。结果表明, 黑叶猴和灰叶猴种的分歧分别始于30和35万年以前, 两种叶猴的分离始于190万年以前, 猴亚科和疣猴亚科的分离应早于1100万年。叶猴属在中国的 扩散不是很晚才发生的。图2表2参15

从DNA序列到物种树

DNA不仅是主要的遗传物质, 同时也是生物进化史的重要记录者。通过DNA序列分析研究生物的进化历程、确定物种间的进化关系至少有三大优越性。因此, DNA序列分析已成为生物系统与演化研究中最重要与最热门的工具之一, 并取得令人瞩目的结果。

马来熊的 DNA 序列分析与遗传多样性研究

马来熊在 IUCN 红皮书中被列为受胁动物, 其保护受到广泛的关注. 该文研究４只马来熊的线粒体 DNA 序列, 其中１只来自云南, 其余３只产地不详, 但来自不同的搜集渠道. 对于每个个体, 作者测定了 397bp 的细胞色素ｂ基因、346bp 的12S rRNA基因、98bp 的 tRNA 基因和333bp 的Ｄ环区序列, 共计1174bp. 经与黑犀牛序列比较, 发现 RNA 基因的空间结构对基因的进化有显著影响, 环区的进化明显快于茎区的. 对于细胞色素ｂ基因、12S rRNA基因和 tRNA 基因, 在马来熊个体间未发现序列变异. 这一结果提示, 马来熊群体的遗传变异程度低. 在D环区, 有13和1个位点分别出现转换和颠换. 根据D环区序列, 作者采用简约法确定了马来熊群体间的进化关系. 作者的结果表明, 线粒体 DNA 的D环区是研究马来熊群体遗传结构十分有效的遗传结构十分有效的遗传标记。

金丝猴属的DNA序列变异及进化与保护遗传学研究

测定了2只川金丝猴、8只滇金丝猴、1只越南金丝猴和1只灰叶猴的253bp的线粒体细胞色素b基因的序列。其中47个位点(19%)检出变异。建立了一系列的分子系统树,得到相同的拓扑结构,从而可能在分子水平澄清了金丝猴属的系统发育。结果表明,云南金丝猴与越南金丝猴间的关系较与川金丝猴的为近。金丝猴的分化大约发生在2-6百万年以前。这3种金丝猴均是独立的种,且都应归入金丝猴属。对8只来自野外的滇金丝猴(其中包括了昆明动物研究所圈养群体的所有6只创立者)的非损性遗传分析提示,编号为YK2的母猴是维持该圈养群体遗传多样性的关键猴。建立的这种非损伤性遗传分析方法广泛适用于珍稀濒危动物的遗传多样性及遗传管理研究。

人胎盘线粒体DNA提取方法的探讨

介绍一种人胎盘DNA的碱变性提取法。并对提取过程中应注意的问题和解决方法进行了分析和讨论。

长臂猿的DNA序列进化及其系统发育研究

测定了来自白眉长臂猿、黑冠长臂猿、白手长臂猿合趾长臂猿352-399bp的线粒体细胞色素b基因的序列。发现自然选择对该基因ＤＮＡ序列水平的进化具有显著的影响。结合前人的序列,构建了系统的长臂猿分子系统树。结果表明,长臂猿属可分为4组:(1)白眉长臂猿组,仅一个种;(2)合趾猿组,仅合趾猿一个种;(3)白手长臂猿组,包括白手长臂猿、敏长臂猿、穆氏长臂猿、黑帽长臂猿和克氏长臂猿;(4)黑冠长臂猿组,包括黑冠长臂猿。对应于形态学上的4个亚属。黑冠长臂猿亚种间的遗传分化程度显著高于白手长臂猿亚属种间的分化程度。结果提示,黑冠长臂猿可能至少应分为4个种,它们在保护上具有同等重要的地位,应分别加以保护。

山羊品种间线粒体DNA限制性片段长度多态性研究

该试验利用 Apal，BamHI，BclI，BglI，BglⅡ，DraI，EcoRI，EcoRV，HaeⅡ，HindⅢ, KpnI，PstI，PvuⅡ，SacI，SalI，SmaI 和 X hoI 计18种限制性内切酶, 研究了来自欧洲、非洲及国内的5个山羊品种共计33只个体的 mtDNA, 共检测出27种限制性态型，可归结为8种单倍型. 结果表明, 国内2个山羊品种的基本单倍型为 BamHl-A, Bcl, I-B, ClaI-A, EcoRI-A, EcoRV- A, HaeIIA, HindIII-C和PvuⅡ-A, 以及为 BamHl-A,BcII-A,ClaI-A, EcoRI-A, EcoRV-A, HaeⅡ-A, HindIII-C和PvuⅡ-A.II一A, 而欧洲及非洲3个山羊品种基本的单倍型为BamHl-B, BcII-A, ClaI-A, EcoRI-A, EcoRV-A, HaeⅡ-A, HindIII-B和PvuⅡ-A，这一结果提示本研究几个受试山羊品种可能有两种不同的母系来源; 同时, 各品种的分子聚类图也表明国内2个山羊品种间具有较近的亲缘关系, 而欧洲品种和非洲3个品种间的亲缘关系较近, 这一结果也支持上述几个受试山羊品种可能有不同野生祖先的结论, 同时也验证了欧洲品种萨能羊曾引入过奴比羊的事实。

