Tid1/Rdh54 promotes colocalization of Rad51 and Dmc1 during meiotic recombination

Two RecA homologs, Rad51 and Dmc1, assemble as cytologically visible complexes (foci) at the same sites on meiotic chromosomes. Time course analysis confirms that co-foci appear and disappear as the single predominant form. A large fraction of co-foci are eliminated in a red1 mutant, which is expected as a characteristic of the interhomolog-specific recombination pathway. Previous studies suggested that normal Dmc1 loading depends on Rad51. We show here that a mutation in TID1/RDH54, encoding a RAD54 homolog, reduces Rad51-Dmc1 colocalization relative to WT. A rad54 mutation, in contrast, has relatively little effect on RecA homolog foci except when strains also contain a tid1/rdh54 mutation. The role of Tid1/Rdh54 in coordinating RecA homolog assembly may be very direct, because Tid1/Rdh54 is known to physically bind both Dmc1 and Rad51. Also, Dmc1 foci appear early in a tid1/rdh54 mutant. Thus, Tid1 may normally act with Rad51 to promote ordered RecA homolog assembly by blocking Dmc1 until Rad51 is present. Finally, whereas double-staining foci predominate in WT nuclei, a subset of nuclei with expanded chromatin exhibit individual Rad51 and Dmc1 foci side-by-side, suggesting that a Rad51 homo-oligomer and a Dmc1 homo-oligomer assemble next to one another at the site of a single double-strand break (DSB) recombination intermediate.

Human CD1d–glycolipid tetramers generated by in vitro oxidative refolding chromatography

CD1 molecules are specialized in presenting lipids to T lymphocytes, but identification and isolation of CD1-restricted lipidspecific T cells has been hampered by the lack of reliable and sensitive techniques. We here report the construction of CD1d–glycolipid tetramers from fully denatured human CD1d molecules by using the technique of oxidative refolding chromatography. We demonstrate that chaperone- and foldase-assisted refolding of denatured CD1d molecules and β2-microglobulin in the presence of synthetic lipids is a rapid method for the generation of functional and specific CD1d tetramers, which unlike previously published protocols ensures isolation of CD1d tetramers loaded with a single lipid species. The use of human CD1d–α-galactosylceramide tetramers for ex vivo staining of peripheral blood lymphocytes and intrahepatic T cells from patients with viral liver cirrhosis allowed for the first time simultaneous analysis of frequency and specificity of natural killer T cells in human clinical samples. Application of this protocol to other members of the CD1 family will provide powerful tools to investigate lipid-specific T cell immune responses in health and in disease.

Mechanical behavior in living cells consistent with the tensegrity model

Alternative models of cell mechanics depict the living cell as a simple mechanical continuum, porous filament gel, tensed cortical membrane, or tensegrity network that maintains a stabilizing prestress through incorporation of discrete structural elements that bear compression. Real-time microscopic analysis of cells containing GFP-labeled microtubules and associated mitochondria revealed that living cells behave like discrete structures composed of an interconnected network of actin microfilaments and microtubules when mechanical stresses are applied to cell surface integrin receptors. Quantitation of cell tractional forces and cellular prestress by using traction force microscopy confirmed that microtubules bear compression and are responsible for a significant portion of the cytoskeletal prestress that determines cell shape stability under conditions in which myosin light chain phosphorylation and intracellular calcium remained unchanged. Quantitative measurements of both static and dynamic mechanical behaviors in cells also were consistent with specific a priori predictions of the tensegrity model. These findings suggest that tensegrity represents a unified model of cell mechanics that may help to explain how mechanical behaviors emerge through collective interactions among different cytoskeletal filaments and extracellular adhesions in living cells.

Muscarinic acetylcholine receptor down-regulation limits the extent of inhibition of cell cycle progression in Chinese hamster ovary cells.

