Structure and function of the Bacillus hybrid enzyme GluXyn-1: Native-like jellyroll fold preserved after insertion of autonomous globular domain

The 1,3–1,4-β-glucanase from Bacillus macerans (wtGLU) and the 1,4-β-xylanase from Bacillus subtilis (wtXYN) are both single-domain jellyroll proteins catalyzing similar enzymatic reactions. In the fusion protein GluXyn-1, the two proteins are joined by insertion of the entire XYN domain into a surface loop of cpMAC-57, a circularly permuted variant of wtGLU. GluXyn-1 was generated by protein engineering methods, produced in Escherichia coli and shown to fold spontaneously and have both enzymatic activities at wild-type level. The crystal structure of GluXyn-1 was determined at 2.1 Å resolution and refined to R = 17.7% and R(free) = 22.4%. It shows nearly ideal, native-like folding of both protein domains and a small, but significant hinge bending between the domains. The active sites are independent and accessible explaining the observed enzymatic activity. Because in GluXyn-1 the complete XYN domain is inserted into the compact folding unit of GLU, the wild-type-like activity and tertiary structure of the latter proves that the folding process of GLU does not depend on intramolecular interactions that are short-ranged in the sequence. Insertion fusions of the GluXyn-1 type may prove to be an easy route toward more stable bifunctional proteins in which the two parts are more closely associated than in linear end-to-end protein fusions.

Heat shock fusion proteins as vehicles for antigen delivery into the major histocompatibility complex class I presentation pathway

Mice immunized with heat shock proteins (hsps) isolated from mouse tumor cells (donor cells) produce CD8 cytotoxic T lymphocytes (CTL) that recognize donor cell peptides in association with the major histocompatibility complex (MHC) class I proteins of the responding mouse. The CTL are induced apparently because peptides noncovalently associated with the isolated hsp molecules can enter the MHC class I antigen processing pathway of professional antigen-presenting cells. Using a recombinant heat shock fusion protein with a large fragment of ovalbumin covalently linked to mycobacterial hsp70, we show here that when the soluble fusion protein was injected without adjuvant into H-2b mice, CTL were produced that recognized an ovalbumin-derived peptide, SIINFEKL, in association with Kb. The peptide is known to arise from natural processing of ovalbumin in H-2b mouse cells, and CTL from the ovalbumin-hsp70-immunized mice and a highly effective CTL clone (4G3) raised against ovalbumin-expressing EL4 tumor cells (EG7-OVA) were equally effective in terms of the concentration of SIINFEKL required for half-maximal lysis in a CTL assay. The mice were also protected against lethal challenge with ovalbumin-expressing melanoma tumor cells. Because large protein fragments or whole proteins serving as fusion partners can be cleaved into short peptides in the MHC class I processing pathway, hsp fusion proteins of the type described here are promising candidates for vaccines aimed at eliciting CD8 CTL in populations of MHC-disparate individuals.

An approach to probe some neural systems interaction by functional MRI at neural time scale down to milliseconds

In this paper, we demonstrate an approach by which some evoked neuronal events can be probed by functional MRI (fMRI) signal with temporal resolution at the time scale of tens of milliseconds. The approach is based on the close relationship between neuronal electrical events and fMRI signal that is experimentally demonstrated in concurrent fMRI and electroencephalographic (EEG) studies conducted in a rat model with forepaw electrical stimulation. We observed a refractory period of neuronal origin in a two-stimuli paradigm: the first stimulation pulse suppressed the evoked activity in both EEG and fMRI signal responding to the subsequent stimulus for a period of several hundred milliseconds. When there was an apparent site–site interaction detected in the evoked EEG signal induced by two stimuli that were primarily targeted to activate two different sites in the brain, fMRI also displayed signal amplitude modulation because of the interactive event. With visual stimulation using two short pulses in the human brain, a similar refractory phenomenon was observed in activated fMRI signals in the primary visual cortex. In addition, for interstimulus intervals shorter than the known latency time of the evoked potential induced by the first stimulus (≈100 ms) in the primary visual cortex of the human brain, the suppression was not present. Thus, by controlling the temporal relation of input tasks, it is possible to study temporal evolution of certain neural events at the time scale of their evoked electrical activity by noninvasive fMRI methodology.

