882 resultados para trihydrogen cation (H3 )
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The formation and the isolation of fluoroboron salts, (D2BF2+)(PF6-), (DD'BF2+)(PF6-) and (D3BF2+)(PF6-)2, have been carried out. 1,8-Diazabicyclo [5,4.0]undec-7-ene (DBU) and 1,5-diazabicyclo[4,3,O]non-5-ene (DBN), extremely strong organic bases, were introduced into the fluoroboron cation systems and induced a complicated redistribution reaction in the D/BF3/BC13 systems. The result was the formation of all BFnCI4-n-, D.BFnCI3-n and fluoroboron cation species which were detected by 19p and 11B NMR spectrometry. The displacement reaction of CI- from these D.BFnCI3-n (n = 1 and 2) species by the second entering ligand is much faster than in other nitrogen donor containing systems which have been previously studied. Tetramethylguanidine, oxazolines and thiazolines can also produce similar reactions in D/BF3/BCI3 systems, but no significant BFnC4-n- species were observed. As well as influences of their basicity and their steric hindrance, N=C-R(X) (X = N, 0 or S) and N=C( X)2 (X = N or S) structures of ligands have significant effects on the fonnationof fluoroboron cations and the related NMR parameters. D3BF2+ and some D2BF2+ show the expected inertness, but (DBU)2BF2+ shows an interestingly high reactivity. (D2BF2+)(X-) formed from weak organic bases such as pyridine can react with stronger organic bases and form DD'BF2+ and D'2BF2+ in acetone or nitromethane. Fast atom bombardment mass spectrometry is doubly meaningful to this work. Firstly, FABMS can be directly applied to the complicated fluoroboron cation containing solution systems as an excellent complementary technique to multinuclear NMR. Secondly, the gas-phase ion substitution reaction of (D2BF2+)(PF6-) with the strong organic bases is successfully observed in a FABMS ion source when the B-N bond is not too strong in these cations.
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I t was hypothesized that the freeze/thaw cycles endured by icewine grapes would change their chemical composition, resulting in unique chemical fingerprint and sensory properties, and would be affected by harvest date (HD) and crop level (CL). The objectives were: 1) to identify odour-active compounds using gas chromatographic and sensory analysis; 2) to determine the effect of CL and HD on these compounds; 3) to determine the icewine sensory profiles; 4) to correlate analytical and sensory results for an overall icewine profile. CharmAnalysis determined the Top 15 odour-potent compounds in Vidal and Riesling icewine and table wines; 24 and 23 compounds, respectively. The majority of the compounds had the highest concentrations in the icewines compared to table wines. These compounds were used as the foundation for assessing differences in icewine chemical profiles from different HD and CL. Vidal and Riesling icewine were made from grapes picked at different HD; HI : 19 December; H2: 29 December; H3: 18 January; H4: 11 February (Vidal only). HI wines differed from H3 and H4 wines in both Vidal and Riesling for aroma compounds and sensory profiles. - ThreeCL [control (fully cropped), cluster thin at fruit set to one basal cluster/shoot (TFS), and cluster thin at veraison to one basal cluster/shoot (TV)] were evaluated for Riesling and Vidal cultivars over two seasons. Vidal icewines had the highest concentration of aroma compounds in the control and TV icewines in 2003 and in TFS icewines in 2004. In Riesling, most aroma compounds had the highest concentration in the TV icewines and the lowest concentration in the TFS wine for both years. The thinned treatments were associated with almost all of the sensory attributes in both cultivars, both years. HD and CL affected the chemical variables, aroma compounds and sensory properties of Vidal and Riesling icewines and freeze/thaw events changed their sensory profile. The most odour-potent compounds were p-damascenone, cis-rose oxide, 1- octen-3-ol, 4-vinylguaiacol, ethyl octanoate, and ethyl hexanoate. The role of Pdamascenone as a marker compound for icewine requires further investigation. This research provides a strong foundation for the understanding the odour-active volatiles and sensory profiles important to icewine.
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Dynamic logic is an extension of modal logic originally intended for reasoning about computer programs. The method of proving correctness of properties of a computer program using the well-known Hoare Logic can be implemented by utilizing the robustness of dynamic logic. For a very broad range of languages and applications in program veri cation, a theorem prover named KIV (Karlsruhe Interactive Veri er) Theorem Prover has already been developed. But a high degree of automation and its complexity make it di cult to use it for educational purposes. My research work is motivated towards the design and implementation of a similar interactive theorem prover with educational use as its main design criteria. As the key purpose of this system is to serve as an educational tool, it is a self-explanatory system that explains every step of creating a derivation, i.e., proving a theorem. This deductive system is implemented in the platform-independent programming language Java. In addition, a very popular combination of a lexical analyzer generator, JFlex, and the parser generator BYacc/J for parsing formulas and programs has been used.
