Modelação do crescimento da árvore individual de Eucalyptus globulus labill

Dissertação apresentada como requisito parcial para obtenção do grau de Mestre em Estatística e Gestão de Informação

Hipersensibilidade tardia a antígeno de Trypanosoma cruzi: I - estudo experimental em coelhos

Reações de hipersensibilidade cutânea tardia em coelhos infectados com Trypanosoma cruzi homólogo ou heterólogo, foram obtidas pela injeção de 50µg de proteína do antígeno T12E, derivado de um clone do parasito. A especificidade do teste foi indicada pela ausência de reação em coelhos controles normais que receberam a mesma quantidade de antígeno na pele. A injeção intradérmica do antígeno, em cinco ocasiões, não induziu reação cutânea positiva ou soroconversão dos exames de hemaglutinação e aglutinação, em coelhos controles normais. Por outro lado, coelhos chagásicos submetidos a série de cinco testes cutâneos, com intervalos de uma semana, não exibiram alteração da intensidade das reações de hipersmsibilidade ou dos perfis dos títulos de anticorpos séricos. Os registros eletrocardiográficos também não foram alterados pelos testes cutâneos em coelhos normais e chagásicos. A inocuidade do antígeno T12E foi confirmada em experimentos realizados em 36 coelhos chagásicos e 19 coelhos controles normais. Esse estudo mostra que o teste cutâneo com o antígeno T12E pode ser útil no diagnóstico, além de servir como indicador de morbidade da doença.

Evolução de genótipos de Streptococcus agalactiae associados a colonização na grávida

Dissertação para obtenção do grau de Mestre em Microbiologia Médica

Caracterização de estirpes de Streptococcus agalactiae provenientes de colonização de tratos genitourinário e gastrointestinal da mulher grávida

Streptococcus agalactiae, ou Streptococcus do grupo B, é actualmente, o principal responsável pelo desenvolvimento de infecção neonatal, seja de início precoce (nos primeiros 7 dias de vida) ou tardio (entre os 7 dias e os 3 meses de vida). O principal factor de risco ao desenvolvimento de doença neonatal precoce é a colonização rectovaginal da mulher grávida. No presente estudo foram caracterizados 179 isolados provenientes de colonização dos tratos genitourinário e gastrointestinal da mulher grávida, obtidos no Hospital Garcia de Orta (Almada) entre 2007 e 2010. A colonização vaginal da mulher grávida neste período foi de 12%, e os serótipos mais prevalententemente detectados foram os serótipos Ia, V, IV, II e III, o que está de acordo com outros estudos efectuados em Portugal, à excepção do serótipo IV que tem sido pouco detectado na Europa. Todos os isolados se revelaram susceptíveis à penicilina, ofloxacina e vancomicina e, apenas 11.8% se revelaram susceptíveis a todos os antibióticos testados. A resistência à tetraciclina, eritromicina e clindamicina, de 2007 a 2010, foi de 86.8%, 14.6% e 9.7%, respectivamente. Não foi encontrado nenhum fenótipo de resistência à eritromicina dominante. Neste estudo o serótipo capsular mais associado à resistência à eritromicina foi o serótipo Ia, seguido pelos serótipos III, V e II. Verificou-se a presença de uma associação entre o serótipo Ia, o fenótipo M e a presença do gene mef(A). Os isolados com fenótipo cMLSB apresentaram o gene erm(B) e o gene erm(A) [erm(TR)] foi detectado em todos os isolados de fenótipo iMLSB, em ambos os casos com diversos serótipos. Os isolados pertencentes à mesma grávida foram considerados geneticamente relacionados com base na técnica de PFGE, excepto em dois casos em que as duas mulheres grávidas aparentemente estavam colonizadas por mais do que uma estirpe. Observou-se uma grande heterogeneidade populacional entre os isolados caracterizados. Relativamente à resistência aos macrólidos, a origem foi multiclonal e não derivada da disseminação de um único clone. Mais estudos epidemiológicos longitudinais são necessários para complementar os já existentes e, conhecer a evolução das estirpes de S. agalactiae em circulação, não só a nível nacional, mas em todo o mundo. Desta forma será possível definir a melhor estratégia para a criação de uma vacina adequada à variabilidade populacional de S. agalactiae.

