Protease inhibitor from Moringa oleifera leaves: Isolation, purification, and characterization

Protease inhibitors have great demand in medicine and biotechnology. We report here the purification and characterization of a protease inhibitor isolated from mature leaf extract of Moringa oleifera that showed maximum inhibitor activity. The protease inhibitor was purified to 41.4-fold by Sephadex G75 and its molecular mass was calculated as 23,600 Da. Inhibitory activity was confirmed by dot-blot and reverse zymogram analyses. Glycine, glutamic acid, alanine, proline and aspartic acid were found as the major amino acids of the inhibitor protein. Maximal activity was recorded at pH 7 and at 40 ���C. The inhibitor was stable over pH 5���10; and at 50 ���C for 2 h. Thermostability was promoted by CaCl2, BSA and sucrose. Addition of Zn2+ and Mg2+, SDS, dithiothreitol and -mercaptoethanol enhanced inhibitory activity, while DMSO and H2O2 affected inhibitory activity. Modification of amino acids at the catalytic site by PMSF and DEPC led to an enhancement in the inhibitory activity. Stoichiometry of trypsin���protease inhibitor interaction was 1:1.5 and 0.6 nM of inhibitor effected 50% inhibition. The low Ki value (1.5 nM) obtained indicated scope for utilization of M. oliefera protease inhibitor against serine proteases

Isolation, Stabilization and Characterization of Xanthophyll from Marigold Flower- Tagetes Erecta-L

The present paper deals with the chemistry, isolation, separation, characterisation and stabilisation of the Marigold oleoresin and its application as a natural food colorant. Marigold (Tagetes Erecta L), an ornamental plant belonging to the composite family, has a rich source of natural antioxidant-Lutein. A natural pigment, xanthophylls offer an alternative to synthetic dyes as a food colorant, due to its non-toxicity. Chromatographic separations of saponified and unsaponified oleoresin were performed and Trans-Lutein identified as the major constituent. Well-preserved flowers exhibit a high yield of Xanthophyll content (105.19 g/Kg) in contrast to the unpreserved flower sample (54.87 g/Kg), emphasizing the significance of flower preservation in the extraction of xanthophyll. The stability and amount of xanthophyll also increased from 105.19 g/Kg to 226.88 g/Kg on saponification and subsequent purification with Ethylene Dichloride

Mosquito larvae borne viruses from the central travancore region of kerala: isolation and characterization

The present study was initiated when several massive outbreaks of Chikungunya, Dengue and Japanese Encephalitis were frequently reported across the State of Kerala. Multiple symptoms persisted among the affected individuals and the public health officials were in search of aetiological agents responsible for the out breaks and, other than clinical samples no resources were available. In this context, a study was undertaken to focus on mosquito larvae to investigate the viruses borne by them which remain silently prevalent in the environment. The study was not a group specific investigation limited to either arbovirus or enterovirus, but had a broad spectrum approach. The study encompassed the viral pathogens that could be isolated, their impact when passaged through cell lines, growth kinetics, titer of the working stocks in specific cell line, the structure by means of transmission electron microscopy(TEM), the one step growth and molecular characterization using molecular tools.

Provenance, Isolation and Characterisation of Organic Matter in the Cochin Estuarine Sediment-���a Diagenetic Amino Acid Marker Scenario