Cobrança pelo uso da água e escassez de recursos hídricos: proposta de modelo de cobrança e aplicação na bacia do rio Atibaia

No Brasil, a Política Nacional de Recursos Hídricos apresenta a cobrança pelo uso da água como um instrumento de gestão de recursos hídricos de caráter econômico. Considerando esse caráter, a cobrança deve ter como objetivos: racionalizar o uso do recurso baseado na sua escassez; reconhecer a água como um bem de valor econômico, refletindo os custos ambientais advindos de sua utilização; e diminuir os conflitos entre os usos, induzindo uma alocação que considere o gerenciamento da demanda e as prioridades da sociedade. Além dessas metas, como instrumento de gestão de uma política que lista como primeiro objetivo \"assegurar à atual e às futuras gerações a necessária disponibilidade de água, em padrões de qualidade adequados aos respectivos usos\", a cobrança deve ser implementada de maneira que o agente usuário direcione seu comportamento no sentido da sustentabilidade ambiental. Mediante esses fundamentos, o que se pretende desenvolver neste trabalho é a aplicação de um modelo de cobrança sobre o uso da água que considera como princípio base a manutenção da qualidade ambiental medida pela adequada gestão da escassez de água e, compondo a busca dessa qualidade, a racionalização econômica e a viabilização financeira. Essa predominância do ambiente sobre aspectos econômicos vem no sentido de desqualificar argumentos segundo os quais, os impactos advindos dos usos da água serão corrigidos indefinidamente mediante investimentos financeiros em infra estrutura. Admitir que o desenvolvimento tem esse poder é supor equivocadamente que o meio econômico é limitante do meio ambiente e não o contrário. Esta constatação mostra qual é o problema da maioria das propostas de cobrança que valoram a água baseadas em custos de tratamento de resíduos e de obras hidráulicas. Por mais elaborados que sejam essas fórmulas de cobrança, chegando a ponto de se conseguir que fique mais caro, mediante um padrão ambiental corretamente definido, captar água ou lançar poluentes do que racionalizar usos, o preço da água não pode estar baseado em fatores cuja \"sustentabilidade\" pode acabar no curto prazo, dependendo do ritmo de crescimento econômico. A sustentabilidade dos recursos hídricos só será base da cobrança pelo uso da água se o valor cobrado for dificultando esse uso à medida que os recursos tornarem se escassos, e não quando os custos de medidas mitigadoras dessa escassez se tornarem muito elevados. Portanto, o modelo de cobrança proposto neste trabalho procura garantir que o agente econômico que está exaurindo o meio ambiente não possa ter capacidade de pagar por essa degradação, ajudando efetivamente a política de outorga do direito de uso da água na observância da capacidade de suporte do meio.

Maqāmāt : manuscript, undated

بسم الله الرحمن الرحيم اللهم انا نحمدك على ما علمت في البيان والهمت في البيان كما نحمدك على ما مبعت في الغطا... :Incipit

A cerâmica de cozinha africana de Monte Molião: Monte Molião, Lagos

Monte Molião fica situado na margem esquerda do estuário da Ribeira de Bensafrim, em Lagos. Teve uma ocupação pré-romana, tendo sido densamente povoado durante toda a época romana. Neste trabalho, analisam-se os fragmentos de cerâmica de cozinha africana recolhidos no sítio, em escavações arqueológicas. O conjunto engloba 2005 fragmentos classificaveis, no entanto, apenas 1767 foram passíveis de tipificação (de acordo com as propostas de Tortorella, Hayes e M. Bonifay), tendo sido analisados também de acordo com a sua posição estratigráfica, o que permitiu retirar informação sobre a sua cronologia absoluta e integração nas diferentes fases de ocupação romana do sítio. Todos foram também abordados do ponto de vista do fabrico, concretamente no que se refere à cor e à estrutura física da pasta, numa tentativa de aproximação aos centros produtores. 161 exemplares, considerados representativos do conjunto, foram desenhados e tintados. O circuito da cerâmica de cozinha africana no sul de Portugal foi proposto com base nos dados do sítio de Lagos, mas também com outros provenientes de distintos locais algarvios, tendo-se concluído que aqueles em que esta cerâmica se tinha registado eram litorais ou facilmente acessíveis por rio.