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Alternative splicing (AS) is the predominant mechanism responsible for increasing eukaryotic transcriptome and proteome complexity. In this phenomenon, numerous mRNA transcripts are produced from a single pre-mRNA sequence. AS is reported to occur in 95% of human multi-exon genes; one specific gene that undergoes AS is DNA polymerase beta (POLB). POLB is the main DNA repair gene which performs short patch base excision repair (BER). In primate untransformed primary fibroblast cell lines, it was determined that the splice variant (SV) frequency of POLB correlates positively with species lifespan. To date, AS patterns of POLB have only been examined in mammals primarily through the use of cell lines. However, little attention has been devoted to investigating if such a relationship exists in non-mammals and whether cell lines reflect what is observed in vertebrate tissues. This idea was explored through cloning and characterization of 1,214 POLB transcripts from four non-mammalian species (Gallus gallus domesticus, Larus glaucescens, Xenopus laevis, and Pogona vitticeps) and two mammalian species (Sylvilagus floridanus and Homo sapiens) in two tissue types, liver and brain. POLB SV frequency occurred at low frequencies, < 3.2%, in non-mammalian tissues relative to mammalian (>20%). The highest POLB SV frequency was found in H. sapiens liver and brain tissues, occurring at 65.4% and 91.7%, respectively. Tissue specific AS of POLB was observed in L. glaucescens, P. vitticeps, and H. sapiens, but not G. gallus domesticus, X. laevis and S. floridanus.The AS patterns of a second gene, transient receptor potential cation channel subfamily V member 1 (TRPV1), were compared to those of POLB in liver and brain tissues of G. gallus domesticus, X. laevis and H. sapiens. This comparison was performed to investigate if any changes (either increase or decrease) observed in the AS of POLB were gene specific or if they were tissue specific, in which case similar changes in AS would be seen in POLB and TRPV1. Analysis did not reveal an increase or decrease in both the AS of POLB and TRPV1 in either the liver or brain tissues of G. gallus domesticus and H. sapiens. This result suggested that the AS patterns of POLB were not influenced by tissue specific rates of AS. Interestingly, an increase in the AS of both genes was only observed in X. laevis brain tissue. This result suggests that AS in general may be increased in the X. laevis brain as compared to liver tissue. No positive correlation between POLB SV frequency and species lifespan was found in non-mammalian tissues. The AS patterns of POLB in human primary untransformed fibroblast cell lines were representative of those seen in human liver tissue but not in brain tissue. Altogether, the AS patterns of POLB from vertebrate tissues and primate cell lines revealed a positive correlation between POLB SV frequency and lifespan in mammals, but not in non-mammals. It appears that this positive correlation does not exist in vertebrate species as a whole.
Towards reverse engineering of Photosystem II: Synergistic Computational and Experimental Approaches
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ABSTRACT Photosystem II (PSII) of oxygenic photosynthesis has the unique ability to photochemically oxidize water, extracting electrons from water to result in the evolution of oxygen gas while depositing these electrons to the rest of the photosynthetic machinery which in turn reduces CO2 to carbohydrate molecules acting as fuel for the cell. Unfortunately, native PSII is unstable and not suitable to be used in industrial applications. Consequently, there is a need to reverse-engineer the water oxidation photochemical reactions of PSII using solution-stable proteins. But what does it take to reverse-engineer PSIIs reactions? PSII has the pigment with the highest oxidation potential in nature known as P680. The high oxidation of P680 is in fact the driving force for water oxidation. P680 is made up of a chlorophyll a dimer embedded inside the relatively hydrophobic transmembrane environment of PSII. In this thesis, the electrostatic factors contributing to the high oxidation potential of P680 are described. PSII oxidizes water in a specialized metal cluster known as the Oxygen Evolving Complex (OEC). The pathways that water can take to enter the relatively hydrophobic region of PSII are described as well. A previous attempt to reverse engineer PSIIs reactions using the protein scaffold of E. colis Bacterioferritin (BFR) existed. The oxidation potential of the pigment used for the BFR reaction centre was measured and the protein effects calculated in a similar fashion to how P680 potentials were calculated in PSII. The BFR-RCs pigment oxidation potential was found to be 0.57 V, too low to oxidize water or tyrosine like PSII. We suggest that the observed tyrosine oxidation in BRF-RC could be driven by the ZnCe6 di-cation. In order to increase the efficiency of iii tyrosine oxidation, and ultimately oxidize water, the first potential of ZnCe6 would have to attain a value in excess of 0.8 V. The results were used to develop a second generation of BFR-RC using a high oxidation pigment. The hypervalent phosphorous porphyrin forms a radical pair that can be observed using Transient Electron Paramagnetic Resonance (TR-EPR). Finally, the results from this thesis are discussed in light of the development of solar fuel producing systems.