Disponibilidade de biomassa florestal residual para combustão na central termoeléctrica de Sines

Dissertação para obtenção do grau de Mestre em Energia e Bioenergia

Clonal structure of Trypanosoma cruzi Colombian strain (biodeme Type III): biological, isoenzymic and histopathological analysis of seven isolated clones

The clonal structure of the Colombian strain of Trypanosoma cruzi, biodeme Type III and zymodeme 1, was analyzed in order to characterize its populations and to establish its homogeneity or heterogeneity. Seven isolated clones presented the basic characteristics of Biodeme Type III, with the same patterns of parasitemic curves, tissue tropism to skeletal muscle and myocardium, high pathogenicity with extensive necrotic-inflammatory lesions from the 20th to 30th day of infection. The parental strain and its clones C1, C3, C4 and C6, determined the higher levels of parasitemia, 20 to 30 days of infection, with high mortality rate up to 30 days (79 to 100%); clones C2, C5 and C7 presented lower levels of parasitemia, with low mortality rates (7.6 to 23%). Isoenzymic patterns, characteristic of zymodeme 1, (Z1) were similar for the parental strain and its seven clones. Results point to a phenotypic homogeneity of the clones isolated from the Colombian strain and suggest the predominance of a principal clone, responsible for the biological behavior of the parental strain and clones.

Trypanosoma cruzi: susceptibility to chemotherapy with benznidazole of clones isolated from the highly resistant Colombian strain

The present investigation was performed to evaluate the susceptibility of seven clones isolated from the highly resistant Colombian strains, prototype of Biodeme Type III. Seven clones previously obtained, showed a phenotypic homogeneity and high similarity with the parental strain. Eight groups of 30 mice were inoculated with one of seven clones or the parental strain; 20 were treated with benznidazole (100mg/kg/day) and 10 were untreated controls. Cure evaluations were done by parasitological and serological tests and PCR. Cure rates varied from 0% (null) to 16.7%. Correlation between positivity of parasitological and serological tests with positive PCR reached 37%. The results demonstrated the high resistance of the clones, suggesting the predominance of a highly resistant principal clone in this strain. The findings apparently indicate that the possibility of cure is minimal for patients infected with this biodeme; a fact that could affect the control of Chagas' disease through treatment of chronically infected people.

Variation in protein expression levels in cell populations

Dissertation presented to obtain the Ph.D degree in Systems Biology

Response to chemotherapy with benznidazole of clones isolated from the 21SF strain of Trypanosoma cruzi (biodeme Type II, Trypanosoma cruzi II)

Susceptibility to chemotherapy with benznidazole was investigated of 5 clones isolated from the 21 SF strain (biodeme Type II, Trypanosoma cruzi II). Swiss mice were infected with the parental strain for each clone and submitted to chemotherapy with benznidazole (100mg/kg/day during 90 days). Treatment determined negativity of the parasitemia. Cure rates were evaluated by parasitological cure tests. Serology was evaluated for treated animals (titers from negative to 1:640) and untreated controls (1:160 to 1:640). Cure rates varied from 30 to 100% for the 5 clones, and were 25% for the parental strain. Results suggested that the variability of response to treatment of the clonal populations of Trypanosoma cruzi II strains is responsible for the high variation in the response to chemotherapy with benznidazole and nifurtimox by strains of this biodeme.

