Analysis of Agonist and Antagonist Effects on Thyroid Hormone Receptor Conformation by Hydrogen/Deuterium Exchange

Thyroid hormone receptors (TRs) are ligand-gated transcription factors with critical roles in development and metabolism. Although x-ray structures of TR ligand-binding domains (LBDs) with agonists are available, comparable structures without ligand (apo-TR) or with antagonists are not. It remains important to understand apo-LBD conformation and the way that it rearranges with ligands to develop better TR pharmaceuticals. In this study, we conducted hydrogen/deuterium exchange on TR LBDs with or without agonist (T(3)) or antagonist (NH(3)). Both ligands reduce deuterium incorporation into LBD amide hydrogens, implying tighter overall folding of the domain. As predicted, mass spectroscopic analysis of individual proteolytic peptides after hydrogen/deuterium exchange reveals that ligand increases the degree of solvent protection of regions close to the buried ligand-binding pocket. However, there is also extensive ligand protection of other regions, including the dimer surface at H10-H11, providing evidence for allosteric communication between the ligand-binding pocket and distant interaction surfaces. Surprisingly, C-terminal activation helix H12, which is known to alter position with ligand, remains relatively protected from solvent in all conditions suggesting that it is packed against the LBD irrespective of the presence or type of ligand. T(3), but not NH(3), increases accessibility of the upper part of H3-H5 to solvent, and we propose that TR H12 interacts with this region in apo-TR and that this interaction is blocked by T(3) but not NH(3.) We present data from site-directed mutagenesis experiments and molecular dynamics simulations that lend support to this structural model of apo-TR and its ligand-dependent conformational changes. (Molecular Endocrinology 25: 15-31, 2011)

1,4-Diamino-2-butanone, a wide-spectrum microbicide, yields reactive species by metal-catalyzed oxidation

The alpha-aminoketone 1,4-diamino-2-butanone (DAB), a putrescine analogue, is highly toxic to various microorganisms, including Trypanosoma cruzi. However, little is known about the molecular mechanisms underlying DAB`s cytotoxic properties. We report here that DAB (pK(a) 7.5 and 9.5) undergoes aerobic oxidation in phosphate buffer, pH 7.4, at 37 degrees C, catalyzed by Fe(II) and Cu(II) ions yielding NH(4)(+) ion, H(2)O(2), and 4-amino-2-oxobutanal (oxoDAB). OxoDAB, like methylglyoxal and other alpha-oxoaldehydes, is expected to cause protein aggregation and nucleobase lesions. Propagation of DAB oxidation by superoxide radical was confirmed by the inhibitory effect of added SOD (50 U ml(-1)) and stimulatory effect of xanthine/xanthine oxidase, a source of superoxide radical. EPR spin trapping studies with 5,5-dimethyl-1-pyrroline-1-oxide (DMPO) revealed an adduct attributable to DMPO-HO(center dot), and those with alpha-(4-pyridyl-1-oxide)-N-tert-butylnitrone or 3,5-dibromo-4-nitrosobenzenesulfonic acid, a six-line adduct assignable to a DAB(center dot) resonant enoyl radical adduct. Added horse spleen ferritin (HoSF) and bovine apo-transferrin underwent oxidative changes in tryptophan residues in the presence of 1.0-10 mM DAB. Iron release from HoSF was observed as well. Assays performed with fluorescein-encapsulated liposomes of cardiolipin and phosphatidylcholine (20:80) incubated with DAB resulted in extensive lipid peroxidation and consequent vesicle permeabilization. DAB (0-10 mM) administration to cultured LLC-MK2 epithelial cells caused a decline in cell viability, which was inhibited by preaddition of either catalase (4.5 mu M) or aminoguanidine (25 mM). Our findings support the hypothesis that DAB toxicity to several pathogenic microorganisms previously described may involve not only reported inhibition of polyamine metabolism but also DAB pro-oxidant activity. (C) 2011 Elsevier Inc. All rights reserved.