Cellular desensitization is believed to be important for growth control but direct evidence is lacking. In the current study we compared effects of wild-type and down-regulation-resistant mutant m3 muscarinic receptors on Chinese hamster ovary (CHO-K1) cell desensitization, proliferation, and transformation. We found that down-regulation of m3 muscarinic acetylcholine receptors was the principal mechanism of desensitization of receptor-activated inositol phosphate phospholipid hydrolysis in these cells. Activation of wild-type and mutant receptors inhibited anchorage-independent growth as assayed by colony formation in agar. However, the potency for inhibition of anchorage-independent growth was greater for cells expressing the mutant receptor. Activation of either receptor also initially inhibited anchorage-dependent cell proliferation in randomly growing populations. Rates of DNA synthesis and cell division were profoundly reduced by carbachol in cells expressing either receptor at early time points. Analysis of cell cycle parameters indicated that cell cycle progression was inhibited at transitions from G1 to S and G2/M to G1 phases. However, mutant receptor effects on anchorage-dependent growth were sustained, whereas wild-type receptor effects were transient. Thus, receptor down-regulation restored cell cycle progression. In contrast, activation of either receptor blocked entry into the cell cycle from quiescence, and this response was not reduced by receptor down-regulation. Therefore, activation of m3 muscarinic acetylcholine receptors inhibited CHO cell anchorage-dependent and -independent growth. In anchored cells carbachol inhibited the cell cycle at three distinct points. Inhibitions at two of these points were eliminated by wild-type receptor down-regulation while the other was not. These results directly demonstrate that desensitization mechanisms can act as principal determinants of cellular growth responses.

Lineage specification of neuronal precursors in the mouse spinal cord.

We have investigated the differentiation potential of precursor cells within the developing spinal cord of mice and have shown that spinal cord cells from embryonic day 10 specifically give rise to neurons when plated onto an astrocytic monolayer, Ast-1. These neurons had the morphology of motor neurons and > 83% expressed the motor neuron markers choline acetyltransferase, peripherin, calcitonin gene-related peptide, and L-14. By comparison, < 10% of the neurons arising on monolayers of other neural cell lines or 3T3 fibroblasts had motor neuron characteristics. Cells derived from dorsal, intermediate, and ventral regions of the spinal cord all behaved similarly and gave rise to motor neuron-like cells when plated onto Ast-1. By using cells that expressed the lacZ reporter gene, it was shown that > 93% of cells present on the Ast-1 monolayers were motor neuron-like. Time-lapse analysis revealed that the precursors on the Ast-1 monolayers gave rise to neurons either directly or following a single cell division. Together, these results indicate that precursors in the murine spinal cord can be induced to differentiate into the motor neuron phenotype by factors produced by Ast-1 cells, suggesting that a similar factor(s) produced by cells akin to Ast-1 may regulate motor neuron differentiation in vivo.