Cochin estuarine system is among the most productive aquatic environment along the Southwest coast of India, exhibits unique ecological features and possess greater socioeconomic relevance. Serious investigations carried out during the past decades on the hydro biogeochemical variables pointed out variations in the health and ecological functioning of this ecosystem. Characterisation of organic matter in the estuary has been attempted in many investigations. But detailed studies covering the degradation state of organic matter using molecular level approach is not attempted. The thesis entitled Provenance, Isolation and Characterisation of Organic Matter in the Cochin Estuarine Sediment-��� A Diagenetic Amino Acid Marker Scenario��� is an integrated approach to evaluate the source, quantity, quality, and degradation state of the organic matter in the surface sediments of Cochin estuarine system with the combined application of bulk and molecular level tools. Sediment and water samples from nine stations situated at Cochin estuary were collected in five seasonal sampling campaigns, for the biogeochemical assessment and their distribution pattern of sedimentary organic matter. The sampling seasons were described and abbreviated as follows: April- 2009 (pre monsoon: PRM09), August-2009 (monsoon: MON09), January-2010 (post monsoon: POM09), April-2010 (pre monsoon: PRM10) and September- 2012 (monsoon: MON12). In order to evaluate the general environmental conditions of the estuary, water samples were analysed for water quality parameters, chlorophyll pigments and nutrients by standard methods. Investigations suggested the fact that hydrographical variables and nutrients in Cochin estuary supports diverse species of flora and fauna. Moreover the sedimentary variables such as pH, Eh, texture, TOC, fractions of nitrogen and phosphorous were determined to assess the general geochemical setting as well as redox status. The periodically fluctuating oxic/ anoxic conditions and texture serve as the most significant variables controlling other variables of the aquatic environment. The organic matter in estuary comprise of a complex mixture of autochthonous as well as allochthonous materials. Autochthonous input is limited or enhanced by the nutrient elements like N and P (in their various fractions), used as a tool to evaluate their bioavailability. Bulk parameter approach like biochemical composition, stoichiometric elemental ratios and stable carbon isotope ratio was also employed to assess the quality and quantity of sedimentary organic matter in the study area. Molecular level charactersation of free sugars and amino acids were carried out by liquid chromatographic techniques. Carbohydrates are the products of primary production and their occurrence in sediments as free sugars can provide information on the estuarine productivity. Amino acid biogeochemistry provided implications on the system productivity, nature of organic matter as well as degradation status of the sedimentary organic matter in the study area. The predominance of carbohydrates over protein indicated faster mineralisation of proteinaceous organic matter in sediments and the estuary behaves as a detrital trap for the accumulation of aged organic matter. The higher lipid content and LPD/CHO ratio pointed towards the better food quality that supports benthic fauna and better accumulation of lipid compounds in the sedimentary environment. Allochthonous addition of carbohydrates via terrestrial run off was responsible for the lower PRT/CHO ratio estimated in thesediments and the lower ratios also denoted a detrital heterotrophic environment. Biopolymeric carbon and the algal contribution to BPC provided important information on the better understanding the trophic state of the estuarine system and the higher values of chlorophyll-a to phaeophytin ratio indicated deposition of phytoplankton to sediment at a rapid rate. The estimated TOC/TN ratios implied the combined input of both terrestrial and autochthonous organic matter to sedimentsAmong the free sugars, depleted levels of glucose in sediments in most of the stations and abundance of mannose at station S5 was observed during the present investigation. Among aldohexoses, concentration of galactose was found to be higher in most of the stationsRelative abundance of AAs in the estuarine sediments based on seasons followed the trend: PRM09-Leucine > Phenylalanine > Argine > Lysine, MON09-Lysine > Aspartic acid > Histidine > Tyrosine > Phenylalanine, POM09-Lysine > Histadine > Phenyalanine > Leucine > Methionine > Serine > Proline > Aspartic acid, PRM10-Valine > Aspartic acid > Histidine > Phenylalanine > Serine > Proline, MON12-Lysine > Phenylalanine > Aspartic acid > Histidine > Valine > Tyrsine > MethionineThe classification of study area into three zones based on salinity was employed in the present study for the sake of simplicity and generalized interpretations. The distribution of AAs in the three zones followed the trend: Fresh water zone (S1, S2):- Phenylalanine > Lysine > Aspartic acid > Methionine > Valine ��� Leucine > Proline > Histidine > Glycine > Serine > Glutamic acid > Tyrosine > Arginine > Alanine > Threonine > Cysteine > Isoleucine. Estuarine zone (S3, S4, S5, S6):- Lysine > Aspartic acid > Phenylalanine > Leucine > Valine > Histidine > Methionine > Tyrosine > Serine > Glutamic acid > Proline > Glycine > Arginine > Alanine > Isoleucine > Cysteine > Threonine. Riverine /Industrial zone (S7, S8, S9):- Phenylalanine > Lysine > Aspartic acid > Histidine > Serine > Arginine > Tyrosine > Leucine > Methionine > Glutamic acid > Alanine > Glycine > Cysteine > Proline > Isoleucine > Threonine > Valine. The abundance of AAs like glutamic acid, aspartic acid, isoleucine, valine, tyrosine, and phenylalanine in sediments of the study area indicated freshly derived organic matter.

Differential induction, isolation, physicochemical and molecular characterization of temperate phages of environmental Vibrio cholerae as evidence of phage mediated Horizontal Gene Transfer