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Recent empirical evidence from vector autoregressions (VARs) suggests that public spending shocks increase (crowd in) private consumption. Standard general equilibrium models predict the opposite. We show that a standard real business cycle (RBC) model in which public spending is chosen optimally can rationalize the crowding-in effect documented in the VAR literature. When such a model is used as a data-generating process, a VAR estimated using the artificial data yields a positive consumption response to an increase in public spending, consistent with the empirical findings. This result holds regardless of whether private and public purchases are complements or substitutes.
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Les transformations conomiques visant la cration dun march mondial unique, le progrs technologique et la disponibilit dune main-duvre qualifie dans les pays bas salaire amnent les dirigeants des entreprises rexaminer lorganisation et la localisation de leurs capacits productives de faon en accrotre la flexibilit qui est, selon plusieurs, seule garante de la prennit de lorganisation (Atkinson, 1987; Patry, 1994; Purcell et Purcell, 1998; Kennedy 2002; Kallaberg, Reynolds, Marsden, 2003; Berger, 2006). Une stratgie dploye par les entreprises pour parvenir cette fin est la dlocalisation (Kennedy, 2002; Amiti et Wei, 2004; Barthlemy, 2004; Trudeau et Martin, 2006; Olsen, 2006). La technologie, louverture des marchs et laccs des bassins nouveaux de main-duvre qualifie rendent possible une fragmentation de la chane de production bien plus grande quauparavant, et chaque maillon de cette chane fait lobjet dun choix de localisation optimale (Hertveldt et al., 2005). Dans ces conditions, toutes les activits qui ne requirent aucune interaction complexe ou physique entre collgues ou entre un employ et un client, sont sujettes tre transfres chez un sous-traitant, ici ou ltranger (Farrell, 2005). La plupart des recherches traitant de limpartition et des dlocalisations se concentrent essentiellement sur les motivations patronales dy recourir (Lauzon-Duguay, 2005) ou encore sur les cas de russites ou dchecs des entreprises ayant implant une stratgie de cette nature (Logan, Faught et Ganster, 2004). Toutefois, les impacts sur les employs de telles pratiques ont rarement t considrs systmatiquement dans les recherches (Benson, 1998; Kessler, Coyle-Shapiro et Purcell, 1999; Logan et al., 2004). Les aspects humains doivent pourtant tre considrs srieusement, car ils sont mme dtre une cause dchec ou de russite de ces processus. La gestion des facteurs humains entourant le processus de dlocalisation semble jouer un rle dans limpact de limpartition sur les employs. Ainsi, selon Kessler et al. (1999), la faon dont les employs peroivent la dlocalisation serait influence par trois facteurs : la manire dont ils taient grs par leur ancien employeur (context), ce que leur offre leur nouvel employeur (pull factor) et la faon dont ils sont traits suite au transfert (landing). La recherche vise comprendre limpact de la dlocalisation dactivits dune entreprise sur les employs ayant t transfrs au fournisseur. De faon plus prcise, nous souhaitons comprendre les effets que peut entraner la dlocalisation dune entreprise source (celle qui cde les activits et les employs) une entreprise destination (celle qui reprend les activits cdes et la main-duvre) sur les employs transfrs lors de ce processus au niveau de leur qualit de vie au travail et de leurs conditions de travail. Plusieurs questions se posent. Quest-ce quun transfert russi du point de vue des employs? Les conditions de travail ou la qualit de vie au travail sont-elles affectes? quel point les aspects humains influencent-t-ils les effets de la dlocalisation sur les employs? Comment grer un tel transfert de faon optimale du point de vue du nouvel employeur? Le modle danalyse est compos de quatre variables. La premire variable dpendante (VD1) de notre modle correspond la qualit de vie au travail des employs transfrs. La seconde variable dpendante (VD2) correspond aux conditions de travail des employs transfrs. La troisime variable, la variable indpendante (VI) renvoie la dlocalisation dactivits qui comporte deux dimensions soit (1) la dcision de dlocalisation et (2) le processus dimplantation. La quatrime variable, la variable modratrice (VM) est les aspects humains qui sont examins selon trois dimensions soit (1) le contexte dans lentreprise source (Context), (2) lattrait du nouvel employeur (pull factor) et (3) la ralit chez le nouvel employeur (landing). Trois hypothses de recherche dcoulent de notre modle danalyse. Les deux premires