Cell homeostasis in a Leishmania major mutant overexpressing the spliced leader RNA is maintained by an increased proteolytic activity

Although several stage-specific genes have been identified in Leishmania, the molecular mechanisms governing developmental gene regulation in this organism are still not well understood. We have previously reported an attenuation of virulence in Leishmania major and L braziliensis carrying extra-copies of the spliced leader RNA gene. Here, we surveyed the major differences in proteome and transcript expression profiles between the spliced leader RNA overexpressor and control lines using two-dimensional gel electrophoresis and differential display reverse transcription PCR, respectively. Thirty-nine genes related to stress response, cytoskeleton, proteolysis, cell cycle control and proliferation, energy generation, gene transcription, RNA processing and post-transcriptional regulation have abnormal patterns of expression in the spliced leader RNA overexpressor line. The evaluation of proteolytic pathways in the mutant revealed a selective increase of cysteine protease activity and an exacerbated ubiquitin-labeled protein population. Polysome profile analysis and measurement of cellular protein aggregates showed that protein translation in the spliced leader RNA overexpressor line is increased when compared to the control line. We found that L major promastigotes maintain homeostasis in culture when challenged with a metabolic imbalance generated by spliced leader RNA surplus through modulation of intracellular proteolysis. However, this might interfere with a fine-tuned gene expression control necessary for the amastigote multiplication in the mammalian host. (c) 2010 Elsevier Ltd. All rights reserved.

The Hus1 homologue of Leishmania major encodes a nuclear protein that participates in DNA damage response

The protozoan parasite Leishmania presents a dynamic and plastic genome in which gene amplification and chromosome translocations are common phenomena. Such plasticity hints at the necessity of dependable genome maintenance pathways. Eukaryotic cells have evolved checkpoint control systems that recognize altered DNA structures and halt cell cycle progression allowing DNA repair to take place. In these cells, the PCNA-related heterotrimeric complex formed by the proteins Hus1, Rad9, and Rad1 is known to participate in the early steps of replicative stress sensing and signaling. Here we show that the Hus1 homolog of Leishmania major is a nuclear protein that improves the cell capability to cope with replicative stress. Overexpression of LmHus1 confers resistance to the genotoxic drugs hydroxyurea (HU) and methyl methanesulfonate (MMS) and resistance to HU correlates to reduced net DNA damage upon LmHus1 expression. (C) 2011 Elsevier B.V. All rights reserved.

The influence of glutathione modulators on the course of Leishmania major infection in susceptible and resistant mice

Glutathione (GSH) has an important dual role in parasite-host relationship in Leishmania major infection. Our previous studies showed that both antioxidant systems, glutathione and trypanothione/trypanothione reductase, participate in the protection of Leishmania against the toxic effect of nitrogen-derived reactive species. On the other hand, GSH also is very important to the modulation of the effective immune response, inducting NO production and leishmanicidal activity of macrophages. In the present study, we investigated the role of host GSH during the course of L. major infection, analysing the size of footpad lesions and parasite load from mice treated with two GSH modulators, N-acethyl-L-cysteine (NAC) and buthionine sulphoximine (BSO). Resistant mice treated with BSO, which depletes GSH develop exacerbated lesions, but only harbour higher parasite load in their lesions 2 weeks post-infection. Although the NAC treatment does not affect the footpad lesions development in susceptible BALB/c mice, it significantly reduced the tissue parasitism in the lesions throughout the course of infection. Interestingly, the treatment with BSO did not change the course of L. major infection on susceptible mice when compared with nontreated mice. These results suggest that GSH is an important antioxidant modulator during anti-Leishmania immune response in vivo.