Avaliação do potencial de biomassa florestal da Ilha da Madeira para produção de combustíveis sólidos

Dissertação para obtenção do Grau de Mestre em Energia e Bioenergia

Phage display as a tool for development of novel therapeutics for breast cancer

Phage display technology is a powerful platform for the generation of highly specific human monoclonal antibodies (Abs) with potential use in clinical applications. Moreover, this technique has also proven to be a reliable approach in identifying and validating new cancer-related targets. For scientific or medical applications, different types of Ab libraries can be constructed. The use of Fab Immune libraries allows the production of high quality and affinity antigen-specific Abs. In this work, two immune human phage display IgG Fab libraries were generated from the Ab repertoire of 16 breast cancer patients, in order to obtain a tool for the development of new therapeutic Abs for breast cancer, a condition that has great impact worldwide. The generated libraries are estimated to contain more than 108 independent clones and a diversity over 90%. Libraries validation was pursued by selection against BSA, a foreign and highly immunogenic protein, and HER2, a well established cancer target. Preliminary results suggested that phage pools with affinity for these antigens were selected and enriched. Individual clones were isolated, however, it was not possible to obtain enough data to further characterize them. Selection against the DLL1 protein was also performed, once it is a known ligand of the Notch pathway, whose deregulation is associated to breast cancer, making it an interesting target for the generation of function-blocking Abs. Selection resulted in the isolation of a clone with low affinity and Fab expression levels. The validation process was not completed and further effort will have to be put in this task in the future. Although immune libraries concept implies limited applicability, the library reported here has a wide range of use possibilities, since it was not restrained to a single antigen but instead thought to be used against any breast cancer associated target, thus being a valuable tool.

Desenvolvimento de um condicionador de sinal para eletroantenografia

O objetivo principal que motivou este trabalho foi o de construir um condicionador de sinal para medição da resposta elétrica das antenas de insetos devido à receção de sinais químicos (Eletroantenografia). O estudo da resposta das antenas dos insetos é particularmente relevante para o estudo das pragas de insetos, para a sua monitorização, e também para a descodificação dos mecanismos olfativos nas relações planta-inseto, com consequências para o desenvolvimento de dispositivos biossensores. O trabalho desenvolvido enquadra-se numa área interdisciplinar da física, química, fisiologia, ecologia aplicada e saúde pública. O inseto usado nesta experiência foi o gorgulho do eucalipto (Gonipterus Platensis), que tem vindo a dizimar as plantações de eucalipto em Portugal, provocando graves perdas económicas aos proprietários. O condicionador desenvolvido consiste num sistema de “interface” com a antena do inseto e um amplificador operacional de baixo ruído e ganho variável, que permite amplificar o sinal elétrico da antena para níveis adequados à aquisição e tratamento de sinal. A vantagem do aparelho construído é o fácil manuseamento do material biológico e químico,comparado com ensaios de Eletroantenografia tradicionais com recurso a pipetas de “Pasteur”. Este projeto indicou que o sistema desenvolvido poderá ser capaz da medição da resposta da antena do gorgulho a estímulos olfativos de eucalipto.

Intrahospital spread of carbapenem-resistant Pseudomonas aeruginosa in a University Hospital in Florianópolis, Santa Catarina, Brazil

INTRODUCTION: Carbapenem-resistant Pseudomonas aeruginosa (CRPA) has been isolated with increasing frequency in Brazilian hospitals. Since June 2003, its detection in a teaching hospital in the city of Florianópolis, Brazil, has increased. This study aimed to investigate the minimal inhibitory concentration (MIC), presence of Metallo-β-lactamase (MβL) and a possible clonal relationship among the isolates. METHODS: The study included 29 CRPA and seven isolates with reduced susceptibility. The MIC was determined by agar-dilution. Detection of MβL was performed by Double Disk Sinergism (DDS) and Combined Disk (CD). The MβL gene was verified by PCR and nucleotide sequence analysis. Epidemiological typing was performed by pulsed-field gel electrophoresis. RESULTS: Among the 29 carbapenem-resistant isolates, polymyxin B presented 100% susceptibility and piperacillin/tazobactam 96.7%. Seventeen (62%) strains were verified as clonal (A clone) and among these, six isolates indicated phenotypically positive tests for MβL and harbored the blaSPM-1 gene. The first CRPA isolates were unrelated to clone A, harbored blaIMP-16 and were phenotypically positive only by CD. CONCLUSIONS: The spread of a high-level of resistance clone suggests cross transmission as an important dissemination mechanism and has contributed to the increased rate of resistance to carbapenems. This study emphasizes the need for continuous surveillance and improved strategies.