The resurgence of the enteric pathogen Vibrio cholerae, the causative organism of epidemic cholera, remains a major health problem in many developing countries like India. The southern Indian state of Kerala is endemic to cholera. The outbreaks of cholera follow a seasonal pattern in regions of endemicity. Marine aquaculture settings and mangrove environments of Kerala serve as reservoirs for V. cholerae. The non-O1/non-O139 environmental isolates of V. cholerae with incomplete ���virulence casette��� are to be dealt with caution as they constitute a major reservoir of diverse virulence genes in the marine environment and play a crucial role in pathogenicity and horizontal gene transfer. The genes coding cholera toxin are borne on, and can be infectiously transmitted by CTX��, a filamentous lysogenic vibriophages. Temperate phages can provide crucial virulence and fitness factors affecting cell metabolism, bacterial adhesion, colonization, immunity, antibiotic resistance and serum resistance. The present study was an attempt to screen the marine environments like aquafarms and mangroves of coastal areas of Alappuzha and Cochin, Kerala for the presence of lysogenic V. cholerae, to study their pathogenicity and also gene transfer potential. Phenotypic and molecular methods were used for identification of isolates as V. cholerae. The thirty one isolates which were Gram negative, oxidase positive, fermentative, with or without gas production on MOF media and which showed yellow coloured colonies on TCBS (Thiosulfate Citrate Bile salt Sucrose) agar were segregated as vibrios. Twenty two environmental V. cholerae strains of both O1 and non- O1/non-O139 serogroups on induction with mitomycin C showed the presence of lysogenic phages. They produced characteristic turbid plaques in double agar overlay assay using the indicator strain V. cholerae El Tor MAK 757. PCR based molecular typing with primers targeting specific conserved sequences in the bacterial genome, demonstrated genetic diversity among these lysogen containing non-O1 V. cholerae . Polymerase chain reaction was also employed as a rapid screening method to verify the presence of 9 virulence genes namely, ctxA, ctxB, ace, hlyA, toxR, zot,tcpA, ninT and nanH, using gene specific primers. The presence of tcpA gene in ALPVC3 was alarming, as it indicates the possibility of an epidemic by accepting the cholera. Differential induction studies used ��ALPVC3, ��ALPVC11, ��ALPVC12 and ��EKM14, underlining the possibility of prophage induction in natural ecosystems, due to abiotic factors like antibiotics, pollutants, temperature and UV. The efficiency of induction of prophages varied considerably in response to the different induction agents. The growth curve of lysogenic V. cholerae used in the study drastically varied in the presence of strong prophage inducers like antibiotics and UV. Bacterial cell lysis was directly proportional to increase in phage number due to induction. Morphological characterization of vibriophages by Transmission Electron Microscopy revealed hexagonal heads for all the four phages. Vibriophage ��ALPVC3 exhibited isometric and contractile tails characteristic of family Myoviridae, while phages ��ALPVC11 and ��ALPVC12 demonstrated the typical hexagonal head and non-contractile tail of family Siphoviridae. ��EKM14, the podophage was distinguished by short non-contractile tail and icosahedral head. This work demonstrated that environmental parameters can influence the viability and cell adsorption rates of V. cholerae phages. Adsorption studies showed 100% adsorption of ��ALPVC3 ��ALPVC11, ��ALPVC12 and ��EKM14 after 25, 30, 40 and 35 minutes respectively. Exposure to high temperatures ranging from 50��C to 100��C drastically reduced phage viability. The optimum concentration of NaCl required for survival of vibriophages except ��EKM14 was 0.5 M and that for ��EKM14 was 1M NaCl. Survival of phage particles was maximum at pH 7-8. V. cholerae is assumed to have existed long before their human host and so the pathogenic clones may have evolved from aquatic forms which later colonized the human intestine by progressive acquisition of genes. This is supported by the fact that the vast majority of V. cholerae strains are still part of the natural aquatic environment. CTX�� has played a critical role in the evolution of the pathogenicity of V. cholerae as it can transmit the ctxAB gene. The unusual transformation of V. cholerae strains associated with epidemics and the emergence of V. cholera O139 demonstrates the evolutionary success of the organism in attaining greater fitness. Genetic changes in pathogenic V. cholerae constitute a natural process for developing immunity within an endemically infected population. The alternative hosts and lysogenic environmental V. cholerae strains may potentially act as cofactors in promoting cholera phage ������blooms������ within aquatic environments, thereby influencing transmission of phage sensitive, pathogenic V. cholerae strains by aquatic vehicles. Differential induction of the phages is a clear indication of the impact of environmental pollution and global changes on phage induction. The development of molecular biology techniques offered an accessible gateway for investigating the molecular events leading to genetic diversity in the marine environment. Using nucleic acids as targets, the methods of fingerprinting like ERIC PCR and BOX PCR, revealed that the marine environment harbours potentially pathogenic group of bacteria with genetic diversity. The distribution of virulence associated genes in the environmental isolates of V. cholerae provides tangible material for further investigation. Nucleotide and protein sequence analysis alongwith protein structure prediction aids in better understanding of the variation inalleles of same gene in different ecological niche and its impact on the protein structure for attaining greater fitness of pathogens. The evidences of the co-evolution of virulence genes in toxigenic V. cholerae O1 from different lineages of environmental non-O1 strains is alarming. Transduction studies would indicate that the phenomenon of acquisition of these virulence genes by lateral gene transfer, although rare, is not quite uncommon amongst non-O1/non-O139 V. cholerae and it has a key role in diversification. All these considerations justify the need for an integrated approach towards the development of an effective surveillance system to monitor evolution of V. cholerae strains with epidemic potential. Results presented in this study, if considered together with the mechanism proposed as above, would strongly suggest that the bacteriophage also intervenes as a variable in shaping the cholera bacterium, which cannot be ignored and hinting at imminent future epidemics.

