The role of mechanistic target of rapamycin (mTOR) pathway and synaptic protein GABAA-R in cortical GABAergic cell connectivity

Quelque 30 % de la population neuronale du cortex mammalien est composée d’une population très hétérogène d’interneurones GABAergiques. Ces interneurones diffèrent quant à leur morphologie, leur expression génique, leurs propriétés électrophysiologiques et leurs cibles subcellulaires, formant une riche diversité. Après leur naissance dans les éminences ganglioniques, ces cellules migrent vers les différentes couches corticales. Les interneurones GABAergiques corticaux exprimant la parvalbumin (PV), lesquels constituent le sous-type majeur des interneurones GABAergiques, ciblent spécifiquement le soma et les dendrites proximales des neurones principaux et des neurones PV+. Ces interneurones sont nommés cellules à panier (Basket Cells –BCs) en raison de la complexité morphologique de leur axone. La maturation de la connectivité distincte des BCs PV+, caractérisée par une augmentation de la complexité de l’axone et de la densité synaptique, se déroule graduellement chez la souris juvénile. Des travaux précédents ont commencé à élucider les mécanismes contrôlant ce processus de maturation, identifiant des facteurs génétiques, l’activité neuronale ainsi que l’expérience sensorielle. Cette augmentation marquante de la complexité axonale et de la synaptogénèse durant cette phase de maturation suggère la nécessité d’une synthèse de protéines élevée. La voie de signalisation de la cible mécanistique de la rapamycine (Mechanistic Target Of Rapamycin -mTOR) a été impliquée dans le contrôle de plusieurs aspects neurodéveloppementaux en régulant la synthèse de protéines. Des mutations des régulateurs Tsc1 et Tsc2 du complexe mTOR1 causent la sclérose tubéreuse (TSC) chez l’humain. La majorité des patients TSC développent des problèmes neurologiques incluant des crises épileptiques, des retards mentaux et l’autisme. D’études récentes ont investigué le rôle de la dérégulation de la voie de signalisation de mTOR dans les neurones corticaux excitateurs. Toutefois, son rôle dans le développement des interneurones GABAergiques corticaux et la contribution spécifique de ces interneurones GABAergiques altérés dans les manifestations de la maladie demeurent largement inconnus. Ici, nous avons investigué si et comment l’ablation du gène Tsc1 perturbe le développement de la connectivité GABAergique, autant in vitro que in vivo. Pour investiguer le rôle de l’activation de mTORC1 dans le développement d’une BC unique, nous avons délété le gène Tsc1 en transfectant CRE-GFP dirigé par un promoteur spécifique aux BCs dans des cultures organotypiques provenant de souris Tsc1lox. Le knockdown in vitro de Tsc1 a causé une augmentation précoce de la densité des boutons et des embranchements terminaux formés par les BCs mutantes, augmentation renversée par le traitement à la rapamycine. Ces données suggèrent que l’hyperactivation de la voie de signalisation de mTOR affecte le rythme de la maturation des synapses des BCs. Pour investiguer le rôle de mTORC1 dans les interneurones GABAergiques in vivo, nous avons croisé les souris Tsc1lox avec les souris Nkx2.1-Cre et PV-Cre. À P18, les souris Tg(Nkx2.1-Cre);Tsc1flox/flox ont montré une hyperactivation de mTORC1 et une hypertrophie somatique des BCs de même qu’une augmentation de l’expression de PV dans la région périsomatique des neurones pyramidaux. Au contraire, à P45 nous avons découvert une réduction de la densité des punctas périsomatiques PV-gephyrin (un marqueur post-synaptique GABAergique). L’étude de la morphologie des BCs en cultures organotypiques provenant du knock-out conditionnel Nkx2.1-Cre a confirmé l’augmentation initiale du rythme de maturation, lequel s’effondre ensuite aux étapes développementales tardives. De plus, les souris Tg(Nkx2.1Cre);Tsc1flox/flox montrent des déficits dans la mémoire de travail et le comportement social et ce d’une façon dose-dépendante. En somme, ces résultats suggèrent que l’activation contrôlée de mTOR régule le déroulement de la maturation et la maintenance des synapses des BCs. Des dysfonctions de la neurotransmission GABAergique ont été impliquées dans des maladies telles que l’épilepsie et chez certains patients, elles sont associées avec des mutations du récepteur GABAA. De quelle façon ces mutations affectent le processus de maturation des BCs demeuret toutefois inconnu. Pour adresser cette question, nous avons utilisé la stratégie Cre-lox pour déléter le gène GABRA1, codant pour la sous-unité alpha-1 du récepteur GABAA dans une unique BC en culture organotypique. La perte de GABRA1 réduit l’étendue du champ d’innervation des BCs, suggérant que des variations dans les entrées inhibitrices en raison de l’absence de la sous-unité GABAAR α1 peuvent affecter le développement des BCs. La surexpression des sous-unités GABAAR α1 contenant des mutations identifiées chez des patients épileptiques ont montré des effets similaires en termes d’étendue du champ d’innervation des BCs. Pour approfondir, nous avons investigué les effets de ces mutations identifiées chez l’humain dans le développement des épines des neurones pyramidaux, lesquelles sont l’endroit privilégié pour la formation des synapses excitatrices. Somme toute, ces données montrent pour la première fois que différentes mutations de GABRA1 associées à des syndromes épileptiques peuvent affecter les épines dendritiques et la formation des boutons GABAergiques d’une façon mutation-spécifique.

