Análise do processo de reparo ósseo de cavidades cirúrgicas preenchidas com osso autógeno e recobertas por membrana de matriz óssea homógena e de politetrafluoretileno em ratos

Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES)

Avaliação do processo de reparo periimplantar utilizando matriz óssea heterógena desmineralizada ou osso autógeno: análise histológica e histométrica em tíbias de coelhos

Pós-graduação em Odontologia - FOA

Influência da ovariectomia associada à dieta deficiente em cálcio na periodontite experimental

Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES)

Copaiba oil effect on experimental jaw defect in Wistar rats

PURPOSE: To evaluate the effects of copaiba oil on jaw defects repair in Wistar rats treated with bioglass or adipose tissue. METHODS: A jaw defect was randomly created in forty-two rats and filled with bioglass or adipose tissue. The two groups (Gbio and Gcell) were subdivided in three subgroups with seven animals each according to gavage administration: control (distillated water), oil (copaiba oil) and melox (meloxicam). Euthanasia was performed after forty post-operative days. The bone formation was analyzed regarding the histological aspects. RESULTS: The osteoclasts activity was observed only in four subgroups (p=0.78). Regarding the osteoblasts presence, it was very similar between the subgroups, the difference was due to Gcell-melox (p=0.009) that presented less osteoblastic activity. The inflammatory cells were more evident in Gcell-melox subgroup, however, there was no difference in comparison with the other subgroups (p=0.52). Bone formation was observed in all subgroups, just two animals showed no bone formation even after 40 days. More than 50% of bone matrix mineralization was observed in 56% (23 animals) of the analyzed areas. The bone matrix mineralization was not different between subgroups (p=0.60). CONCLUSIONS: The subgroups that received copaiba oil showed bone repair, although not statistically significant in comparison to subgroups treated whit meloxicam or controls. Copaiba oil administered by gavage had no effect on bone repair in this experimental model.

Aspecto radiológico e macroscópico de matriz óssea mineralizada heteróloga fragmentada e polimetilmetacrilato autoclavados em falha óssea de tíbia de coelho

A segmental defect of 6mm diameter was performed in the medial metaphyseal region of the tibia of 12 rabbits. For the bone defect reconstruction there was implanted a combination of micro and macro fragments of heterologous fragmented cortical bone matrix preserved in glycerin (98%) and polymethylmethacrylate, both autoclaved. Radiological and macroscopic evaluation was performed at 30, 60, 90 and 120 days. Adhesion in relation to time of the micro and macro composites to the recipient bed was observed in 100% of the cases. This showed that this implant is biologically biocompatible, since it promoted bone defects repair, with no signs of infection, migration and/or rejection. In this way, this implant can be classified as one more option of substitute to fill large bone defects.

Zoledronic Acid Inhibits Human Osteoblast Activities

Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP)

Osteossarcoma apendicular: revisão de literatura

Osteosarcoma is the most common primary bone cancer in dogs. It affects most commonly dogs of big or giant breeds with 7 to 8 years and the etiology is unknown. Osteosarcoma is defined as a bone matrix-producing malignant mesenchymal tumor and has a predilection for the metaphyseal region of appendicular skeleton, however, it can affect axial skeleton and soft tissues. Distal radius is the most commonly affected site. The definitive diagnosis of osteosarcoma can be obtained with history, physical examination, radiographs and biopsy. Lung is the most common organ for metastatic disease. The mainly treatment for osteosarcoma is limb amputation and systemic chemotherapy for metastatic disease control. Limb-sparing surgery is a viable alternative to amputation for dogs with concomitant conditions that impede limb amputation. Palliative treatments for osteosarcoma have been studied such as local and systemic radiotherapy, immunotherapy and biphosphonates. This study has the objective of presenting the aspects of diagnosis and treatment for appendicular osteosarcoma

Diferenciação osteogênica de células mesenquimais do cordão umbilical canino

Pós-graduação em Ciência Animal - FMVA

Análise histológica e histomorfométrica do processo de reparo de defeitos ósseos em ratos diabéticos preenchidos com osso autógeno e recobertos por membrana de matriz óssea homógena ou por membrana de politetrafluoretileno

Pós-graduação em Odontologia - FOA

Ovariectomy-associated changes in interradicular septum and in tibia metaphysis in different observation periods in rats

In order to standardize an experimental model to study the effects of absence of ovarian hormones in maxillary bones compared with long bones, the aim of this research was to analyze the influence of ovariectomy (OVX) on rat alveolar bone and tibiae, in different observation periods. Thirty-six female rats were ovariectomized or sham operated. After 60, 90 or 120 days, the animals were sacrificed and their hemimandibles, maxillae and tibiae were removed and routinely prepared for hematoxylin and eosin staining. The percentage of bone matrix area in bone septum in the first molar furcation region, and in tibial metaphysis was calculated, and data were submitted to statistical analysis (p < 0.05). As regards the histomorphometrical analysis in jaw bones, there was no statistical difference between groups, while the effects of ovariectomy on tibiae were seen as early as 60 days. According to the methods used, there was no significant influence of absence of ovarian hormones on interradicular septum of mandibular or maxillary first molars in the periods studied, despite the reduction in bone matrix area in tibia metaphysis as early as 60 days. (C) 2014 Elsevier GmbH. All rights reserved.