sont leffet que la dlocalisation entrane une dtrioration de la qualit de vie au travail (H1) et des conditions de travail (H2). La troisime hypothse nonce que les aspects humains ont un effet modrateur sur limpact de la dlocalisation sur les employs transfrs (H3). La recherche consiste en une tude de cas auprs dune institution financire (entreprise source ) qui a dlocalis ses activits technologiques une firme experte en technologies de linformation (entreprise destination ). Onze entrevues semi-diriges ont t ralises avec des acteurs-cls (employs transfrs et gestionnaires des deux entreprises). Les rsultats de la recherche indiquent que la dlocalisation a de faon gnrale un impact ngatif sur les employs transfrs. Par contre, cette affirmation nest pas gnralisable tous les indicateurs tudis de la qualit de vie au travail et des conditions de travail. Les rsultats mettent en vidence des consquences ngatives en ce qui a trait la motivation intrinsque au travail, lengagement organisationnel ainsi qu la satisfaction en lien avec laspect relationnel du travail. La dlocalisation a galement entran une dtrioration des conditions de travail des employs transfrs soit au niveau de la scurit demploi, du contenu et de lvaluation des tches, de la sant et scurit au travail et de la dure du travail. Mais, daprs les propos des personnes interviewes, les consquences les plus importantes sont sans aucun doute au niveau du salaire et des avantages sociaux. Les consquences de la dlocalisation savrent par contre positives lorsquil est question de laccomplissement professionnel et de la satisfaction de laspect technique du travail. Au niveau de la confiance interpersonnelle au travail, lorganisation du travail, la formation professionnelle ainsi que les conditions physiques de lemploi, les effets ne semblent pas significatifs daprs les propos recueillis lors des entrevues. Enfin, les rsultats mettent en vidence leffet modrateur significatif des aspects humains sur les consquences de la dlocalisation pour les employs transfrs. Lentreprise source a tent damoindrir limpact de la dlocalisation, mais ce ne fut pas suffisant. Comme les employs taient fortement attachs lentreprise source et quils ne dsiraient pas la quitter pour une entreprise avec une culture dentreprise diffrente qui leur paraissait peu attrayante, ces dimensions des aspects humains ont en fait contribu amplifier les impacts ngatifs de la dlocalisation, particulirement sur la qualit de vie au travail des employs transfrs. Mots cls : (1) dlocalisation, (2) impartition, (3) transfert demploys, (4) qualit de vie au travail, (5) conditions de travail, (6) technologies de linformation, (7) entreprise, (8) gestion des ressources humaines.
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Les tches de vision articielle telles que la reconnaissance dobjets demeurent irrsolues ce jour. Les algorithmes dapprentissage tels que les Rseaux de Neurones Articiels (RNA), reprsentent une approche prometteuse permettant dapprendre des caractristiques utiles pour ces tches. Ce processus doptimisation est nanmoins difcile. Les rseaux profonds base de Machine de Boltzmann Restreintes (RBM) ont rcemment t proposs an de guider lextraction de reprsentations intermdiaires, grce un algorithme dapprentissage non-supervis. Ce mmoire prsente, par lentremise de trois articles, des contributions ce domaine de recherche. Le premier article traite de la RBM convolutionelle. Lusage de champs rceptifs locaux ainsi que le regroupement dunits caches en couches partageant les mme paramtres, rduit considrablement le nombre de paramtres apprendre et engendre des dtecteurs de caractristiques locaux et quivariant aux translations. Ceci mne des modles ayant une meilleure vraisemblance, comparativement aux RBMs entranes sur des segments dimages. Le deuxime article est motiv par des dcouvertes rcentes en neurosciences. Il analyse limpact dunits quadratiques sur des tches de classication visuelles, ainsi que celui dune nouvelle fonction dactivation. Nous observons que les RNAs base dunits quadratiques utilisant la fonction softsign, donnent de meilleures performances de gnralisation. Le dernire article quand lui, offre une vision critique des algorithmes populaires dentranement de RBMs. Nous montrons que lalgorithme de Divergence Contrastive (CD) et la CD Persistente ne sont pas robustes : tous deux ncessitent une surface dnergie relativement plate an que leur chane ngative puisse mixer. La PCD "poids rapides" contourne ce problme en perturbant lgrement le modle, cependant, ceci gnre des chantillons bruits. Lusage de chanes tempres dans la phase ngative est une faon robuste dadresser ces problmes et mne de meilleurs modles gnratifs.