Caracterização experimental de uma bomba ejetora

A opção de futuro incide sobre os processos de combustão em regime pobre e com baixos índices de formação de poluentes. Neste contexto, o presente trabalho estuda um ejetor de um queimador de gás propano, que equipa uma marmita utilizada para confeção de alimentos no Exército Português, para compreender o mecanismo de arrastamento de ar, com vista a identificar as causas que possam contribuir para uma diminuição da razão de equivalência da mistura ar/combustível. Estes queimadores são dispositivos de funcionamento estritamente mecânico e de conceção simples que permitem uma gama de potências caloríficas compreendidas entre 8 e 22 kW. Permitem uma boa estabilidade de chama que é um requisito fundamental de segurança. A regulação de potência é executada através de uma válvula de ajuste, contendo três posições, uma em que a alimentação se encontra cortada e as outras duas permitindo funcionar na potência mínima e máxima. De modo a efetuar o estudo do ejetor, numa primeira fase, submeteu-se o sistema a uma caracterização experimental do campo de escoamentos à entrada de ar do ejetor, a partir da técnica de diagnóstico Particle Image Velocimetry (PIV). Assim avalia-se de que forma o escoamento de ar exterior influencia o comportamento do escoamento da mistura de ar/combustível à saída do queimador. Numa segunda fase, recorre-se à técnica de diagnóstico Quimiluminescência para medição de espécies químicas, para avaliar o comportamento do ejetor a alterações de vários parâmetros, tais como caudal de combustível, área de entrada de ar e área de saída da mistura do difusor. Conclui-se que o ejetor mostrase "insensível" a alterações da área de saída e de entrada de ar, em relação ao valor médio da razão de equivalência. Porém observa-se que as misturas de ar/combustível são mais homogéneas quando as áreas de entrada, da saída e da garganta têm valores próximos.