Occurrence of antibodies anti-Neospora caninum, anti-Toxoplasma gondii, and anti-Leishmania chagasi in serum of dogs from Para State, Amazon, Brazil

A cross-sectional study was conducted to determine the occurrence of anti-Toxoplasma gondii, anti-Neospora caninum, and anti- Leishmania chagasi antibodies in dogs of the state of Para, Brazil. For this purpose, 129 blood samples were collected from dogs of different ages and gender. Samples of 72 dogs were collected from 39 rural properties from 19 municipalities, and 57 samples were from stray dogs, collected after captivity by the Center of Zoonosis Control from the municipality of Santar,m. The sera were analyzed for anti-T. gondii and anti-N. caninum antibodies by indirect fluorescent antibody tests with cutoff values of 1:16 and 1:50, respectively. For the presence of L. chagasi antibodies, enzyme-linked immunosorbent assay was used and positive results were confirmed by immunochromatographic method using the recombinant antigen K39. Of the total of 129 dogs, 90 (69.8%) were positive for T. gondii, 16 (12.4%) for N. caninum, and 30 (23.3%) for L. chagasi. Antibodies for all three parasites were found simultaneously in seven dogs (5.4%), mostly in urban dogs (six of seven). No association was observed related to gender and location (urban or rural) of dogs and occurrence of N. caninum and T. gondii antibodies although, regarding L. chagasi, higher prevalence was found in females (P < 0.02) and in dogs from urban location (P < 0.001). From the 39 farms, in 30 (76.9%) at least one dog was positive for T. gondii or N. caninum or both. Higher occurrence of Leishmania antibodies was observed in N. caninum-negative dogs (P < 0.05).

Transovarial passage of Leishmania infantum kDNA in artificially infected Rhipicephalus sanguineus

Phlebotomine sand flies are the only proven biological vectors of Leishmania parasites. However, Rhipicephalus sanguineus ticks have long been suspected to transmit Leishmania infantum in studies carried out in laboratory and natural conditions. In the present study, 5 mu l of L. infantum promastigotes (1 x 10(6) cells per ml) was injected into the hemocel through the coxa 1 of four engorged females (F1, F2, F3 and F4). Control ticks (F5 and F6) were injected with sterile phosphate-buffered saline (PBS) using the same procedure. Then, these females, their eggs, and the originated larvae were tested by real time polymerase chain reaction (real-time PCR) for the presence of L. infantum kinetoplast DNA (kDNA). Females and eggs were tested after the end of the oviposition period (about 5 weeks post-inoculation) whereas larvae were tested about 4 months after the inoculation of females. All artificially infected females were positive for L. infantum kDNA. In addition, two pools of eggs (one from F2 and other from F4) and four pools of larvae (one from each F1 and F4 and two from F2) were positive for L infantum kDNA. These results showed, for the first time, the transovarial passage of L. infantum kDNA in R. sanguineus ticks, thus suggesting that the transovarial transmission of L. infantum protozoa in ticks is worth to be investigated. (C) 2010 Elsevier Inc. All rights reserved.

A presta????o pelo setor p??blico n??o estatal dos servi??os de sa??de p??blica: an??lise de hip??teses e potencialidades

O trabalho analisa a potencialidade do desenvolvimento de alian??as entre o p??blico e o privado na gest??o p??blica municipal brasileira da sa??de. A relev??ncia da quest??o pauta-se na transfer??ncia de responsabilidade da presta????o de servi??os de sa??de para os munic??pios, posterior ?? promulga????o da Constitui????o Federal, aliada ?? limita????o da capacidade de gest??o dos mesmos. As an??lises aqui tratadas referem-se ??s alian??as previstas no arcabou??o legal brasileiro, estabelecidas entre o ente p??blico e o terceiro setor. Essas alian??as s??o introduzidas pela reforma do aparelho do Estado, em 1995, no ??mbito da qual se utilizou a estrat??gia de publiciza????o que tratou do fortalecimento dessa alian??a entre o Estado e o Terceiro Setor. A partir dos modelos poss??veis de parcerias com o terceiro setor, este estudo apresenta uma an??lise do modelo das organiza????es sociais (OS), trazendo ?? luz estrat??gias e desafios para sua implementa????o.