Effects of tubers of the Jerusalem artichoke (Helianthus tuberosus) and potatoes (Solanum tuberosum) on the intestinal microbiota of pigs and evaluation of a procedure for quantification of microbial mass in pig faeces

Die Mikrobiota im Gastrointestinaltrakt (GIT) spielt eine bedeutende Rolle beim Fermentationsprozess im Bezug auf die N��hrstoffversorgung sowie die Gesundheit des Darms und des gesamten Organismus. Inulin und resistente St��rke (RS) konnten als pr��biotisch wirksame Substanzen identifiziert werden und sind jeweils auch in den Knollen der Topinamburpflanze (Helianthus tuberosus) und in Kartoffeln (Solanum tuberosum) enthalten. Da sie ebenfalls energiereiche Futtermittel f��r Schweine sind, war es das Ziel der ersten beiden Studien, die Auswirkungen der Aufnahme von Topinamburknollen und Kartoffeln auf die intestinale Mikrobiota und Parameter des Immunsystems bei Endmastschweinen zu bestimmen. In der dritten Studie wurde die mikrobielle Biomasse quantitativ mit einem Verfahren zur Isolation von Bakterien in einer Fl��ssigkeit durch Hochgeschwindigkeits-Zentrifugation erfasst und der bakteriell gebundene Stickstoff (MP-N) mit dem bakteriellen und endogenem Kotstickstoff (BEDN) verglichen. Im ersten Versuch wurden 72 Endmastschweine in einem Freilandhaltungssystem in eine Kontroll- (CT), die mit Kraftfutter entsprechend des Bedarfs der Tiere f��r ein Leistungsniveau von 700 g t��glichem Lebendmassezuwachs versorgt wurde, und eine Versuchsvariante (ET) aufgeteilt. In der Versuchsvariante erhielten die Tiere nur 70% der Kraftfuttermenge der Kontrollvariante, hatten aber Zugang zu einer abgeteilten Fl��che, auf der Topinamburknollen angebaut waren. Die freie Aufnahme von Topinamburknollen wurde auf 1���24 kg Trockenmasse (TM)/Tag bestimmt, entsprechend einer Inulinaufnahme von durchschnittlich 800 g/Tag. W��hrend sich die Wachstumsleistung in der Kontrollvariante auf 0���642 �� 0���014 kg/Tag belief, war sie in der Versuchsvariante mit 0���765 �� 0���015 kg/Tag (P=0���000) h��her. Die freie Verf��gbarkeit von Inulin und Fructo-oligosacchariden (FOS) im GIT der Schweine erh��hte die Keimzahlen der anaeroben Bakterien (P=0���000), Laktobazillen (P=0���046) und Hefen (P=0���000) signifikant und verringerte das Vorkommen von Clostridium perfringens im Schweinekot erheblich von lg 5���24 �� 0���17 kolonie-bildende Einheiten pro g Frischmasse (KbE/ g FM) in der Kontrollvariante auf lg 0���96 �� 0���20 KbE/ g FM in der Versuchsvariante (P=0���000). C-reaktives Protein (CRP) und Antik��rper gegen Lipopolysaccharide (LPS) von Escherichia coli J5 lie��en keine Unterschiede zwischen den F��tterungsvarianten erkennen. In der zweiten Untersuchung wurden 58 Endmastschweine einer Kontrollvariante (CT), die bedarfsgerecht mit einer Kraftfuttermischung f��r ein Leistungsniveau von 700 g Tageszunahmen gef��ttert wurde, und zwei Versuchsvarianten zugeteilt. Die Versuchsvarianten erhielten eine Menge von 1���2 kg TM ged��mpften Kartoffeln (potato treatment, PT) oder ged��mpften und einsilierten Kartoffeln (silage treatment, ST) pro Tag und nur 46% bzw. 43% der Menge des Kraftfutters der Kontrollvariante. Die Wachstumsleistung und Schlachtk��rperzusammensetzung lie��en keine signifikanten Unterschiede zwischen den Varianten erkennen. Im PT und ST waren gegen��ber dem CT im Kot der pH-Wert sowie die Gehalte von TM, Neutral-Detergenz-Faser (NDF), unverdautem Futterstickstoff (UDN) und teilweise von S��ure-Detergenz-Faser (ADF) signifikant niedriger (P=0���000) und die von Ammonium (NH4) und Ammoniumstickstoff (NH4-N) signifikant h��her (P=0���000). Das hohe Angebot von hitzebehandelten Kartoffeln f��hrte zu einer erheblichen Verringerung von E. coli (P=0���000), C. perfringens (P=0���000) und Immunoglobulin A gegen LPS von E. coli J5 (P=0���001). Dar��ber hinaus waren in der ersten Versuchsperiode im ST die aeroben und anaeroben Gesamtkeimzahlen sowie die Laktobazillen und Hefen gegen��ber dem PT signifikant erh��ht. Die Unterschiede in der Mikrobiota zwischen der Kontroll- und Versuchsvarianten weisen auf die positiven Auswirkungen von Topinamburknollen und hitzebehandelten Kartoffeln auf die Mikrobiota im hinteren Darmabschnitt hin. Das Ziel der dritten Untersuchung war die Modifizierung des Verfahrens zur Isolation von Bakterien in einer Fl��ssigkeit mittels verschiedener Zentrifugationsschritte, um ein mikrobielles Pellet (MP) zu erhalten, welches die quantitative Abtrennung und Erfassung der Bakterien in Schweinekot erm��glicht. Zus��tzlich wurde der BEDN Anteil sowie die Gehalte der Aminozucker Galactosamin, Glucosamin, Mannosamin und Muramins��ure im Kot und im MP bestimmt. Die untersuchten Kotproben stammten von Schweinen eines Phosphor (P) Stoffwechselversuch. Zehn m��nnlich-kastrierte Schweine mit einem durchschnittlichen Lebendgewicht von 51���1 �� 8���5 kg wurden einzeln in Stoffwechselk��figen gehalten. Die Tiere wurden f��nf F��tterungsvarianten zugeteilt, die dem Bedarf der Tiere f��r ein Leistungsniveau von 700 g Tageszunahmen entsprachen, in den Rationen 2 bis 5 jedoch eine P-Gehalt unter dem Tagesbedarf der Tiere aufwiesen und in den Rationen 3 bis 5 mit abgestuften Gehalten von 50, 100 sowie 200 mg/kg einer experimentellen Phytase erg��nz waren. Die Absenkung des P Gehaltes im Futter verringerte den Asche- (P=0���024) und Trockenmassegehalt im Kot (P=0���017) sowie die P Konzentration im MP (P=0���000) signifikant. Die mikrobielle Biomasse im Kot wurde durch die Wiegung des MP auf durchschnittlich 467 g/kg TM bestimmt. Der Stickstoffgehalt im Kot betrug im Mittel 46���1 g/kg TM und der in die Bakterienmasse eingebaute Stickstoffanteil 27���1 g/kg TM bzw. 58% vom Gesamtstickstoffgehalt im Kot. Die BEDN Fraktion wurde auf 73% am Kotstickstoff bestimmt. Der P-Gehalt im Kot sowie der N Gehalt im MP mit durchschnittlichen 10���4 und 57���9 g/kg TM lagen im Bereich von Literaturangaben. Die P Gehalte im MP schwankten in Abh��ngigkeit von der Zugabe von Phytase signifikant (P=0���000) von 1���8 bis 4���8 g/kg TM. Die Aminozucker wiesen keine signifikanten unterschiede zwischen F��tterungsvarianten auf und lagen im Bereich von Werten von Rinderkot. Ergebnisse weisen darauf hin, dass die angewandte Methode zur direkten Quantifizierung der mikrobiellen Biomasse geeignet ist.