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Les Rtinal dshydrognases (RALDHs) catalysent irrversiblement la dshydrognation du Rtinal en Acide Rtinoque (AR) qui est impliqu dans lembryogense et la diffrenciation tissulaire. Pour comprendre le rle dans la biosynthse de lAR des RALDHs type 3 et 4 de souris, nous avons dtermin leurs proprits cintiques ainsi que leur comportement en prsence de diffrents inhibiteurs. Les tests enzymatiques sont effectus avec une prparation denzyme recombinante, taggue avec 6 histidines, purifie sur colonne Ni-NTA (Qiagen). Lactivit enzymatique est value en quantifiant la production dAR par chromatographie liquide haute performance (HPLC) en phase inverse. Les constantes cintiques ont t dtermines pour les isomres du rtinal tout-trans, 9-cis et 13-cis. La RALDH4 catalyse les isomres 9-cis et 13-cis de rtinal, elle prsente un faible KM (3M) pour les deux isomres et a une efficacit catalytique leve pour le 9-cis rtinal 3.4 fois suprieure au 13-cis rtinal. La RALDH3 est spcifique au tout-trans rtinal avec un KM de 4 M et une efficacit leve. -Ionone, inhibiteur possible pour la RALDH4, inhibe lactivit avec le rtinal 9-cis et 13-cis, mais ninfluence pas lactivit de la RALDH3. Le para-hydroxymercuribenzoque (p-HMB) inhibe lactivit de deux isoenzymes. Le cation MgCl2 augmente par 3 fois loxydation du rtinal 13-cis par la RALDH4, diminue loxydation du 9-cis rtinal et influence faiblement la RALDH3. Ces donnes enrichissent les connaissances sur les caractristiques cintiques des RALDHs recombinantes de souris de types 3 et 4 et fournissent des claircissements sur la biogense de lacide rtinoque in vivo.
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Le long bio-polymre d'ADN est condens lintrieur du noyau des cellules eukaryotes l'aide de petites protines appeles histones. En plus de leurs fonctions condensatrices,ces histones sont galement la cible de nombreuses modifications post-traductionnelles(MPT), particulirement au niveau de leur section N-terminale. Ces modifications rversibles font partie dun code dhistones pi-gntique transmissible qui orchestre et module dynamiquement certains vnements impliquant la chromatine, tels lactivation et la dsactivation de gnes ainsi que la duplication et la rparation dADN. Ces modifications sont impliques subsquemment dans la signalisation et la progression de cancers, tels que la leucmie. En consquence, l'lucidation des modifications dhistones est importante pour comprendre leurs fonctions biologiques. Une mthodologie analytique a t mise au point en laboratoire pour isoler, dtecter, et quantifier les MPT dhistones en utilisant une approche rapide deux volets laide doutils bioinformatiques spcialiss. La mthodologie dveloppe en laboratoire a t valide en utilisant des histones de souche sauvage ainsi que deux types dhistones mutants dficients en enzymes actyltransferase. Des trois sources dhistones utilises, la seule MPT qui a dmontr un changement significatif est lactylation de lhistone H3 lysine 56 (H3K56ac). Lexpression et la stoechiomtrie de cette MPT, issue de cellules de souche sauvage et de cellules mutantes, ont t dtermines avec prcision et compares. Les fonctions de balayage polyvalentes d'un instrument trappe ionique quadruple linaire hybride ont t utilises pour amliorer la dtection de protines intactes. Le mode de balayage enhanced multiply charged (EMC) a t modifi pour contenir et dtecter les ions de protines intactes situes dans la trappe ionique linaire. Ce mode de balayage nomm targeted EMC (tEMC) a permis de quadrupler le niveau de sensibilit (signal/interfrence), et quintupler la rsolution du mode de balayage conventionnel. De plus, la capacit de sparation des charges du tEMC a rduit de faon significative les effets de space charge dans la trappe ionique linaire. La rsolution suprieure du mode tEMC a permis de diffrencier plusieurs isoformes modifies, particulirement pour lhistone H3. Lanalyse des peptides dhistones trypsiques laide du mode de balayage MRM a permis le squenage et la quantification de MPT avec un haut degr de prcision. La seule MPT qui tait sous-exprime entre lhistone de souche sauvage et le mutant DOT1L fut la mthylation de lhistone H3 lysine 79(H3K79me1). Les effets de deux inhibiteurs denzymes HDAC (HDACi) sur lexpression de MPT dhistone ont t valus en utilisant la mthodologie analytique mentionne. Les histones extraites de cellules normales et cancreuses ont t exposes du Vorinostat(SAHA) ou du Entinostat (MS-275) pour une priode de 24 72 heures. Deux histones furent principalement affectes, soit H3 et H4. tonnamment, les mmes effets n'ont pas t dtects lorsque les cellules normales ont t traites avec le HDACi pour une priode de 48 72 heures. Une mthode absolue de quantification avec une courbe dtalonnage a t dveloppe pour le peptide H3K56ac. Contrairement certaines publications, nos rsultats dmontrent que cette MPT est prsente dans les cellules mammifres avec une stoechiomtrie trs basse (< 0,1%) et n'est pas surexprime de faon significative aprs le traitement au HDACi.