A intimidade afetiva e sexual na imprensa em Portugal (1968-1978)

Tese de doutoramento, Sociologia (Sociologia da Cultura, Comunicação, e Estilos de Vida), Universidade de Lisboa, Instituto de Ciências Sociais, 2016

Ukraine – Trying to build a future beyond the past. EPC Commentary, 2 June 2014

On 25 May Ukrainian businessman Petro Poroshenko became Ukraine’s fifth President, winning in the first round with some 54% of the vote, far ahead of Yulia Tymoshenko. While Poroshenko has been involved in Ukrainian politics for several years, including a short stint in the government of disposed President Viktor Yanukovych, his support and involvement in the EuroMaiden anti-government protests, along with the decision of Vitali Klitschko to drop out of the presidential race and support Poroshenko’s candidacy, were key to his success.

German companies strengthen their cooperation with Russian gas suppliers. OSW Commentary No. 64, 2011-10-24

Germany’s decision to give up the use of nuclear energy will force it to find a conventional low-carbon energy source as a replacement; in the short term, in addition to coal, this is likely to be gas. Due to their continued high debt and the losses associated with the end of atomic power, German companies will not be able to spend large funds on investing in conventional energy. First of all, they will aim to raise capital and repay their debts. The money for this will come from selling off their less profitable assets; this will include sales on the gas market. This will create opportunities for natural gas exporters and extraction companies such as Gazprom to buy back some of the German companies’ assets (electricity companies, for example). The German companies will probably continue to seek to recover the costs incurred in the investment projects already underway, such as Nord Stream, the importance of which will grow after Russian gas imports increase. At the same time, because of their debts, the German companies will seek to minimise their investment costs by selling some shares on the conventional energy market, to Russian corporations among others; the latter would thus be able to increase their stake in the gas market in both Western (Germany, Great Britain, the Benelux countries) and Central Europe (Poland, the Czech Republic). It is possible that while establishing the details of cooperation between the Russian and German companies, Russia will try to put pressure on Germany to give up competing projects such as Nabucco. However, a well-diversified German energy market should be able to defend itself against attempts to increase German dependence on Russian gas supplies and the dictates of high prices.

Projeto de uma antena para controlo wireless de um robot

A comunicação e transmissão de informação sem fios tornou - se uma realidade cada vez mais utilizada pelas sociedades contemporâneas. A nível profissional, as forças armadas de cada país acharam conveniente modernizar os seus meios, por forma a aumentar a eficiência e a segurança em determinadas tarefas. Nesse sentido, o Exército português adquiriu um robot (ROVIM) cuja função é desempenhar ações de reconhecimento e vigilância de modo a obter informações de forma segura. O objetivo desta dissertação é dimensionar e construir uma antena para controlo wireless do robot (ROVIM). As especificações técnicas desta antena requerem dois modos de operação, um com uma largura de feixe larga e outro com uma largura de feixe estreita. Para alcançar esses objetivos dimensionou-se e construiu-se duas antenas. Na dissertação são construídas duas antenas, a primeira é uma antena Yagi – Uda convencional e a segunda é uma antena com uma estrutura nova que permite a regulação do ganho e da largura de feixe a -3 dB. A primeira antena será o modelo base da segunda antena, que apresenta a inovação do controlo das caraterísticas de radiação. Esse controlo é possível através da introdução de díodos e do respetivo circuito de polarização na estrutura da antena. Inicialmente, as antenas foram dimensionadas e simuladas recorrendo ao programa de simulação CST MWS, de modo a operarem na banda dos 2,4 GHz. Após a construção das antenas, as caraterísticas de radiação foram medidas recorrendo à câmara anecoica e ao network analyzer, permitindo assim a comparação dos resultados medidos com os simulados.