Apoio à decisão na análise técnica de empreendimentos : aplicação ao caso da selecão da localização de um novo aeroporto

A localização do novo Aeroporto de Lisboa foi durante décadas, alvo de diversos estudos de forma a obter a melhor viabilidade. Em 2005, num seminário promovido pelo Novo Aeroporto, S.A. (NAER), foram apresentados vários estudos sobre a viabilidade da manutenção do aeroporto da Portela através da sua possível expansão ou da sua utilização em simultâneo com outro aeroporto da zona de Lisboa. Os estudos apresentados revelaram a inviabilidade da expansão do aeroporto da Portela e que as soluções baseadas nos aeroportos do Montijo e de Alverca não tinham vantagens e não permitiam o prolongamento da vida útil do aeroporto da Portela. Em 2007, o XVII Governo Constitucional decidiu mandatar o Laboratório Nacional de Engenharia Civil (LNEC), para elaborar um estudo que procedesse a uma análise técnica comparada das alternativas de localização do Novo Aeroporto de Lisboa (NAL), na zona da Ota e na Zona do Campo de Tiro de Alcochete (CTA). O estudo realizado pelo LNEC identificou o conjunto de atributos, sustentados em estudos técnicos, para avaliação da localização do NAL. Neste estudo, não foi utilizada nenhuma das metodologias de apoio à decisão amplamente referenciadas na bibliografia científica. Assim, pareceu-nos interessante, efetuar uma análise das referidas alternativas suportadas na utilização de MAD e, também, uma análise mais detalhada e exaustiva dos atributos de decisão. Assim, foram aplicados três métodos, o método da soma ponderada (MSP), o método de TOPSIS e o método de ELECTRE I, combinados com várias hipóteses de distribuição de pesos pelos atributos. Conclui-se que a localização do NAL na zona do CTA torna-se mais favorável comparativamente com a zona da Ota. Esta conclusão apoia-se essencialmente na constante tendência de melhores classificações da localização do CTA nos três métodos aplicados e na maioria das hipóteses de distribuição de pesos.

Análise comparativa entre metodologias de manutenção de tractores agrícolas

O objectivo do projecto de mestrado é fazer a análise comparativa entre as metodologias de manutenção recomendadas pelo fabricante de uma marca de tractores agrícolas e as práticas dos proprietários destes equipamentos. O estudo foca-se em seis tractores agrícolas da marca New Holland, cujos dados foram disponibilizados pela empresa Agro Mondego com sede em Alqueidão-Figueira da Foz. Os tractores em causa, embora tendo potências diferentes, a sua utilização nos trabalhos agrícola é similar, bem como os procedimentos e intervalos de manutenção recomendados pelo fabricante. Os equipamentos em apreço, embora constituindo uma pequena amostra, a partir dos dados das suas intervenções já permitem fazer alguma análise estatística conducente a tirar as ilações possíveis sobre as práticas de manutenção e eventuais alterações a efectuar no futuro. As horas de funcionamento dos tractores a que são efectuadas as intervenções, registadas nos seus conta-horas, e que constam nas folhas de obra (Ordens de Trabalho) de cada um destes, bem como os procedimentos, recursos utilizados e custos, constituem os elementos base a partir dos quais é efectuado o estudo. A análise estatística dos dados atrás referidos, bem como o estudo dos desvios, em termos de custos comparativos entre os expectáveis resultantes das recomendações dos fabricantes e os efectivamente pagos, permitem apoiar a decisão sobre eventuais alterações nas metodologias de manutenção a efectuar. O presente projecto tem o potencial de permitir extrapolar ilações para equipamentos similares de outros fabricantes e, eventualmente, de permitir fazer recomendações sobre as melhores práticas de manutenção a levar a efeito no mercado nacional.

Brexit: análise das opiniões nas redes sociais

Análise realizada pela DAPP/FGV (Diretoria de Análise de Políticas Públicas da Fundação Getulio Vargas) com informações do Twitter mostra a opinião pública britânica fortemente dividida em relação à saída do Reino Unido da União Europeia, chamado de Brexit (junção das palavras inglesas British, que significa Reino Unido, e exit, que significa saída). Há alguma tendência favorável à permanência na União Europeia. As postagens na rede social em línguas alemã e francesa mostram uma tendência de apoio à permanência do Reino Unido no bloco europeu. Esse resultado, baseado em dados obtidos ao longo de uma semana, sugere importantes diferenças de perspectiva quanto ao futuro do Reino Unido na UE tanto entre britânicos como entre as principais potências do bloco, cujas visões acerca dos benefícios e prejuízos da UE ficam evidentes no debate.

