985 resultados para 196-808


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考虑了ASE效应和端面反射率的影响,建立了锥形激光功率放大器的Rigrod模型并引进了新的迭代方法,讨论了ASE效应和端面反射率对放大器增益G及信噪比S/N的影响。

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本研究以本实验室分离的有机磷农药高效降解菌Pseudomonas sp.WBC-3为材料,通过X-射线晶体学研究确定了甲基对硫磷水解酶(MPH)的三维结构,并在结构基础上探讨了甲基对硫磷水解酶的结构与功能的关系。利用生物信息学手段对Pseudomonas sP.WBC-3中的甲基对硫磷水解酶基因进行分析,推测论H的结构基因的编码序列为398-1393 bp,蛋白大小为331个氨基酸,且具有一个由35个氨基酸组成的信号肤。同时发现,MPH是一个不同于具有相似生物学功能的有机磷水解酶(OPH)的蛋白质,而且在PDB库中尚无与MPH同源性较高的蛋白结构。晶体的生长依赖于高纯度的蛋白质的获得。在本研究中,我们采用阳离子交换树脂和凝胶过滤两步纯化获得了纯度达95%以上的MPH溶液,并采用等离子体质谱仪测定MPH为含锌的金属酶。采用悬滴蒸汽扩散法获得了PI和P43212两种晶型的晶体以及硒标记的MPH晶体。在获得单晶以后,最终利用尸43212晶型的晶体通过多波长反常散射法(MAD)解析了MPH的三维结构。MPH的晶体结构为同源二聚体,具有与OPH类似的二价金属离子组成的活性中心:其中一个单体含有两个锌离子,另一个单体含有一个锌离子和一个锅离子;每个单体的两个金属离子通过AsP 151、His 152、His 302、His 147、His 149、His 234和A印255与蛋白质相连,一个H2O分子桥连于两个金属离子,还有一个H2O分子只与一个金属离子配位。在MPH三维结构知识的基础上,利用分子生物学手段对MPH活性中心附近可能的底物结合氨基酸位点进行了研究。通过定点突变获得了针对Trp179,Phe 196和Phe 119三个位点的六个突变体W179F、W179A、F196W、F196A、FllgW和Fll9A,系统比较了突变体与野生酶的催化动力学特点。结果表明Trp 179,Phel%是MPH活性中心的底物结合部位的关键氨基酸。而Phe 119在与底物结合中的作用不明显。

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