Rela����o orientador-orientando e suas influ��ncias na elabora����o de teses e disserta����es

O artigo tem o objetivo de discutir a rela����o orientador-orientando e suas influ��ncias no processo de produ����o de teses e disserta����es dos programas de p��s-gradua����o stricto sensu em Contabilidade na cidade de S��o Paulo. O campo de estudos foi o do ensino e pesquisa em Administra����o e Contabilidade. Como abordagem metodol��gica foi utilizada a avalia����o qualitativa, com coleta de dados por meio de entrevistas estruturadas. Foram entrevistados orientadores e orientandos dos programas de p��s-gradua����o em Contabilidade da USP, PUC-SP e FECAP. Os resultados indicaram que, no processo de escolha, orientadores valorizaram caracter��sticas t��cnicas dos orientandos, enquanto os orientandos enfatizaram as caracter��sticas afetivas e pessoais dos orientadores. Verificou-se tamb��m que a atividade de orienta����o qualifica os orientandos para a autoria e que muitos problemas surgidos durante o processo de constru����o do trabalho estariam ligados �� rela����o orientador-orientando.

Aprendendo a viver com regras : a valida����o das teses piagetianas da g��nese da moral nos contextos atuais

RESUMO: Esta disserta����o teve como objetivo central replicar o estudo realizado por Piaget sobre aquisi����o do conceito de regras em crian��as, a fim de procurarmos saber se passados 78 anos da obra ���O Ju��zo Moral na Crian��a���, os dados que o mesmo encontrou sobre a aquisi����o do princ��pio da moral se mant��m em nossa atualidade. Para atingir esse objetivo realizamos uma breve revis��o bibliogr��fica, abrangendo alguns autores, te��ricos e pesquisadores que enfatizaram estudos sobre o princ��pio da ��tica e a fundamenta����o da moral, entre os quais constam: Plat��o, Arist��teles, Nietzsche, Kant, Durkheim. Baseamo-nos igualmente em alguns autores mais recentes como V��zquez, Louren��o, Cortina e Martinez, Biaggio, dentre outros. Ao analisarmos a origem psicol��gica do desenvolvimento moral da crian��a, buscamos suporte na teoria de Kolhberg e principalmente de Jean Piaget, autor principal para esta pesquisa. A pesquisa guiou-se por uma dimens��o descritiva e qualitativa, centrada na observa����o direta e indireta, baseada no modelo cl��nico introduzido por Piaget. Os resultados da pesquisa demonstraram que os dados obtidos por Piaget h�� 78 anos, s��o compat��veis com os dias de hoje, pois as crian��as apresentaram dados equivalentes em m��dia com as idades estipuladas para a aquisi����o da moral heter��noma e da moral aut��noma. Constat��mos que a aquisi����o do princ��pio da reversibilidade leva as crian��as a adquirirem capacidades cognitivas para uma moral aut��noma. A concep����o de regras transmitidas pelas crian��as, emergiram em uma concep����o de respeito a uma norma pr�� estabelecida, e que, gradualmente se transforma em consci��ncia da import��ncia das mesmas para o princ��pio da boa conviv��ncia. ABSTRACT: This dissertation aimed to replicate the study worked out by Piaget on acquisition of concept rules in children, in order to know if, 78 years passed from "The Moral Judgment in Child", data about acquisition of morality principle remain current. To achieve this goal we conducted a brief bibliographic review, covering some authors, theorists and researchers who emphasized studies on ethics principle and moral fundamentation, such as: Plato, Aristotle, Nietzsche, Kant, Durkheim. We were also based on some latest authors as V��zquez, Louren��o, Cortina and Martinez, Biaggio, and others. Considering the psychological origin of moral development of children, we sought support in Kolhberg��s theory and, especially, Jean Piaget, the main author for this search. The research was led by a descriptive and qualitative dimension, focused on direct and indirect observation, based on clinical model introduced by Piaget. The survey results showed that data obtained by Piaget 78 years ago are still compatible with the present day, because children have, on average, equivalent data through all ages stipulated for the acquisition of heteronomic and autonomous moral. We found that the acquisition of the reversibility principle leads children to acquire cognitive skills for an autonomous moral. The conception of rules provided by children, emerged to a conception of respect to a pre-established standard, that gradually becomes aware of its importance to the principle of coexistence.