Diazafluoren-9-yliden als Bindungsmotiv f��r Metallfragmente in kreuzkonjugierten ��-Systemen

In der vorliegenden Dissertation wurden kreuzkonjugierte organische Verbindungen basierend auf Diazafluorenmethyliden- sowie Dipyridylmethyliden-Bausteinen synthetisiert, die zum einen photoredoxaktive Metallfragmente komplexieren k��nnen und zum anderen erweiterte ��-konjugierte Pfade auf der Grundlage von Alkineinheiten erm��glichen. Das kreuzkonjugierte Motiv wurde ��ber die Kupplung von Alkineinheiten an halogenierte Methyliden-Einheiten, den so genannten Dibromolefinen, zug��nglich gemacht. Zur Synthese von Dibromolefinen wurden verschiedene Methoden untersucht. Literaturbekannte Methoden wie die Wittig-Reaktion und ihre Modifikationen sowie die Corey-Fuchs-Reaktion konnten f��r die Diazafluoreneinheit nicht erfolgreich angewendet werden. Bei einer mikrowellenunterst��tzten Reaktion konnte sowohl ausgehend von Diazafluoren-9-on als auch von Di-2-pyridylketon eine Dibromolefinierung (55 % und 65 %) erreicht werden. Die Eignung der Mikrowellenstrahlung f��r Dibromolefinierungsreaktionen nach Corey und Fuchs wurde weiterhin an verschiedenen Aldehyden und Ketonen untersucht. In den meisten F��llen konnten gute bis sehr gute Ergebnisse erzielt werden. Durch die erfolgreiche Synthese von Dibromolefinen ��ber Mikrowellensynthese wurde die Realisierung von diversen ��-konjugierten Systemen m��glich. Dies erfolgte exemplarisch durch die Kupplung der Alkine 5-Ethinyl-2,2���-bipyridin, 1-(Ferrocenylethinyl)-4-(ethinyl)benzol, Tri(tolyl)propin sowie der TIPS- und TMS-Acetylene. Neben der Vielfalt an M��glichkeiten zur Funktionalisierung von Dipyridyl- und Diazafluorenbausteinen zeigte sich zudem, dass sogar r��umlich anspruchsvolle Verbindungen wie die geminale angeordneten volumin��sen Tri(tolyl)propinyl-Substituenten an der Doppelbindung erfolgreich synthetisiert werden k��nnen. Die Koordinationseigenschaften der neu synthetisierten Verbindungen konnten durch Umsetzungen der Diazafluoren- und Dipyridylverbindungen mit PdCl2 und [RuCl2(bpy)2] erfolgreich gezeigt werden. Im Hinblick auf die Herstellung von Funktionsmaterialien eignen sich die Endiin-Strukturmotive aufgrund von diversen Variationsm��glichkeiten wie Koordination von ��bergangsmetallen sowie Funktionalisierung der Peripherie gut. Dadurch k��nnen die elektronischen Eigenschaften wie die Absorption oder elektrochemische Potentiale der Verbindungen modifiziert werden. Die UV/Vis-Spektren der neu synthetisierten Verbindungen zeigen, dass Absorptionen in l��ngerwelligen Bereichen durch Verl��ngerung des Konjugationspfades gesteuert werden k��nnen. Zudem lassen sich weitere photophysikalische Eigenschaften wie MC-, LC-, LMCT- oder MLCT-��berg��nge durch Koordination von Metallen generieren. Die elektrochemischen Potentiale der Dipyridyl- und Diazafluorenbausteine konnten durch Anbindung von verschiedenen Substituenten beeinflusst werden. Es zeigte sich, dass sich die Reduktionswellen im Vergleich zu denen der Ketone zu niedrigeren Potentialen verschieben, wenn Alkine an die Dipyridylmethyliden- und Diazafluorenmethyliden-Bausteine gekn��pft wurden. Zudem konnte beobachtet werden, dass die Signale nicht immer reversibel sind. Insbesondere die Dipyridylverbindungen zeichneten sich durch irreversible Reduktionswellen aus. Die Realisierung von ��-konjugierten Systemen gelang auch mit cyclischen kohlenstoffbasierten Verbindungen. ��ber das separat synthetisierte 2,2���-Diethinyltolan konnte eine cyclische Verbindung, ein dehydroannulen-radialenisches System, erfolgreich hergestellt werden. Die Koordination von redoxaktiven Metallzentren wie [Ru(bpy)2] konnte f��r diese Verbindung ebenfalls erfolgreich gezeigt werden. Die elektronische Wechselwirkung zwischen dem Metallzentrum und dem dehydroannulenischen System k��nnte sowohl ��ber theoretische Methoden (zeitabh��ngige Dichtefunktionaltheorie) als auch experimentell wie z. B. ��ber transiente Absorptionsspektroskopie untersucht werden. Diese zuk��nftig durchzuf��hrenden Untersuchungen k��nnen Aufschluss ��ber die Ladungstransferraten und -dauer geben. Im Hinblick auf die Realisierung von Modellverbindungen f��r molekulare Dr��hte wurden lineare Systeme basierend auf der Diazafluoreneinheit synthetisiert. Zur Synthese von derartigen Systemen war es zun��chst notwendig, die Dibromolefine unsymmetrisch zu alkinylieren. Die unsymmetrische Substitution gestaltete sich als Herausforderung, da eine Einfachkupplung mit einem Acetylen nicht m��glich war. In den meisten F��llen wurden zweifach substituierte Spezies mit den identischen Alkinen erhalten. Die besten Ausbeuten konnten durch die konsekutive Zugabe von TIPS-Acetylen und darauffolgend TMS-Acetylen in die Reaktionsmischung erhalten werden. Offenbar spielt der r��umliche Anspruch des Erstsubstituenten in diesem Zusammenhang eine Rolle. Die selektive Entsch��tzung der unterschiedlich silylierten Verbindungen erfolgte mit K2CO3 in MeOH/THF (1:1). Die oxidative Homokupplungsreaktion erfolgte ohne Isolierung der entsch��tzten Spezies, da diese instabil ist und zur Polymerisation neigt. Aufgrund der Instabilit��t der entsch��tzten Spezies sowie m��glichen Nebenreaktionen waren die Ausbeuten sowohl bei der TIPS-gesch��tzten Verbindung als auch bei der TTP-gesch��tzten Verbindung gering. Versuche, lineare Systeme von dipyridylbasierten Verbindungen zu erhalten, schlugen fehl. Die ��-konjugierten Systeme lassen aufgrund der effektiven ��berlappung der beteiligten ��-Orbitale hohe Ladungstr��germobilit��ten vermuten. Die im Rahmen dieser Arbeit synthetisierten Verbindungen k��nnten mit Schwefelverbindungen die Anbindung an Elektroden zulassen, wor��ber die Leitf��higkeiten der Verbindungen gemessen werden k��nnten.