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Plusieurs nouveaux complexes pinceurs de cobalt et de nickel ont t prpars avec le ligand pinceur de type POCOP : 2,6-(i-Pr2PO)2C6H4. Dans le cas du cobalt, une nouvelle voie de synthse a t dveloppe. Contrairement au cas du nickel, il sagit ici de cobalt au degr doxydation +III. Les composs obtenus sont paramagntiques. En outre, le driv brom est instable la lumire et se dcompose en perdant un brome pour former le complexe pinceur de Co(II). La ractivit de ces complexes a t tudie. Pour ce qui est du nickel, la catalyse de lhydroamination a t largie aux drivs de lacrylonitrile et aux amines aromatiques. En outre, la raction dhydroaryloxylation a t tudie dans les mmes conditions. Enfin, avec le 4-cyanostyrne et le cinnamonitrile, la formation damidines a t observe. Un complexe pinceur portant cette amidine a t isol. Enfin, le cation ragit avec des anions fortement coordonnants tels le cyanure ou lisocyanate. En outre, lanion triflate peut tre dplac par leau, lacrylonitrile et ses drivs. Enfin, une ractivit particulire a t observe avec la morpholine, lactone et un mlange 1:1 aniline/trithylamine.
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Dans ce mmoire nous allons prsenter une mthode de diffusion derreur originale qui peut reconstruire des images en demi-ton qui plaisent lil. Cette mthode prserve des dtails ns et des structures visuellement identiables prsentes dans limage originale. Nous allons tout dabord prsenter et analyser quelques travaux prcdents an de montrer certains problmes principaux du rendu en demi-ton, et nous allons expliquer pourquoi nous avons dcid dutiliser un algorithme de diffusion derreur pour rsoudre ces problmes. Puis nous allons prsenter la mthode propose qui est conceptuellement simple et efcace. Limage originale est analyse, et son contenu frquentiel est dtect. Les composantes principales du contenu frquentiel (la frquence, lorientation et le contraste) sont utilises comme des indices dans un tableau de recherche an de modier la mthode de diffusion derreur standard. Le tableau de recherche est tabli dans un tape de pr-calcul et la modication est compose par la modulation de seuil et la variation des coefcients de diffusion. Ensuite le systme en entier est calibr de faon ce que ces images reconstruites soient visuellement proches dimages originales (des aplats dintensit constante, des aplats contenant des ondes sinusodales avec des frquences, des orientations et des constrastes diffrents). Finalement nous allons comparer et analyser des rsultats obtenus par la mthode propose et des travaux prcdents, et dmontrer que la mthode propose est capable de reconstruire des images en demi-ton de haute qualit (qui prservent des structures) avec un traitement de temps trs faible.