The role of mechanistic target of rapamycin (mTOR) pathway and synaptic protein GABAA-R in cortical GABAergic cell connectivity

Quelque 30 % de la population neuronale du cortex mammalien est composée d’une population très hétérogène d’interneurones GABAergiques. Ces interneurones diffèrent quant à leur morphologie, leur expression génique, leurs propriétés électrophysiologiques et leurs cibles subcellulaires, formant une riche diversité. Après leur naissance dans les éminences ganglioniques, ces cellules migrent vers les différentes couches corticales. Les interneurones GABAergiques corticaux exprimant la parvalbumin (PV), lesquels constituent le sous-type majeur des interneurones GABAergiques, ciblent spécifiquement le soma et les dendrites proximales des neurones principaux et des neurones PV+. Ces interneurones sont nommés cellules à panier (Basket Cells –BCs) en raison de la complexité morphologique de leur axone. La maturation de la connectivité distincte des BCs PV+, caractérisée par une augmentation de la complexité de l’axone et de la densité synaptique, se déroule graduellement chez la souris juvénile. Des travaux précédents ont commencé à élucider les mécanismes contrôlant ce processus de maturation, identifiant des facteurs génétiques, l’activité neuronale ainsi que l’expérience sensorielle. Cette augmentation marquante de la complexité axonale et de la synaptogénèse durant cette phase de maturation suggère la nécessité d’une synthèse de protéines élevée. La voie de signalisation de la cible mécanistique de la rapamycine (Mechanistic Target Of Rapamycin -mTOR) a été impliquée dans le contrôle de plusieurs aspects neurodéveloppementaux en régulant la synthèse de protéines. Des mutations des régulateurs Tsc1 et Tsc2 du complexe mTOR1 causent la sclérose tubéreuse (TSC) chez l’humain. La majorité des patients TSC développent des problèmes neurologiques incluant des crises épileptiques, des retards mentaux et l’autisme. D’études récentes ont investigué le rôle de la dérégulation de la voie de signalisation de mTOR dans les neurones corticaux excitateurs. Toutefois, son rôle dans le développement des interneurones GABAergiques corticaux et la contribution spécifique de ces interneurones GABAergiques altérés dans les manifestations de la maladie demeurent largement inconnus. Ici, nous avons investigué si et comment l’ablation du gène Tsc1 perturbe le développement de la connectivité GABAergique, autant in vitro que in vivo. Pour investiguer le rôle de l’activation de mTORC1 dans le développement d’une BC unique, nous avons délété le gène Tsc1 en transfectant CRE-GFP dirigé par un promoteur spécifique aux BCs dans des cultures organotypiques provenant de souris Tsc1lox. Le knockdown in vitro de Tsc1 a causé une augmentation précoce de la densité des boutons et des embranchements terminaux formés par les BCs mutantes, augmentation renversée par le traitement à la rapamycine. Ces données suggèrent que l’hyperactivation de la voie de signalisation de mTOR affecte le rythme de la maturation des synapses des BCs. Pour investiguer le rôle de mTORC1 dans les interneurones GABAergiques in vivo, nous avons croisé les souris Tsc1lox avec les souris Nkx2.1-Cre et PV-Cre. À P18, les souris Tg(Nkx2.1-Cre);Tsc1flox/flox ont montré une hyperactivation de mTORC1 et une hypertrophie somatique des BCs de même qu’une augmentation de l’expression de PV dans la région périsomatique des neurones pyramidaux. Au contraire, à P45 nous avons découvert une réduction de la densité des punctas périsomatiques PV-gephyrin (un marqueur post-synaptique GABAergique). L’étude de la morphologie des BCs en cultures organotypiques provenant du knock-out conditionnel Nkx2.1-Cre a confirmé l’augmentation initiale du rythme de maturation, lequel s’effondre ensuite aux étapes développementales tardives. De plus, les souris Tg(Nkx2.1Cre);Tsc1flox/flox montrent des déficits dans la mémoire de travail et le comportement social et ce d’une façon dose-dépendante. En somme, ces résultats suggèrent que l’activation contrôlée de mTOR régule le déroulement de la maturation et la maintenance des synapses des BCs. Des dysfonctions de la neurotransmission GABAergique ont été impliquées dans des maladies telles que l’épilepsie et chez certains patients, elles sont associées avec des mutations du récepteur GABAA. De quelle façon ces mutations affectent le processus de maturation des BCs demeuret toutefois inconnu. Pour adresser cette question, nous avons utilisé la stratégie Cre-lox pour déléter le gène GABRA1, codant pour la sous-unité alpha-1 du récepteur GABAA dans une unique BC en culture organotypique. La perte de GABRA1 réduit l’étendue du champ d’innervation des BCs, suggérant que des variations dans les entrées inhibitrices en raison de l’absence de la sous-unité GABAAR α1 peuvent affecter le développement des BCs. La surexpression des sous-unités GABAAR α1 contenant des mutations identifiées chez des patients épileptiques ont montré des effets similaires en termes d’étendue du champ d’innervation des BCs. Pour approfondir, nous avons investigué les effets de ces mutations identifiées chez l’humain dans le développement des épines des neurones pyramidaux, lesquelles sont l’endroit privilégié pour la formation des synapses excitatrices. Somme toute, ces données montrent pour la première fois que différentes mutations de GABRA1 associées à des syndromes épileptiques peuvent affecter les épines dendritiques et la formation des boutons GABAergiques d’une façon mutation-spécifique.