Effects of SB-205384, a positive modulator of (alfa)3-subunit-containing GABA-A receptors, on isolation-induced aggressions in male mice. 'Efectos del SB-205384, un modulador positivo de los receptores GABA-A que contienen la subunidad (alfa)3, sobre la agresi??n inducida por aislamiento en ratones machos'

Resumen tomado de la publicaci??n

Plasmapheresis vs. immunoglobulin in autoimmune neurologic diseases: a meta-analysis

Objectives: to evaluate the efficacy and safety of human immunoglobulin versus plasmapheresis in the management of autoimmune neurologic diseases. Likewise, length of hospital stay and duration of ventilator support were compared. Methods: Randomized controlled trials and analytical observational studies of more than 10 cases, were reviewed. Cochrane Neuromuscular Disease Group trials, MEDLINE, EMBASE, HINARI Ovid, the Database of abstracts of reviews of effectiveness and the Economic evaluation Database were searched as data source. Reference lists were examined for further relevant articles. A random-effect model was used to derive a pooled risk ratio. Results: 725 articles were found and 27 met the criteria for a population studied of 4717 cases: 14 articles were about Guillain Barr�� syndrome, 10 of Myasthenia Gravis, one of Sydenham Chorea, one of Chronic inflammatory demyelinating polyneuropathy, and one of PANDAS. No evidence was found in favor of any of the two treatments as regards effectiveness (OR 0.94, IC 0.63 ��� 1.41, p= 0.77) or ventilator support time; IGIV had a significant better safety profile than plasmapheresis (OR 0.70, IC 0.51 ��� 0.96, p= 0.03) and patients needed less time of hospital stay (p=0.03). Conclusions: There is no evidence for superiority in the effectiveness of immunoglobulin or plasmapheresis in the management of autoimmune neurologic diseases. Nevertheless, patients treated with immunoglobulin have statistically significant less adverse effects, a shorter hospital stay and a tendency of less ventilator support time. These premises could lead to fewer costs for health services but an economic study should be done.

Fragments d'hist??ria cultural per una composici?? pedag??gica : propostes per pensar l'experi??ncia educativa

Resumen basado en el de la publicaci??n

L???educaci?? sentimental d???una joventut perduda : fragments de vida boh??mia del Par??s finisecular i la Gran Guerra

Resumen basado en el de la publicaci??n

An��lisi polif��sica de soques de "Pseudomonas fluorescens" potencials agents de biocontrol de malalties de fruiters

