Estudo do perfil salivar proteico de crianças obesas pré-púberes com foco nas alterações de mediadores da metainflamação

O objetivo deste estudo foi investigar na saliva de crianças pré-púberes obesas, em comparação com crianças eutróficas, a presença de possíveis diferenças na expressão de mediadores proteicos relacionados à metainflamação através de um estudo observacional transversal. Foram selecionadas 105 crianças pré-púberes com idade entre 5 e 9 anos, sem quaisquer outros comprometimentos sistêmicos ou bucais sendo realizada a mensuração do comprimento da circunferência da cintura (CC), além do peso e estatura para cálculo do IMC e seu escore Z (zscore IMC), de forma a compor 3 grupos: EU - eutrofia (-2SD≤ zscore IMC≤1SD), SP - sobrepeso (1SD < zscore IMC < 2SD) e OB obesidade (zscore IMC ≥ 2SD). Após o exame médico e odontológico foi feita a coleta de sangue e de saliva total não estimulada, de forma protocolada. Amostras séricas e salivares foram analisadas, individualmente, para a dosagem de IL1β, IL6, IL8. IL10, IL12p70, TNFα, MCP1, leptina, grelina e insulina, por Multiplex e adiponectina total e de alto peso molecular (adipoHMW), por ELISA. Além disso, as amostras séricas foram utilizadas para o delineamento hemodinâmico dos pacientes. As amostras salivares de EU e OB foram também analisadas em pools por espectrometria de massa (MS) e a presença de algumas proteínas foi validada por imunoblotting, para a comparação do perfil salivar proteico. As concentrações dos analitos foram comparadas tanto entre os grupos (teste de Kruswall-Wallis), como em relação ao zscore IMC e ao CC (Correlação de Spearman ou Pearson). Dos 12 analitos, somente a adipoHMW não foi detectada em nenhuma das amostras salivares. Na comparação OBxEU houve aumento na concentração total de proteínas salivares, da insulina e leptina sérica e salivar e do MCP1, além de diminuição da adiponectina sérica total e de adipoHMW e uma menor relação adiponectina/leptina (A/L) no grupo OB. As principais correlações obtidas com o zscore IMC foram com as concentrações séricas e salivares de insulina e leptina (positivas) e com a relação A/L (negativa), observando-se também a correlação negativa com a adiponectina total e adipoHMW séricas. Na comparação entre as concentrações séricas e salivares, foi possível detectar correlação positiva entre as dosagens de insulina e leptina, assim como com os valores da relação A/L. Na análise proteômica por MS foram identificadas 670 proteínas, sendo 163 delas com expressão diferenciada na saliva de OB em relação a EU. Dentre estas, encontram-se alteradas proteínas relacionadas à resposta inflamatória humoral, em especial com a via alternativa do sistema complemento e do metabolismo redox. Foram selecionadas três destas proteínas para validação por imunoblotting, que confirmou o aumento do Fator H e a diminuição do Fator B e da tioredoxina na saliva de OB em relação a EU. Considerando os resultados, podemos verificar que embora com menores concentrações absolutas dos mediadores, a saliva mostrou praticamente as mesmas associações observadas no sangue, em especial para a insulina, leptina e relação A/L, sendo possível admitir que a análise salivar venha a ser um bom método diagnóstico não invasivo para a obesidade infantil.

Equação de referência do Teste do Degrau medida em distância para indivíduos saudáveis e sedentários