Regulation of dendrite growth, placement, and patterning in Drosophila melanogaster class 4 dendrite arborization neurons

Thesis (Ph.D.)--University of Washington, 2016-06

Type 1 nitrergic (ND1) cells of the rabbit retina: Comparison with other axon-bearing amacrine cells

NADPH diaphorase (NADPHd) histochemistry labels two types of nitrergic amacrine cells in the rabbit retina. Both the large ND1 cells and the small ND2 cells stratify in the middle of the inner plexiform layer, and their overlapping processes produce a dense plexus, which makes it difficult to trace the morphology of single cells. The complete morphology of the ND1 amacrine cells has been revealed by injecting Neurobiotin into large round somata in the inner nuclear layer, which resulted in the labelling of amacrine cells whose proximal morphology and stratification matched those of the ND1 cells stained by NADPHd histochemistry. The Neurobiotin-injected ND1 cells showed strong homologous tracer coupling to surrounding ND1 cells, and double-labelling experiments confirmed that these coupled cells showed NADPHd reactivity. The ND1 amacrine cells branch in stratum 3 of the inner plexiform layer, where they produce a sparsely branched dendritic tree of 400-600 mum diameter in ventral peripheral retina. In addition, each cell gives rise to several fine beaded processes, which arise either from a side branch of the dendritic tree or from the tapering of a distal dendrite. These axon-like processes branch successively within the vicinity of the dendritic field before extending, with little or no further branching, for 3-5 mm from the soma in ventral peripheral retina. Consequently, these cells may span one-third of the visual field of each eye, and their spatial extent appears to be greater than that of most other types of axon-bearing amacrine cells injected with Neurobiotin in this study. The morphology and tracer-coupling pattern of the ND1 cells are compared with those of confirmed type 1 catecholaminergic cells, a presumptive type 2 catecholaminergic cell, the type 1 polyaxonal. cells, the long-range amacrine cells, a novel type of axon-bearing cell that also branches in stratum 3, and a type of displaced amacrine cell that may correspond to the type 2 polyaxonal cell. (C) 2004 Wiley-Liss, Inc.