Flexibility and inhibitor binding in Cdc25 phosphatases

Cdc25 phosphatases involved in cell cycle checkpoints are now active targets for the development of anti-cancer therapies. Rational drug design would certainly benefit from detailed structural information for Cdc25s. However, only apo- or sulfate-bound crystal structures of the Cdc25 catalytic domain have been described so far. Together with previously available crystalographic data, results from molecular dynamics simulations, bioinformatic analysis, and computer-generated conformational ensembles shown here indicate that the last 30-40 residues in the C-terminus of Cdc25B are partially unfolded or disordered in solution. The effect of C-terminal flexibility upon binding of two potent small molecule inhibitors to Cdc25B is then analyzed by using three structural models with variable levels of flexibility, including an equilibrium distributed ensemble of Cdc25B backbone conformations. The three Cdc25B structural models are used in combination with flexible docking, clustering, and calculation of binding free energies by the linear interaction energy approximation to construct and validate Cdc25B-inhibitor complexes. Two binding sites are identified on top and beside the Cdc25B active site. The diversity of interaction modes found increases with receptor flexibility. Backbone flexibility allows the formation of transient cavities or compact hydrophobic units on the surface of the stable, folded protein core that are unexposed or unavailable for ligand binding in rigid and densely packed crystal structures. The present results may help to speculate on the mechanisms of small molecule complexation to partially unfolded or locally disordered proteins.

Gästredaktörernas inledning : Med fokus på ålder som organiserande princip

Sociologisk Forsknings digitala arkiv

Ålderism – ett fruktbart begrepp?

Ageism – A useful concept? Ageism has gained growing attention in Sweden the last decade. Age is even discussed to be included in the discrimination legislation. Still, the concept has not been of much sociological interest. This article is an overview of the concept ageism and how it has been discussed in social gerontology. In the article it is argued that the overall focus has been on overtly expressions such as stereotypes and discriminating behavior while underlying structures and processes of power and power relations have not got enough attention. As a result the concept of ageism has become limited as an analytical tool. Thus, in order to develop the potential of the concept it seems crucial to explicate and theorise power relations. To accomplish this goal, i.e. to focus on how age-based power relations are negotiated, challenged and reproduced in processes and institutionalised practises it is suggested that ageism might have to be complemented with other concepts, such as age coding.

Efeitos da apomorfina e de um produto derivado de sua autoxidação em diferentes modelos biológicos