O teste de caminhada em seis minutos (TC6M) avalia a capacidade respiratória durante o exercício. Recentemente, o teste do degrau em seis minutos (TD6M) está sendo estudado como uma proposta para essa mesma avaliação. Diante do exposto, o desenvolvimento de uma equação de referência se torna importante. O objetivo desse estudo foi desenvolver uma equação de referência padrão para o Teste do Degrau em Seis minutos. Esse estudo foi do tipo transversal, em que foram selecionados 452 indivíduos. Após a aplicação dos critérios de inclusão/exclusão, foram selecionados 326 sujeitos saudáveis e sedentários com idade entre 20 e 80 anos. Para serem considerados saudáveis, os participantes não podiam ter história de doenças (exceto hipertensão arterial sistêmica ou diabetes mellitus em tratamento) e foram submetidos à radiografia de tórax, espirometria e eletrocardiograma, que deveriam ser normais. O nível de sedentarismo foi avaliado através do International Physical Activity Questionnaire (IPAQ). Foram coletados os seguintes dados demográficos: idade, peso e altura. Todos os indivíduos realizaram TD6M na sua própria cadência (autocadenciado) em um degrau de 16,5 cm de altura, 65 de largura e 30 cm de comprimento. O número de subidas e descidas foi contado por um pedômetro digital. Foram mensuradas a pressão arterial, a frequência cardíaca e a saturação de oxigênio, antes e depois do TD6M. A análise estatística foi realizada pelo software STATA 12.0, e as equações foram desenvolvidas pelo modelo estatístico de regressão linear múltipla. Como resultado, observou-se que os participantes apresentaram exames normais, sendo 135 homens e 191 mulheres. O IPAQ demonstrou 157 ativos, 114 irregularmente ativos e 40 inativos, sendo que 14 indivíduos não responderam. A análise da distância alcançada em relação à idade e à diferença da frequência cardíaca tanto para homens quanto para mulheres mostrou significância estatística, demonstrando a sua importância para o desenvolvimento das equações para cada gênero. Para mulheres: Distância (m) = 88,83 - [(FC final- FC inicial)* 0,23] (Idade *0,37); para homens: Distância (m)= 110,20 - [(FC final- FC inicial)*0,18] (Idade * 0,59). O estudo concluiu que as equações de referência desenvolvidas nesse estudo foram realizadas em uma população de indivíduos saudáveis e sedentários e pode ser usada como padrão de referência para o TD6M.

检测猴艾滋病D型逆转录病毒抗体的ELISA技术

云南省应用基础研究基盎以及云南夏长娄中心和昆明动物所 长羹生物学旺台实验室基金资助。

Liver cytochrome oxidase P4501A1 purification of Acipenser persicus and designing ELISA for measuring

Moon oxygenases related to cytochrome P450s are the molecular Biomarkers which have important role in Biotransformation of endogenous and exogenous compounds and catalazyin of many biological reactions. One of the important isoenzyme is cytochrome P4501A. This isoenzyme involved in metabolism of environment pollutnts such as PAHs. Because of its inducibility, it has a key tool for impact assesment of contaminants in aquatic environment. In this study, at first, that fractions containing Acipenser persicus and Huso huso isoenzyme were purified, and after that Antibodies against them were prepared. For isolation of isoenzyme fraction, Microsomes were prepared from fish liver using differential centrifugation at high speeds. microsomes were solubiized by cholat sodium and Emulgen. Extraction of this isoenzyme was done with the combinatuion of ionexchange chromatography and gelfiltration or chromatofocusing chromatography. Ion exchange chromatography and gel filtration were applied in DEAE sepharose fast flow and sephacryl S200 respectively and chromatofocusing was done at poly buffer 74 and 94 exchanger. The results of SDS-PAGE Showed that the molecular weight of isoenzyme was about 58±1 KDa. Furthermore the inmunoblotting results confirmed this subject. Isoenzyme activigy based on EROD (Ethoxyresorofin o-deethylase) reaction showed about 20-26 fold increase in enzyme activity of treated fish than control fish. The results of Elisa, Using monoclonal anti cod P4501A demonstrated the inducibility and highly elevated of its activity in treated sample more than the control fish. Mean while, the fish sample were showed the strong reaction to polyclonal antibody against beluga P4501A1 prepared in our Lab compared to monoclonal anti body.

定量ELISA检测小鼠血清中抗LDH-C4IgG2b抗体的水平

用定量EL ISA 的方法检测背部携带分泌抗LDH - C4 IgG2b 抗体杂交瘤小鼠的血清中IgG2b 抗体浓 度, 结果表明: 本法稳定, 批间变异系数为7104 %～13130 % , 批内变异系数为3161 %～10120 %; 标准曲线 相关性良好, 相关系数从01962 884～01996 795 ; 灵敏度较高, 最低检出浓度为0101 mg/ L ; 特异性亦较好.

圆形碘孢虫完整孢子ELISA的建立

探索建立鱼类寄生圆形碘孢虫(MyxobolusrotundusNemezek,1911,Myxosporea,Bivalvulida)完整孢子酶联免疫吸附试验(Enzyme linkedimmunosorbentassay,ELISA)检测的可行性,对丙酮、戊二醛、甲醛、多聚甲醛、乙醇等几种常用固定剂应用于此方法的效果进行评价,初步建立了针对鱼类黏孢子虫的完整孢子ELISA检测模式。结果显示,同比其他几种固定剂,2%的多聚甲醛、0 25%的戊二醛对圆形碘孢虫完整孢子ELISA有较好的效果,经二者固定后,最