Infec����o experimental de Calomys callosus (Rodentia-Cricetidae) com Leishmania donovani chagasi (Laison, 1982)

Foi descrita a infec����o experimental em Calomys callosus com uma cepa de Leishmania donovani chagasi de caso humano. Um grupo de 22 roedores foi inoculado por via intraperitoneal com 0,1 ml de um macerado de ba��o em salina, rico em amastigotas. Esses animais foram sacrificados tr��s meses ap��s as inocula����es, tendo sido realizado: cultura "in vitro" em meio acelular (LIT e NNN) e esfrega��os, corados pelo Giemsa, de f��gado, ba��o, medula ��ssea e sangue; cortes histol��gicos corados com hematoxilina-eosina de f��gado e ba��o. Os resultados para f��gado e ba��o foram: 67% de positividade nas culturas "in vitro"; esfrega��os ricos em amastigotas intra e extra celular (inclui medula ��ssea); rea����es teciduais traduzidas por hepatomegalia com prolifera����o das c��lulas de Kupffer; rea����o granulomatosa das ��reas portais, esplenomegalia com rea����es granulomatosas, abund��ncia de formas amastigotas. Os resultados para o sangue foram negativos em todas as investiga����es.

Resposta imune na infec����o por Leishmania infantum em modelo murino

As leishmanioses s��o doen��as causadas por protozo��rios do g��nero Leishmania que s��o parasitas intracelulares obrigat��rios das c��lulas fagoc��ticas. O objectivo deste estudo foi caracterizar a infec����o por Leishmania infantum em murganhos BALB/c inoculados por via intrad��rmica, analisando a evolu����o do parasitismo e as respostas imunit��rias desenvolvidas. A carga parasit��ria foi determinada por PCR em tempo real. Foram detectados parasitas desde o 7�� dia p��s-infec����o, verificando-se a dissemina����o visceral do parasita ao 56�� dia p��s-infec����o. Os linf��citos dos animais do grupo infectado proliferaram em resposta �� estimula����o antig��nica, enquanto que os macr��fagos peritoneais produziram nitritos na presen��a do antig��nio. Estes resultados demonstraram que os murganhos BALB/c inoculados por via intrad��rmica constituem um bom modelo experimental de leishmaniose visceral.

Leishmania braziliensis: aislamiento de lesiones por inoculaci��n de h��msteres con o sin adici��n de lisado de gl��ndulas salivares de Lutzomyia youngi

Homogeneizados de biopsias de lesiones cut��neas de 50 casos de leishmaniasis tegumentaria de Trujillo, Venezuela, han sido inoculados en h��msteres machos. Se ha comparado la infectvidad de Leishamania braziliensis, de homogeneizados simples, con la de los mezclados con lisado de gl��ndula salival de Lutzomyia youngi, registrandose un 58,5% de infecciones para una media de 12 semanas de prepatencia con los homogeneizados simples, contra 92% de infecciones con una media de 3 semanas de prepatencia, cuando cada uno de los in��culos de homogeneizado se mezcl�� con lisado equivalente al de una gl��ndula salival de fleb��tomo.