The type 1 polyaxonal amacrine cells of the rabbit retina: A tracer-coupling study

The type 1 polyaxonal (PA1) cell is a distinct type of axon-bearing amacrine cell whose soma commonly occupies an interstitial position in the inner plexiform layer; the proximal branches of the sparse dendritic tree produce 1-4 axon-like processes, which form an extensive axonal arbor that is concentric with the smaller dendritic tree (Dacey, 1989; Famiglietti, 1992a,b). In this study, intracellular injections of Neurobiotin have revealed the complete dendritic and axonal morphology of the PA1 cells in the rabbit retina, as well as labeling the local array of PA1 cells through homologous tracer coupling. The dendritic-field area of the PA1 cells increased from a minimum of 0.15 mm(2) (0.44-mm equivalent diameter) on the visual streak to a maximum of 0.67 mm(2) (0.92-mm diameter) in the far periphery; the axonal-field area also showed a 3-fold variation across the retina, ranging from 3.1 mm(2) (2.0-mm diameter) to 10.2 mm(2) (3.6-mm diameter). The increase in dendritic- and axonal-field size was accompanied by a reduction in cell density, from 60 cells/mm(2) in the visual streak to 20 cells/mm(2) in the far periphery, so that the PA1 cells showed a 12 times overlap of their dendritic fields across the retina and a 200-300 times overlap of their axonal fields. Consequently, the axonal plexus was much denser than the dendritic plexus, with each square millimeter of retina containing similar to100 mm of dendrites and similar to1000 mm of axonal processes. The strong homologous tracer coupling revealed that similar to45% of the PA1 somata were located in the inner nuclear layer, similar to50% in the inner plexiform layer, and similar to5% in the ganglion cell layer. In addition, the Neurobiotin-injected PA1 cells sometimes showed clear heterologous tracer coupling to a regular array of small ganglion cells, which were present at half the density of the PA1 cells. The PA1 cells were also shown to contain elevated levels of gamma-aminobutyric acid (GABA), like other axon-bearing amacrine cells.

Comparative analysis of CNS populations in knockout mice with altered growth hormone responsiveness

Recently we have shown that growth hormone (GH) inhibits neuronal differentiation and that this process is blocked by suppressor of cytokine signalling-2 (SOCS2). Here we examine several cortical and subcortical neuronal populations in GH hyper-responsive SOCS2 null (-/-) mice and GH non-responsive GH receptor null (GHR-/-) mice. While SOCS2-/- mice showed a 30% decrease in density of NeuN positive neurons in cortex compared to wildtype, GHR-/- mice showed a 25% increase even though brain size was decreased. Interneuron sub-populations were variably affected, with a slight decrease in cortical parvalbumin expressing interneurons in SOCS2-/- mice and an increase in cortical calbindin and calretinin and striatal cholinergic neuron density in GHR-/- mice. Analysis of glial cell numbers in cresyl violet or glial fibrillary acidic protein (GFAP) stained sections of cortex showed that the neuron: glia ratio was increased in GHR-/- mice and decreased in SOCS2-/- mice. The astrocytes in GHR-/- mice appeared smaller, while they were larger in SOCS2-/- mice. Neuronal soma size also varied in the different genotypes, with smaller striatal cholinergic neurons in GHR-/- mice. While the size of layer 5 pyramidal neurons was not significantly different from wildtype, SOCS2-/- neurons were larger than GHR-/- neurons. In addition, primary dendritic length was similar in all genotypes but dendritic branching of pyramidal neurons in the cortex appeared sparser in GHR-/- and SOCS2-/- mice. These results suggest that GH, possibly regulated by SOCS2, has multiple effects on central nervous system (CNS) development and maturation, regulating the number and size of multiple neuronal and glial cell types.