大熊猫DNA序列变异及其遗传多样性研究

测定了来自马边、美姑、越西、宝兴、平武、青川、南坪和白水江等地４０只大熊猫３３６－４４４ｂｐ的线粒体ｔＲＮＡ基因和Ｄ环区序列，在２１外创立者中共检出９种线粒体ＤＮＡ单倍型，发现大熊猫的遗传分化程度很低，地理群体间无显著的遗传隔离，大熊猫现生群体可能源于晚更新世，并受瓶颈效应的影响，在此之后，其遗传多样性得到了一定程度的恢复。

藏绵羊线粒体DNA遗传多样性研究

用ApaI、AvaII、BamHI、BclII、ClaI、EcoRV、HindIII、HpaI、KpnI、PstI、PvuII、XbaI、XhoI等14种内切酶,分析了12头藏绵羊mtDNA的限制性片断长度多态性,共检测出35个酶切位点,发现AvaII、ClaI、PvuII三种酶切类型具有多态性。根据不同个体的mtDNA的酶切类型,发现藏绵羊存在三种mtDNA单倍型,计算mtDNA多态度#phi#值为0.0012,表明藏绵羊mtDNA多态性比较贫乏。

大熊猫气味标记DNA的制备和序列分析

大熊猫气味标记在其个体间的通讯中具有重要意义。用不同方法收集了7只大熊猫个体的9个气味标记样品,运用Instagene Kit制备出了DNA。采用PCR扩增线粒体D-环区和细胞色素b基因、Thr-tRNA基因片段并作序列分析。结果提示,不同收集方式所得气味标记样品均有DNA,但用干棉花棒收集样品的方法最佳。为大熊猫的遗传多样性研究提供了新的简捷有效的DNA来源。

云南鹅不同地理群体线粒体DNA多态性研究

用19种限制性内切酶对云南鹅昆明群体和德宏群体的13只个体进行了mtDNA RFLP分析。结果表明:所有受试样品的mtDNA都为一种类型,没有检测到变异。

云南微小按蚊随机扩增多态DNA及遗传分化关系

对来自云南昭通、景洪、元阳、潞西和镇康等5个地区的25只雌按蚊,及4只雄按蚊进行随机扩增多态DNA分析。从使用的20个随机引物中,选择其中扩增谱带清晰的12个引物进行分析。结果发现,只有2个引物获得的RAPD谱带呈单型,其余均表现为不同程度的多态型。UPGMA法构建的分子系统树表明该29只微小按蚊实际上可以归并为显著不同的5个组,分别对应于它们的地理来源,说明云南微小按蚊群体间的基因流程度不高,不同地理群体间存在显著的遗传分化。

浙江地方猪种线粒体DNA多态及遗传多样性研究

用ApaⅠ、AvaⅠ、BamHⅠ、BclⅠ、BglⅠ、BglⅡ、ClaⅠ、DraⅠ、Eco RI、Eco RV、HaeⅡ、HincⅡ、HindⅢ、HpaⅠ、KpnⅠ、PstⅠ、PvuⅠ、PvuⅡ、SacⅠ、SalⅠ、ScaⅠ、SmaⅠ、StuⅠ、XbaⅠ和XhoⅠ等25种识别6个碱基对的限制性内切酶分析了浙江地方品种猪、浙江野猪等30个个体的线粒体DNA,共检出30种限制性态型(morph),可归结成3种单倍型,其中BamHⅠ-B、BclⅠ-B、DraⅠ-B和XbaⅠ-C为首次发现;各单倍型间平均遗传距离(p)为0.005,群体的平均多态度(#pi#)为0.0008,均处于遗传多样性贫乏范围。

中国貉随机扩增多态DNA及其亚种分化关系

不同地理群体间的中国貉存在遗传分化;中国貉可分为4组:(1)广西貉,(2)安徽貉,(3)陕西貉,(4)云南貉和越南貉。其中安徽貉和广西貉间的关系稍近,陕西貉则与云南貉-越南貉稍近。结合中国貉的形态分类、地理分布、mtDNA多态分析以及进化遗传学的观点,认为陕西貉、广西貉和安徽貉可能与云南貉-越南貉具有等同的分类地位。