Excreci��n de promastigotos de Leishmania pifanoi por Lutzomyia youngi experimentalmente infectada

Se describe el desarrollo poblacional promastig��tico de Leishmania pifanoi en Lutzomyia youngi experimentalmente infectada y mantenida con sacarosa al 50% bajo condiciones constantes de temperatura y humedad. Se reconocen dos etapas para la diferenciaci��n y el crecimiento de los par��sitos entre las dos y ciento veinte horas postprandiales. Hasta 48 horas tiene lugar la diferenciaci��n pleom��rfica de amastigotos en promastigotos cortos, que se multiplican por divisi��n binaria hasta las 60 horas, cuando ocurre la ruptura de la membrana peritr��fica. La segunda etapa tiene lugar entre las 72 y 96 horas cuando algunos par��sitos migran hacia la v��lvula esof��gica y los dem��s par��sitos libres son excretados en gotitas fecales como promastigotos grandes y activos. Las primeras gotitas excretadas dan reacci��n positiva a glucosa o contienen cristales de urato. El exceso de promastigotos de la segunda fase de desarrollo es eliminado en las ��ltimas excretas que dan reacci��n positiva con las pruebas Hemoscreen y Biuret para prote��nas totales y tambi��n para glucosa, y constituyen el 82% del total de gotas excretadas. La excreci��n de par��sitos por Lu. youngi es fase normal del desarrollo de L. pifanoi en un vector.

Anu��rio Cient��fico ��� 2009 & 2010 Resumos de Artigos, Comunica����es, Teses, Patentes, Livros e Monografias de Mestrado

O Conselho T��cnico-Cient��fico do Instituto Superior de Engenharia de Lisboa (ISEL), na senda da consolida����o da divulga����o do conhecimento e da ci��ncia desenvolvidos pelo nosso corpo docente, prop��e-se publicar mais uma edi����o do Anu��rio Cient��fico, relativa �� produ����o cient��fica de 2009 e 2010. A investiga����o, enquanto vertente estrat��gica do Instituto Superior de Engenharia de Lisboa (ISEL), tem concorrido para o seu reconhecimento nacional e internacional como institui����o de refer��ncia e de qualidade na ��rea do ensino das engenharias. �� tamb��m nesta vertente que o ISEL consubstancia a sua liga����o �� sociedade portuguesa e internacional atrav��s da transfer��ncia de tecnologia e de conhecimento, resultantes da sua atividade cient��fica e pedag��gica, contribuindo para o seu desenvolvimento e crescimento de forma sustentada. S��o parte integrante do Anu��rio Cient��fico todos os conte��dos com afilia����o ISEL resultantes de resumos de artigos publicados em livros, revistas e atas de congressos que os docentes do ISEL apresentaram em f��runs e congressos nacionais e internacionais, bem como teses e patentes. Desde 2002, ano da publica����o da primeira edi����o, temos assistido a uma evolu����o crescente do n��mero de publica����es de conte��dos cient��ficos, fruto do trabalho desenvolvido pelos docentes que se t��m empenhado com afinco e perseveran��a. Contudo, nestes dois anos (2009 e 2010) constatou-se um decr��scimo no n��mero de publica����es, principalmente em 2010. Uma das causas poder�� estar diretamente relacionada com a redu����o do financiamento ao ensino superior uma vez que limita toda a investiga����o no ��mbito da atividade de I&D e da produ����o cient��fica. Na sequ��ncia da implementa����o do Processo de Bolonha em 2006, o ISEL promoveu a cria����o de cursos de Mestrado disponibilizando uma oferta educativa mais completa e diversificada aos seus alunos, mas tamb��m de outras institui����es, dotando-os de compet��ncias inovadoras apropriadas ao mercado de trabalho que hoje se carateriza mais competitivo e din��mico. Terminados os per��odos escolar e de execu����o das monografias dos alunos, os resumos destas s��o igualmente parte integrante deste Anu��rio, no que concerne �� conclus��o dos Mestrados em 2009 e 2010.A fim de permitir uma maior acessibilidade �� comunidade cient��fica e �� sociedade civil, o Anu��rio Cient��fico ser�� editado de ora avante em formato eletr��nico. Excecionalmente esta edi����o contempla publica����es referentes a dois anos ��� 2009 e 2010.