Produção in vitro, análise fitoquímica e avaliação da atividade antineoplásica de metabólitos de Hovenia dulcis Thunb. (Rhamnaceae) obtidos por diferentes estratégias biotecnológicas

Hovenia dulcis Thunberg, natural da Ásia Oriental, é cultivada no Brasil onde é conhecida como uva-do-japão. A espécie possui várias indicações na medicina popular e alguns estudos apontam o seu potencial antineoplásico, tripanocida e hepatoprotetor. Metabólitos secundários são substâncias não essenciais para a sobrevivência celular, mas que fornecem vantagens adaptativas aos vegetais, sendo atribuído, para algumas delas, atividades biológicas importantes. Substâncias de interesse medicinal têm sido obtidas por técnicas da cultura de tecidos vegetais, como a calogênese e a cultura de células em suspensão, que permitem a síntese de matéria-prima de forma contínua e homogênea, independentemente de fatores ambientais e sazonais. O presente estudo objetivou o estabelecimento de culturas in vitro de H. dulcis, visando à produção de metabólitos de interesse, com vistas à avaliação do seu potencial antineoplásico sobre células K562. Foram testados protocolos para o estabelecimento de diferentes sistemas, como culturas de calos, de células em suspensão (CCS) e compact callus clusters (CCC) e ainda a avaliação do uso de elicitores na otimização de metabólitos produzidos in vitro. Foi verificado que a adição dos fitorreguladores KIN e TDZ, substituindo o BAP, não foi capaz de induzir a formação de calos friáveis, bem como a manutenção das culturas em ausência de luz. O uso do nitrato de prata promoveu a friabilidade de calos em todas as concentrações testadas, considerando-se 2,0 mg.L-1 a melhor concentração. Foram alcançadas taxas de 100% de formação de CCS tanto na presença, quanto em ausência de AgNO3. O maior acúmulo de biomassa foi verificado na concentração mais baixa de PIC (0,625 mg.L-1). A análise dos espectros de RMN indicou a presença de (+)-dihidromiricetina, (+)-galocatequina, hovenitina II, hovenosideo G, hodulosideo III, hodulosideo IV, hodulosideo I e hovenidulciosideo B1 nas culturas de calos friáveis. No estabelecimento de culturas CCC, observou-se a formação de calos compactos verdes em todas as concentrações de ANA testadas. O aumento da velocidade de rotação para 135 rpm aumentou a dispersão das células com consequente formação dos agregados celulares desejados. A seleção de linhagens celulares demonstrou ser um método eficiente na uniformização do tamanho desses agregados e tal uniformidade se manteve estável por mais de cinco subcultivos em 100% das culturas. Uma fração rica em saponinas foi obtida a partir dos agregados celulares, correspondendo a 1,46% da massa seca. A análise por RMN sugeriu a presença das saponinas Hovenosideo G e dos hovenidulciosideos A2 e B2. O uso de elicitores em cultura de calos mostrou-se adequado à produção de metabólitos secundários, sem alterações morfológicas nos mesmos. A elicitação alterou o perfil cromatográfico analisado por HPLC. Na elicitação com 5,0 mg.L-1 de extrato de levedura foi verificado um aumento de quase três vezes (12,280 3,396 equivalentes de quercetina/mg de extrato) na síntese de flavonoides. Finalmente, os estudos de ação antitumoral in vitro demonstraram citotoxicidade dos extratos de calos não elicitados de H. dulcis sobre linhagem de leucemia mieloide crônica (IC50 de 74,05 μg.mL-1.) e inibição do crescimento de tais células (K562), sugerindo o potencial antineoplásico para um produto biotecnológio (calo) desta espécie.

Monoculture of marine planktonic diatoms and the effects of different media on their growth and survival

Diatoms are the preferred live food of the protozoea stages of prawns. Due to seasonal variations, it is difficult to obtain continuous supply of diatoms and other algae throughout the year. Therefore mass culture of diatoms is necessary. At attempt was made to culture planktonic diatoms and to study the effect of Allen and Nelson media, Simon media, Vitamin B12 and treated sewage water media on their growth and survival. Navicula sp showed better growth in Allen and Nelson media, Coscinodiscus and Chaetoceros grew better in Simon media while Navicula sp and Coscinodiscus sp showed better growth in the combination of Allen and Nelson + Vitamin B12.