Apomorfina é um potente agonista dopaminérgico D1/D2, utilizada no tratamento da Doença de Parkinson. Em maio de 2001, apomorfina HCl foi aprovada para utilização no tratamento da disfunção erétil, aumentando o número de usuários potenciais deste fármaco. Estudos sugerem que apomorfina e outros agonistas dopaminérgicos podem induzir neurotoxicidade mediada por seus derivados de oxidação semiquinonas e quinonas, os quais levam à formação de espécies reativas de oxigênio. Os objetivos do presente estudo foram de avaliar os possíveis efeitos genotóxicos, antimutagênicos, citotóxicos de apomorfina (APO) e de um produto derivado de sua oxidação, 8-oxo-apomorfina-semiquinona (8-OASQ), utilizando o teste Salmonella/microssoma, Mutoxiteste WP2, ensaio Cometa e teste de sensibilidade em Saccharomyces cerevisiae. Em adição, foram avaliados os efeitos de APO e 8-OASQ sobre a memória e o comportamento em ratos (tarefa de esquiva inibitória, comportamento e habituação ao campo aberto) e o comportamento estereotipado em camundongos. Ambos compostos induziram mutações por erro no quadro de leitura em linhagens de S. typhimurium TA97 e TA98, sendo que 8-OASQ foi cerca de duas vezes mais mutagênico que APO, na ausência de S9 mix. Para linhagens que detectam mutágenos oxidantes, 8-OASQ foi mutagênico, enquanto APO foi antimutagênico, inibindo a mutagenicidade induzida por H2O2 e t-BOOH em linhagens de S. typhimurium e derivadas WP2 de E. coli. O S9 mix inibiu todos os efeitos mutagênicos, provavelmente retardando a oxidação de APO ou devido à conjugação de APO e seus produtos de autoxidação, como 8-OASQ, a proteínas do S9. Em testes de sensibilidade com S. cerevisiae, APO foi citotóxica para algumas linhagens apenas nas doses mais altas. Para 8-OASQ este efeito foi dose-depende para todas as linhagens, sendo que as mutantes deficientes em catalase (ctt1), superóxido dismutase (sod1) e yap1 foram as mais sensíveis. APO protegeu as linhagens de S. cerevisiae contra danos oxidativos induzidos por concentrações altas de H2O2 e t-BOOH, enquanto que 8-OASQ aumentou os efeitos pró-oxidantes e induziu respostas adaptativas para aqueles agentes. APO e 8-OASQ induziram efeitos de prejuízo na memória de curta e de longa duração em uma tarefa de esquiva inibitória em ratos. APO, mas não 8-OASQ, prejudicou a habituação a um novo ambiente de forma dose-dependente. Os efeitos de prejuízo de memória não foram atribuídos à redução da nocicepção ou outra alteração inespecífica de comportamento, visto que nem APO e nem 8-OASQ afetaram a reatividade ao choque nas patas e comportamento durante a exploração ao campo aberto. Os resultados sugerem, portanto, que os produtos de oxidação de dopamina ou de agonistas dopaminérgicos podem induzir deficiências cognitivas.APO, mas não 8-OASQ, induziu comportamento estereotipado em camundongos machos CF-1. A falta da indução deste comportamento por 8-OASQ sugere que a autoxidação de APO causa a perda na sua habilidade de ligar-se a receptores dopaminérgicos. Pelo ensaio Cometa, 8-OASQ provocou danos ao DNA do tecido cerebral de camundongos sacrificados 1 h e 3 h, mas não 24 h após sua administração, enquanto que APO induziu um fraco aumento da freqüência de dano ao DNA 3 h após o tratamento. Esses resultados sugerem que ambos APO e 8-OASQ desempenham uma atividade genotóxica no tecido cerebral.

Estudo da influência da variabilidade em genes de apolipoproteínas sobre níveis lipídicos e parâmetros de massa e gordura corporal na população de Porto Alegre

Apolipoproteínas constituem a parte proteica das lipoproteínas e de uma maneira geral desempenham papéis como proporcionar estabilidade estrutural, solubilizar lipídeos altamente hidrofóbicos, servir como ligantes a receptores ou agir como co-fatores para enzimas envolvidas no metabolismo. Diversos estudos têm mostrado que a variabilidade dos genes que codificam estas proteínas podem influenciar os níveis lipídicos em diversas populações. A variabilidade da apo A-IV também foi associada com variáveis antropométricas. Nesta investigação foram analisados 8 RFLPs nos genes das apolipoproteínas C-I (HpaI), C-II (AvaII), C-III (SacI, FokI e MspI) e A-IV (XbaI, HinfI e PvuII). A amostra foi composta por 391 indivíduos caucasóides de Porto Alegre (RS) e dados sobre hábitos de vida, dosagens lipídicas e medidas antropométricas foram obtidas para cada indivíduo. Os fragmentos de interesse de cada gene foram amplificados por PCR e os genótipos foram identificados por eletroforese em géis de agarose ou poliacrilamida corados com brometo de etídio.

Avaliação ergonômica de desempenho do ambiente construído de ambulatórios do serviço médico de empresas : contribuição para projetação ergonômica