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La transmission mre-enfant du VIH-1 (TME) reprsente le principal mode dinfection chez lenfant et se produit durant la grossesse (in utero, IU), laccouchement (intrapartum, IP) ou lallaitement (postpartum, PP). Les mcanismes qui sous-tendent le passage du VIH-1 travers le placenta et les muqueuses intestinales du nouveau-n sont encore trs peu dcrits. Dendritic cell-specific ICAM-grabbing non-integrin (DC-SIGN) et son homologue DC-SIGN related (DC-SIGNR) sont des rcepteurs dantignes exprims au niveau du placenta et capables de capter et de transmettre le VIH-1 aux cellules adjacentes. Ils pourraient donc participer au passage trans placentaire du VIH-1 et le polymorphisme gntique affectant lexpression ou modifiant linteraction avec le virus aurait une influence sur la TME du VIH-1. Afin dexplorer cette hypothse, nous avons procd une analyse exhaustive du polymorphisme de DC-SIGN et DC-SIGNR dans la population du Zimbabwe. Par la suite, nous avons dtermin lassociation entre le polymorphisme de DC-SIGN et DC-SIGNR et la TME du VIH-1 dans une cohorte denfants ns de mres VIH-positives Harare, au Zimbabwe. Enfin, nous avons dfini limpact fonctionnel des mutations associes. Les enfants homozygotes pour les haplotypes H1 et H3 dans le gne de DC-SIGNR sont 4 6 fois plus risque de contracter le VIH-1 par voie IU et IP. H1 et H3 contiennent la mutation du promoteur p-198A et la mutation de lintron 2, int2-180A, et des tudes fonctionnelles nous ont permis de dmontrer que p-198A diminue lactivit transcriptionnelle du promoteur de DC-SIGNR et lexpression des transcrits dARNm dans le placenta, alors que int2-180A modifie le rpertoire disoformes de DC-SIGNR vers une proportion diminue disoformes membranaires. Les enfants porteurs des haplotypes H4 et H6 de DC-SIGN sont 2 6 fois plus risque de contracter le VIH-1 par voie IU. Ces haplotypes contiennent deux mutations du promoteur (p-336T/C et p-201C/A) et quatre mutations codant pour un changement dacide amin dans lexon 4 (R198Q, E214D, R221Q ou L242V) associes un risque augment de transmission IU, IP et PP du VIH-1. Des tudes fonctionnelles ont dmontr que les mutations du promoteur diminuent lexpression de DC-SIGN dans les macrophages placentaires. Toutefois, lexposition IU au VIH-1 module le niveau dexpression de DC-SIGN, rsultant en des niveaux dexpression similaires entre les macrophages des porteurs des allles sauvages et muts. Les mutations de lexon 4 augmentent laffinit de DC-SIGN pour le VIH-1 et sa capacit capturer et transmettre le virus aux lymphocytes T, favorisant possiblement la dissmination du VIH-1 travers le placenta. Lassociation entre les mutations de DC-SIGN et la transmission IP et PP du VIH-1 suggrent quil aurait aussi un rle jouer dans les muqueuses intestinales de lenfant. Notre tude dmontre pour la premire fois limplication de DC-SIGN et DC-SIGNR dans la TME du VIH-1. Laugmentation des capacits de capture et de transmission de DC-SIGN rsulte en une susceptibilit accrue de lenfant linfection au VIH-1 et concorde avec un rle dans la dissmination transplacentaire. Toutefois, la diminution prfrentielle des transcrits membranaires de DC-SIGNR au placenta augmente la TME du VIH-1 et laisse croire son implication via un autre mcanisme. Ces mcanismes pourraient aussi sappliquer dautres pathognes reconnus par DC-SIGN et DC-SIGNR et transmis de la mre lenfant.