Regeneração óssea guiada com o uso de matriz óssea bovina desmineralizada em defeitos ósseos experimentais em cães

Background: The principles of tissue regeneration to repair alveolar bone defects are based on the fabrication of a biologic barrier with different biomaterials. Therefore, the present study aimed to investigate the guided bone regeneration (GBR) by using membrane of demineralized bovine bone matrix (DBBM) on experimental defects in tibia of dogs. Methods: Four dogs were used and after anesthesia, shaving and antisepsis, two standardized bone defects were created on the right tibia of each animal with trephine drill. In the Control Group, the defects were filled with blood coagulum, while in the Treated Group, a membrane of DBBM was used to cover the defects. After 90 days, animals were sacrificed. Results: In the Treated Group, 67.4% of new bone formation was observed and, in the Control Group, 32.6% of the bone tissue reabsorbed when compared with initial bone volume. The membrane remained intact and no inflammatory tissue was observed on membrane/ bone interface. Conclusion: It was concluded that the use of DBBM is an osteoconductive material, presents biocompatibility and may be promise option to repair bone defects.

Estudo comparativo do desempenho de diferentes membranas oclusivas de Látex Natural no reparo ósseo

Introduction: In dentistry, alveolar bone resorption is a limiting factor in the well being of individuals directly interfering in the stomatognathic system, causing problems in the context of overall health. Aiming to promote biological methods that can stimulate bone regeneration, several biomimetic strategies have been developed by the use of diverse materials possible to the bone matrix, culminating in the development of techniques that promote such repair. Objective: This work is a comparative study of the performance of films made with latex as occlusive membrane for Guided Bone Regeneration (GBR) procedure in three preparations: Latex preserved in ammonia, produced by Latex rubber clones IAN873 and PR255 polymerized immediately after collection and without use ammonia as a preservative. Methods: Sixty Wistar rats were randomly divided into 4 groups of 15 animals in which bone defects of critical size (8mm diameter) were made surgically in the skull. Group A was treated by GBR through the membrane latex preserved with ammonia, Group B received the membrane made of latex from IAN873, Group C, the membrane clone PR255 and group D was not treated by GBR. After a period of 7, 15 and 50 days, 5 animals from each group were euthanized, and specimens containing bone defect collected for microscopic examination (descriptive histology and histomorphometry). Results: The results showed that after 50 days there was bone formation in higher proportions in group D (p <0.05, ANOVA followed by Tukey), suggesting that further experiments should be conducted to conclude about the presence of ammonia and the influence of kind of rubber. Conclusion: GOR is a procedure proven effective in the treatment of bone defects. Therefore, further experiments should be conducted to reach a conclusion regarding the presence of ammonia in the latex composition for the manufacture of membranes, as well as the difference induced by the species of rubber.

Effect of alendronate on endochondral ossification in mandibular condyles of growing rats

The replacement of the calcified cartilage by bone tissue during the endochondral ossification of the mandibular condyle is dependent of the resorbing activity of osteoclats. After partial resorption, calcified cartilage septa are covered by a primary bone matrix secreted by osteoblasts. Osteoadherin (OSAD) is a small proteoglycan present in bone matrix but absent in cartilage during the endochondral ossification. The aim of this study was to analyze the effect of alendronate, a drug known to inhibit bone resorption by osteoclasts, on the endochondral ossification of the mandibular condyle of young rats, by evaluating the distribution of osteoclasts and the presence of OSAD in the bone matrix deposited. Wistar newborn rats (n = 45) received daily injections of alendronate (n = 27) or sterile saline solution as control (n = 18) from the day of birth until the ages of 4, 14 and 30 days. At the days mentioned, the mandibular condyles were collected and processed for transmission electron microscopy analysis. Specimens were also submitted to tartrate resistant acid phosphatase (TRAP) histochemistry and ultrastructural immunodetection of OSAD. Alendronate treatment did not impede the recruitment and fusion of osteoclasts at the ossification zone during condyle growth, but they presented inactivated phenotype. The trabeculae at the ossification area consisted of cartilage matrix covered by a layer of primary bone matrix that was immunopositive to OSAD at all time points studied. Apparently, alendronate impeded the removal of calcified cartilage and maturation of bone trabeculae in the mandibular ramus, while in controls they occurred normally. These findings highlight for giving attention to the potential side-effects of bisphosphonates administered to young patients once it may represent a risk of disturbing maxillofacial development.