Como estamos indo? Estudo do deslocamento ativo no Brasil

Introdução: O deslocamento ativo tem estreita relação com problemas de saúde pública da atualidade e sua promoção pode contribuir para melhorias quanto à mobilidade urbana, estado de saúde e proteção do meio ambiente. Entretanto, a maior parte das pesquisas sobre o tema tem sido desenvolvida em países de renda alta. A presente tese busca ampliar a investigação sobre o deslocamento ativo no Brasil. Objetivos: i) Descrever a frequência, a distribuição e a variação temporal de indicadores do deslocamento ativo em populações brasileiras; ii) Avaliar o impacto de mudanças no padrão de transporte da população sobre o deslocamento ativo, o tempo sedentário e desfechos de saúde em populações brasileiras. Métodos: Tese composta por sete manuscritos. O primeiro apresenta revisão sistemática de estudos com informações sobre a prática de deslocamento ativo na América Latina e Caribe; o segundo descreve estimativas representativas da população brasileira sobre a prática de deslocamento ativo para o trabalho; o terceiro e o quarto descrevem a frequência e tendência temporal do deslocamento ativo na Região Metropolitana de São Paulo (ciclistas e escolares); o quinto discute a questão da mobilidade urbana e do direito à cidade em São Paulo; o sexto e o sétimo avaliam o impacto de mudanças no padrão de mobilidade da metrópole paulistana sobre a prática de deslocamento ativo, tempo não-ativo de deslocamento e tempo total de deslocamento, bem como sobre a poluição do ar e saúde da população. Resultados: A prevalência mediana de deslocamento ativo encontrada em diferentes locais do Brasil foi de 12 por cento , variando entre 5,1 por cento em Palmas (Tocantins) a 58,9 por cento em Rio Claro (São Paulo) (Manuscrito 1). Um terço dos homens e das mulheres desloca-se a pé ou de bicicleta de casa para o trabalho no país. Em ambos os sexos, esta proporção diminui com o aumento da renda e da escolaridade e é maior entre os mais jovens, entre os que residem em áreas rurais, e na região Nordeste. Em todas as regiões metropolitanas estudadas, o quinto das pessoas de menor renda apresenta uma maior frequência de deslocamento ativo (Manuscrito 2). Entre os anos de 2007 e 2012, observamos redução no número de ciclistas em São Paulo e diferenças expressivas na proporção de ciclistas entre homens e mulheres (9,7 por mil habitantes versus 1,4 por mil habitantes em 2012) (Manuscrito 3). Também verificamos uma queda na proporção de crianças que se deslocam ativamente para a escola entre os anos de 1997 e 2012 (Manuscrito 4). O cenário epidemiológico do deslocamento ativo no país é resultante da disputa pelo direito à cidade, com repercussões na transição de mobilidade humana e na saúde e qualidade de vida da população, como podemos observar no caso de São Paulo (Manuscrito 5). A construção de uma São Paulo mais inclusiva, com menores distâncias para os deslocamentos cotidianos e maior frequência de caminhada e bicicleta, levaria à substancial redução do tempo total e do tempo sedentário despendidos nos deslocamentos, sem diminuir a duração do deslocamento ativo (Manuscrito 6). Traria também ganhos à saúde da população, sobretudo pelo aumento da prática de atividade física e da redução da poluição do ar (Manuscrito 7). Conclusões: A prática de deslocamento ativo no Brasil apresenta marcadas diferenças segundo região e características sociodemográficas. De um modo geral, esta prática vem diminuindo no país, o que deve contribuir negativamente para a saúde da população. A promoção de cidades mais inclusivas e compactas, com o favorecimento a modos ativos de deslocamento, pode contribuir para reverter esta preocupante tendência.

Doseamento microbiológico de neomicina e bacitracina - desenvolvimento e validação de método rápido em microplacas

Os ensaios microbiológicos são utilizados para avaliar a atividade antimicrobiana desde a descoberta do uso dos antibióticos. Apesar dos ensaios microbiológicos serem amplamente empregados para determinação da potência de antibióticos em formas farmacêuticas, uma vez que fornecem a medida da atividade biológica, apresentam limitações quanto a baixa reprodutibilidade e tempo de análise. O objetivo deste trabalho foi desenvolver, otimizar e validar ensaio colorimétrico rápido em microplaca para determinar a potência da neomicina e bacitracina em produtos farmacêuticos. Metodologias de análise fatorial e análise de superfície de resposta foram utilizadas no desenvolvimento e otimização da escolha do microrganismo, da composição do meio de cultura, da proporção de inóculo, e das concentrações de cloreto de trifeniltetrazólio e dos antibióticos. Os métodos otimizados foram validados pela avaliação da linearidade, precisão, exatidão e robustez. Análise estatística mostrou equivalência entre o método de difusão em ágar e o método colorimétrico rápido em microplaca para ambos antibióticos. Além disso, o ensaio em microplaca apresentou vantagens em relação à reprodutibilidade, sensibilidade, tempo de incubação e quantidades necessárias de meio de cultura e soluções para ambos os antibióticos.

Manutenção de sistemas produtivos: um estudo sobre a gestão da disponibilidade de equipamentos.