Resumo:
Les cellules souches hmatopotiques (CSH) sont rares, mais indispensables pour soutenir la production des cellules matures du sang, un tissu en constant renouvellement. Deux caractristiques principales les dfinissent; la proprit dauto-renouvellement (AR), ou la capacit de prserver leur identit cellulaire suivant une division, et la multipotence, ce potentiel de diffrentiation leur permettant de gnrer toutes les ligne hmatopotiques. De par leurs attributs, les CSH sont utilise en thrapie cellulaire dans le domaine de la transplantation. Une organisation tissulaire hirarchique est aussi prserve dans la leucmie, ou cancer du sang, une masse tumorale htrogne devant tre maintenue par une fraction de cellules au potentiel prolifratif illimit, les cellules souches leucmiques (CSL). Les travaux prsents dans ce manuscrit visent explorer les bases molculaires de lAR, encore mal dfinies. Certains membres de la famille des facteurs de transcription homodomaine HOX sont impliqus dans la rgulation de lhmatopose normale, et leur drgulation peut contribuer la transformation leucmique. En particulier, la surexpression du gne Hoxb4 dans les CSH influence leur destin cellulaire, favorisant des divisions dauto-renouvellement et leur expansion en culture et in vivo. En gnral, les CSH spuisent rapidement lorsque maintenue hors de leur niche ex vivo. Diffrents facteurs interagissent avec les HOX et modulent leur liaison lADN, dont la famille des protines TALE (Three Amino acid Loop Extension), comme MEIS1 et PBX1. En utilisant une stratgie de surexpression combine de Hoxb4 et dun anti-sens de Pbx1 dans les CSH, gnrant ainsi des cellules Hoxb4hiPbx1lo, il est possible de majorer encore davantage leur potentiel dAR et leur expansion in vitro. Les CSH Hoxb4hiPbx1lo demeurent fonctionnellement intactes malgr une modulation extrme de leur destin cellulaire en culture. Les niveaux dexpressions de facteurs nuclaires, seules ou en combinaison, peuvent donc savrer des dterminants majeurs du destin des CSH. Afin didentifier dautres facteurs nuclaires potentiellement impliqus dans le processus dAR des CSH, une stratgie permettant dvaluer simultanment plusieurs gnes candidats a t labore. Les progrs raliss en termes de purification des CSH et de leur culture en micro-puits ont facilit la mise au point dun crible en RNAi (interfrence de lARN), mesurant limpact fonctionnel dune diminution des niveaux de transcrits dun gne cible sur lactivit des CSH. Les candidats slectionns pour cette tude font partie du grand groupe des modificateurs de la chromatine, plus prcisment la famille des histones dmthylases (HDM) contenant un domaine catalytique Jumonji. Ce choix repose sur la fonction rgulatrice de plusieurs membres de complexes mthyl-transfrases sur lAR des CSH, dont lhistone mthyl-transfrases MLL (Mixed Lineage Leukemia). Cette stratgie a aussi t utilise dans le laboratoire pour tudier le rle de facteurs dasymtrie sur le destin des CSH, en collaboration. Ces tudes ont permis didentifier la fois des rgulateurs positifs et ngatifs de lactivit des CSH. Entre autre, une diminution de lexpression du gne codant pour JARID1B, une HDM de la lysine 4 de lhistone H3 (H3K4), augmente lactivit des CSH et saccompagne dune activation des gnes Hox. En conclusion, divers dterminants nuclaires, dont les facteurs de transcription et les modificateurs de la chromatine peuvent influencer le destin des CSH. Les mcanismes sous-jacents et lidentification dautres modulateurs de lAR demeurent des voies explorer, pouvant contribuer ventuellement aux stratgies dexpansion des CSH ex vivo, et lidentification de cibles thrapeutiques contre les CSL. Mots-cls : cellules souches hmatopotiques, Hoxb4, Pbx1, auto-renouvellement, histone dmthylases, RNAi
Resumo:
Une nouvelle mthode d'extraction en phase solide (SPE) couple une technique d'analyse ultrarapide a t dveloppe pour la dtermination simultane de neuf contaminants mergents (l'atrazine, le dsthylatrazine, le 17(bta)-estradiol, l'thynylestradiol, la northindrone, la cafine, la carbamazpine, le diclofnac et le sulfamthoxazole) provenant de diffrentes classes thrapeutiques et prsents dans les eaux uses. La pr-concentration et la purification des chantillons a t ralise avec une cartouche SPE en mode mixte (Strata ABW) ayant la fois des proprits changeuses de cations et d'anions suivie d'une analyse par une dsorption thermique par diode laser/ionisation chimique pression atmosphrique couple la spectromtrie de masse en tandem (LDTD-APCI-MS/MS). La LDTD est une nouvelle mthode d'introduction d'chantillon qui rduit le temps total d'analyse moins de 15 secondes par rapport plusieurs minutes avec la chromatographie liquide couple la spectromtrie de masse en tandem traditionnelle (LC-MS/MS). Plusieurs paramtres SPE ont t valus dans le but d'optimiser l'efficacit de rcupration lors de l'extraction des analytes provenant des eaux uses, tels que la nature de la phase stationnaire, le dbit de chargement, le pH d'extraction, le volume et la composition de la solution de lavage et le volume de l'chantillon initial. Cette nouvelle mthode a t applique avec succs de vrais chantillons d'eaux uses provenant d'un rservoir de dcantation primaire. Le recouvrement des composs cibls provenant des eaux uses a t de 78 106%, la limite de dtection a t de 30 122 ng L-1, alors que la limite de quantification a t de 88 370 ng L-1. Les courbes d'talonnage dans les matrices d'eaux uses ont montr une bonne linarit (R2 > 0,991) pour les analytes cibles ainsi quune prcision avec un coefficient de variance infrieure 15%.