Effect of different media on the determination of the number of micro organisms in frozen prawns (shrimp)

The Indian standards Institution have recently laid down specifications for the grading of frozen shrimp of which the bacterial examination of the product forms a significant part. Work carried out in this regard in our laboratories have shown that various improvements could be made in the composition of the medium to obtain a more true picture of the total bacterial count. Changes in the medium for total bacterial count have, therefore, been suggested and the reasons for the same discussed.

Growth performances of three microalgal species in filtered brackishwater with different inorganic media

The growth of three microalgae species, viz., Nannochloropsis oculata, Tetraselmis chui and Chaetoceros muelleri which are commonly used in aquaculture, was investigated using three different inorganic nutrient media: (i) Modified Guillard's f/2 medium (ii) Rix Mix medium and (iii) BFRI medium. Each microalgae species was cultured for 24 days in small- scale with initial inoculation density of 17xl04 cell /ml in the three media with triplicates. N. oculata cultured in modified Guillard's f/2 medium showed superior growth with a mean peak density of 221 ±4.24 x 104 cell/ ml, to Rix Mix medium (141 ± 10.54xl04 cell/ml) and BFRI medium (47±4.94 x 104 cell/ml) on the 16th day of culture at stationary phase. Considering the increase in cell density for 20 days of culture in Rix Mix medium, C. muelleriwas significantly (P<0.05) highest than in other two media. N. oculata cultured in BFRI medium resulted in the poorest growth with a mean peak increase in density of 84±9.19 x 104 cell/ml in 12 days of culture. However, with an increase in cell density, growth of T. chui (182 ± 6.26 x 104 cell/ml) was significantly (P<0.05) higher in BFRI medium than in modified Guillard's f/2 medium. The results of the present study suggest that N. oculata and C. muelleri can be grown very well in both the modified Guillard's f/2 medium and Rix Mix medium. Better growth of T. chui can be obtained while culturing either in BFRI and Rix Mix medium. These three nutrient media used in the present study may be useful for microalgae species culture for establishing green-water culture for suitable target zooplankton, and fish and crustacean larvae in marine and brackishwater hatcheries.

Maturation of rhesus monkey oocytes in chemically defined culture media and their functional assessment by IVF and embryo development

This study compared success of in-vitro maturation of rhesus monkey oocytes in protein-free versus serum-containing culture systems, assessed by embryo development subsequent to IVF. Four media were tested: (i) modified Connaught Medical Research Laborato

Culture of green algae Chlorella ellipsoidea in inexpensive media

The culture of the of green alga Chlorella ellipsoidea was conducted under natural conditions at the same place simultaneously in five different media, viz., medium-I (inorganic medium), medium-II (powdered whole-pulse medium), medium-III (medium of pulse bran), medium-IV (mixed medium = 50% inorganic medium + 50% whole-pulse powder medium), medium-V (mixed medium = 50% inorganic medium + 50% pulse bran medium). The culture was done in 500 ml conical flask. Growth rates of C. ellipsoidea in five different media were different and reached maximum cell densities of 0.63 x 10^6 cells per ml in 8 days in medium-I, 4.02 x 10^6 cells per ml in 10 days in medium-II, 3.62 x 10^6 cells per ml in 9 days in medium-III, 4.38 x 10^6 cells per ml in 11 days in medium-IV and 4.36 x 10^6 cells per ml in 11 days in medium-V. The range of air temperature was 20 to 33°C and that of culture media was 24 to 32°C and light intensity was 2000 to 7000 lux during the culture period. The inexpensive culture media were found to be significantly useful for algal culture.

Studies on isolation of salmonella from sea foods 1. Comparison of enrichment and selective media for recovery of salmonellae from fish

Three enrichment broths and six plating media were compared for efficiency of detection Salmonella in the presence of numbers of Coliforms (10super(5)/ml) and proteus (10super(3)/ml) from artificially inoculated fish samples. Recovery experiments Salmonella anatum, S. typhimurium and S. enteritidis indicated that the two enrichment broths Dulcitol Selinite (DSE) and Selinite Cystine (SC) were equally efficient. Further, the viability of Salmonella, inoculated into fish muscle and kept at 4°C for 48 hours, was found to be not affected by the low temperature storage. Selective plating media like Xylose Lysine Deoxycholate agar (XLD), Brilliant Green Sulphadiazine agar (BGS) and Brilliant Green agar (BG) were found to be superior in performance to Salmonella-Shigella agar: (SS) and Bismuth Sui phite agar (BiS).