Este trabalho traduz um estudo de casos, que procura pesquisar e sistematizar o conhecimento sobre a gestão do estado dos equipamentos para atender às suas funções produtivas, isto é, uma gestão orientada para resultados. A função manutenção tem sido considerada como aquela que agrega conhecimentos e atividades para assegurar a disponibilidade operacional dos sistemas produtivos, dentro de padrões de desempenho antecipadamente especificados, ao menor custo possível e atendendo a requisitos pertinentes de segurança. Nesse contexto, pretende-se caracterizar de que modo abordagens ou políticas, adotadas por empresas selecionadas, que requerem o exercício da função manutenção, se vinculam a indicadores de disponibilidade. Ao longo do trabalho, a disponibilidade é tratada como um \"indicador de resultado\" das atividades de manutenção. Transparece da literatura que a análise da tendência desse indicador deve orientar as tomadas de decisão referentes às ações sobre o equipamento. Desse modo, compete verificar se, e como, é feito o vínculo entre esse indicador e decisões relativas à manutenção, sem perder de vista a produtividade da empresa. Assim, descreve-se o contexto em que se inserem a manutenção e a disponibilidade e são identificados elementos que, interferindo na disponibilidade, permitem desdobrá-la e associá-la a uma estrutura analítica que auxilie o levantamento e encaminhamento de análises sobre os dados obtidos no campo, para melhor percepção do tratamento dado à disponibilidade. Para possibilitar o encaminhamento do estudo de casos e a definição das proposições de pesquisa, a função manutenção é associada a um processo, em que se usa o indicador de disponibilidade como feedback, para a otimização do próprio processo de operação da função manutenção, bem como da especificação dos recursos de entrada desse processo. Três proposições são estruturadas e verificadas em quatro empresas que tipificam dois grupos distintos de operações, focalizando o tratamento dado à disponibilidade, e, no seu âmbito, o tratamento de compromissos de gestão e do estudo do ciclo de vida do equipamento. Para possibilitar uma avaliação objetiva das variáveis das proposições da pesquisa, que são de natureza essencialmente qualitativa, encontrou-se, no Capability Maturity Model (CMM), um modelo conceitual que, por suas características evolutivas, forneceu inspiração para estruturar o necessário instrumento de avaliação. A conclusão da pesquisa revela que as proposições de estudo não se confirmaram de forma plena, apontando sensível diferença de seu atendimento quando se faz a comparação entre os dois grupos de empresas, deixando, assim, um espaço em aberto para novas pesquisas.

Search for ultrahigh energy neutrinos in highly inclined events at the Pierre Auger Observatory

The Surface Detector of the Pierre Auger Observatory is sensitive to neutrinos of all flavors above 0.1 EeV. These interact through charged and neutral currents in the atmosphere giving rise to extensive air showers. When interacting deeply in the atmosphere at nearly horizontal incidence, neutrinos can be distinguished from regular hadronic cosmic rays by the broad time structure of their shower signals in the water-Cherenkov detectors. In this paper we present for the first time an analysis based on down-going neutrinos. We describe the search procedure, the possible sources of background, the method to compute the exposure and the associated systematic uncertainties. No candidate neutrinos have been found in data collected from 1 January 2004 to 31 May 2010. Assuming an E-2 differential energy spectrum the limit on the single-flavor neutrino is E(2)dN/dE < 1.74 x 10(-7)GeVcm(-2)s(-1)sr(-1) at 90% C.L. in the energy range 1 x 10(17) eV < E < 1 x 10(20)eV.

Contribuições para a implementação de um barramento de processo segundo a norma IEC 61850-9.