An ELISA-like time-resolved fluorescence immunoassay for microcystin detection

Background: A time-resolved fluorescence immunoassay (TRFIA), based on anti-microcystin-LR (MCLR) monoclonal antibodies (MAbs) and europium-labeled antimouse IgG conjugate, was first developed for microcystin detection. Methods: Anti-MCLR MAbs were prepared by a standard method, and the attained MAbs showed a good cross reactivity with MCLR, MCRR and MCYR. The TRFIA was performed in an indirect competitive mode. The detection method of TRFIA was compared with indirect competitive enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) and high-performance liquid chromatography (HPLC). Results: The TRFIA exhibited a typical sigmoidal response for MCLR at concentrations of 0.005-50 ng/ml, with a wide quantitative range between 0.01 and 10 ng/ml, indicating the broadest detective range and the most sensitive of all the methods for microcystins (MCs) detection. Additionally, the TRFIA maintained good reliability through its quantitative range, as evidenced by low coefficients of variation (1.6-12.2%). The toxin data of algal samples assayed from TRFIA were in the same range as those with ELISA and HPLC, implying that the method was reliable and practical for the detection of MCs. Conclusions: The TRFIA may offer a valuable alternative or a substitute for conventional ELISA for microcystin detection. (C) 2004 Elsevier B.V. All rights reserved.

Determinação da umidade limite de sobrevivência de sementes de pupunha: teste preliminar.

2010

Avaliação do delineamento experimental utilizado em teste progênie de erva-mate.

2010

ELISA com MSP5 recombinante truncada para detecção de anticorpos contra Anaplasma marginale em bovinos.

Os objetivos buscados pelos autores neste estudo foram produzir e solubilizar a proteína MSP5 recombinante truncada de Anaplasma marginale e avaliar seu desempenho em um ensaio de imunoadsorção enzimática indireto para detecção de anticorpos contra a riquétsia. O gene msp5, exceto a região N-terminal hidrofóbica, foi amplificado por reação em cadeia da polimerase, clonado em plasmídeo pTrcHis-TOPO e expresso em Escherichia coli. A solubilização da proteína recombinante foi avaliada em diferentes pHs e concentrações de uréia. A sensibilidade e a especificidade do ensaio foram avaliados testando-se 66 soros de animais infectados experimentalmente com A. marginale e 96 soros negativos, com o estado de infecção desses animais confirmado por reação em cadeia da polimerase. Um total de 1.666 amostras de soros bovinos, provenientes do Brasil - Rio Grande do Sul (73), Mato Grosso do Sul (91), Pernambuco (86), Bahia (314) e Minas Gerais (267), assim como do Uruguai (32) e Costa Rica (803) foram testadas nos ELISAs com MSP5 truncada e com MSP1a recombinantes, e a concordância entre os dois testes foi avaliada. O ELISA indireto com MSP5 truncada foi capaz de detectar animais infectados com 96,97% de sensibilidade e 100% de especificidade. Nos animais infectados experimentalmente, o ELISA detectou anticorpos do 12o dia após a inoculação (DPI) até o último dia de observação (37o DPI). Os ELISAs para MSP5 e MSP1a apresentaram concordância de 95,67%, com índice kappa de 0,81. Os resultados discordantes apresentaram uma diferença significativa (P < 0,001). Anticorpos contra A. marginale foram detectados em animais de todas asregiões estudadas. O ELISA com MSP5 recombinante truncada apresentou bom desempenho na detecção de anticorpos contra A. marginale, com alta sensibilidade e especificidade, representando uma importante ferramenta para o diagnóstico da anaplasmose bovina em estudos epidemiológicos.

Programa de melhoramento genético da raça Girolando: teste de progênie: Sumário de Touros 2009.

2009

Otimização do método de Elisa indireto não competitivo para detecção e quantificação de aflatoxina B1 em cereais.

2007

Evolução nas características medidas em teste de desempenho de machos de pedigree no estado de Santa Catarina.

1984

Metodologia do teste de tetrazólio em semente de soja.

Introducao; Historico; Principios; Material necessario; Interpretacao; Identificacao dos niveis de viabilidade; Classe 1; Classe 2; Classe 3; Classe 4; Classe 5; Classe 6; Classe 7; Classe 8; Utilizacao da ficha; Interpretacao dos resultados; Precisao dos resultados; Vantagens e limitacaoes do este de tetrazolio para soja.

Suscetibilidade das principais cultivares de soja utilizadas no Brasil ao dano de embebicao no teste de germinacao.

1998