Molts bacteris del grup fluorescent del g��nere Pseudomonas s��n capa��os de controlar malalties de les plantes causades per fongs i bacteris fitopat��gens (ACBs) o mostren activitat com a bacteris promotors del creixement de les plantes (BPCPs). S'han descrit diversos metab��lits que intervenen de manera important en la seva activitat com a ACBs i BPCPs entre els quals en destaquen el 2,4-diacetilfloroglucinol (Phl), ��cid fenazin-1-carbox��lic (PCA), Pirrolnitrina (Prn), ��cid cianh��dric (HCN), ��cid 3-indolac��tic (IAA), sider��fors i quitinases. L'objectiu principal del nostre treball ha estat la comparaci�� de les caracter��stiques d'un grup de Pseudomonas del grup fluorescent utilitzant una aproximaci�� polif��sica amb la finalitat d'establir possibles relacions entre algunes de les caracter��stiques i la capacitat d'actuar com a ACB o BPCP. Atesa la import��ncia en el biocontrol de la producci�� de metab��lits com Phl, PCA i Prn, l'objectiu preliminar ha estat la recerca i obtenci�� de soques productores d'aquests metab��lits. Per assolir aquest objectiu s'ha emprat una aproximaci�� molecular basada en la detecci�� dels gens biosint��tics implicats en la seva producci�� en lloc de la detecci�� directa dels metab��lits per evitar els efectes que poden tenir les condicions de cultiu en la inducci�� o repressi�� de la seva s��ntesi. S'han realitzat diferents protocols basats (i) en la cerca assistida de productors mitjan��ant l'��s de marcadors fenot��pics i posterior confirmaci�� per PCR i, (ii) en l'��s de la PCR per a la detecci�� dels gens directament dels extractes bacterians, d'enriquiments d'aquests extractes i la realitzaci�� de la hibridaci�� en col��nies per al posterior a��llament. La cerca assistida de productors de Phl mitjan��ant marcadors fenot��pics i posteriorment la utilitzaci�� de t��cniques moleculars (amplificaci�� per PCR del gen phlD), ha estat el millor m��tode en el tipus de mostres processades en el nostre treball, on la proporci�� de productors ��s relativament baixa. En total s'han a��llat a partir de diversos ambients 4 soques portadores dels gens de la s��ntesi de PCA, 15 de Phl i 1 de Prn. S'ha constitu��t una col��lecci�� de 72 soques de Pseudomonas del grup fluorescent que inclou 18 a��llats propis portadors dels gens biosint��tics necessaris per la producci�� de Phl PCA i Prn; 6 soques de refer��ncia procedents de col��leccions de cultius tipus, 14 soques productores dels diferents antibi��tics cedides per altres investigadors i una selecci�� de 34 soques procedents d'un treball previ realitzat en el nostre grup de recerca. A la col��lecci�� s'hi troben soques candidates a ACB i BPCP de diverses malalties i plantes. Les 72 soques s'han caracteritzat fenot��pica i genot��picament. La caracteritzaci�� fenot��pica s'ha portat a terme mitjan��ant la identificaci�� a nivell d'esp��cie amb galeries API 20NE i proves bioqu��miques espec��fiques; la producci�� de metab��lits com PCA, Phl, Prn, IAA, HCN, quitinases i sider��fors mitjan��ant l'��s de diferents t��cniques; antagonisme in vitro en diversos medis enfront dos fongs (Stemphylium vesicarium i Penicillium expansum) i tres bacteris fitopat��gens (Erwinia amylovora, Pseudomonas syringae pv. syringae i Xanthomonas arboricola pv. juglandis); l'efic��cia de la inhibici�� de la infecci�� en bioassaigs in vivo sobre material vegetal enfront els fongs P. expansum en poma i S. vesicarium en fulles de perera i enfront el bacteri E. amylovora en fruits immadurs de perera i, finalment, en assaigs de promoci�� de creixement en dos portaempelts comercials de Prunus. Cal destacar que P. expansum causa la podridura blava en pomes i peres en postcollita, S. vesicarium