Die Rolle des Fibronektins im Knochen und in der diabetischen Nephropathie

Diese Arbeit befasst sich mit der Rolle des Fibronektins im Knochen sowie in der diabetischen Nephropathie. Fibronektin im Knochen: Es war bekannt, dass Osteoblasten für ihre Differenzierung in vitro Fibronektin benötigen, dass Fibronektin für die Ausbildung einer Kollagenmatrix erforderlich ist und für die Matrixintegrität eine kontinuierliche Fibronektin-Versorgung gewährleistet sein muss. Um die Rolle des Fibronektins im Knochen, dessen Matrix zu 90% aus Kollagen besteht, näher zu untersuchen, wurde das Fibronektin der Osteoblasten spezifisch über das Cre/loxP-System in Mäusen ausgeschaltet. Dies führte zu einer erhöhten Anzahl an Osteoblasten, deren Fähigkeit die Matrix zu mineralisieren jedoch beeinträchtigt war. Dennoch zeigte sich kein Einfluss auf die Eigenschaften der Knochenmatrix. Insbesondere war der Fibronektingehalt nicht vermindert, entgegen der allgemeinen Annahme, dass die Osteoblasten die Produzenten des Fibronektins der Knochenmatrix seien. Im Gegensatz dazu stellte sich durch Untersuchungen an anderen genetisch veränderten Mäusen heraus, dass eine Ausschaltung des Plasmafibronektins im Blut zu einer deutlichen Verringerung des Fibronektingehalts des Knochens sowie zu einer Verminderung des Mineralgehalts bezogen auf die Proteinmenge führte. Auch die Komposition des Minerals war verändert. Da es jedoch keinen nennenswerten Effekt auf die Knochenzellen gab, lässt sich schlussfolgern, dass die Osteoblasten-spezifische Fibronektin-Isoform für eine regelgerechte Funktion der Osteoblasten notwendig ist, während das von der Leber produzierte Plasmafibronektin die Zusammensetzung der Knochenmatrix beeinflusst. Fibronektin in der diabetischen Niere: Mit der diabetischen Nephropathie geht eine Ausdehnung des Mesangiums in den Glomeruli einher, die mit dem Ausmaß des Nierenschadens korreliert ist. Fibronektin ist ein Bestandteil dieses expandierten Mesangiums. Vorarbeiten hatten gezeigt, dass injiziertes Fibronektin durch die Blutzirkulation in die Niere gelangt und in der Mesangialmatrix der Glomeruli eingelagert wird. Daher wurden in konditionellen Knockout-Mäusen das Plasmafibronektin bzw. das Fibronektin der Mesangialzellen und das Plasmafibronektin zugleich ausgeschaltet. In diesen Mäusen wurde ein Diabetes mellitus induziert und die Tiere für 22 Wochen mit Diabetes gehalten. Die Ausschaltung des Fibronektins hatte eine geringere Ausbreitung der Mesangialmatrix sowie eine geringere Mortalität der Tiere zur Folge. Interessanterweise schien das Plasmafibronektin alleine bereits grob ein Drittel der Ausdehnung des Mesangiums zu verursachen. Die kombinierte Ausschaltung von zirkulierendem und lokalem Fibronektin vermochte die Expansion der Mesangialmatrix sogar beinahe zu halbieren. Zusammengefasst zeigten sich neue Rollen eines traditionellen Proteins der Extrazellulärmatrix in physiologischen und pathologischen Zuständen. Einige dieser Aspekte demonstrieren die große Bedeutung der Fibronektin-Produktion durch die Leber.