Este trabalho trata da avaliação de desempenho do ambiente construído de ambulatórios médicos voltados à Medicina do Trabalho, tendo como objetivo a busca de diretrizes ergonômicas de projeto que venham a contribuir para a reformulação dos ambulatórios estudados e/ou para o planejamento de ambulatórios semelhantes. Para isso, utilizou-se um método de análise e ação ergonômica, com abordagem participativa, ao qual foi inserida uma das etapas de uma técnica corrente de avaliação do ambiente construído - a APO (Avaliação Pós-Ocupação). Os estudos de caso foram desenvolvidos em ambulatórios do setor médico de duas empresas gaúchas. Verificou-se que, mesmo havendo diferenças significativas entre estas empresas (atividade econômica, porte e gradação de risco), existem problemas comuns relacionados aos seus ambulatórios. Os resultados demonstram ser as questões de planejamento a origem dos principais conflitos existentes entre os ambientes construídos e seus usuários - os ambulatórios não atendem à legislação vigente do Ministério da Saúde que regulamenta os estabelecimentos assistenciais de saúde e, além disso, foram identificadas problemas referentes ao leiaute, mobiliário, ruído e privacidade. Pôde-se concluir, também, que a integração dos usuários em todas as fases realizadas do método macroergonômico utilizado foi fundamental para o alcance do objetivo proposto. Por fim, recomenda-se a participação significativa dos trabalhadores das empresas em todas as fases referntes a futuros planejamentos dos ambulatórios estudados e que os resultados desta pesquisa sejam aplicados como diretrizes para esses projetos.

Social impact bond feasibility study APAC Portugal: enhancing ex-offenders’ lives

Este estudo é uma análise à eficácia de um Social Impact Bond como como instrumento financeiro no modelo de intervenção da APAC Portugal. O objetivo é o de melhorar a vida de ex-criminosos e reduzir os índices de reincidência de modo a apoiar a sua reinserção na sociedade após a libertação. Enquanto os custos de funcionamento de um estabelecimento prisional forem suportados pelo sector público, como é de lei, o modelo inovador de intervenção terá de encontrar um meio alternativo de financiamento. Sendo assim, testámos a rentabilidade de um Social Impact Bond através de um bem estruturado modelo Excel que simula o mecanismo de investimento, tendo os resultados demonstrado que um Social Impact Bond pode, de facto, financiar o modelo de intervenção da APAC Portugal de forma eficaz.

Credit ratings and government bonds evidence before, during and after the european debt crisis

Neste projeto, investigamos se as agências de rating e as taxas de juro de longo prazo da dívida soberana tiveram uma influência recíproca antes, durante e após a crise da dívida soberana Europeia. Esta análise é realizada, estimando a relação existente entre os ratings da dívida soberana ou taxas de juro e factores macroeconomicos e estruturais, através de uma diferente aplicação de metodologias utilizadas para este efeito. Os resultados obtidos demonstram que, no período da crise soberana, os ratings e as taxas de juros tiveram um mútuo impacto, sugerindo que as descidas dos ratings podem ter conduzido a profecias auto-realizáveis, levando países relativamente estáveis a um eventual incumprimento

Memória ferroviária : da mobilização social à política pública de patrimônio

Esta tese tem como objetivo o estudo do processo de construção e apropriação do passado ferroviário e da transformação da memória ferroviária como objeto de política pública, sobretudo após a edição da Lei no 11.483/2007. O estudo aborda os papeis desempenhados por agentes sociais diversos, como as associações de preservação ferroviárias (APF), a Rede Ferroviária Federal (RFFSA) e o Instituto do Patrimônio Histórico e Artístico Nacional (Iphan), e suas estratégias de ressignificação e objetificação do passado ferroviário, processo que teve início ainda na década de 1970. A pesquisa descreve a implantação da malha ferroviária brasileira, de maneira a contextualizar a extinção da RFFSA, em 2007; aborda o surgimento e evolução das APFs, e descreve a atuação da Rede na preservação e salvaguarda do passado da ferrovia por meio da análise do Programa de Preservação do Patrimônio Histórico Ferroviário (Preserfe). Por fim, a tese se debruça sobre a atuação do Iphan, recorrendo à análise dos processos de tombamentos de bens ferroviários e ao estudo dos desdobramentos da Lei no 11.483/2007 no interior do órgão. O movimento de valorização do passado ferroviário contribui para os debates acerca dos processos de apropriação e patrimonialização do passado.