Changes in neuronal protein 22 expression and cytoskeletal association in the alcohol-dependent and withdrawn rat brain

The action of alcohol on neuronal pathways has been an issue of increasing research focus, with numerous findings contradicting the previously accepted idea that its effect is nonspecific. The human NP22 (hNP22) gene was revealed by its elevated expression in the frontal cortex of the human alcoholic. The sequences of hNP22 and the rat orthologue rNP22 contain a number of domains consistent with those of cytoskeletal-interacting proteins. Localization of rNP22 is restricted to the cytoplasm and processes of neurons and it colocalizes with elements of the microfilament and microtubule matrices including filamentous actin (F-actin), alpha-tubulin, tau, and microtubule-associated protein 2 (MAP2). Withdrawal of Wistar rats after alcohol dependence induced by alcohol vapor produced elevated levels of rNP22 mRNA and protein in the cortex, CA2, and dentate gyrus regions of the hippocampus. In contrast, there was decreased rNP22 expression in the striatum after chronic ethanol exposure. Chronic ethanol exposure did not markedly alter rNP22 colocalization with F-actin, alpha-tubulin, or MAP2, although colocalization at the periphery of the neuronal soma with F-actin was observed only after chronic ethanol exposure and withdrawal. Rat NP22 colocalization with MAP2 was reduced during withdrawal, whereas association with alpha-tubulin and actin was maintained. These findings suggest that the effect of chronic ethanol exposure and withdrawal on rNP22 expression is region selective. Rat NP22 may affect microtubule or microfilament function, thereby regulating the neuroplastic changes associated with the development of alcohol dependence and physical withdrawal.

The novel cytoskeleton-associated protein Neuronal protein 22: Elevated expression in the developing rat brain

Neuronal development and process targeting is mediated by proteins of the cytoskeleton. However, the signaling pathways underlying these mechanisms are complex and have not yet been fully elucidated. Neuronal protein 22 (NP22) has been identified as a cytoskeleton-associated protein. It colocalizes with microtubules and actin, the two major components of the cytoskeleton. It contains numerous signaling motifs and induces process formation in non-neuronal cells. Expression of rat NP22 (rNP22) rises incrementally at specific time points during brain development, with the greatest elevation occurring during synaptogenesis in the rat brain. its neuronal localization is primarily at the plasma membrane of the soma in the embryonic brain and progresses into homogeneous expression in the postnatal rat brain. Data suggest that NP22 may play a role in mediating the molecular events governing development of the neuronal architecture. Furthermore, its sustained expression in postnatal brain implies a function in the maintenance of neuronal morphology.

Substance P preferentially inhibits large conductance nicotinic ACh receptor channels in rat intracardiac ganglion neurons

The effects of substance P (SP) on nicotinic acetylcholine (ACh)-evoked currents were investigated in parasympathetic neurons dissociated from neonatal rat intracardiac ganglia using standard whole cell, perforated patch, and outside-out recording configurations of the patch-clamp technique. Focal application of SP onto the soma reversibly decreased the peak amplitude of the ACh-evoked current with half-maximal inhibition occurring at 45 mu M and complete block at 300 mu M SP. Whole cell current-voltage (I-V) relationships obtained in the absence and presence of SP indicate that the block of ACh-evoked currents by SP is voltage independent. The rate of decay of ACh-evoked currents was increased sixfold in the presence of SP (100 mu M), suggesting that SP may increase the rate of receptor desensitization. SP-induced inhibition of ACh-evoked currents was observed following cell dialysis and in the presence of either 1 mM 8-Br-cAMP, a membrane-permeant cAMP analogue, 5 mu M H-7, a protein kinase C inhibitor, or 2 mM intracellular AMP-PNP, a nonhydrolyzable ATP analogue. These data suggest that a diffusible cytosolic second messenger is unlikely to mediate SP inhibition of neuronal nicotinic ACh receptor (nAChR) channels. Activation of nAChR channels in outside-out membrane patches by either ACh (3 mu M) or cytisine (3 mu M) indicates the presence of at least three distinct conductances (20, 35, and 47 pS) in rat intracardiac neurons. In the presence of 3 mu M SP, the large conductance nAChR channels are preferentially inhibited. The open probabilities of the large conductance classes activated by either ACh or cytisine were reversibly decreased by 10- to 30-fold in the presence of SP. The single-channel conductances were unchanged, and mean apparent channel open times for the large conductance nAChR channels only were slightly decreased by SP. Given that individual parasympathetic neurons of rat intracardiac ganglia express a heterogeneous population of nAChR subunits represented by the different conductance levels, SP appears to preferentially inhibit those combinations of nAChR subunits that form the large conductance nAChR channels. Since ACh is the principal neurotransmitter of extrinsic (vagal) innervation of the mammalian heart, SP may play an important role in modulating autonomic control of the heart.