la taca bruna de la perera i E. amylovora el foc bacteri�� de les ros��cies. El nombre de soques de Pseudomonas, sobre el total de les 72 estudiades, productores d'IAA (4) i quitinases (6) ��s baix, mentre que ��s elevat en el cas del HCN (32), que a m��s est�� associat a la producci�� de Phl. Els resultats obtinguts en l'antagonisme in vitro han mostrat en el cas dels bacteris que ��s dependent del patogen indicador i del medi de cultiu. La pres��ncia o abs��ncia de ferro no sembla ser un factor que potenci�� l'antagonisme. En el cas dels fongs no s'ha observat per��, influ��ncia del medi de cultiu emprat. En el total de 72 soques s'ha observat un percentatge baix de soques que manifesten antagonisme en tots els medis assajats vers 3 o 4 dels pat��gens (7). Solament 2 d'aquestes 7 soques han mostrat ser tamb�� efectives en bioassaigs d'inhibici�� de les infeccions causades per 2 dels 3 pat��gens assajats. Algunes de les soques efectives en els bioassaigs no s��n antagonistes in vitro en cap dels medis assajats enfront el mateix patogen. En el cas de la promoci�� del creixement, s'han observat m��s soques promotores del creixement del portaempelts de prunera Marianna 2624 que no en l'h��brid de presseguer-ametller GF677 i les efic��cies assolides s��n tamb�� majors en el cas de Marianna 2624, detectant una elevada especificitat soca/portaempelts La caracteritzaci�� genot��pica s'ha realitzat mitjan��ant l'an��lisi dels polimorfismes en la longitud dels fragments de restricci�� de DNA ribosomal (RFLP-rDNA) i l'an��lisi dels polimorfismes en la longitud dels fragments de macrorestricci�� gen��mica de DNA cromos��mic separats per electroforesi en camp polsant (MRFLP-PFGE). Ambdues an��lisis van mostrar una gran heterogene��tat gen��tica entre les soques caracteritzades i no s'ha pogut relacionar les agrupacions obtingudes amb les caracter��stiques fenot��piques o capacitat d'actuar com a ACB o BPCP. Els patrons de macrorestricci�� gen��mica (MRFLP-PFGE) del bacteri model P. fluorescens EPS288 s��n estables en el temps i independents de les condicions de cultiu assajades al laboratori o en mostres naturals, mostrant ser una t��cnica efica�� en la identificaci�� de rea��llats de mostres naturals inoculades pr��viament amb el bacteri. Una selecci�� de soques que comparteixen el fet de produir floroglucinol s'han caracteritzat mitjan��ant RFLP i seq��enciaci�� del gen phlD. S'ha establert una relaci�� entre les agrupacions obtingudes en les an��lisis RFLP-rDNA, RFLP-phlD i les seq����ncies del gen. En l'an��lisi filogen��tica de les seq����ncies del gen phlD s'ha observat un elevat grau de polimorfisme obtenint-se 3 agrupacions principals. Les agrupacions semblen relacionar-se amb els patrons de producci�� de metab��lits (Phl, HCN i Prn en una primera agrupaci��; Phl i HCN en la segona i solament Phl en la tercera), per�� aquestes no s'han pogut relacionar amb l'origen geogr��fic de les soques o la seva activitat com a ACBs i/o BPCP. Amb les dades obtingudes de la caracteritzaci�� fenot��pica i genot��pica s'ha realitzat una an��lisi multivariant (correspond��ncies, correlacions d'Spearman i de freq����ncies amb variables categ��riques). S'ha demostrat la import��ncia de disposar d'una t��cnica que permeti depurar una col��lecci�� de soques descartant les soques gen��ticament id��ntiques, ja que influeixen en els resultats de les an��lisis. Pels tres pat��gens assajats com a indicadors i els dos portaempelts emprats, no s'ha observat cap correlaci�� entre la inhibici�� de la infecci�� o la promoci�� del creixement amb les caracter��stiques fenot��piques i genot��piques de les soques que fos significatiu i consistent en les tres t��cniques emprades.