Desde seu lançamento, em 2002, a Norma IEC 61850 vem evoluindo para se tornar o padrão adotado nos Sistemas de Automação de Subestações. Dentre seus vários aspectos, destacam- se os serviços de tempo real, que permitem a implementação de funções de automação e de proteção dentro da subestação através da troca de mensagens específicas entre Dispositivos Eletrônicos Inteligentes através de um barramento digital de rede de dados. O objetivo central deste trabalho é explorar algumas das questões que envolvem a implementação de uma classe de serviços de tempo real: a transmissão de valores amostrados através de Serviços SMV, definidos pela Norma IEC 61850-9. Primeiramente, apresenta-se um breve resumo das principais características da Norma IEC 61850 que possibilitam o atendimento dos três requisitos por ela estabelecidos como base: a interoperabilidade entre dispositivos de diferentes fabricantes, a versatilidade na configuração e reconfiguração do Sistema de Automação da Subestação, e a possibilidade de implementação de novas tecnologias. Em seguida, explora-se com maior profundidade todos os aspectos relevantes à implementação dos Serviços SMV. Devido à complexidade deste assunto, o autor propõe abordá-lo sob a ótica de cinco tópicos interdependentes: variações da Norma IEC 61850-9, confiabilidade do barramento de processo, sincronismo de tempo, análise da qualidade da medição e segurança cibernética. Com base nos resultados apresentados neste estudo, propõem-se duas plataformas, um protótipo de Transformador de Potencial Óptico e um protótipo de Relé de Proteção Diferencial para transformadores de potência, com o objetivo de explorar alguns dos aspectos pertinentes à implementação de um barramento de processo de acordo com a Norma IEC 61850-9. Também foram realizados testes de geração e transmissão de mensagens contendo valores de amostras de tensão/corrente do sistema elétrico (denominadas de SV Messages) com a finalidade de implementá-las de fato e avaliar as ferramentas de mercado disponíveis. Por fim foi proposto um modelo para a simulação do sistema de potência em conjunto com a rede de comunicação utilizando o programa Matlab/Simulink. O autor espera que este trabalho contribua para esclarecer os vários conceitos envolvidos na implementação do barramento de processo definido pela Norma IEC 61850-9, auxiliando na pesquisa e no desenvolvimento de novas ferramentas e dispositivos, e no aprimoramento da Norma IEC 61850.

Integrating the development of data mining and data warehouses via model-driven engineering

Data mining is one of the most important analysis techniques to automatically extract knowledge from large amount of data. Nowadays, data mining is based on low-level specifications of the employed techniques typically bounded to a specific analysis platform. Therefore, data mining lacks a modelling architecture that allows analysts to consider it as a truly software-engineering process. Bearing in mind this situation, we propose a model-driven approach which is based on (i) a conceptual modelling framework for data mining, and (ii) a set of model transformations to automatically generate both the data under analysis (that is deployed via data-warehousing technology) and the analysis models for data mining (tailored to a specific platform). Thus, analysts can concentrate on understanding the analysis problem via conceptual data-mining models instead of wasting efforts on low-level programming tasks related to the underlying-platform technical details. These time consuming tasks are now entrusted to the model-transformations scaffolding. The feasibility of our approach is shown by means of a hypothetical data-mining scenario where a time series analysis is required.

Intérprete y portavoz: la figura del diputado en las elecciones de 1854 en España

Las elecciones de 1854 en España se desarrollaron en un contexto político que favoreció la participación en el marco del sufragio censitario. Un número significativo de candidatos publicaron manifiestos en la prensa, a través de los cuales es posible delinear varios rasgos de los modelos representativos existentes en la cultura política de la época. El análisis de los manifiestos constituye el núcleo central de este texto, donde apuntamos los elementos que conforman la figura del diputado a Cortes.