MINISTÉRIO PASTORAL METODISTA NO DISTRITO ECLESIÁSTICO DE PIRACICABA: UM ESTUDO DE CASO SOBRE A PRÁXIS DE SOLIDARIEDADE NO CONTEXTO DA GLOBALIZAÇÃO

Assiste-se na contemporaneidade o avanço da globalização econômica, responsável por alguns progressos à humanidade, mas também por profundos problemas sociais, como exemplo, o aumento da multidão de excluídos e miseráveis no mundo. Soma-se a isto, o surgimento na atualidade da religião de mercado, ou seja, uma religião privatizada, hedonista, a-histórica, descomprometida com os dramas sociais ou valores como a solidariedade. Tal cenário apresenta desafios à práxis pastoral da Igreja. Neste sentido, o presente trabalho, situado na área de Práxis Religiosa e Sociedade, tem como objetivo analisar como a práxis pastoral solidária metodista se apresenta nestes tempos de globalização econômica. Salienta-se que a Igreja Metodista é gerida por governo episcopal, organizada geográfica e politicamente em oito (08) Regiões Eclesiásticas. Cada Região Eclesiástica possui uma subdivisão interna, denominada de distrito. Cada igreja local, distrito e região são ligados de forma conexional no sistema metodista. Como um estudo da práxis pastoral metodista em âmbito nacional se mostra inviável, a presente pesquisa propõe investigar as práxis solidárias dos pastores metodistas do Distrito Eclesiástico de Piracicaba. Para tanto, este trabalho utiliza uma metodologia que privilegia o método de análise histórico crítico. A relevância de tal pesquisa está em demonstrar a interação entre um setor do protestantismo brasileiro e a globalização econômica, possibilitando uma avaliação de certas mudanças e/ou transformações que este intercâmbio provoca e suas implicações para a expressão de uma práxis pastoral solidária metodista na contemporaneidade.(AU)

IMPÉRIO DO IMEDIATO: A URGÊNCIA COMO ARGUMENTO DE VENDAS NA COMUNICAÇÃO MERCADOLÓGICA

Esta tese analisa as relações da comunicação de mercado com a obsessão pelo imediato presente na cultura social contemporânea. Vive-se hoje numa sociedade marcada pelo consumo intenso, em tempo real e não restrito por distâncias. Para acelerar a circulação de produtos e serviços, as empresas tentam estimular o mercado através de anúncios que incorporam em sua linguagem as características de urgência e imediatismo observadas e extraídas da sociedade. Sob uma perspectiva social, esta tese discutiu a presença do elemento tempo na vida contemporânea e sua apropriação pela comunicação mercadológica. A pesquisa foi desenvolvida sob o método de análise de conteúdo em mais de trezentos comerciais de televisão e em cerca de duzentos anúncios impressos que apresentaram sólidas evidências dessa apropriação da cultura de urgência e imediatismo pela comunicação de mercado. A ênfase no urgente e no imediato reforça e estimula o modelo social vigente. Em outras palavras, a soma de um estilo de vida que cultua a velocidade com a presença de tais elementos na comunicação de mercado contribui para a promoção de uma ditadura do agora, baseada na promessa do prazer instantâneo. Esses elementos que caracterizam a sociedade contemporânea são, do ponto de vista comercial, eficientemente apropriados pela comunicação de mercado, uma vez que essa condição social, quando transformada em argumento de vendas, contribui para provocar no consumidor um estado de consonância com suas cognições.