Avaliação Pós-Ocupação da iluminação natural das salas dos setores de aulas teóricas da Universidade Federal do Rio Grande do Norte

The objective of this study is to assess the natural light of the classrooms sectors, at Universidade Federal do Rio Grande do Norte. It was applied the Post-Occupation Evaluation technique, by using questionnaires and brightness levels measurements inside the classrooms. In order to check the users satisfaction degree, it was initially done a general approach on the related aspects to natural light: their characteristics, availability, sources, opening systems and evaluating tools. It was also determined the necessary brightness levels for the activities development in the classroom and the Post-Occupation Evaluation technique used in the search analyses. Then, it was made the UFRN Campus` characterization; the models` definition which formed the data collection basis; the detailing of the procedures used in the research, the processing description and the data analysis. Subsequently, the results that clarify the issues raised were shown through quantitative and / or qualitative data analyses. This research notes a high level of satisfaction by the users, despite some problems such as the reflections occurrence on the board, the lack of uniformity and, occasionally, the brightness low levels

Percepção dos usuários nos espaços públicos: avaliação pós-ocupação em três praças de Natal-RN

The research investigates the acting and the importance for the users of the public squares located predominantly in residential areas. It presents the results of the posoccupation evaluations accomplished in three squares, whose physical, environmental characteristics, equipments and fumitures are different in its qualities and amounts, taking in consideration aspects related to the users' physical and psychological comfort and of the inhabitants of the I spill. The collection of data involved physical risings and of files, observations behavious, application of questionnaires and interviews, analyzed qualitative as quantitatively so much for a larger precision and validity of the investigation. The results were obtained through the relationship among the users' perception the environmental attributes and the different levels of apropriation/use of the studied places. They indicate that the aspects composicionais of physical order of the space affects the type and the intensity of use of the squares intimately, contributing positive or negatively for its valor. It is evidenced like this, that the low freqüentation of the public squares of Natal, is due mainly to referring aspects to the physical quality and the amount of the fumitures and urban equipments. It is ended that the investments and the physical planning of these public spaces should be based in the real knowledge of the aspirations of the population objective, in way to allow its largest use and valor

Para que servem hoje nossas cozinhas? :uma análise de uso das cozinhas do Plano 100 (Natal-RN)

This work investigates the using of kitchens of the apartments of PLANO 100 in Natal-RN, through one method s set of the functional and behavior evaluation. The theme was selected through of the emergence of the many questions that sought to understand what manners how individuals relates to the constructed space, what was the possible changes caused by these relation, also verifying how this space interferes in a daily life of theirs users. This research to search answers what to improve of the study s object and in futures production s architectonic too. The used approach combined an overview of new kinds of familiar arrangements and the evolution process of the brazilian s kitchens within social context of Brazil, with APO (Post-Occupation Evaluation), techniques through a physical space survey, questionnaires and interviews with users. Beyond to APO s implements were applied behavior setting s techniques too, what presented the most knowledge about to satisfactions levels pointed by the users

Indicações para o projeto arquitetônico de edifícios multifamiliares: uma análise pósocupação em Natal/RN

Confirming the Brazilian tendency in the field, the multifamily vertical condominium habitats in Natal are defined as buildings with three or more floors which have been an increasingly used solution. In the mentioned project, the connection between the projectarchitects and the user/ buyers are spread out, by which the first people conceive the realestate property as a creation for the market and not the individual client in specific. Such situation along with technical and financial limitations of the project lead to the adoption of standard solutions to be utilized by clients with different profiles. Besides that, there are various legal and urban parameters by the City Director Plan showing elements of great influence in the final solution adopted by the mentioned edifices. Moving to this subject in general, this project is focused on the case study of the Ed. Ville de Montpellier, having as a base of Post Occupancy Evaluation (POE), considered an efficient tool to analyze and keep up with the progress of the construction of the building, including technical approvals, the application of surveys with the local residents and the creation of informal interviews. The data shows that with time some items that initially motivated the acquisition of the realestate property (with a social common area) move to being less valued, and that the residents quickly alter the pre constructed space, thus seeking to alter the property in a more personal and conforming manner. The possibility of a new emphasis for projects on the mentioned space should also be in discussion, the created project calls for the attention of projected conceptual aspects and interdependence within project and construction which permits the indication of some recommendations for the projection of multifamily residential buildings within the studied realm