Caracterização molecular de Pseudomonas aeruginosa resistentes a carbapenêmicos e produtoras de metalo-β-lactamase isoladas em hemoculturas de crianças e adolescentes com câncer

INTRODUCÃO: O objetivo do estudo foi avaliar a prevalência e a disseminação de amostras de Pseudomonas aeruginosa resistente aos carbapenêmicos e produtoras de metalo-β-lactamases isoladas de hemoculturas (2000-2005) de pacientes do Instituto de Oncologia Pediátrica da UNIFESP (IOP-GRAACC). MÉTODOS E RESULTADOS: Cinquenta e seis amostras de Pseudomonas aeruginosa foram isoladas de 49 pacientes. Trinta e duas dessas amostras foram classificadas como resistentes aos carbapenêmicos pela técnica de disco difusão e submetidas a reação de PCR para detecção de genes de MBL. Dezoitos dessas 32 amostras evidenciaram o gene blaSPM-1. Oito amostras selecionadas em diferentes anos no período de estudo apresentaram o mesmo perfil genético por pulsed-field gel electrophoresis. A terapêutica antimicrobiana foi considerada adequada em apenas 23,5% dos pacientes com bacteremia por P. aeruginosa carreando blaSPM-1 e letalidade de 70,6% no período de até 30 dias após a bacteremia e uma inadequação inicial dos esquemas antibióticos utilizados CONCLUSÕES: Evidenciamos a presença de um clone de P. aeruginosa resistente aos carbapenêmicos carreando blaSPM-1 que persistiu em amostras de hemocultura pelo período de 6 anos na instituição, com alta letalidade, justificando uma vigilância epidemiológica rigorosa e uma readequação dos esquemas de terapia antimicrobianos na instituição.

Seroepidemiological monitoring in sentinel animals and vectors as part of arbovirus surveillance in the state of Mato Grosso do Sul, Brazil

INTRODUCTION: From February-September 2010, seroepidemiological surveys were conducted on non-human primates and transmitter vector capture was used to investigate the possible circulation of arboviruses in the municipalities of Bonito, Campo Grande, and Jardim, State of Mato Grosso do Sul, Brazil. METHODS: A total of 65 primates from the wild and captivity were used, and potential vectors were captured using Castro and dip nets. Serum samples were tested at the Instituto Evandro Chagas, State of Pará, using the hemagglutination inhibition test to detect total antibodies against 19 different arboviruses. Virus isolation was attempted from serum samples and arthropod suspensions using newborn mice and the C6/36 cell line clone. In addition, identification of the vector species was conducted. RESULTS: From the 19 serum samples from Campo Grande, 1 sample had a 1:20 titer for Flavivirus. From the 35 samples collected in Bonito, 17 samples had antibodies to arboviruses, 4 (11.4%) were positive for Alphavirus, and 5 (14.2%) were positive for Flavivirus. Monotypic reactions were observed for the Mayaro (n = 10) and Oropouche (n = 5) viruses, and 6 (17.1%) samples had titers for >1 virus. We captured 120 Culicidae individuals that were potential arbovirus transmitters in Jardim; however, all the samples were negative for the viruses. CONCLUSIONS: Mato Grosso do Sul has a variety of vertebrate hosts and transmission vectors, thereby providing ideal conditions for the emergence or reemergence of arboviruses, including some pathogenic to human beings.