The specificity of emotion inferences as a function of emotional contextual support

Research on emotion inferences has shown that readers include a representation of the main character's emotional state in their mental representations of the text. We examined the specificity of emotion representations as a function of the emotion content of short narratives, in terms of the quantity and quality of emotion components included in the narratives, based on the GRID instrument (Fontaine et al., 2013). In a self-paced reading task, target sentences that only moderately matched the emotional context were read faster than target sentences that strongly matched the emotional context of the narratives. In a “makes sense” judgment task, we showed that this result was not driven by a mapping difficulty and, in a memory task, we provided some evidence that these effects reflected integration processes. We suggest that readers can integrate specific emotions into their mental representations, but only if provided with the appropriate emotional contextual support.

Paixão empreendedora: neoliberalismo, capital humano e processos seletivos de trainees

O neoliberalismo, do ponto de vista econômico e social, pode ser entendido como a instauração, na sociedade, de relações estritamente mercantis, fazendo com que a lógica da maximização do ganho e do rendimento seja estendida a todos os campos, promovendo a racionalidade econômica como forma de racionalidade em geral. A forma de governamentalidade neoliberal norte-americana, com sua pretensão de transmutar os indivíduos em sujeitos-microempresas e as relações humanas em relações de tipo concorrencial, faz com que os indivíduos passem a ser vistos como “capital humano”. Originalmente, o termo “capital humano” remete a uma teoria que, desenvolvida sob influência do paradigma econômico neoclássico e liderança de Theodore Schultz, foi responsável por assimilar e transferir princípios econômicos para uma realidade anteriormente isenta de significados dessa natureza, fazendo emergir um discurso que associa o humano ao capital, transportando-o, dessa forma, para uma lógica onde ele deve gerir a si mesmo, tal como uma empresa. A empresa é, assim, promovida a modelo de subjetivação, sendo cada indivíduo um capital a ser gerenciado e valorizado conforme as demandas do mercado. É por isso que o modelo de conduta empreendedora, advindo do discurso do capital humano de inspiração neoliberal e de teorias clássicas propostas por Werner Sombart e Joseph A. Schumpeter, acomete os profissionais das organizações sediadas nos países capitalistas. Esse fato é bastante expressivo entre os jovens que procuram inserir-se no mercado de trabalho, principalmente em posições estratégicas valorizadas dentro das organizações, como as de trainee. No Brasil, os programas de trainee são considerados uma estratégia de busca de atração de jovens com perfil diferenciado, sendo uma resposta encontrada por muitas organizações desde 1970 para ganhar vantagem em um cenário econômico altamente competitivo. Esses profissionais são vistos como os “talentos” da organização, sendo treinados para ocuparem cargos estratégicos em um curto espaço tempo. A fim de esclarecer de que maneira o modelo de conduta empreendedora está presente nos processos seletivos de trainee, foi realizada uma análise dos textos que descrevem as competências exigidas na seleção desses jovens, a partir da Análise Crítica do Discurso (ACD) de Fairclough (2001, 2003), a partir das categorias analíticas “modalidade” e “avaliação”, e reflexões acerca da ideologia neoliberal. Chegou-se à conclusão de que o modelo de conduta empreendedora que está presente nos processos seletivos de trainee é marcada pela expressão de um comportamento apaixonado, que, no campo do management, é entendido a partir do conceito de “paixão empreendedora”. A pesquisa desenvolvida é relevante para o campo da Administração, tanto para o campo acadêmico (uma vez que há poucos estudos que têm como objeto de pesquisa a seleção de trainees e que procuram entendê-lo a partir de um viés crítico utilizando-se da análise do discurso do capital humano), como para quem está inserido nas organizações e convive com as dificuldades e desafios de selecionar jovens para programas de trainees, já que levanta questões importantes sobre os impactos dessas iniciativas tanto para os jovens, como para as organizações que os contratam.

The works of Voltaire : a contemporary version with notes /

Accompanied by: Voltaire, index to his works, genius, and character / by Oliver H.G. Leigh. 302 p.

Reading the Bible,

"This book is composed of three lectures, on the L.P. Stone foundation, delivered at Princeton theological seminary, on the third, fourth, and fifth of February, 1919."

The works of Voltaire : a contemporary version ; with notes by Tobias Smollett, rev. and modernized ; new translations by William F. Fleming and an introd. by Oliver H. G. Leigh. A critique and biography /

At head of title: Edition säns soucï.