Molekulare Mechanismen der Knochenmetastasierung des Nierenzellkarzinoms

Die schlechte Prognose des Nierenzellkarzinoms (NZK) kommt nicht durch den Primärtumor an sich zustande, sondern durch das Vorhandensein von Fernmetastasen. Obwohl bereits vieles über die Mechanismen der Metastasierung bekannt ist, sind die Hintergründe der Organspezifität metastasierender Tumorzellen weitgehend ungeklärt. In 30% der Fälle kommt es zur Entstehung von Knochenmetastasen. Diese hohe Frequenz deutet darauf hin, dass NZK-Zellen bevorzugt in dieses Organ metastasieren, da die Knochenmatrix ein günstiges Mikromilieu für ihr Wachstum bietet. Hierbei könnte extrazellulärem Calcium und dem für die Detektion zuständigen Calcium-sensitiven Rezeptor (CaSR) eine entscheidende Rolle zukommen, da sich Knochen durch ihren hohen Gehalt an Calcium auszeichnen und von anderen Organen unterscheiden. Das Ziel der vorliegenden Dissertation lag in der Aufklärung der Mechanismen, die zu einer Knochenmetastasierung des NZK führen.rnrnIn ersten Analysen konnte gezeigt werden, dass sich bereits der Primärtumor durch eine von Calcium unabhängige charakteristische Expression bestimmter Signalmediatoren auszeichnet, die Metastasierungspotenzial und –ort bestimmen. So wurden in Gewebeproben und primären Tumorzellen von NZK-Patienten, die innerhalb von fünf Jahren nach Nephrektomie Knochenmetastasen entwickelten, in Westernblot-Analysen eine sehr hohe Expression der α5-Integrine, eine starke Aktivität von Akt, FAK und eine Reduktion der PTEN-Expression detektiert. Diese Veränderungen begünstigten die chemotaktische Migration in Richtung Fibronektin (bestimmt in einer Boyden-Kammer) und die Adhäsion dieser NZK-Zellen an Komponenten der Extrazellularmatrix (Fibronektin und Kollagen I – beides ist Bestandteil der Knochenmatrix). Migration und Adhäsion sind essentielle Schritte beim Austreten der Tumorzellen aus dem Primärtumor und Infiltration des Knochens. In NZK-Zellen von Patienten, die keine Metastasen oder Lungenmetastasen entwickelten, waren diese Charakteristika nicht oder deutlich schwächer ausgeprägt. Bestimmte Primärtumore sind somit prädestiniert Knochenmetastasen auszubilden.rnrnUm die Bedeutung von extrazellulärem Calcium und dem CaSR darzustellen, wurde die Expression des CaSR mittels Real-Time PCR, Westernblot-Analysen und durchflusszytometrisch in NZK-Gewebeproben und –Zellen von Patienten untersucht, die innerhalb von fünf Jahren nach Nephrektomie keine bzw. Lungen- oder Knochenmetastasen ausbildeten. Proben von Patienten mit Knochenmetastasen zeigten die stärkste Expression von CaSR-mRNA und CaSR-Protein. Durch eine Behandlung der NZK-Zellen mit Calcium in physiologischen Konzentrationen, konnte Calcium als möglicher Regulator der CaSR-Expression ausgeschlossen werden. Der Einfluss von Calcium auf die Metastasierungsfähigkeit der primären NZK-Zellen wurde anhand eines weiteren chemotaktischen Migrationsversuchs mit Calcium als Chemotaxin analysiert. Die Zellproliferationsrate konnte nach Behandlung der Zellen mit Calcium mittels BrdU-Inkorporation gemessen werden. NZK-Zellen, die aus dem Primärtumor von Patienten mit Knochenmetastasen kultiviert wurden, konnten durch eine erhöhte extrazelluläre Calcium-Konzentration verstärkt zu Migration und Proliferation (Konzentrations-abhängige Steigerung) angeregt werden. Diese stellen weitere essentielle Schritte bei der Infiltration und Vermehrung der NZK-Zellen in den Knochen dar. Die Effekte traten bei NZK-Zellen aus Patienten, die keine oder Lungenmetastasen ausbildeten, nicht auf. Die Identifizierung der beteiligten Signalwege erfolgte in Westernblot-Analysen und einem Phospho-Kinase Array. Hierdurch konnten eine verstärkte Aktivierung des Akt-, JNK-, p38α- und PLCγ-1-Signalwegs und eine beinahe vollständige Reduktion der PTEN-Expression nach Calcium-Behandlung in Knochen-metastasierenden NZK-Zellen aufgedeckt werden. Durch Blockierung des CaSR mittels des Inhibitors NPS 2143 konnte bestätigt werden, dass die metastasierungs-fördernde Wirkung von Calcium über den CaSR zustande kommt. rnrnNZK-Zellen zeichnen sich somit bereits im Primärtumor durch eine charakteristische Expression verschiedener Signalmediatoren aus, die ihr Metastasierungspotenzial und die mögliche Lokalisation der Metastase bestimmen. Gelangen metastasierende NZK-Zellen auf ihrem Weg durch den Blutkreislauf in das Knochenmilieu, verhilft ihnen hier eine hohe Expression des CaSR zu einem wichtigen Überlebensvorteil. Extrazelluläres Calcium wirkt über den CaSR, verstärkt ihre metastatischen Eigenschaften und fördert schließlich die Ausbildung einer Knochenmetastase. Aus diesem Grund kommt dem CaSR eine Rolle als möglicher prognostischer Marker hinsichtlich der Knochenmetastasierung beim NZK zu. Die Charakteristika des Primärtumors sollten daher die Auswahl des adjuvanten Therapeutikums und die Nachsorgeuntersuchungen beeinflussen. um die Medizin dem Ziel einer individualisierten Therapie näher zu bringen.rn