Spatiotemporal characteristics of the Huangtupo landslide in the Three Gorges region (China) constrained by radar interferometry

The Huangtupo landslide is one of the largest in the Three Gorges region, China. The county-seat town of Badong, located on the south shore between the Xiling and Wu gorges of the Yangtze River, was moved to this unstable slope prior to the construction of the Three Gorges Project, since the new Three Gorges reservoir completely submerged the location of the old city. The instability of the slope is affecting the new town by causing residential safety problems. The Huangtupo landslide provides scientists an opportunity to understand landslide response to fluctuating river water level and heavy rainfall episodes, which is essential to decide upon appropriate remediation measures. Interferometric Synthetic Aperture Radar (InSAR) techniques provide a very useful tool for the study of superficial and spatially variable displacement phenomena. In this paper, three sets of radar data have been processed to investigate the Huangtupo landslide. Results show that maximum displacements are affecting the northwest zone of the slope corresponding to Riverside slumping mass I#. The other main landslide bodies (i.e. Riverside slumping mass II#, Substation landslide and Garden Spot landslide) exhibit a stable behaviour in agreement with in situ data, although some active areas have been recognized in the foot of the Substation landslide and Garden Spot landslide. InSAR has allowed us to study the kinematic behaviour of the landslide and to identify its active boundaries. Furthermore, the analysis of the InSAR displacement time-series has helped recognize the different displacement patterns on the slope and their relationships with various triggering factors. For those persistent scatterers, which exhibit long-term displacements, they can be decomposed into a creep model (controlled by geological conditions) and a superimposed recoverable term (dependent on external factors), which appears closely correlated with reservoir water level changes close to the river's edge. These results, combined with in situ data, provide a comprehensive analysis of the Huangtupo landslide, which is essential for its management.

El impacto de la crisis económica sobre la movilidad internacional de los residentes extranjeros en la provincia de Alicante

Introducción: En este estudio se investigan los efectos de la crisis económica en los flujos migratorios internacionales. Específicamente, se realiza un análisis comparado sobre los comportamientos en la movilidad residencial de los principales grupos de residentes a partir de las Estadísticas de Variaciones Residenciales (EVR) de 2005 a 2010 en Alicante. Método: Se analizan los microdatos de las EVR para comparar las entradas y salidas de inmigrantes procedentes de los países que aglutinan a las personas que se trasladan orientadas por motivos más cercanos a la esfera del ocio que a la del trabajo, con el grupo de nacionalidades que concentra a la mayoría de los inmigrantes laborales que llegaron atraídos por las ofertas de empleo generadas con la expansión del sector inmobiliario. Resultados: Entre los años 2007 y 2009 se redujeron mucho las variaciones residenciales de entrada en la provincia Alicante desde el extranjero, mientras que se incrementaron las variaciones relacionadas con las salidas. Aunque existen diferencias en el balance de entradas y salidas según la zona de la provincia, la nacionalidad y la edad de los migrantes, la crisis parece asociarse con una tendencia a la reducción del número de residentes extranjeros en general. Discusión o Conclusión: Se concluye que la crisis no sólo ha generado un éxodo de los ciudadanos con menos recursos económicos, también ha provocado la salida masiva de aquellos otros inmigrantes cuya presencia en España se asocia con el consumo.

Performance Factors in Women's Team Handball: Physical and Physiological Aspects—A Review

Team handball is an Olympic sport played professionally in many European countries. Nevertheless, a scientific knowledge regarding women's elite team handball demands is limited. Thus, the purpose of this article was to review a series of studies (n = 33) on physical characteristics, physiological attributes, physical attributes, throwing velocity, and on-court performances of women's team handball players. Such empirical and practical information is essential to design and implement successful short-term and long-term training programs for women's team handball players. Our review revealed that (a) players that have a higher skill level are taller and have a higher fat-free mass; (b) players who are more aerobically resistant are at an advantage in international level women team handball; (c) strength and power exercises should be emphasized in conditioning programs, because they are associated with both sprint performance and throwing velocity; (d) speed drills should also be implemented in conditioning programs but after a decrease in physical training volume; (e) a time-motion analysis is an effective method of quantifying the demands of team handball and provides a conceptual framework for the specific physical preparation of players. According to our results, there are only few studies on on-court performance and time-motion analysis for women's team handball players, especially concerning acceleration profiles. More studies are needed to examine the effectiveness of different training programs of women's team handball players' physiological and physical attributes.